晏媛；刘世霆；许重远；罗奇志；谭亚非；陈志良
目的建立定量检测SARS冠状病毒N蛋白的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA).方法采用经SARS-CoVN蛋白和配对实验筛选的两株抗SARSN蛋白单克隆抗体,以双抗体夹心法为基础建立检测SARS-CoVN抗原的时间分辨荧光免疫分析技术,进行方法学的评价,并与相应ELISA试剂盒进行比较.结果该法的测量范围为(0.02～150)ng/ml,灵敏度为0.02 ng/ml;批内、批间CV分别为(3.3～6.2)%和(5.3～9.6)%,与采用ELISA试剂盒检测灭活SARS-CoV N蛋白情况比较的结果一致.结论本研究建立的检测SARSN蛋白的时间分辨荧光免疫分析技术灵敏度高,特异性好,具有潜在的临床应用价值.
作者：王蕾；吴英松；汤永平；李明 刊期： 2005年第04期
目的探讨在非体外循环心脏不停跳经冠状窦持续灌注动脉血对急性心肌缺血的保护作用和安全性.方法实验猪通过套扎冠状动脉前降支120min复制急性心肌缺血模型,然后松解套扎线60 min恢复灌注.随机分为3组:第1组为对照组,在第2、3组,缺血60 min后接受主动脉-冠状静脉窦分流进行逆灌60 min,冠状窦压分别控制在40～50mmHg(低压组)和70～80mmHg(高压组).术中测定各时点血流动力学和冠状窦静脉血一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)变化,术毕测定左心室心肌梗塞范围.结果在缺血180min,第2、3组左室压上升或下降速率(±dp/dtmax)比对照组提高,NO浓度较高而ET-1较低,心梗面积分别比对照组减少45%和61%.结论非体外循环下经冠状窦逆行灌注可以减少急性缺血/再灌注后左室收缩和舒张功能不全和内皮细胞损伤,高压逆灌可以抢救更多的濒危心肌.
作者：郭惠明；张镜芳；吴若彬；郑少忆；庄建 刊期： 2005年第04期
目的制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法.方法用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力.用protein-G亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法,选择佳反应模式对疟疾血样进行检测.结果筛选出6株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类均为IgG1,亲和常数(κ)介于1×10-8～2.82×10-10.以镜检法为参照,建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟的敏感性为86.66%,特异性为96.43%.结论建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟快速、简便、可靠,有望开发成为恶性疟快速诊断试剂盒.
作者：李妍；宁云山；李莉；彭丹丹；董文其；李明 刊期： 2005年第04期
目的从炎症反应的角度探讨外用鸸鹋油对烫伤大鼠创面愈合的影响.方法建立10%体表面积浅Ⅱ度烫伤大鼠模型,将144只雄性Wistar大鼠随机分为A、B、C组,分别外用生理盐水、碘伏、鸸鹋油治疗,观察创面的大体变化及愈合情况,分别留取不同时相的创面和血液标本,进行组织病理学检查和含水量测定(干湿重法)、ELISA法检测组织和血浆TNFα含量.结果外用鸸鹋油可使创面肿胀、渗出减轻,创面无感染迹象,未见任何副作用;病理形态学观察发现鸸鹋油可使局部组织炎症反应减轻,与A、B组相比较,以伤后1、3 d差异为明显;C组伤后3 d组织含水量及TNF-α含量明显减少(P<0.01),两者之间存在正相关关系(P<0.001);可使创面愈合时间缩短(P<0.01),促进创面再上皮化和表皮各层的分化.结论在浅Ⅱ度烫伤创面外用鸸鹋油具有抗炎作用,可能与局部组织中促炎细胞因子水平的降低有关;并能促进创面愈合,可能与其抑制局部组织的继发性炎症反应有关.
作者：邱学文；王甲汉；方小文；龚震宇；李志清；易朝辉 刊期： 2005年第04期
目的探讨重组腺病毒介导血管内皮生长因子(VEGF)165基因治疗对缺氧状态下对神经干细胞凋亡的作用.方法体外培养C17.2神经干细胞,建立神经干细胞缺氧模型.将携带人类VEGF基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞,Western-blotting分析VEGF蛋白的表达,并用流式细胞术测定细胞凋亡率的变化.Hoechst33342染色荧光显微镜观察凋亡小体.结果转染pAdCMVVEGF165的C17.2神经干细胞成功表达VEGF蛋白;缺氧后神经干细胞凋亡率为(19.98±0.55)%,而转染pAdCMV VEGF165后的细胞凋亡率为(10.38±0.48)%(P<0.01),转染pAdCMV VEGF165+VEGF反义寡核脱氧核酸经干细胞凋亡率为(19.07±0.64)%,与对照组无显著差异(P>0.05).结论腺病毒介导的VEGF165基因能高效表达VEGF;外源性VEGF对C17.2神经干细胞具有抗凋亡作用,能够提高C17.2神经干细胞对缺氧的耐受性,有利于神经干细胞的生存.
作者：沈庆煜；吕瑞妍；李梅；王莉梅；肖颂华；邢诒刚 刊期： 2005年第04期
目的应用RNAi技术,研究cyclin E基因小干扰RNA(siRNA)对K562细胞生长的抑制作用.方法针对cyclin EmRNA设计siRNA序列,经PCR方法体外扩增,得到含有U6启动子以及siRNA序列的PCR产物,以LipofectamineTM2000脂质体法转染K562细胞,分别设置为干扰组、阴性对照组以及空白对照组,转染48 h后进行细胞计数、RT-PCR及通过PI染色进行流式细胞仪检测,观察其干扰效果.结果干扰组与阴性对照组和空白对照组相比,活细胞计数减少约80%,G1期细胞百分比增高30%,细胞基本停止增殖.干扰组cyclin E mRNA表达明显减弱,相对阴性对照组及空白对照组,干扰组mRNA表达下降70%.阴性对照组与空白对照组无显著性差异.结论应用RNAi技术可以有效地干扰cyclinE基因的表达,并进一步抑制细胞的生长,但对于干扰的长期有效性尚无实验结论,需通过长效表达载体实验验证.
作者：宋海星；马文丽；宋艳斌；张宝；郑文岭 刊期： 2005年第04期
目的体外诱导Balb/C小鼠胚胎干细胞定向分化为胰岛样细胞团,观察细胞表面形态学的变化.方法选用Balb/C小鼠ES细胞,经过拟胚体(EB)发育分化4 d后开始定向诱导培养,不同时间段分别向细胞培养基中添加碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子-1和尼克酰胺和N等细胞生长因子,使ES细胞定向分化为胰岛样细胞团.免疫细胞化学检测表达胰岛素和胰高血糖素的阳性细胞.原子力显微镜(AFM)原位扫描阳性细胞团.结果EB细胞生长为大小不一、境界清楚的细胞团,细胞团内细胞排列紧密.胰岛B细胞数量多,主要分布在细胞团的中央,边缘少,染色较淡.而表达胰高血糖素的A细胞主要分布在细胞团的边缘,数量相对较少.AFM扫描可见表达胰岛素的阳性细胞团,其表面有很多类似神经纤维束,接成网络状.在细胞质中,还有很多类圆形的颗粒物质,其大小几乎一致,粒径都处于0.5～1.0μm间.结论诱导分化得到的细胞团不仅有形态和功能上的成熟,而且还具备良好的组织结构,为细胞的移植疗法提供了可靠的凭据.
作者：刘美莉；熊轶；蔡继业；潘运龙；孟凡义；李凌松 刊期： 2005年第04期
目的克隆、原核表达中华按蚊的防御素基因,并对其表达产物的生物学活性进行评价.方法根据已发表的埃及伊蚊和冈比亚按蚊防御素基因序列设计合成两对引物,以中华按蚊成蚊cDNA为模板进行PCR扩增,将预期片段克隆测序并进行分析;根据表达质粒pET32a(+)上的克隆位点及测序结果设计PCR引物,将截短的基因片段重组入质粒pET32a(+)中进行表达,纯化表达产物并进行体外抑菌试验.结果PCR扩增产物大小约270 bp,目的基因的序列与冈比亚按蚊防御素基因同源性为85%;截取其保守功能区域序列(162 bp),构建成功重组表达质粒pET32a(+)-tDEF,含重组质粒的转化菌用IPTG诱导表达后,于Mr 26000处可见一预期的特异表达带,该蛋白与抗6-His抗体有特异性的反应;琼脂扩散法显示,纯化的重组防御素融合蛋白未出现抑菌环.结论首次克隆了中华按蚊防御素基因,其截短片段在大肠杆菌中得到了高效可溶性表达,但重组融合蛋白不具备抑菌活性.
作者：阎晓宇；陈晓光；彭鸿娟；郑学礼 刊期： 2005年第04期
目的建立高效液相色谱法测定小鼠血浆中丝裂霉素C聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米球浓度的方法.方法血浆样品经乙酸乙酯提取后,以乙腈∶醋酸钠缓冲液pH(15∶85)为流动相,使用LiChroCART LiChrospher RP-18(250 mm×4 mm,5 μm)色谱柱分离;流速为1.0 ml/min;检测波长为365 nm.结果血浆中丝裂霉素C测定的线性范围为0.04～1.00μg/ml,线性方程为:Y=16388X-17.17,r=0.9998.结论该方法简单实用,结果准确,适用于丝裂霉素C-聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米制剂临床前药代动力学研究.
作者：刘炜；陈建海；任非；郭云波；阎玺庆；刘焰东 刊期： 2005年第04期
目的探讨卡托普利和洛沙坦对正常大鼠肾脏水通道蛋白-2(AQP2)mRNA表达的影响及尿液水通道蛋白-2浓度的改变.方法30只健康大鼠随机分成3组:正常对照组,卡托普利组,洛沙坦组.经用药后观察血Na+、尿量以及尿渗量水平,用RT-PCR半定量检测肾内髓质AQP2及血管加压素2型(V2)受体mRNA水平,用酶联免疫吸附测定法检测尿液AQP2浓度.结果卡托普利组与洛沙坦组大鼠尿量均较正常组显著增多,卡托普利组尿渗量低于洛沙坦组和正常组,但尿液中AQP2浓度却高于洛沙坦组和正常组.RT-PCR半定量显示卡托普利组AQP2 mRNA较正常组显著降低(P<0.05),V2受体mRNA没有显著差别.结论卡托普利可以抑制正常大鼠肾内髓质AQP2 mRNA的表达,同时促进肾内AQP2经尿液排出.
作者：江荣炎；许顶立；赖文岩；任昊；沈倩波；邵亚辉 刊期： 2005年第04期
目的采用中药空心莲子草提取液进行体外抗登革病毒的研究,寻找新的抗登革病毒药物.方法利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和细胞病变效应(CPE),观察检测空心莲子草对C6/36传代细胞株的细胞毒性作用和抗登革病毒作用.结果空心莲子草的4种提取物除>320μg/ml组以外,各浓度组均未见对细胞有明显的毒性作用.用统计软件SPSS11.5的Probit回归法计算药物的半数毒性浓度(TD50)和半数有效抑制浓度(ED50),香豆精类提取物对细胞的毒性小(TD50=535.91),石油醚提取物对病毒的抑制作用大于另3种提取物和药物对照(ED50=47.43).结论空心莲子草在体外有抗登革病毒作用.
作者：蒋文玲；罗宪玲；邝素娟 刊期： 2005年第04期
目的研究缺氧对体外培养的大鼠星形胶质细胞活性及损伤的影响,确定星形胶质细胞体外培养的佳缺氧时间点以对其进行深入研究.方法体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,纤维酸性蛋白免疫荧光染色鉴定.通以5%CO2+95%N2混合气体造成缺氧,分别观察缺氧不同时间段星形胶质细胞光镜下的形态变化,死亡细胞数目,培养上清液的氧分压、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化.结果星形胶质细胞在缺氧条件下,随着时间延长,细胞逐渐出现肿胀、漂浮和坏死.与对照组相比,缺氧10 h组死亡细胞数、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化均有明显差异(P<0.05),且与缺氧时间呈正相关,其中缺氧组细胞培养上清液中葡萄糖浓度比对照组明显降低,而乳酸盐浓度和LDH活性则明显升高,而缺氧8 h组虽然葡萄糖和乳酸盐的浓度及LDH活性的变化明显,但星形胶质细胞保存着多突触的形态.结论缺氧可致体外培养的鼠脑星形胶质细胞损伤甚至死亡,缺氧8 h可作为以体外培养的鼠脑星形胶质细胞为研究对象的缺氧生物学研究的佳时间点.
作者：颜晓慧；陈雪梅；邹飞 刊期： 2005年第04期
目的探讨实验性缺血性脑梗塞早期CT表现与神经细胞损伤的相关性及与临床诊断、治疗、预后的关系.方法将新西兰大白兔经颈总动脉注入PVA栓子栓塞大脑中动脉,在不同的时间点(2～36 h)对兔脑进行CT扫描,并取脑组织经HE染色、Nissle染色、免疫组化(TUNEL法)进行观察.结果CT分期Ⅰ期(脑梗塞后2～8 h),神经细胞首先出现缺血改变,随后细胞周围出现水肿;基底节周围及大脑皮质可见少量TUNEL阳性细胞.CT分期Ⅱ期(梗塞后12～18 h),以神经细胞溶解消失为主;基底节周围及大脑皮质可见较多TUNEL阳性细胞.CT分期Ⅲ期(梗塞后24～36h),脑水肿改变十分显著,基底节呈明显的坏死区,神经细胞坏死,结构消失,大脑皮质可见大量TUNEL阳性细胞.神经元具有凋亡及坏死的双重形态学特征.结论缺血性脑梗塞后神经细胞损伤形态上有水肿、凋亡及坏死等多样性,CT扫描显示缺血性脑梗塞的进展与实际病理变化有高度相关性.
作者：冯长征；李扬彬；谭理连；孙卫文 刊期： 2005年第04期
目的为研究脊柱推拿时所发出咔哒声响,提供一套可采集、定位和分析的检测仪器.方法在回顾咔哒声响测量技术现状的基础上,分析研究了实现声响测量的技术路线,设计了由时钟脉冲发生器、发送/接收接口、校准波发生器、复合传感器、计算机、测定分析软件以及输出部件等组成的声响测量系统.结果经初步试验,在40 cm的距离上测到了关节发出的咔哒声响,说明技术上基本可行.结论本仪器可以作为脊柱推拿所致咔哒声响的采集、定位和分析系统使用.
作者：李义凯；陈建华；邱桂春 刊期： 2005年第04期
目的研究功能未知新基因LX3[1]与白细胞介素-6(IL-6)的相关性,为研究IL-6的作用机制寻找新的靶基因.方法反转录-PCR(RT-PCR)分析不同浓度IL-6处理的U937细胞及同一浓度IL-6诱导不同时间的U937细胞中新基因LX3的表达差异;Northern Blot分析IL-6诱导前后U937细胞中新基因LX3表达的变化.结果LX3基因在U937细胞中的表达量随IL-6诱导浓度的增加而增加,在IL-6浓度为500 ng/m1时表达量高,而在0ng/ml时不表达;时间表达谱分析显示在IL-6刺激8h时新基因LX3的表达量高;Northern印迹分析显示新基因LX3在IL-6诱导后的U937细胞中的表达量明显升高.结论LX3是与IL-6诱导紧密相关的新基因.
作者：夏荣；黎燕；冯建男；兰炯采；沈倍奋 刊期： 2005年第04期
目的克隆中国人的肥胖基因,并在大肠杆菌中高效表达人瘦素蛋白.方法用RT-PCR从培养的中国人脂肪细胞提取的总RNA中扩增出肥胖基因,与TA载体连接后进行核酸序列测定,并将该基因定向克隆至高效表达质粒pBV220,在大肠杆菌中表达.结果克隆出中国人肥胖基因,其cDNA序列与文献报道的一致,构建了重组质粒pBV220-OB,并成功地实现了人肥胖基因在大肠杆菌中的表达.结论人肥胖基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达,为进一步研究该基因在肥胖症及其相关疾病中的作用,以及在脂肪代谢与脂肪细胞分化中的调控机制奠定基础.
作者：祝骥；马文丽；毛向明；李凌；宋艳斌；郑文岭 刊期： 2005年第04期
目的体外实验探讨羟乙基淀粉(hydroxyethyl-starch,HES)对慢性肝病患者血液流变学的影响.方法21例健康人作为对照组,21例慢性肝病患者作为实验组,两组均随机分为HES组(11例)及林格氏液R-L组(10例).每个实验对象采集贵要静脉血12 ml,等分为4个亚组,每组3 ml;亚组1为全血基础值,亚组2、3、4分别以6%HES和R-L稀释,使红细胞压积分别降到30%、25%、20%.测定各样本红细胞压积、全血高切粘度、全血中切粘度、全血低切粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数等血液流变学指标.结果实验组全血红细胞压积显著低于对照组,血浆粘度、红细胞聚集指数显著高于对照组(P<0.05).HES稀释后,实验组与对照组全血粘度均显著下降(P<0.05),两组间无显著差异(P>0.05);与HES组相比,R-L组全血粘度下降趋势更为显著.HES稀释后,实验组红细胞聚集指数显著下降(P<0.05),亚组3、4与对照组无显著差异(P>0.05);R-L稀释后,实验组与对照组的红细胞聚集指数均显著上升(P<0.05).HES稀释后,对照组红细胞刚性指数无显著改变,实验组呈升高趋势,但只有亚组4显著高于对照组(P<0.05);R-L稀释后,两组红细胞刚性指数均显著上升(P<0.05).结论肝病患者红细胞聚集指数显著增高,用6%HES给肝病患者作适度的血液稀释可降低其全血粘度和红细胞聚集率.
作者：劳建新；古妙宁；肖金舫；吕晓明 刊期： 2005年第04期
目的评价聚乙烯醇(PVA)加明胶海绵(GS)栓塞支气管动脉治疗大咯血的疗效.方法对46例大咯血病人行支气管动脉栓塞(BAE)治疗,其中单纯GS栓塞21例,PVA加GS栓塞25例.结果(1)BAE治疗后总有效率为91.3%;GS组有效率(90.5%)与PVA加GS组(91.3%)之间无显著差异(P>0.05).(2)BAE治疗后总复发率为26.2%;GS组复发率(42.1%)与PVA加GS组(11.3%)之间有显著差异(P<0.05).(3)BAE治疗后无严重并发症发生.结论BAE是治疗大咯血的一种有效方法;PVA加GS栓塞治疗大咯血复发率低.
作者：吕良山；刘亚民；马清涌；周明利；宫清娥；贾三院；任云霞 刊期： 2005年第04期
目的探讨构建的重组丙型肝炎病毒(HCV)能否在易感细胞系中复制和表达.方法用人工构建的HCV感染易感细胞系7721,培养72 h后利用RT-PCR检测HCV的RNA表达,并应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察免疫荧光标记的HCV核心抗原和胞膜抗原E1在细胞中的表达.结果人工构建的HCV感染7721细胞72 h后,RT-PCR检测细胞内可检出HCV正链及负链RNA,细胞培养上清中可检出HCV正链RNA,CLSM检测HCV核心抗原和E1抗原在细胞内的分布呈胞浆型.结论构建的HCV 72 h内可以在易感细胞系7721中复制和表达.
作者：周志涛；吴英松；李明 刊期： 2005年第04期
目的研究上皮细胞来源的中性粒细胞激活肽(ENA-78)在子宫内膜异位症发病中的作用.方法应用ELISA法,检测42例子宫内膜异位症患者(Ⅰ～Ⅱ期20例、Ⅲ～Ⅳ期22例)血清ENA-78的浓度,并与25例非子宫内膜异位症患者(对照组)进行比较.结果子宫内膜异位症组血清中ENA-78浓度明显高于对照组(2.97±1.91 ng/ml vs 0.72±0.24ng/ml,P<0.001),Ⅲ、Ⅳ期比Ⅰ、Ⅱ患者血清中ENA-78增高更明显(4.48±1.25 ng/ml vs 1.30±0.74ng/ml,P<0.001).增殖期与分泌期比较,两组血清ENA-78的表达均无显著差异.结论子宫内膜异位症患者ENA-78明显升高,可能为子宫内膜异位症发病的因素之一.
作者：蔡珠华；何援利；彭冬先 刊期： 2005年第04期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
