学术投稿

三七总皂甙增强人内皮源性一氧化氮合酶基因启动子活性

张丽华;贾钰华;孙学刚;邢飞跃;刘志锋;宋革;姜勇

关键词:三七总皂甙, 一氧化氮合酶, 基因表达调控, 酶学, 共转染
摘要:目的探讨三七总皂甙(tPNS)对人内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调控机制.方法以基因重组技术构建人eNOS基因启动子区(-1~-1 600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc,采用脂质体介导的细胞基因共转染技术将peNOS-Luc、空载体pGL2-Basic和β-半乳糖苷酶表达质粒pCMV-β共转染NIH3T3细胞,用细菌脂多糖(LPS)、tPNS和转移生长因子β1(TGFβ1)等因子分别刺激转染后的NIH3T3细胞,检测并比较荧光素酶/β-半乳糖苷酶活性,以确定LPS、tPNS和TGFβ1对人eNOS基因启动子转录活性的影响.结果(1)酶切和测序结果均证实重组载体peNOS-Luc构建正确;(2)重组载体peNOS-Luc在NIH3T3细胞中有效表达;(3)在LPS刺激下,人eNOS启动子的转录活性降低,而在tPNS和TGFβ1刺激下,其启动子的转录活性增强,其中,TGFβ1较tPNS所致的转录活性更强.结论正确构建了人eNOS基因启动子区(-1~-1600bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc:tPNS在NIH3T3细胞中增强人eNOS基因启动子的转录活性.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 新生小牛血清对人胎脑海马组织神经干细胞分化的影响

    目的探讨新生小牛血清对人胎脑海马组织神经干细胞分化的影响.方法采用细胞培养和免疫细胞组化技术,观察不同浓度新生小牛血清对人胎脑海马组织神经干细胞分化的影响.结果新生小牛血清能诱导人神经干细胞分化为神经细胞及神经胶质细胞,在无血清培养基与含不同浓度新生小牛血清培养基中培养的神经干细胞分化为神经细胞和神经胶质细胞的数目在发生变化,并且随着新生小牛血清浓度的增加,神经干细胞分化为神经细胞的数量在减少,分化为神经胶质细胞的数量增加.结论新生小牛血清影响人神经干细胞分化为神经细胞和神经胶质细胞的比例,并与新生小牛血清的浓度有一定的关系.

    作者:尹晓娟;封志纯;杜江 刊期: 2004年第10期

  • 致敏受者肾移植急性排斥反应的影响因素

    目的探讨致敏受者肾移植急性排斥反应的影响因素.方法对102例术前致敏患者临床资料进行回顾性分析,探讨群体反应抗体(PRA)水平、氨基酸残基配型、术后PRA水平升高及细胞因子基因型对急性排斥反应发生率的影响.结果和结论102例致敏肾移植受者术后随访期间发生急性排斥反应33例次,其中PRA水平、氨基酸残基相配程度、术后PRA水平升高、TNF-α高产量基因型和IL-10高产量基因型对移植肾的急性排斥发生率均有显著性影响.术前综合评估这些因素,有利于制订合理的免疫抑制方案.

    作者:黄先恩;范礼佩;李留洋;赵明;夏穗生 刊期: 2004年第10期

  • 中国人CTLA-4基因-1722位点多态性与系统性红斑狼疮的相关性

    目的研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen 4,CTLA-4)基因启动子区-1722位点(T/C)多态性在中国南方地区汉族人群中的分布及其与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性.方法103例患者诊断均符合1982年美国风湿病学会修订的SLE分类标准,其中男13例,女90例.正常对照组110例,其中男21例,女89例.全部研究对象均为无血缘关系的中国南方汉族人群.采用微量全血提取法,从EDTA抗凝血中提取DNA.应用聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)方法,对所有SLE患者和正常对照者进行CTLA-4基因-1722位点多态性检测.结果CTLA-4基因-1722位点多态性在中国南方地区人群中普遍存在,与正常对照组比较,SLE患者CTLA-4基因-1722位点TC基因型频率明显升高(42%vs 58%,P<0.05),CC基因型频率明显降低(25%vs 15%,P<0.05),TT基因型频率虽有降低趋势,但差异无显著性(33%vs 27%,P>0.05);而SLE患者等位基因频率和携带者频率分布均无显著性差异(P>0.05).在不同人种CTLA-4基因-1722位点基因型频率和等位基因频率分布存在差异.结论CTLA-4基因-1722位点多态性与SLE明显相关,CTLA-4基因可能是SLE的易感基因.

    作者:徐安平;尹培达;苏晓燕 刊期: 2004年第10期

  • 创伤性颈动脉海绵窦瘘的血管内栓塞治疗

    目的探讨创伤性颈动脉海绵窦瘘(TCCF)的治疗方法、栓塞技术要点及随访意义.方法对119例TCCF病人共行128次栓塞.其中,股动脉入路112例,股静脉入路5例,经眼上静脉入路2例;以球囊栓塞瘘口101例,以微弹簧圈栓塞13例,球囊并用弹簧圈2例,干冻硬脑膜3例.术后3月~10年随访110例,其中行影像学复查29例.结果111例1次栓寒成功,8例于第1次栓塞后球囊泄漏复发,经再次栓塞治愈,总治愈率100%.颈内动脉通畅率90.8%(108/119),无严重并发症,随访显示疗效可靠.结论TCCF一般经股动脉入路用可脱性球囊栓塞瘘口,小瘘口TCCF选择微弹簧圈栓塞;若颈内动脉结扎或闭塞,可经静脉入路栓塞瘘口.一般情况下海绵窦瘘均表现为良性过程,应力争解剖治愈,不可轻易牺牲颈内动脉.正确选择栓塞途径及栓塞材料是手术成功的关键.

    作者:郭元星;李铁林;段传志;汪求精 刊期: 2004年第10期

  • 神经干细胞移植及术后处理:附70例报告

    目的总结脑损伤和脊髓损伤后神经功能障碍病人的神经干细胞移植及术后相关问题的处理经验.方法对70例脑和脊髓神经干细胞移植病人术后相关问题的处理和恢复情况进行回顾分析.结果除3例病人出现颅内感染,通过腰穿椎管内给抗生素终出院外,其余病人术后均顺利出院,而手术后有3例病人性功能完全恢复,5例病人大小便可以自己控制.结论对于脑损伤功能障碍或者脊髓损伤的截瘫病人,进行脑内或者脊髓神经干细胞移植,对于促进脑功能或者脊髓功能恢复有意义,术后相关问题的处理是手术预后的重要保障.

    作者:周青;张世忠;徐如祥;徐凯 刊期: 2004年第10期

  • 输尿管镜下弹道碎石治疗结石梗阻性肾积脓

    目的总结应用输尿管镜治疗结石梗阻性肾积脓的经验.方法对输尿管结石梗阻性肾积脓患者行输尿管镜检查、气压弹道碎石、取石及留置双J管治疗.结果12例患者,10例1次取净结石,2例1~2周后经体外震波碎石治愈,无明显并发症.结论应用输尿管镜治疗结石梗阻性肾积脓疗效好、创伤小、安全可靠,可作为该病的重要治疗方法.

    作者:辛军;黄书堤;于立新;辛明华;蔡经爽;苏智军 刊期: 2004年第10期

  • 广州地区扎幌样病毒的检出及基因型分析

    目的了解广州腹泻儿童是否存在扎幌样病毒(Sapporo-like virus,SLV)感染.方法在2003年秋冬季腹泻流行期间在南方医院儿科收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本,并采用半套式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测.纯化阳性标本PCR产物并测序,然后将其同GenBank中的参比毒株序列比较.结果收集的169份标本中有1份SLV(CH03354)PCR扩增阳性,检出率为0.59%,同源性分析表明该毒株属于SLVGⅠ-1群.结论广州地区存在SLV所致感染,本次实验检出毒株基因型与安徽毒株不同,说明我国不同地区可能存在不同的SLV基因型.

    作者:刘翼;戴迎春;李建栋;詹惠春;陈清;俞守义;聂军 刊期: 2004年第10期

  • 生物素-亲和素系统在MR靶向成像中的应用

    目的探讨利用生物素-亲和素系统的靶向定位效应和生物放大作用,提高MR分子成像的敏感性.方法制备生物素化HAb18单克隆抗体并测定其生物素化程度及抗原结合活性.将8只荷人肝细胞癌裸鼠静脉注射生物素化单克隆抗体600μg,24 h后腹腔注射80μg亲和素,30 min后再静脉给予Gd-DTPA-链霉亲和素.对实验动物行MR扫描,测量SET T1 WI平扫及增强后10、30min及2、6、12、24 h图像内肿瘤、肝脏、肌肉的信号强度,绘制信号强度-时间曲线,并计算其强化率及对比度噪声比.结果HAb18单克隆抗体经生物素化后,每个抗体分子平均可结合20个分子生物素,其抗原结合活性约为91%.增强后肿瘤信号强度缓慢升高,在注射对比剂后第6小时,肿瘤的强化率、比度噪声比达到大值,与其他各时间点有显著性差异.肝脏在注射对比剂后第6小时的信号强度达到高,而后信号强度下降,增强后12 h的信号强度与平扫相似.肌肉表现为轻度强化,增强后各时间点的信号强度与平扫相比无明显差异.结论利用生物素-亲和素技术对肿瘤进行MR靶向成像,具有特异性强化作用并能延长肿瘤的强化时间,但Gd-DTPA-SA的血池效应也造成了肝脏的持续强化.

    作者:刘岘;许乙凯;叶靖 刊期: 2004年第10期

  • 难治性白血病异基因造血干细胞移植超强预处理的疗效

    目的探讨异基因造血干细胞移植超强预处理联合移植后诱导移植物抗白血病(GVL)治疗难治未缓解白血病的预处理相关毒性(RRT)和疗效.方法18例移植前难治未缓解白血病和62例移植前完全缓解的急性白血病或慢性粒细胞白血病慢性期病人分别接受超强预处理方案和全身放疗+环磷酰胺或改良BuCY(羟基脲、马利兰、阿糖胞苷、环磷酰胺)方案(对照组).在难治性白血病移植后30 d未出现移植物抗宿主病(GVHD)病人,采用早期快速递减环孢素A或供体淋巴细胞输注诱导GVL.统计移植后RRT发生率与致死率、移植后完全缓解率、GVHD发生率、白血病复发和无病生存率等.结果移植后除超强预处理组1例和对照组2例死于移植相关并发症外,其余病人均获得造血重建.两组总RRT发生率均为100%,各脏器RRT发生均以胃肠常见,超强预处理组和对照组分别为83.3%和85.5%,两组口腔RRT发生率分别为44.4%和62.9%,膀胱RRT发生率分别为16.7%和33.9%,各组比较未见差异.超强预处理组RRT致死率为0,对照组为5%,两组比较无差异(P=0.341).18例接收超强预处理病人除1例死于移植中感染外,其余病人均获完全缓解.超强预处理组和对照组移植后急性GVHD发生率分别为11.8%和18.3%,移植后3年估计无病生存率分别为(61.2±12.3)%和(65.0±7.4)%(P=0.6311).结论连续序惯超强预处理方案能提高移植前未缓解的难治性白血病移植后完全缓解率和无病生存率,不增加移植中RRT发生率和致死率.

    作者:刘启发;孙竞;徐丹;张钰;范志平;魏永强;孟凡义;周淑芸 刊期: 2004年第10期

  • 老年渔民重症急性胆管炎31例临床分析

    1989年~2002年10月间我科共收治31例老年重症急性胆管炎病人,现报告如下.

    作者:邓群峰;肖建秋;陈建发;许辉;刘训;李轶辉 刊期: 2004年第10期

  • 人鼻咽癌不同部位组织相关基因表达谱的研究

    目的筛选鼻咽癌癌变发生过程中的重要基因.方法应用显微切割和荧光标记探针基因芯片杂交技术,检测鼻咽癌、癌周组织、癌旁组织及鼻咽炎症组织的基因差异表达,扫描仪扫描荧光芯片,图象处理软件分析结果.结果在检测的3组标本中,存在大量差异表达基因,涉及基因包括信号与蛋白传递、癌基因与原癌基因、免疫相关基因、凋亡基因,以及DNA结合转录和转录因子等范围.结论鼻咽癌癌变过程中有多个多种类基因参与,说明鼻咽癌癌变过程是一个复杂、多通路的过程.

    作者:韩慧霞;姚连生;王爽;韩为农;姚开泰 刊期: 2004年第10期

  • 大鼠海马神经干细胞的分离、培养及鉴定

    目的探寻出生后1~3 d和成年大鼠海马分离、培养并鉴定神经干细胞(NSC)的可行性.方法向培养基添加碱性成纤维细胞生长因子、脑源性神经营养因子及其他生长因子,采用单细胞克隆技术,分离出生后1~3 d和成年SD大鼠海马组织并分别无血清培养;以免疫细胞化学方法对原代和传代培养形成的克隆细胞,以及其分化后的细胞进行鉴定.结果上述条件下培养可形成悬浮生长的表达巢蛋白的神经球,且具有连续克隆的能力;分化后可得到具有网状联系的、分别呈神经元特异性烯醇化酶阳性和胶质纤维酸性蛋白阳性的神经元及胶质细胞.结论新生及成年SD大鼠海马存在神经干细胞.

    作者:郭洪波;邹飞 刊期: 2004年第10期

  • 恶性肿瘤患儿家长身心状况调查分析

    目的了解住院恶性肿瘤患儿家长存在的心身问题,探索解决问题的护理依据.方法使用国际通用焦虑自评量表对我院已确诊为恶性肿唐的68名住院患儿家长进行问卷调查.结果68名患儿家长所得标准分44.68±11.26,平均出现的焦虑症状为(6.42±2.25)项,女性家长焦虑均分58.38±8.85,男性家长焦虑均分53.30±9.17,女性高于男性(P<0.05).采取积极治疗态度患儿家长焦虑均分55.07±8.91,由于经济原因可能放弃治疗患儿家长焦虑均分66.71±4.50,前者低于后者(P<0.001).结论住院恶性肿瘤患儿家长在感情上和情绪上均表现不同程度的焦虑症状.恶性肿瘤患儿家长身心状况与性别、家庭经济状况密切相关.

    作者:余文玉;杨关芬;任志美 刊期: 2004年第10期

  • 斑蝥素对G1/S期肾小管上皮细胞ATP的调节

    目的通过斑蝥素对G1/S期肾小管上皮细胞(RTECs)低氧损伤后细胞ATP代谢影响的研究,探讨斑螯素稳定肌动蛋白微丝骨架系统的机制.方法将新生猪G1/S界面RTECs分为3组:实验组(氰化钠+斑蝥素)、缺氧组(氰化钠)和空白对照组,应用反相高效液相比较缺氧后各组细胞内ATP含量的变化.结果实验组细胞内ATP含量[(14.50±0.26)mmol/g蛋白]明显高于缺氧组[(4.25±0.11)mmol/g蛋白]和空白对照组[(8.58±0.13)mmol/g蛋白](P<0.01).结论斑蝥素稳定肌动蛋白微丝骨架系统可能与抗RTECs低氧损伤后细胞能量代谢紊乱相关.

    作者:沈青;姚裕家;李如英;丁翠玲;侯立朝;孙绪德 刊期: 2004年第10期

  • POEMS综合征伴肾损害1例报告

    1临床资料患者男,33岁,既往身体健康.于2002年7月份无意中发现双侧乳腺肿大,乳头增大,乳晕颜色加深,乳头可挤出少许黄色液体.局部不红,无疼痛,同时伴有性欲减退.因肿块增大迅速,于2002年8月在增城市医院行肿块切除术,切下肿物约3.0 cm×3.0 cm大小.病理检查结果示:男性乳房发育.2002年10月份出现颜面及下肢浮肿,伴双下肢乏力,活动后明显加重.无发热、尿痛、关节痛等,在当地予中西药治疗(具体不详),无明显疗效,2002年12月份再次前往增城市医院诊治.

    作者:李锡强;任昊 刊期: 2004年第10期

  • 湿热环境下Ⅱ度烫伤大鼠施行冷却疗法后皮肤温度的改变

    目的观察大鼠浅Ⅱ度烫伤创面即刻施行冷疗后,在湿热环境下皮肤温度的变化.同时,评价冷疗敷料方法的降温效果.方法24只Wistar大鼠,随机分成4组,即常温常湿对照组(常对组)、常温常湿冷疗组(常冷组)、湿热对照组(高对组)和湿热冷疗组(高冷组),每组6只.制作浅Ⅱ度烫伤模型后分别采取不同的干预条件,常温组的实验环境条件为干球温度(Tdb)(26.33±1.29)℃、相对湿度(rh)(71.05±4.57)%,湿热组的实验环境条件为Tdb(35.33±0.35)℃,rh(70.81±1.38)%,对照组不给予冷疗降温,冷疗组给予腹部冷疗敷料降温,暴露时间均为125 min.监测皮肤温度(Ts),烫伤5 min后每20 min记录1次.结果4组组内7个时间水平之间、不同时间水平组间以及不同组间比较,湿热环境使Ts升高(P<0.001),冷疗使Ts降低(P<0.001),且时间与环境温度(P≤0.002)、时间与冷疗(P<0.05)、时间、环境温度与冷疗对Ts变化影响有交互作用(P<0.05).常温组冷疗前后Ts降低了(1.92±2.13)℃,湿热组Ts降低了(2.36±1.03)℃.结论在湿热环境下,腹部冷疗敷料有效降低了大鼠创面皮肤温度,阻止了热损伤的进程和创面余热的不良作用.

    作者:张立颖;李亚洁;罗炳德;李亦蕾;林妮 刊期: 2004年第10期

  • 副溶血弧菌不耐热溶血毒素tlh基因的序列分析

    目的利用PCR技术扩增副溶血弧菌不耐热溶血毒素tlh基因,对tlh基因进行生物信息学分析.方法利用PCR技术扩增tlh基因,克隆至载体pET32a+并测序.将测序结果提交国际互联网上有关生物信息网站进行生物信息学分析.结果和结论测序结果tlh14-90被GenBank收录,登录号为AY289609.t1h14-90全长1 257bp,与国际标准株WP1的同源性为99%,含有启动子和密码子,预测其编码一个含418个氨基酸的蛋白质(TLH14-90),分子式为C2131H3184N548O649S16,相对分子质量47 392.9,理论等电点pI为4.92,丙氨酸、亮氨酸和天冬酰氨的含量分别为11.0%、7.4%和7.2%,含有4个半胱氨酸(Cys),κ-D法推算的疏水性参数为-34.预测其二级折叠结构为α/□蛋白,三级结构未给出.

    作者:李志峰;聂军;戴迎春;李建栋;陈清;俞守义 刊期: 2004年第10期

  • 安定或/和硫酸镁在预防骶管阻滞引起局麻药毒性反应中的应用

    目的探讨安定或/和硫酸镁在预防骶管阻滞引起局麻药毒性反应中的作用.方法240例病人随机分为A、B、C、D组,每组60例,各组间平均年龄、体质量及性别在统计学上无明显差异.A组不用硫酸镁或安定,骶管阻滞前10min静脉注射安定(B组)、硫酸镁(C组)、硫酸镁+安定(D组),观察局麻药的毒性反应情况.结果B、C组毒性症状明显减少,与A组比较有显著差异(P<0.05);D组与A组比较有非常显著差异(P<0.01).结论静脉注射安定或硫酸镁均可明显降低骶管阻滞局麻药毒性反应,二者联合应用效果更佳.

    作者:杨天明;范新民;范学良 刊期: 2004年第10期

  • 三七总皂甙增强人内皮源性一氧化氮合酶基因启动子活性

    目的探讨三七总皂甙(tPNS)对人内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调控机制.方法以基因重组技术构建人eNOS基因启动子区(-1~-1 600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc,采用脂质体介导的细胞基因共转染技术将peNOS-Luc、空载体pGL2-Basic和β-半乳糖苷酶表达质粒pCMV-β共转染NIH3T3细胞,用细菌脂多糖(LPS)、tPNS和转移生长因子β1(TGFβ1)等因子分别刺激转染后的NIH3T3细胞,检测并比较荧光素酶/β-半乳糖苷酶活性,以确定LPS、tPNS和TGFβ1对人eNOS基因启动子转录活性的影响.结果(1)酶切和测序结果均证实重组载体peNOS-Luc构建正确;(2)重组载体peNOS-Luc在NIH3T3细胞中有效表达;(3)在LPS刺激下,人eNOS启动子的转录活性降低,而在tPNS和TGFβ1刺激下,其启动子的转录活性增强,其中,TGFβ1较tPNS所致的转录活性更强.结论正确构建了人eNOS基因启动子区(-1~-1600bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc:tPNS在NIH3T3细胞中增强人eNOS基因启动子的转录活性.

    作者:张丽华;贾钰华;孙学刚;邢飞跃;刘志锋;宋革;姜勇 刊期: 2004年第10期

  • 胰酶在创伤/失血性休克后肠损伤中的作用

    目的通过观察胰蛋白酶抑制剂ANGD的作用,分析胰酶与创伤/失血性休克(T/HS)后肠损伤的关系.方法雄性SD大鼠剖腹术(创伤)后分别经肠腔或静脉内给予ANGD或生理盐水,随后经受T/HS或创伤/假休克(T/SS),90min后林格液复苏;复苏后3 h评估肠损伤情况.结果肠腔内给予ANGD的T/HS大鼠肠绒毛损伤明显少于肠腔内无ANGD灌注及静脉给予ANGD的T/HS对照组.肠腔内灌注林格氏液与不行肠腔内灌注相比,对T/HS所致的肠损伤显示出某种程度的保护作用.结论肠腔内的胰蛋白酶可能是T/HS后肠损伤的重要促进因素.

    作者:石汉平;闻英;张策;薛琪;雷尚通 刊期: 2004年第10期

南方医科大学学报杂志

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主办:南方医科大学