学术投稿

蛋白质芯片制作条件的优化

江凌晓;郭兆彪;陈泽良;王津;王红霞;俞守义;杨瑞馥

关键词:蛋白质芯片, 制备, 荧光强度
摘要:目的探讨以醛基化玻片为固相载体制备蛋白质芯片的条件.方法蛋白质用含40%甘油的PBS稀释后点加在醛基化玻片上,室温干燥1h,4℃冰箱保存,经封闭剂封闭,PBS漂洗后,依次加入抗体,反应结果用扫描仪进行扫读.结果以醛基化玻片为固相载体时预点10~15个点后点样均一性较好;点样后4℃冰箱保存24~48h再进行漂洗和封闭处理,所得结果的荧光测量值较高;3%BSA为封闭剂时所得图像的荧光背景值低;点样量影响荧光信号的强度.结论以醛基化玻片为固相载体制备蛋白质芯片时要预点15~20个点后再正式点样,点样后应4℃保存24~48h再进行漂洗和3%BSA封闭处理.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 供肾质量和受者体质量与移植肾远期功能的关系

    目的探讨肾移植术后供肾质量、受者体质量及二者比值与远期肾功能的关系.方法对108例肾移植手术病人的供肾质量、受者体质量及二者的比值与受者术后3年血肌酐值进行线性相关分析.结果供肾质量与术后3年血肌酐值呈负相关(P<0.05);受者体质量与术后3年血肌酐值呈正相关影响(P<0.01);供肾质量及受者体质量的比值与术后3年血肌酐值呈负相关(P<0.01).结论供肾质量、受者体质量及二者的比值与远期移植肾功能的关系应引起重视,体质量较大的受者应尽量选择较重的供肾相配.

    作者:付绍杰;于立新;杜传福;徐健;刘小友;王亦斌 刊期: 2004年第11期

  • 氯氮平和利培酮对首发精神分裂症偏执型患者细胞因子水平的影响

    目的了解氯氮平、利培酮对首发精神分裂症偏执型患者细胞因子的影响,探讨细胞因子与精神病理之间的关系.方法对58例首发精神分裂症偏执型患者给予氯氮平或利培酮治疗,分别于治疗前和治疗后第4周末、8周末、6月末用酶联免疫吸附法检测患者血清白细胞介素(IL)-6、2、18和α-肿瘤坏死因子(TNFα)浓度,用阳性与阴性症状量表(PANSS)评估精神症状.结果利培酮组患者IL-6和IL-2水平于4周末、TNFα水平于8周末、IL-18水平于6月末均较治疗前显著下降(P<0.01或0.05);氯氮平组患者IL-2水平于4周末、IL-6和IL-18水平于6月末均较治疗前显著下降(P<0.01或0.05).治疗前IL-6水平与阳性症状分呈正相关(r=0.386,P<0.01),IL-2水平与总分、阳性症状分呈正相关(r=0.338、0.305,P<0.01、0.05),TNFα水平与总分呈正相关(r=0.283,P<0.05).8周末血清IL-2、IL-6变化率与阳性症状变化率呈正相关(r=0.268、0.375,P<0.05、0.01),6月末IL-6、TNFα变化率与总分变化率呈正相关(r=0.365、0.362,P<0.05).治疗前IL-6与IL-2、TNFα与IL-18呈正相关(r=0.356、0.291,P<0.01、0.05),8周末TNFα与IL-6呈正相关(r=0.332,P<0.01),6月末IL-6与IL-2变化率呈正相关(r=0.391,P<0.05).结论氯氮平和利培酮有相似的免疫抑制作用,血清细胞因子与精神分裂症精神病理之间有一定关系.

    作者:吕路线;郭素芹;陈娓;李强;成军;郭敬华 刊期: 2004年第11期

  • 小柴胡汤对内异症大鼠异位内膜的作用

    目的探讨小柴胡汤(XCHT)对大鼠子宫内膜异位症(内异症)异位内膜的作用.方法建立大鼠内异症动物模型,通过透射电镜技术观察XCHT对异位内膜细胞结构的影响.结果中、高剂量XCHT(500、750g/L)组对异位内膜生长有非常显著的抑制作用,异位内膜体积明显减小(P<0.01),低剂量XCHT(250g/L)组异位内膜体积也显著减小(P<0.05),而对照组体积无显著变化(P>0.05).透射电镜下可见中、高剂量XCHT组治疗后腺上皮细胞出现凋亡特征,表现为细胞体积变小、核固缩、胞质和核染色质凝集、密度增高、细胞间有凋亡小体,同时间质细胞中也可见一些坏死细胞或退行性改变.结论XCHT对内异症大鼠异位内膜有明显抑制作用,其作用机制可能是通过调整宿主局部环境中的免疫状态和功能而诱导细胞凋亡和坏死.

    作者:郑辉;左连东;李洪义;张文举;王自能 刊期: 2004年第11期

  • 外超声辅助吸脂术在大腿减肥中的应用

    目的探讨安全有效、快速简便的大腿吸脂减肥方法.方法选择适当的手术切口、抽脂范围、操作方法,对32例大腿肥胖、局部畸形者行外超声辅助吸脂减肥手术.结果所有病例均获得满意的减肥、大腿塑形效果,无明显手术并发症.结论外超声辅助吸脂减肥术应用在大腿安全有效.

    作者:张新合 刊期: 2004年第11期

  • 不同月龄自发性高血压大鼠杏仁中央核nNOS免疫阳性神经元的变化

    目的观察自发性高血压大鼠(SHR)杏仁中央核神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性神经元的变化.方法取SHR和WKY大鼠各30只,分别于90、180和360d测血压并处死,ABC法显示nNOS免疫阳性神经元并进行定量分析.结果WKY大鼠各时期血压无明显差异;SHR血压逐渐升高,而且均高于WKY大鼠(P<0.05),维持在(20.8±1.1~26.3±1.0)kPa(P<0.05).杏仁中央核nNOS免疫阳性神经元胞体中等大小,呈梭形或三角形,突起较多且长,阳性神经纤维交错呈网状.定量结果显示,90、180和360d时,WKY杏仁中央核nNOS免疫阳性神经元的数量无显著变化,而SHR大鼠nNOS免疫阳性神经元随着高血压的不断发展呈逐渐减少的趋势,虽然90和180d之间没有显著性差异,但360d减少明显(P<0.05).结论高血压大鼠杏仁中央核nNOS阳性神经元减少可能通过其对心血管和感觉传递的调节功能参与高血压的发生和发展过程.

    作者:沈伟哉;郭国庆;余菁 刊期: 2004年第11期

  • 浮针结合电针治疗网球肘的疗效观察

    目的观察浮针结合电针治疗网球肘的疗效.方法将100例网球肘患者随机分为3组,分别接受浮针(n=30)、电针组(n=30)和浮针结合电针(n=40)的综合治疗.3周后观察疗效.结果(1)3组均获较好疗效.(2)浮针结合电针组的治愈率优于浮针组和电针组.结论浮针结合电针可提高单纯浮针或单纯电针对网球肘的治愈率.

    作者:夏东斌;黄泳 刊期: 2004年第11期

  • 巨噬细胞移动抑制因子蛋白在胰腺癌组织表达的临床意义

    目的观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在胰腺癌组织中的表达及临床意义.方法应用免疫组织化学技术对36例胰腺癌组织中的MIF蛋白表达进行研究.结果胰腺癌组织中的MIF表达率为69.4%(25/36),高于正常胰腺组织表达率0(0/10).统计学分析显示,MIF蛋白表达与胰腺癌病理分级呈显著相关(P<0.01),与胰腺癌临床分期及有无局部淋巴结转移间无显著相关(P>0.05).结论MIF蛋白表达有可能与胰腺癌的发生有关.

    作者:金志清;智发朝;陈学清;王亚东 刊期: 2004年第11期

  • 含碘食物对Graves病患者甲状腺131I与99mTc摄取的不同影响

    目的探讨含碘食物对Graves病患者摄取99mTc与131I的影响.方法选择曾食含碘食物的Graves病患者20例,在禁食含碘食物前后分两次进行摄131I试验与甲状腺99mTc显像,前者测定3、24h摄131I率,后者计算摄锝指数(TI)及估算甲状腺质量(TW).采用Wilcoxon符号秩和检验对数据进行对比分析.结果20例患者禁止含碘食物前后的摄131I率显著不同,所有患者禁食含碘食物后3和24h摄131I率均显著增高.TI2例未变、2例增高、16例降低;TM18例减小、2例增大.较未禁食含碘食物的首次检测,两者均有显著性变化.结论含碘食物对甲状腺摄取Na99mTcO4的影响与Na131I显著不同,含碘食物100%减低甲状腺131I的摄取而90%锝摄取增高.

    作者:何国荣;欧阳伟;刘金华;刘伟英 刊期: 2004年第11期

  • Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

    目的为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片,提高检测灵敏性,对PatrickBrown实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进.方法玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化,然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面.设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能,并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中.结果方法改进后芯片表面性能优良:固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用.结论利用共价连接,方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸,解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷,提高了芯片检测的灵敏性.

    作者:吴清华;马文丽;石嵘;郭秋野;张宝;李凌;张海燕;郑文岭 刊期: 2004年第11期

  • 年龄与正常脑白质平均表观扩散系数的相关性

    目的定量研究不同年龄段正常脑白质磁共振扩散加权成像平均表观扩散系数(ADCav)值,分析年龄因素对正常脑白质ADCav值的影响.方法选取50例具有正常MRI表现的患者作为研究对象,按其年龄段分为4组:第1组(16~30岁,n=13),第2组(31~45岁,n=12),第3组(46~60,n=14)及第4组(>60岁,n=11);所有病人均行常规MR及扩散加权成像检查,扩散加权成像序列采用扩散梯度加在3个正交方向上的扩散追踪加权成像(trace-weighteddiffusionimaging),定量测量白质区ADCav值,比较分析不同年龄段ADCav值特性.结果脑白质ADCav值为(0.71±0.08)×10-3mm2/s;不同年龄段4组ADCav值分别为:(0.69±0.06)×10-3mm2/s,(0.71±0.07)×10-3mm2/s,(0.71±0.09)×10-3mm2/s,(0.73±0.10)×10-3mm2/s;第1组ADC值与第4组ADC值间存在显著性差异(P=0.014);年龄大于60岁与年龄小于或等于60岁两组ADCav值分别为(0.73±0.10)×10-3mm2/s、(0.70±0.07)×10-3mm2/s,两组比较存在显著性差异(P=0.026).结论随年龄的增长,正常脑白质ADCav值呈现微弱增长趋势,其原因可能为正常的年龄变化所致的脑内超微结构的改变.

    作者:赵修义;张雪林;王劲;陈斌;苍鹏;昌仁民 刊期: 2004年第11期

  • 反向离子对色谱法测定益母草药材中水苏碱和益母草碱的含量

    目的建立益母草中水苏碱、益母草碱含量测定的高效液相色谱法.方法生药经乙酸乙酯脱色后,用乙醇超声提取,得样品.采用YMC-ParkCN柱(250.0mm×4.6mm);水苏碱测定用流动相为0.00125mol/LSDS(含0.05%高氯酸):乙腈(90:10),流速1.5ml/min,检测波长201.7nm;益母草碱测定用流动相为0.00125mol/LSDS(含0.05%高氯酸):甲醇(50:50),流速1ml/min,检测波长282nm;灵敏度0.1AUFs,柱温20℃.外标法定量.结果以进样量(mg)为横坐标,峰面积为纵坐标,水苏碱回归方程为Y=1187.5423X-168.9822;益母草碱回归方程为Y=5202.654X-221.141(r=0.9998),线性范围2.5~12.5mg,小检出限0.15mg,加样回收率为(99.030±2.744)%.18个不同地区样品分析结果显示,不同产地的药材中两种生物碱的含量差异甚大,水苏碱约在0.1%~0.2%,益母草碱在生药中含量很低,约在0.01%~0.05%之间.总体而言,产于北方者生物碱含量较高,而产于南方者普遍较低.益母草及其变种白花益母草总生物碱含量在0.3%左右,高于其他品种.结论用高效液相色谱法测定益母草中生物碱含量,简便易行,结果准确可靠,优于以前的方法.

    作者:晁志;马丽玲;周秀佳 刊期: 2004年第11期

  • 低分割三维适形放疗结合化疗治疗非小细胞型肺癌疗效观察

    目的探讨低分割三维适形放疗结合化疗治疗非小细胞型肺癌的疗效.方法采用低分割三维适形放疗治疗63例NSCLC患者,观察疗效、患者生存率及术后并发症.结果患者术后中位生存期14个月,肿瘤局部控制率79.1%,1、3、5年生存率分别是65.2%、23.2%、10.4%,3~4级放射性肺炎及食管炎的发生率分别为9.5%、4.8%.结论低分割三维适形放疗结合化疗治疗非小细胞肺癌有较好的疗效,局部复发仍然是治疗失败的主要原因之一.

    作者:蒋华勇;吴德华;陈龙华 刊期: 2004年第11期

  • 喂饲补肾中药大鼠的血清对成骨细胞的生物学作用

    目的探讨喂饲补肾中药大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用.方法在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的中药血清,并与空白组对照,分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能.结果补肾中药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用,可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量.结论补肾中药血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能.

    作者:唐井钢;李娟;吴贺勇 刊期: 2004年第11期

  • 沙门氏菌食物中毒心肌酶谱和心电图的改变

    目的观察分析沙门氏菌食物中毒后的心肌酶和心电图(ECG)的改变.方法对56例沙门氏菌食物中毒患者行心肌酶及ECG检测,同时检测34例正常人作对照.结果病例组在发病2d内有36例(64.29%)心肌酶活性增高;在发病l~4d内,有33例(58.93%)ECG异常,较对照组的肌酸磷酸激酶(CPK)、α-羟基丁酸脱氢酶(α-HBDH)水平显著增高(P<0.01).结论对沙门氏菌食物中毒患者常规行心肌酶及ECG检查,有助于了解早期心肌酶及ECG改变的情况,以便指导临床用药.

    作者:孙中波;张琴;杨霞芳 刊期: 2004年第11期

  • 恶性浸润性生长伴颅骨缺损Ⅰ型神经纤维瘤病1例

    神经纤维瘤病(NF)是一种常染色体显性遗传病,分为Ⅰ、Ⅱ型,Ⅰ型多见,多为良性病变.本院收治1例典型的Ⅰ型NF患者,病理提示为良性,但具有明显恶性浸润性生长的特性,现报道如下.

    作者:张宝石;邹小明;张振;王武军 刊期: 2004年第11期

  • 山东省家猪感染肾综合征出血热病毒流行病学调查和实验研究

    目的了解家猪在肾综合征出血热(HFRS)疫区的流行病学意义,探讨家猪与HFRS发病的关系.方法以HFRS病毒(HFRSv)抗原和抗体为指标,采用反向间接血凝法(RPHA),血凝抑制法(RPHI),酶标葡萄球菌A蛋白(HPR-SPA),间接免疫荧光法(IFA)和PCR反应对山东部分地区家猪自然感染HFRSV的情况进行检测.结果家猪心、肝、脾、肺、肾等脏器及血、尿、粪和猪圈内污物检出HFRSv抗原与抗体,脏器抗原阳性率为3.33%~5.00%.而血、尿、粪和圈内的污染物抗原阳性率分别为3.67%、7.04%、2.51%和5.56%,血清抗体阳性率为1.96%,并从HFRSV抗原阳性的多种标本分离出病毒.人工感染后病毒可随血液波及多个脏器,二次感染乳鼠脑可检出HFRSV抗原.二次组织病理学检查发现肺、肝、肾等脏器有一过性病理改变;HFRSv可在猪体内增殖,并经多途经排出体外.结论家猪可能是HFRSV的扩散宿主动物.

    作者:杨占清;俞守义;聂军;陈清;李志峰;刘运喜;张景兰;徐建江;于晓敏;步秀萍;苏静静;张云;陶开华 刊期: 2004年第11期

  • 氩激光凝固法对糖尿病性视网膜病变的疗效观察

    目的观察糖尿病性视网膜病变(DR)不同分期者接受氩激光治疗的临床效果.方法采用科以人2000型氩激光组合激光机对170例263只患眼分别做如下处理:(1)对非增殖期糖尿病视网膜病变(NPDR)30眼行局部氩激光凝固术(光凝);(2)对增殖前期糖尿病视网膜病变(PPDR)156眼行次全视网膜光凝;(3)对增殖期糖尿病视网膜病变(PDR)77眼行全视网膜光凝,对合并黄斑局限或弥漫性水肿者给予局灶性光凝或格栅样光凝.于光凝后3个月检查,进行视力、眼底、视网膜荧光血管造影,并与治疗前各项结果对比.结果视力提高92眼(35%)、无变化144眼(55%)、下降27眼(10%).眼底检查、荧光血管造影复查示:NPDR、PPDR眼视网膜微血管瘤、水肿、渗出消退,荧光渗漏消退占89%,其余11%需补充光凝.PDR眼视网膜、视盘新生血管消退占67%,33%为部分消退需补充光凝.黄斑水肿完全或部分消退占91%,光凝后出现视网膜前灶性出血占8%,玻璃体积血为1%.结论氩激光对不同分期DR均有效.NPDR、PPDR效果好于PDR眼,后者光凝后荧光血管造影复查以及补充光凝对提高疗效非常必要.

    作者:魏湛云;胡世兴;唐娜;吴京;王洁 刊期: 2004年第11期

  • 具有明显淋巴滤泡增生的血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤1例报告

    1临床资料患者男,43岁,因双侧颈部淋巴结肿大伴全身皮疹1周就诊.患者自2003年2月中旬起右颌下、耳后淋巴结肿大,随后左颌下、颈侧淋巴结相继肿大,无明显全身症状.2003年6月中旬全身出现广泛皮疹,2003年7月视双侧扁桃体疼痛、肿大,并有低热,体温37.5~38.0℃,抗炎治疗无效.查体发现全身浅表淋巴结肿大,双侧腋下淋巴结肿大较明显,左腋下淋巴结大直径5 cm,双侧腹股沟淋巴结肿大直径1.5~2.0 cm,脾肿大,肋下可触及.CT检查发现纵隔、腹主动脉旁淋巴结肿大1.0~2.5 cm不等.曾在外院进行左颈部淋巴结活检,均诊断为反应性增生.

    作者:韩慧霞;朱梅刚;耿舰 刊期: 2004年第11期

  • 早期生长反应因子-1和组织因子在大鼠胰腺炎组织中的表达

    目的观察早期生长反应因子-1(Egr-1)和组织因子(TF)在实验性大鼠急性胰腺炎组织中的表达.方法以大剂量雨蛙素(每小时腹腔注射20μg/kg·b.w.,连续4h)诱导建立大鼠急性实验性胰腺炎模型.观察刺激后30min至4h时急性胰腺炎组织Egr-1mRNA和蛋白的表达以及TFmRNA的表达,并进行免疫组织化学检测.结果大剂量雨蛙素刺激后,大鼠胰腺呈典型的胰腺炎改变.刺激后30min胰腺组织Egr-1mRNA表达达到高峰,然后逐渐下降.但Egr-1蛋白水平在刺激后2h达到高峰.组织学观察发现,刺激后2h,几乎每个胰腺腺泡细胞均表达Egr-1蛋白,并大多集中在细胞核.TFmRNA的表达在刺激后1h出现,并在4h内逐渐增高.大剂量的蛙皮素刺激胰腺组织仅引起少量的Egr-1mRNA的表达.结论Egr-1作为一种前炎性转录因子在急性胰腺炎的发生中可能起着重要的作用,这一作用在一定程度上可能是通过调节TF的表达而实现的.

    作者:陈学清;姜泊;宋于刚;智发朝;巩兰波 刊期: 2004年第11期

  • 血清蛋白质组学研究中白蛋白和IgG去除方法的建立与评价

    目的建立和评价血清蛋白质组学研究中白蛋白和IgG的去除方法.方法应用MicroBio-Spincolumn过滤纯化血清蛋白,去除白蛋白和IgG,利用双向凝胶电泳(2-DE)分析评价血清蛋白过滤效果.结果建立了血清白蛋白和IgG去除方法;过滤后大部分血清白蛋白和IgG能够去除,2-DE图谱中低丰度蛋白质分辨率增加.结论本研究建立的血清蛋白质纯化技术,可有效应用于疾病的血清蛋白质组学研究.

    作者:李雪华;李欣;徐守军;丁彦青 刊期: 2004年第11期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学