学术投稿

利用绿色荧光蛋白筛选酵母突变株的新方法

胡莲美;朴英杰;何才姑;马文丽;崔东;郑文岭

关键词:同源重组, 转座子, 绿色荧光蛋白, 酵母, 突变株
摘要:目的建立快速简便筛选酵母突变株的方法.方法利用同源重组技术,通过转座子上的GFP基因,从酵母基因组文库中,检测发生突变的菌株,从而筛选出酵母突变株.结果应用荧光显微镜观察SC-ura选择平板筛选出的酵母,有绿色荧光发出的即为阳性菌落.结论利用同源重组技术,初步筛选出了所需的酵母突变株.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 大鼠骨髓源干细胞在损伤脑组织中的分化趋势

    目的探讨迁移至损伤脑组织的骨髓源干细胞(BMDSCs)的分化趋势.方法将雌性SD大鼠脑损伤模型在制作好24 h后经尾静脉植入GFP标记的雄性SD大鼠的BMDSCs.在植入后2周、4周和8周分批取脑,分别用CD11b和GFAP荧光免疫组织化学方法检测GFP阳性细胞的性质.结果在移植GFP标记的BMDSCs后1周,植入的GFP阳性BMDSCs占外周血白细胞总数的3.53%;移植BMDSCs后4周和8周的脑损伤病灶周围有集中分布的GFP阳性细胞,分别表达小胶质细胞的细胞表面标记CD11b和胶质纤维酸性蛋白GFAP.结论GFP标记的BMDSCs能迁移至脑损伤病灶周围并有向小胶质细胞和星形胶质细胞分化的趋势.

    作者:邹西峰;张海燕;赵春礼;李铁林;徐群渊 刊期: 2004年第10期

  • 致敏受者肾移植急性排斥反应的影响因素

    目的探讨致敏受者肾移植急性排斥反应的影响因素.方法对102例术前致敏患者临床资料进行回顾性分析,探讨群体反应抗体(PRA)水平、氨基酸残基配型、术后PRA水平升高及细胞因子基因型对急性排斥反应发生率的影响.结果和结论102例致敏肾移植受者术后随访期间发生急性排斥反应33例次,其中PRA水平、氨基酸残基相配程度、术后PRA水平升高、TNF-α高产量基因型和IL-10高产量基因型对移植肾的急性排斥发生率均有显著性影响.术前综合评估这些因素,有利于制订合理的免疫抑制方案.

    作者:黄先恩;范礼佩;李留洋;赵明;夏穗生 刊期: 2004年第10期

  • 广州地区扎幌样病毒的检出及基因型分析

    目的了解广州腹泻儿童是否存在扎幌样病毒(Sapporo-like virus,SLV)感染.方法在2003年秋冬季腹泻流行期间在南方医院儿科收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本,并采用半套式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测.纯化阳性标本PCR产物并测序,然后将其同GenBank中的参比毒株序列比较.结果收集的169份标本中有1份SLV(CH03354)PCR扩增阳性,检出率为0.59%,同源性分析表明该毒株属于SLVGⅠ-1群.结论广州地区存在SLV所致感染,本次实验检出毒株基因型与安徽毒株不同,说明我国不同地区可能存在不同的SLV基因型.

    作者:刘翼;戴迎春;李建栋;詹惠春;陈清;俞守义;聂军 刊期: 2004年第10期

  • 外源性mIκBα基因抑制肝癌细胞HepG2的生长

    目的观察核转录因子的抑制基因mIκBα在肝癌细胞株HepG2的表达及对该细胞株生长的影响.方法将由293包装细胞产生的含mIκBα的Ad腺病毒上清(Ad-mIκBα)和含包装载体的腺病毒上清(Adv)感染HepG2细胞,观察感染后HepG2细胞的绿色荧光蛋白(GFP)表达和mIκBα蛋白表达,并观察细胞的平板集落形成数、软琼脂集落形成能力、细胞生长曲线、裸鼠成瘤实验.结果肝癌细胞感染腺病毒后GFP表达阳性,感染含mIκBαAd腺病毒的肝癌细胞有mIκBα蛋白表达;HepG2/Ad-mIκBα细胞形成的集落数明显比HepG2/Adv和HepG2细胞形成的集落数少(P<0.05);HepG2细胞、HepG2/Adv细胞在软琼脂内存活,并形成桑椹样细胞集落,而HepG2/Ad-mIκBα细胞在软琼脂上无生长;细胞生长曲线显示HepG2/Ad-mIκBα细胞生长速度较HepG2/Adv、HepG2亲本细胞有所减慢,但饱和密度无显著性差异.裸鼠接种4周后HepG2/Ad-mIκBα细胞成瘤率为80%,HepG2/Adv细胞成瘤率为100%,肿瘤形成率无显著性差异,HepG2/Ad-mIκBα细胞形成的肿瘤的体积比HepG2/Adv细胞形成的肿瘤的体积明显减小(P<0.05).结论mIκBα基因可以抑制HepG2肝癌细胞的生长.

    作者:金吴东;陈龙华;穆峰 刊期: 2004年第10期

  • 糖尿病自主神经病变的皮肤流电响应检测分析

    目的在研究皮肤流电响应(GSR)检测原理的基础上,通过研制样机并进行临床研究,以实现对糖尿病早期自主神经病变(DAN)的无创检测与疗效分析.方法随机选择25名糖尿病患者(包括14例伴有明显的DAN),采用基于LabVIEW的虚拟仪器开发平台,获得左右两侧手指的GSR信号.采用相应的分析软件分析,并与对照组进行对比.结果无论患者有无出现临床DAN症状,GSR研究方法对糖尿病患者均表现出很强的特异性,同时临床治疗前后也表现出较明显的改变.结论GSR检测分析方法及本样机在评价与诊断DAN方面具有重要价值,能够为临床诊断和治疗DAN提供参考依据.

    作者:李永勤;王胜军;高方;邓亲恺 刊期: 2004年第10期

  • 湿热环境下Ⅱ度烫伤大鼠施行冷却疗法后皮肤温度的改变

    目的观察大鼠浅Ⅱ度烫伤创面即刻施行冷疗后,在湿热环境下皮肤温度的变化.同时,评价冷疗敷料方法的降温效果.方法24只Wistar大鼠,随机分成4组,即常温常湿对照组(常对组)、常温常湿冷疗组(常冷组)、湿热对照组(高对组)和湿热冷疗组(高冷组),每组6只.制作浅Ⅱ度烫伤模型后分别采取不同的干预条件,常温组的实验环境条件为干球温度(Tdb)(26.33±1.29)℃、相对湿度(rh)(71.05±4.57)%,湿热组的实验环境条件为Tdb(35.33±0.35)℃,rh(70.81±1.38)%,对照组不给予冷疗降温,冷疗组给予腹部冷疗敷料降温,暴露时间均为125 min.监测皮肤温度(Ts),烫伤5 min后每20 min记录1次.结果4组组内7个时间水平之间、不同时间水平组间以及不同组间比较,湿热环境使Ts升高(P<0.001),冷疗使Ts降低(P<0.001),且时间与环境温度(P≤0.002)、时间与冷疗(P<0.05)、时间、环境温度与冷疗对Ts变化影响有交互作用(P<0.05).常温组冷疗前后Ts降低了(1.92±2.13)℃,湿热组Ts降低了(2.36±1.03)℃.结论在湿热环境下,腹部冷疗敷料有效降低了大鼠创面皮肤温度,阻止了热损伤的进程和创面余热的不良作用.

    作者:张立颖;李亚洁;罗炳德;李亦蕾;林妮 刊期: 2004年第10期

  • 中国绝经前女性群体中钙敏受体基因内多态性位点A986S与骨密度和骨大小的关联研究

    目的在中国绝经前女性群体中研究钙敏受体基因内多态性位点986Ala/Ser(A986S)与骨密度和骨大小的关联.方法样本为来自上海市区的285例20.0~41.9岁绝经前汉族女性.用双能X射线骨密度仪测量腰椎和髋部骨密度和骨大小.用限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)分析钙敏受体基因外显子7内的多态性位点986Ala/Ser(A986S)的多态性.有酶切位点基因片段表示为A,无酶切位点表示为S,基因型为AA、AS、SS.结果在中国女性群体中,AS基因型个体很少而缺少SS基因型个体.AA和AS基因型个体间骨密度和骨大小不存在显著性差异.结论钙受体在钙的代谢中有显著的作用,该基因与骨表型间的关系需要进一步利用有意义的遗传标记来进行研究.

    作者:莫小阳;张媛媛;雷署丰;邓红文 刊期: 2004年第10期

  • 89SrCl2治疗肺癌骨转移126例疗效分析

    目的探讨89SrCl2治疗肺癌骨转移的疗效.方法不同病理类型肺癌骨转移患者126例,按148 MBq/人次确定给药剂量,89SrCl2由肘静脉一次性注射.以疼痛程度、疼痛频率及疼痛得分的变化衡量止痛效果,以病灶数目或大小的变化判断病灶疗效,比较不同病理类型肺癌疗效差异.结果治疗后6个月内,疼痛减轻率为70.6%(89/126),其中消失率为19.8%(25/126),表明疼痛程度明显缓解(u=5.361,P<0.01);78.6%(99/126)的患者疼痛频率下降,疼痛次数明显减少(u=4.589,P<0.01),其中25例疼痛不再发作.疼痛评分由7.54±3.29降低至4.19±4.38,降低显著(t=6.865,P<0.001).病灶数目或大小减少25%以上者占45.2%(57/126).89SrCl2对鳞癌疼痛程度、频率缓解分别为85.7%(30/35)和88.6%(31/35),病灶改善率为57.1%(20/35).各指标在4种肿瘤类型之间均无显著性差异(P>0.05).结论89SrCl2对肺癌骨转移的疗效较好,可缓解疼痛,改善病灶;89SrCl2对不同病理类型肺癌骨转移疗效无明显差异.

    作者:郑航;罗荣城;范义湘 刊期: 2004年第10期

  • 中国人CTLA-4基因-1722位点多态性与系统性红斑狼疮的相关性

    目的研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen 4,CTLA-4)基因启动子区-1722位点(T/C)多态性在中国南方地区汉族人群中的分布及其与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性.方法103例患者诊断均符合1982年美国风湿病学会修订的SLE分类标准,其中男13例,女90例.正常对照组110例,其中男21例,女89例.全部研究对象均为无血缘关系的中国南方汉族人群.采用微量全血提取法,从EDTA抗凝血中提取DNA.应用聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)方法,对所有SLE患者和正常对照者进行CTLA-4基因-1722位点多态性检测.结果CTLA-4基因-1722位点多态性在中国南方地区人群中普遍存在,与正常对照组比较,SLE患者CTLA-4基因-1722位点TC基因型频率明显升高(42%vs 58%,P<0.05),CC基因型频率明显降低(25%vs 15%,P<0.05),TT基因型频率虽有降低趋势,但差异无显著性(33%vs 27%,P>0.05);而SLE患者等位基因频率和携带者频率分布均无显著性差异(P>0.05).在不同人种CTLA-4基因-1722位点基因型频率和等位基因频率分布存在差异.结论CTLA-4基因-1722位点多态性与SLE明显相关,CTLA-4基因可能是SLE的易感基因.

    作者:徐安平;尹培达;苏晓燕 刊期: 2004年第10期

  • 难治性白血病异基因造血干细胞移植超强预处理的疗效

    目的探讨异基因造血干细胞移植超强预处理联合移植后诱导移植物抗白血病(GVL)治疗难治未缓解白血病的预处理相关毒性(RRT)和疗效.方法18例移植前难治未缓解白血病和62例移植前完全缓解的急性白血病或慢性粒细胞白血病慢性期病人分别接受超强预处理方案和全身放疗+环磷酰胺或改良BuCY(羟基脲、马利兰、阿糖胞苷、环磷酰胺)方案(对照组).在难治性白血病移植后30 d未出现移植物抗宿主病(GVHD)病人,采用早期快速递减环孢素A或供体淋巴细胞输注诱导GVL.统计移植后RRT发生率与致死率、移植后完全缓解率、GVHD发生率、白血病复发和无病生存率等.结果移植后除超强预处理组1例和对照组2例死于移植相关并发症外,其余病人均获得造血重建.两组总RRT发生率均为100%,各脏器RRT发生均以胃肠常见,超强预处理组和对照组分别为83.3%和85.5%,两组口腔RRT发生率分别为44.4%和62.9%,膀胱RRT发生率分别为16.7%和33.9%,各组比较未见差异.超强预处理组RRT致死率为0,对照组为5%,两组比较无差异(P=0.341).18例接收超强预处理病人除1例死于移植中感染外,其余病人均获完全缓解.超强预处理组和对照组移植后急性GVHD发生率分别为11.8%和18.3%,移植后3年估计无病生存率分别为(61.2±12.3)%和(65.0±7.4)%(P=0.6311).结论连续序惯超强预处理方案能提高移植前未缓解的难治性白血病移植后完全缓解率和无病生存率,不增加移植中RRT发生率和致死率.

    作者:刘启发;孙竞;徐丹;张钰;范志平;魏永强;孟凡义;周淑芸 刊期: 2004年第10期

  • 左冠窦消融治疗左室反复性单型性室速1例报告

    1临床资料患者男,70岁,因反复发作心悸、气促1年入院.入院前曾多次行24 h动态心电图检查,诊断为频发性室性早搏伴短阵室速.室早达40 697个/24 h,室速发作时心室率平均145次/min.门诊给予口服抗心律失常药物治疗.1年来先后服用心律平、可达龙治疗(服药时间均大于3个月),症状无好转.患者发作时心电图表现为单一型室速,呈不典型左束支阻滞型,电轴向左下.患者无病毒性心肌炎病史.超声心动检查心脏各房室腔及瓣膜正常.入院后行冠脉造影检查:冠状动脉未见异常.隧行射频消融治疗,将大头电极置于右室流出道,刺激图形较发作图形相差较远.后于左冠窦处标测,刺激图形与发作图形完全相符.予15 W消融60 s后室性早搏消失,心电图无ST-T改变.巩固放电120 s.消融后两周再次行24 h动态心电图检查未发现室早及室速.

    作者:崔英凯;彭健;黄晓波;贾满盈;孟素荣 刊期: 2004年第10期

  • 重度卵巢过度刺激综合征的监护和治疗

    目的总结重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)的临床表现、发病机制及相应的治疗方法.方法回顾性分析20例重度OHSS的临床资料.结果重度OHSS发生在超排卵治疗后,临床表现为腹胀、恶心、腹水、胸水、少尿、血液浓缩、水-电解质及酸碱平衡紊乱、氮质血症、血栓形成等.经白蛋白、低分子右旋糖酐、6%贺斯等扩容治疗,腹腔、胸腔穿刺放液,甚至终止妊娠等措施治疗后痊愈.结论防治重度OHSS的关键在于预防,一旦发生OHSS,需及时、正确地治疗.

    作者:马明远;温伟标;周立新;誉铁鸥;方滨 刊期: 2004年第10期

  • 新生小牛血清对人胎脑海马组织神经干细胞分化的影响

    目的探讨新生小牛血清对人胎脑海马组织神经干细胞分化的影响.方法采用细胞培养和免疫细胞组化技术,观察不同浓度新生小牛血清对人胎脑海马组织神经干细胞分化的影响.结果新生小牛血清能诱导人神经干细胞分化为神经细胞及神经胶质细胞,在无血清培养基与含不同浓度新生小牛血清培养基中培养的神经干细胞分化为神经细胞和神经胶质细胞的数目在发生变化,并且随着新生小牛血清浓度的增加,神经干细胞分化为神经细胞的数量在减少,分化为神经胶质细胞的数量增加.结论新生小牛血清影响人神经干细胞分化为神经细胞和神经胶质细胞的比例,并与新生小牛血清的浓度有一定的关系.

    作者:尹晓娟;封志纯;杜江 刊期: 2004年第10期

  • 体外三维抗血管生成药物筛选模型的建立

    目的建立一种新的用于筛选具有抗血管生成作用的体外血管生成模型.方法人脐静脉的内皮细胞(HUVECs)在三维胶原纤维系统中培养,制备成具有毛细血管样网状结构模型;3种酪氨酸酶抑制剂genistein,tyrphostin A23和lavendustin C被分别加入到模型中,观察它们对血管形成的影响.结果在不加入任何生长因子的条件下,HUVECs能迅速重组形成毛细血管样网状结构;3种酪氨酸酶抑制剂均对血管形成有抑制作用.结论该模型具有操作简单、可重复性好、易量化的特点,是一种在体外筛选血管生成抑制剂的理想模型.

    作者:李斌 刊期: 2004年第10期

  • 非静脉转流原位肝移植再灌注期高血钾致心跳骤停的救治:附3例报告

    分析3例非静脉转流下原位肝移植术下腔静脉、门静脉开放时发生高钾血症致心跳骤停的原因,探讨防治措施.

    作者:黄毅然;古妙宁;邓荣健;肖金仿;粱仕伟;徐建设;周伟;陈晔明 刊期: 2004年第10期

  • 副溶血弧菌不耐热溶血毒素tlh基因的序列分析

    目的利用PCR技术扩增副溶血弧菌不耐热溶血毒素tlh基因,对tlh基因进行生物信息学分析.方法利用PCR技术扩增tlh基因,克隆至载体pET32a+并测序.将测序结果提交国际互联网上有关生物信息网站进行生物信息学分析.结果和结论测序结果tlh14-90被GenBank收录,登录号为AY289609.t1h14-90全长1 257bp,与国际标准株WP1的同源性为99%,含有启动子和密码子,预测其编码一个含418个氨基酸的蛋白质(TLH14-90),分子式为C2131H3184N548O649S16,相对分子质量47 392.9,理论等电点pI为4.92,丙氨酸、亮氨酸和天冬酰氨的含量分别为11.0%、7.4%和7.2%,含有4个半胱氨酸(Cys),κ-D法推算的疏水性参数为-34.预测其二级折叠结构为α/□蛋白,三级结构未给出.

    作者:李志峰;聂军;戴迎春;李建栋;陈清;俞守义 刊期: 2004年第10期

  • 18F-FDG PET显像在肺癌纵隔淋巴结转移诊断中的应用

    目的探讨18F-FDG PET显像对肺癌肺门及纵隔淋巴结转移的诊断价值.方法41例手术病理证实为肺癌的患者,回顾分析其术前胸部PET对肺门、纵隔淋巴结转移的检出结果,与同期胸部CT检查对比,并以病理为标准.结果经理检出有肺门或纵隔淋巴结转移者18例,PET正确诊断17例,CT正确诊断10例;病理未见肺门或纵隔淋巴结转移者23例,PET正确诊断22例,CT正确诊断20例;18F-FDG PET显像对肺门及纵隔淋巴结转移灶检出的灵敏度和准确性(分别为94.4%、95.1%)明显高于CT(分别为55.6%、73.2%)(P<0.05).结论18F-FDGPET显像对于肺癌纵隔及肺门淋巴结转移灶的检出具有明显优势,特别是对CT难以检出的小淋巴结转移灶有重要的临床价值,可为临床准确分期、确定治疗方案提供重要依据.

    作者:刘方颖;张雪林;商健彪;王全师 刊期: 2004年第10期

  • 99mTc-MIBI脑SPECT对脑胶质瘤的诊断价值

    目的探讨99mTc-MIBI脑显像对脑胶质瘤的诊断价值.方法对59例脑胶质瘤患者、9例正常人、6例脑脓肿患者进行99mTc-MIBI脑SPECT显像.判断病灶有无异常摄取并根据感兴趣区(ROI)计算肿瘤/非肿瘤比值(T/NT),计算99mTc-MIBI脑显像对脑胶质瘤诊断的灵敏度、特异性、准确率.T/NT比值在胶质瘤、脑脓肿及正常组之间的比较采用t检验.结果59例脑胶质瘤患者中,51例显像为阳性,诊断灵敏度86.4%、特异性66.7%、准确率82.4%.15例非胶质瘤受检者有5例阳性.脑胶质瘤组T/NT比值为2.6±1.2,明显高于正常组的1.1±0.2(t=3.6199,P<0.001)和脑脓肿组的1.5±0.5(t=2.1327,P<0.05).结论用99mc-MIBI脑SPECT诊断脑胶质瘤灵敏度高,可以有效地鉴别良恶性病变.

    作者:范义湘;罗荣城;李贵平;黄凯 刊期: 2004年第10期

  • 生物素-亲和素系统在MR靶向成像中的应用

    目的探讨利用生物素-亲和素系统的靶向定位效应和生物放大作用,提高MR分子成像的敏感性.方法制备生物素化HAb18单克隆抗体并测定其生物素化程度及抗原结合活性.将8只荷人肝细胞癌裸鼠静脉注射生物素化单克隆抗体600μg,24 h后腹腔注射80μg亲和素,30 min后再静脉给予Gd-DTPA-链霉亲和素.对实验动物行MR扫描,测量SET T1 WI平扫及增强后10、30min及2、6、12、24 h图像内肿瘤、肝脏、肌肉的信号强度,绘制信号强度-时间曲线,并计算其强化率及对比度噪声比.结果HAb18单克隆抗体经生物素化后,每个抗体分子平均可结合20个分子生物素,其抗原结合活性约为91%.增强后肿瘤信号强度缓慢升高,在注射对比剂后第6小时,肿瘤的强化率、比度噪声比达到大值,与其他各时间点有显著性差异.肝脏在注射对比剂后第6小时的信号强度达到高,而后信号强度下降,增强后12 h的信号强度与平扫相似.肌肉表现为轻度强化,增强后各时间点的信号强度与平扫相比无明显差异.结论利用生物素-亲和素技术对肿瘤进行MR靶向成像,具有特异性强化作用并能延长肿瘤的强化时间,但Gd-DTPA-SA的血池效应也造成了肝脏的持续强化.

    作者:刘岘;许乙凯;叶靖 刊期: 2004年第10期

  • SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

    目的研究SeO2对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响.方法采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达.结果10和30 mmol/L SeO2能抑制3种细胞增生.30 mmol/L SeO2作用48 h能使54.0%的NB4细胞、46.5%的K562细胞和49.6%的HL-60细胞发生凋亡;能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达.结论SeO2对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用,在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控.

    作者:王晓华;魏亚明;白海;欧剑锋;路继红;郑荣梁 刊期: 2004年第10期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学