学术投稿

精子基因表达谱研究初探

毛向明;马文丽;冯春琼;邹亚光;郑文岭

关键词:精子, 限制性显示技术, 探针, 芯片
摘要:目的应用限制性显示技术,收集正常成年男性的精子基因表达谱探针,制备相应的精子表达谱芯片,以对成年男性正常精子的基因表达情况有一全面、系统的了解.方法提取成年男性正常精子的总RNA,逆转录为cDNA,经限制性内切酶酶切、加接头、PCR扩增、转化、克隆、鉴定等操作,收集成年男性正常精子的基因表达谱探针,制备相应的精子表达谱芯片,并进行初步的杂交分析.结果收集了1 859个基因片段,取其中368个基因探针制备芯片,进行了小量初试.结论证实在精子中有大量基因表达;提示我们自行制备的精子基因表达谱探针也具有较好的特异性和可信性.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 肝缺血再灌注损伤早期对其他脏器的影响

    目的了解肝缺血再灌注损伤对其他重要脏器功能的影响.方法雄性SD大鼠25只,按阻断血流前后不同时间点均分为5组,即肝血流阻断前、阻断30min末、再灌注后30min、再灌注后2 h及再灌注后6 h.各组分别活杀5只大鼠取血检测血生化指标,同时取心肌组织测ATPase活性;在缺血前及再灌注后6 h取肾、肺、心、胰组织匀浆测丙二醛、超氧化物歧化酶.结果再灌注后早期血浆丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、血尿素氮、淀粉酶、心肌型肌酸激酶同功酶及血浆丙二醛呈上升趋势,血浆超氧化物歧化酶及组织ATP酶活性在再灌注后呈下降趋势.再灌注后6h,各组织丙二醛含量较缺血前明显升高,而组织超氧化物歧化酶较缺血前明显下降.结论肝缺血再灌注早期可引起机体其他多脏器的损伤.

    作者:杨进城;季锡清;李朝龙;林建华;刘兴国 刊期: 2004年第09期

  • 血管内皮细胞中ABCA1的表达及其在动脉粥样硬化发生中的意义

    目的以人的血管内皮细胞ECV304为靶点,研究Ox-LDL和8-Br-cAMP对ATP-结合盒转运子A1(ABCA1)、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)基因mRNA和蛋白质表达的影响,阐明ABCA1基因在动脉粥样硬化(AS)形成中的可能机制.方法复苏培养血管内皮细胞,无血清培养基培养静止12 h后,分别加入Ox-LDL(30ng/ml)、8-Br-cAMP(0.5 mmol/L)刺激3、6、12、24 h,设未加刺激同时孵育24h的细胞为阴性对照组,以RT-PCR和Western蛋白印迹法检测ABCA1、ICAM-1及MCP-1 mRNA和蛋白质表达量.结果血管内皮细胞ECV304在给予Ox-LDL刺激后,ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平均增高,ICAM-1的高峰时间在12 h,其余高峰时间在6 h;在8-Br-cAMP的刺激下,ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平也增高,高峰时间均在6h.结论公认的致AS因素Ox-LDL可通过引起血管内皮细胞ECV304中炎性细胞因子ICAM-1、MCP-1 mRNA及蛋白质水平增加,参与AS的形成,同时抗AS基因ABCA1在Ox-LDL刺激下代偿增加,具有AS保护作用.cAMP不仅可增加ABCA1的表达,而且可增加ICAM-1、MCP-1表达.

    作者:李建华;郭志刚;吴平生;杨永红;赖文岩 刊期: 2004年第09期

  • 球海绵体悬吊术治疗男性尿道括约肌损伤后尿失禁

    目的探讨球海绵体悬吊术治疗男性尿道括约肌损伤后尿失禁的效果.方法用球海绵体悬吊术治疗男性尿道括约肌损伤后真性尿失禁患者18例,总结、分析其临床效果.结果术后随访1~34月,16例患者能完全自控排尿,2例患者尿失禁明显改善.结论球海绵体悬吊术是治疗男性尿道括约肌损伤后尿失禁的有效方法.

    作者:李传印;周兴 刊期: 2004年第09期

  • 放大内镜及实体镜检查结肠肿瘤性病变(附139例报告)

    目的探讨如何通过放大内镜观察到的大肠粘膜腺管开口类型发现早期大肠癌及癌前病变.方法2001年8月~2002年2月结肠镜检查139例大肠病变,采用内镜下粘膜染色技术,结合放大内镜、实体显微镜观察腺管开口分型(pit分型)并与病理诊断对照,pit分型采用工藤分型.结果139例患者中发现大肠息肉124例,进展期癌9例,侧向发育型肿瘤(LST)型病变5例,ⅡC病变1例.LST直径10~50 mm,其中ⅢL型1个,Ⅳ型4个.本组放大内镜与病理、实体镜诊断符合率较高.结论大肠腺管开口对于判断肿瘤性、非肿瘤性病变以及早期大肠癌具有重要意义,如发现有V型腺管开口时则高度提示早期癌的可能.

    作者:韩宇晶;赖卓胜;王亚东;姜泊 刊期: 2004年第09期

  • B超诊断双侧甲状旁腺腺瘤1例

    甲状旁腺机能亢进的病人大部分有甲状旁腺腺瘤,但95%发生在一侧,双侧同时发生甲状旁腺腺瘤者较为少见.1临床资料患者男,52岁,因无明显诱因感全身乏力、行走乏累、上楼时更加明显,左足底疼痛、以足底骨部位明显、碰到硬物时加重而来院就诊.查体未发现颈部包块,实验室检查:血钙增高,血磷降低,甲状旁腺激素明显增高.

    作者:王春美;郑晓娴 刊期: 2004年第09期

  • 两株诺瓦克样病毒新亚型的鉴定

    目的对在广州检出的人类杯状病毒(HuCVs)毒株进行分子生物学鉴定,以确定其是否为新亚型.方法选择检出的HuCVs进行克隆、转化和序列分析,使用PHYLIP进行核酸序列同源性比较,经Treeview1.5绘制进化树.结果206份病毒性腹泻标本检出HuCVs18份,检出率为8.74%(18/206),经序列分析证实均为NVs GⅡ毒株.任选其中6株进行PCR产物的克隆和测序,与GenBank中的参考株比较并绘制遗传进化树,其中HuCV/NVGⅡ003/2003/CHN(32282)、HuCV/NVGⅡ004/2003/CHN(32283)与基因文库中病毒的高同源性分别为83%和87%.结论广州存在其他国家或地区没有报道过的诺瓦克样病毒新亚型毒株.

    作者:戴迎春;聂军;刘翼;李志峰;白杨;李建栋;俞守义;江熙 刊期: 2004年第09期

  • 新生大鼠磷脂酶C-γ1 mRNA的表达变化

    目的探讨新生大鼠早期各主要脏器磷脂酶C-γ1(PLCγ1,基因为PLCG1)的mRNA表达状况.方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析大鼠出生后1、3、5、7 d及2、3、5周等7个时期肝、肺、肾和脑等4种脏器共28例样本的PLCG1的表达变化,以看家基因磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)为内参照,同步逆转录PLCG1特异性片段和内参片段,以二者积分吸光度比值作为PLCG1 mRNA的相对表达量.结果肝、肺、肾和脑4种脏器组织PLCG1在出生后早期的不同时期均有较强表达,并且各时期之间的表达有显著性差异(P均<0.01),第1天肝脏组织中PLCG1几乎没有表达,第7天脑组织的表达高;而在同一时期4种不同的组织间PLCG1的表达也有显著性差异(P均<0.01).结论同种脏器组织在不同的发育时期及在同一时期不同脏器组织之间PLCG1的差异性表达提示,PLCG1可能参与了大鼠早期生长发育过程中细胞的增殖与分化.

    作者:刘忠英;罗深秋;邓凡;赵永忠;李西平 刊期: 2004年第09期

  • 内含子和5'非翻译区对人血小板生成素基因表达的影响

    目的观察人血小板生成素(TPO)基因组中内含子及5'非翻译区对TPO表达的影响.方法分别构建含TPO基因组中不同内含子的各类TPO真核表达质粒,在cos-1细胞中进行了瞬间表达,并采用高灵敏定量试剂盒检测培养上清中人血小板生成素的含量.结果在转染48 h后,各类TPO重组质粒在cos-1细胞中表达顺序为:TPOintron v>TPOcDNA>△TPOintronI>TPO intron l>TPO gDNA.结论在TPO基因组中,后一个内含子可显著提高TPO的表达水平,表明其可能含有特殊的增强序列;同时进一步证实,在TPO基因组中可能存在抑制TPO高水平表达的结构元件,造成TPO基因组在细胞中不表达或低水平表达.

    作者:宁云山;李妍;周明乾;李明;曾溢滔;王小宁 刊期: 2004年第09期

  • 基因芯片筛选大肠侧向发育型肿瘤相关基因的初步研究

    目的应用基因芯片初步筛选大肠侧向发育型肿瘤(LST)相关基因,为进一步研究大肠癌的发病机制提供新的思路和线索.方法抽提大肠侧向发育型肿瘤癌细胞株、SW480细胞株、LoVo细胞株的总RNA并纯化mRNA;将18 816种人类基因及LST片段PCR产物用Biorobotics公司的BG600点样仪点样于纤维膜上,制成基因芯片.将3个样品的mRNA分别逆转录合成探针并33P标记,同芯片杂交.严格洗片后Fuji film公司FLA 3000扫描仪扫描芯片信号图象,ArrayGauge1.0软件分析比较3种细胞株中差异表达基因.结果和结论在18 816种人类基因中存在着一系列LST同普通大肠癌细胞株之间的差异表达基因.在本研究中共有差异表达基因97个,其中共上调58个,共下调39个.表明其可能存在不同的肿瘤发生机制,故进一步研究其相关基因,在分子水平上阐明其发生机制及与大肠癌的关系具有重要意义.

    作者:王新颖;姜泊;赖卓胜;马文敏;耿焱 刊期: 2004年第09期

  • 珍珠层/聚乳酸重组人工骨修复动物骨干缺损的实验研究

    目的探讨珍珠层/聚乳酸重组人工骨(NPCB)在体内的生物相容性、降解情况及成骨特点,评价其性能,为进一步的应用提供实验依据.方法将NPCB随机植入成年新西兰白兔1.5 cm的桡骨缺损内,并设立不植入任何材料的空白对照,观察NPCB植入后动物的局部反应,检测动物术后1周、4周的血钙值,并与术前1天比较;于术后6、8、12、16周取材,作X线、骨矿含量、大体标本及组织形态学观察,分析不同时期组织反应、骨缺损修复及材料降解情况.结果NPCB植入后无明显的局部不良反应,术后1周、4周血钙值与术前1天相比无明显差异.植入NPCB的骨缺损内骨矿含量在6~12周时升高幅度明显高于空白对照组,但12周后植入NPCB的骨缺损内骨矿含量出现下降.X线检查、大体标本及组织形态学观察显示NPCB的成骨方式主要是骨传导成骨,至术后16周时骨缺损基本修复,NPCB与宿主骨结合紧密,而空白对照骨缺损断端仅有少量骨修复,形成骨不连.NPCB植入后即开始其降解过程,12周以后材料周围出现较多吞噬有材料颗粒的巨噬细胞和多核巨细胞,16周时仍有部分材料未降解吸收.结论NPCB具备良好的生物相容性和骨传导能力,可以在体内逐渐发生生物降解.

    作者:刘金标;廉维;陈建庭;金大地;权毅;潘显明 刊期: 2004年第09期

  • 绿茶多酚抑制LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖

    观察绿茶多酚对低密度脂蛋白(LDL)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖和p44/42MAPK表达的影响.体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,在LDL(100μg/ml)刺激时,应用不同剂量的绿茶多酚作用24 h后,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态.应用流式细胞术测定细胞周期,p44/42磷酸化抗MAPK抗体的蛋白免疫印迹法测定MAPK蛋白表达.与未经LDL处理的平滑肌细胞相比,LDL可以明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖,绿茶多酚对LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.05),并呈现剂量依赖性.流式细胞术检测表明,绿茶多酚可以使LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞大部分处于G0/G1期,与LDL组相比有明显差异(P<0.05).LDL对磷酸化p44/42MAPK蛋白表达有显著的增强作用,此作用可被绿茶多酚抑制.绿茶多酚可明显抑制LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖和磷酸化p44/42丝裂素活化蛋白激酶的表达.

    作者:欧阳平;彭文烈;赖文岩;徐安龙 刊期: 2004年第09期

  • 动静脉内瘘缝合术的改进

    目的探讨连续锁边缝合法吻合不同部位动静脉内瘘的临床效果.方法对160例慢性肾功能衰竭患者,分别在其不同的部位,采用连续锁边缝合法施行了动静脉内瘘吻合术.结果缩短了血管吻合时间,提高了一次性吻合成功率和手术成功率,减少了并发症,获得了满意的临床效果.结论连续锁边缝合法是一种良好的动静脉内瘘缝合技术,适应于不同部位的内瘘吻合,特别适于血管条件差的患者.

    作者:丰贵文;赵显国 刊期: 2004年第09期

  • 新生鼠下丘脑结节乳头核组胺能神经细胞的原代培养

    目的探讨新生鼠下丘脑结节乳头核(TM)组胺能神经细胞的体外培养方法.方法从新生鼠(24 h内)下丘脑后部分离出TM神经细胞,采用含有B27的Neurobasal Medium培养液进行体外原代培养.应用免疫细胞化学染色对培养的细胞进行鉴定.结果从新生鼠下丘脑中分离的TM神经细胞,在本实验条件下生长良好.原代培养7~9 d的神经细胞在形态上趋向成熟.免疫细胞化学染色结果表明培养的神经细胞呈组胺免疫反应阳性,为组胺能神经细胞.结论新生鼠下丘脑TM神经细胞可进行体外原代培养,它可作为研究中枢组胺神经系统的体外细胞模型.

    作者:莫志贤;梁荣能;翁建霖 刊期: 2004年第09期

  • 非高血压左心室肥厚患者血清胰岛素水平的变化

    目的探讨非高血压左心室肥厚(LVH)与血清胰岛素水平变化的关系.方法测定42例非高血压LVH患者的血清胰岛素、血糖和空腹血脂水平;用超声测定并计算心脏左室质量(LVM)和左室质量指数(LVMI),并按心脏超声测定分为非高血压LVH和左室正常组.结果LVH组的空腹血甘油三酯和胰岛素分别高于左室正常组,而胰岛素抵抗指数(HOMA法)高于左室正常组.直线相关分析显示非高血压LVH组HOMA指数与LVM、LVMI正相关(r=0.38、P<0.01及r=0.29、P<0.01).结论非高血压LVH患者的高胰岛素血症与LVH有密切相关,高胰岛素血症可能参与非高血压LVH的发生和发展.

    作者:王旭开;杨成明;王燕;王红勇;付春江;方玉强;石伟彬;张晔;杜文华;李陶 刊期: 2004年第09期

  • 紫河车体外对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

    目的观察中药紫河车对黑素细胞和酪氨酸酶的影响.方法采用MTT法测定黑素细胞增殖情况,Hunt法测定黑素合成,以蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性.结果(1)紫河车对黑素细胞具有增殖作用,其佳增殖浓度为0.1g/L(P<0.01);(2)紫河车可增强黑素合成能力,其佳增强能力为0.1g/L(P<0.01);(3)紫河车对酪氨酸酶亦具有激活作用,其佳激活浓度为1g/L(P<0.01).结论紫河车能激活黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性.

    作者:杨柳;邓燕 刊期: 2004年第09期

  • 阿司匹林对血管内皮细胞增殖及磷酸化p44/42 MAPK表达的抑制作用

    目的观察阿司匹林对体外培养的血管内皮细胞的增殖和磷酸化p44/42丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响.方法体外培养血管内皮细胞株ECV304,应用1、2、5、10mmol/L的阿司匹林分别作用并设立对照进行比较,采用MTS/PES法确定ECV304细胞的增殖状态.利用p44/42磷酸化抗MAPK抗体的蛋白免疫印迹法测定磷酸化p44/42MAPK蛋白表达.结果各组的细胞增殖率分别为对照组1.533±0.286,阿司匹林1 mmol/L组1.253±0.225,2mmol/L组0.953±0.149,5 mmol/L组0.708±0.125,10mmol/L组0.459±0.107.统计分析显示低至1 mmol/L的阿司匹林仍能明显抑制ECV304细胞的增殖(P<0.05),并呈现剂量依赖性.阿司匹林对ECV304细胞的磷酸化p44/p42 MAPK表达有显著的抑制作用(P<0.05).结论阿司匹林对体外培养的血管内皮细胞的增殖和内皮细胞中磷酸化p44/42MAPK的表达均有明显的抑制作用.

    作者:刘卉;欧阳平;刘振华;赖文岩;许顶立 刊期: 2004年第09期

  • 胼周胼缘动脉起始部双动脉瘤1例

    颅内动脉瘤以单发多见,多发性颅内动脉瘤常发生在多个动脉上,而在1个动脉分叉部同时发生2个动脉瘤尚未见报道.近我科收治1例胼周胼缘动脉起始部双动脉瘤患者,报告如下.

    作者:冯文峰;黄胜平;漆松涛 刊期: 2004年第09期

  • 应用Super SMART cDNA合成技术扩增哮喘嗜酸性粒细胞总RNA

    目的应用Super SMART cDNA合成技术从嗜酸细胞微量总RNA扩增大量双链cDNA.方法利用Percoll密度梯度离心分离哮喘病人血嗜酸性粒细胞,用Trizol试剂盒提取细胞总RNA,利用Super SMART cDNA合成技术合成cDNA第1链及优化扩增第2链.通过梯度电泳鉴定cDNA产品质量,通过对获得的cDNA定量来评估扩增效能.结果从20 ng总RNA成功扩增出双链cDNA 7.155μg,电泳结果显示cDNA质量及纯度较高.结论Super Smart cDNA合成技术可实现从微量总RNA高效扩增高质量的cDNA,为进一步从基因水平研究哮喘机制奠定了基础.

    作者:赵海金;蔡绍曦;邹飞;佟万成;万为人 刊期: 2004年第09期

  • 钩吻总生物碱中钩吻素子的提取与分离

    目的研究钩吻中总生物碱的提取、总量测定方法及其中主要成分钩吻素子的分离、鉴定方法.方法采用加热回流提取与氯仿萃取相结合的方法提取总生物碱;采用碱性硅胶柱层析、梯度洗脱法分离钩吻素子并用薄层层析法和紫外分光光度法定性鉴别.结果从钩吻中分离得到了无色棱柱状钩吻素子晶体.结论本实验所采用的提取钩吻总生物碱及分离钩吻素子的方法行之有效.

    作者:张兰兰;王志睿;黄昌全;张忠义;林敬明 刊期: 2004年第09期

  • 鼻内镜手术中鼻甲及上颌窦口不同处理的疗效比较

    目的观察鼻内镜手术中不同的中鼻甲及上颌窦口处理方式对远期疗效的影响.方法对391例慢性鼻窦炎鼻息肉患者进行内镜鼻窦手术,术后随访0.5~2.5年.结果治愈328例(83.9%),好转53例(13.6%),无效10例(2.6%),总有效率97.5%.术后并发症主要为鼻腔粘连.结论鼻内镜术中鼻甲及上颌窦口的正确处理、术后综合治疗能提高治愈率,减少并发症.

    作者:申玉梅 刊期: 2004年第09期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学