利用PCR扩增目的基因是常用的一种克隆方法,但在实际操作中,试剂盒中Taq DNA聚合酶在经过各种纯化方法(如酚氯仿抽提,乙醇沉淀,电泳和柱纯化)后,仍附着在扩增产物的5'端,有效地阻止随后的内切酶酶切过程,导致重组的失败。作者采用一种可以显著提高PCR产物克隆的效率的方法,即将10 μl蛋白酶K混合物[蛋白酶K混合物的配制:0.1 mol/LTris-HCl (pH8.0)、5%SDS,0.5 mg/ml蛋白酶K)加入100 μl PCR反应后的产物中,37 ℃水浴1 h后,68 ℃ 15 min以灭活蛋白酶K,用酚-氯仿、氯仿各抽提1次,无水乙醇沉淀,70%乙醇清洗后晾干,并用双蒸水溶解。采用这种方法得到了PCR产物与相应酶切载体连接,可以顺利得到大量的重组子,与常规方法比较大大地提高了克隆的效率。
作者：彭志强；俞守义；贺竹梅 刊期： 2001年第04期
目的探讨安定对大脑神经元产生毒副作用的分子机制。方法以10 mg/kg·b.W安定给小鼠进行腹腔注射,连续3 d后,取相同质量的大脑进行线粒体蛋白的分离,进行有关MnSOD和细胞色素氧化酶IV活性以及线粒体DNA断裂程度等指标的测定。结果 (1)安定导致小鼠大脑的线粒体蛋白含量降低,线粒体蛋白含量从(3.307±0.240) mg/ml 下降到(2.746±0.451) mg/ml (t=2.690,0.01
作者：邱小忠；陈瑗；周玫；张稳柱 刊期： 2001年第04期
目的探讨冠心病患者体内人血清脂氢过氧化物 (LOOH) 和NO含量变化。方法分别应用FOX法和硝酸还原酶一步法测定了33名正常人和33名冠心病患者的血清LOOH和NO含量。结果冠心病患者的血清LOOH含量为 (7.64±3.26) μmol/L,显著高于正常对照组(5.78±3.21) μmol/L(P<0.05); 冠心病患者血清NO含量显著低于正常对照[(42.5±18.9)μmol/L和(51.4±17.8)μmol/L,P<0.05]。结论动脉粥样硬化性心脏病的发生可能与LOOH含量增加和NO减少有关。
作者：黄敏珍；周玫；陈瑗；张健 刊期： 2001年第04期
目的探讨侧窦区硬脑膜动静脉瘘的病因、发生机制、临床症状及诊治方法。方法 19例病人中,17例病人应用微导管技术,在数字减影血管造影机(DSA)监视下,对侧窦区硬脑膜动静脉瘘行血管内栓塞治疗,2例单纯应用颈动脉压迫法治疗。结果 19例中,10例治愈;4例症状明显改善;4例好转;1例死亡。结论应用颈动脉压迫法及微导管栓塞技术是治疗侧窦区硬脑膜动静脉瘘的有效手段。
作者：李铁林；段传志；韩志安；汪求精；赵刚；苏正；徐如祥 刊期： 2001年第04期
目的探讨检测优生五项指标在计划妊娠妇女中的临床意义。方法用ELISA方法检测1 085例计划妊娠妇女和孕妇的优生五项指标。结果 1 085例血清弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病I型和II型病毒的IgM阳性率分别为0.385%、0.679%、0.768%、1.060%、2.790%;其中88例血清To单项的IgG阳性率为21.59%。结论计划妊娠妇女先行优生五项指标的检查,对优生优育、提高人口素质有着重要意义。
作者：张泓；武大林 刊期： 2001年第04期
目的建立一种简便而经济的大鼠肝脏贮脂细胞的分离方法。方法采用链霉蛋白酶和Ⅳ型胶原酶循环灌注大鼠肝脏后,以11% Nycodenz密度梯度离心,分离肝脏贮脂细胞。结果细胞得率为2×107~3×107个 / 只,活力在95%以上,纯度超过90%。结论本法简化了肝脏贮脂细胞的分离过程,使之既简便又经济,且细胞得率也较高。
作者：张艺军；杨希山；吴平生；刘树人 刊期： 2001年第04期
间变性大细胞性淋巴瘤( ALCL)是近年引起人们注意的一种少见淋巴瘤,常易与何杰金氏病、恶性组织细胞增生症、转移癌、恶性黑色素瘤等混淆。复习文献,对其细胞起源、免疫表型、病理形态特点与临床诊断要点作简要综述。
作者：陈琪；丁彦青 刊期： 2001年第04期
目的研究血小板α颗粒膜蛋白-140 (GMP-140)在脑血栓形成患者急性期和恢复期的变化。方法测定50例(其中30例急性期患者,20例恢复期患者)脑血栓形成患者血浆GMP-140的含量,并分别与26名健康人作比较。结果脑血栓形成患者急性期GMP-140浓度明显高于恢复期和正常对照组(P<0.01),恢复期与正常对照组间比较差异无显著性(P>0.05)。结论脑血栓形成患者急性期血浆GMP-140含量处于较高水平。
作者：赵东红；周玥；王运良；王芹 刊期： 2001年第04期
Clontech公司新推出的一种能随着时间的延长而由绿色变为红色的荧光蛋白。这种荧炮蛋白为实时研究启动子的调控时效提供了可能：在活细胞或者活的生物体内，不但可以看到某个启动子启动和关闭基因表达的确切时间和位置，而且不需要辅助因子便可直接进行监测(因为这种报告基因是荧光蛋白)。 这种荧光蛋白在表达后大约3h由绿色荧光变为红色荧光。只要检测红、绿光的比率(重叠时为黄色)，就可以推测出这个启动子开启和关闭的时间，也就可以确定目的蛋白的表达时间和存在时间。2h后出现绿色荧光。表明hsp16-41启动子开始表达，50h后绿色荧光消失，表明启动子关闭。
作者： 刊期： 2001年第04期
1 临床资料 患者,男,58岁,因外伤受压后3月扪及上腹部包块入院。既往无任何不适,体检:一般情况好,腹平软,左中上腹可触及一质地中等、表面尚光滑的包块,活动度不大。实验室检查:三大常规正常,肝、肾功能正常,血胆红素及血淀粉酶正常。CT诊断:胰尾部囊性占位性病变,性质多考虑囊腺癌。
作者：蒋慧蓉；崔忠林；杨燕 刊期： 2001年第04期
目的获得人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)编码区基因。方法采用RT-巢式PCR技术从人胎肝组织总RNA扩增目的cDNA片段,克隆入pGEM-T载体,酶切图谱分析和测序鉴定。结果获得了编码含信号顺序的MASP-2肽链全长cDNA,将其与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌TG1,建立了MASP-2的重组克隆。酶切图谱与微机分析结果无异;序列分析表明,与报道的人MASP-2 cDNA序列一致。结论成功克隆了人MASP-2基因,为深入研究补体凝集素途径的激活机制和甘露聚糖结合凝集素基因突变引起免疫缺损的发病机制奠定了基础。
作者：陈政良；张丽芸；卢晓；乔贵林 刊期： 2001年第04期
脑灰质异位(Heterotopic gray matter, HGM)是神经元移行异常的一种。本文报告我院1990~2000年经MRI确诊的6例HGM。 1 临床资料1.1 一般资料 本组男女各3例,年龄18~30岁。门诊2例,住院4例,其中手术1例。6例均有难控制癫痫,发病年龄14~28岁。癫痫发作类型包括强直-阵挛发作4例、失神发作1例、单纯部分(情感)性发作1例。2例智能发育迟滞、3例智能发育正常、1例无记载。2例有局灶运动功能损害、3例正常、1例无记载。3例EEG异常、1例正常、2例无资料。1.2 MRI检查 本组MRI显示异位板型2例、结节型加板型2例、结节型加带型1例、带型1例。T1和T2呈现稍长信号,与脑皮质类似。向脑室内生长者,呈现类似脑回的起伏,脑室变形。无占位效应,增强扫描病灶无强化。伴发胼胝体发育不良2例、脑裂畸形2例、巨脑回畸形1例。
作者：徐忠平；谢惠芳；刘振华 刊期： 2001年第04期
1 临床资料 患者,女,33岁,因反复全身泛发水疱、糜烂3年,双下肢大片溃疡3月,加重10 d,于2000年3月22日入我科。查体:体温 39.2 ℃,脉搏 110次 /min,呼吸频率 18次/min,血压因皮疹未测,强迫体位,营养不良。眼睑、鼻孔、口周水疱糜烂,头皮、四肢、躯干广泛水疱、大疱、大片糜烂,部分为脓疱,疱壁松驰,尼氏征阳性。双小腿有18处3 cm×3 cm~4 cm×25 cm深达皮下脂肪的溃疡,上附脓苔、坏死组织及药痂,触痛(+),伴奇臭味。白细胞12.9×109/L,中性粒细胞百分数87%, 血沉126 mm/h,C反应蛋白159.992 mg/L,总蛋白48 g/L,白蛋白17 g/L。皮损病理诊断为寻常型天疱疮、继发性皮肤溃疡。后诊断:寻常型天疱疮,小腿继发性溃疡并感染。入院后全身给予大剂量糖皮质激素(简称激素)(大量每日25 mg地塞米松)、抗生素、白蛋白等治疗;局部给予口腔、眼部护理,1/5 000高锰酸钾溶液浸泡全身后清除痂皮,糜烂面扑0.5%氯霉素粉。小腿处溃疡先用3%双氧水冲洗、无菌棉球擦干,再用无菌棉片填满创面滴加普通胰岛素混合液(按40 U/ml的普通胰岛素1 ml、500 ng/ml的维生素B125 ml、4 000U/ml的庆大霉素4 ml的比例配制>20 ml,以无混合液溢出为宜,以凡士林纱布1层、纱布4层包扎,每日1次。用药10 d时溃疡表面脓苔、坏死组织消失,可见新鲜肉芽组织及少许黄白色分泌物;用药50 d后溃疡缩小至原来的4/5,于5月10日带泼尼松、胰岛素混合液及其它辅助用药出院。2月后双小腿仅留2 cm×3 cm与2 cm×20 cm溃疡2处,4月后溃疡缩小至1 cm×2 cm与2 cm×5 cm大,出院5个月后溃疡全部愈合,泼尼松减至每日30 mg,无新发水疱。出院后每月复查血、尿、便常规、血生化均正常。继续巩固治疗天疱疮。
作者：周冼苡；曾抗；于娜沙；黄良 刊期： 2001年第04期
目的比较盆腔细菌、沙眼衣原体感染所致不孕症的临床特征及腹腔镜下特点。方法随机选择盆腔细菌、沙眼衣原体感染所致不孕症各50例,进行临床观察和腹腔镜检查。结果盆腔细菌感染组中有宫腔操作史、急性盆腔炎史、下腹痛史依次为24.4%、43.3%、78.6%,盆腔沙眼衣原体感染组中则分别为6.2%、8.9%和37.5%(P<0.05)。腹腔镜检中,盆腔细菌感染组中引起盆腔粘连、输卵管肿胀或积水、输卵管不全堵塞分别为35.7%、14.4%、17.4%,盆腔沙眼衣原体感染组发生盆腔粘连14.2%、输卵管肿胀或积水27.9%、输卵管不全堵塞39.6%(P<0.05)。盆腔细菌感染组中原发性不孕为30.3%、继发性不孕为69.7% (P<0.05),盆腔沙眼衣原体感染组中分别为52.7%和47.3%。结论盆腔细菌感染临床表现较为典型,常有宫腔操作史、急性盆腔炎史、明显下腹痛,腹腔镜下主要表现为盆腔粘连、输卵管损伤;盆腔沙眼衣原体感染临床表现不典型,腹腔镜下主要表现为输卵管损伤,不易早期诊治,并均可导致不孕。
作者：全松；杨晓燕；徐静萍；张军；田京梅；余艳红 刊期： 2001年第04期
目的研究HBV T1862变异的生物学意义。方法采用分子生物学方法,构建HBV前C/C基因EB病毒真核表达载体,利用体外定点突变技术诱导前C/C基因T1862变异,经PCR-RFLP初筛并经测序终鉴定出阳性克隆后,以脂质体介导方法将突变前后的重组质粒转染Cos7细胞, 以ELISA 检测HBeAg的表达量。结果未突变的重组质粒可稳定表达HBeAg,突变后的重组质粒未能检测到HBeAg表达。结论 HBV前C/C基因1862点突变的真核表达载体的构建,为体外研究该点突变引起HBV的一系列生物学改变奠定基础。
作者：林裕龙；侯金林；王战会；阎丽；周福元；骆抗先 刊期： 2001年第04期
目的探讨非开胸食管内翻剥脱术在治疗下咽、颈段食管及贲门癌中的应用。方法 18例中逆行食管内翻剥脱10例,顺行食管内翻剥脱8例;胃代食管15例,结肠代食管3例;咽、喉切除,气管永久性造瘘2例。结果全部病例无手术死亡;术后吻合口瘘2例,喉返神经损伤2例,肺部感染3例,切口感染1例;术后随访15例,生存率1年以上者占77%,3年以上者占44%,5年以上者占22%。结论该方法对心肺功能影响小,使高龄及合并心肺等重要脏器疾病的食管癌患者获得手术机会;下咽、颈段食管癌应积极手术治疗,可提高患者的生存率;胸段食管癌应尽量避免使用该方法。
作者：蔡开灿；王武军；王文林；陈钢；蔡瑞君 刊期： 2001年第04期
目的探讨N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMDA)和非NMDA类受体在基本呼吸节律发生和调节中的作用。方法在新生SD大鼠离体延髓脑片上记录舌下神经的呼吸节律性放电活动,在改良的Krebs液中加入兴奋性氨基酸类递质及相应的拮抗剂, 观察其RRDA的影响。结果使用非NMDA受体激动剂海人酸(Kainic acid, KA)后,可见呼吸周期及呼气时间有所延长, NMDA受体激动剂对呼吸活动则没有明显影响(P>0.1);相应的拮抗剂6-氰基-7-硝基喹恶啉土卫四(6,7-dinitroquinoxaline-2, 3-dione, DNQX)和2-氨基磷酸戊酸(D-2-amino-5- phosphonopentanoic, AP5)均可使放电频率和积分幅值明显降低吸气时间显著缩短(P<0.01),DNQX同时可致呼吸周期和呼气时间明显缩短(P<0.05)。结论在哺乳动物基本呼吸节律的产生和调节中,NMDA类受体主要对呼吸活动的强度产生调节作用;而非NMDA类受体不仅可以影响呼吸的强度,同时对呼吸的频率也发挥调节作用。
作者：潘秉兴；吴中海；王宁黔 刊期： 2001年第04期
1 临床资料 患者,女,26岁,人工流产2次,末次月经1998年11月23日。停经46 d后,外院诊断为早孕,服用米非司酮25 mg/次,2次/d,共3 d,第3天加用米索前列醇600 g。服药3 d后,阴道流血如月经量,未见明显组织物排出,流血24 d后自止。B超检查提示未见异常,宫腔内无残留物。1999年1月26日出现上腹痛,收入本院消化内科,诊为“胃、十二指肠溃疡”,治疗12 d,症状无好转。因患者腹痛加剧,漫延全腹,以“宫外孕破裂内出血”收入本科。查体:体温36.8 ℃,脉搏90次/min,血压13/9 kPa,呼吸20次/min,心肺无异常,全腹膨隆,肝脾未扪及,全腹压痛,反跳痛,肌紧张,移浊阳性。腹部穿刺抽出不凝血6 ml。妇检:外阴、阴道正常,宫颈光滑,未见流血,宫颈举痛,后穹窿饱满,子宫附件压痛拒按,触诊不清。尿妊娠试验阳性。即在硬膜外麻醉下行剖腹探查术,术中见腹腔内积血约200 ml,血块约800 g。吸除大部分积血及血块后,见盆腔左侧附件上方漂浮着1个长约4 cm死胎儿,头颅、五官、躯干、四肢清晰可辨,组织易破碎。大网膜与左附件粘连,并附着大量血块。清除血块后,见大网膜与左输卵管中部近系膜处以胎盘样组织相连,旁有一小破口。将大网膜与输卵管分离后,见左输卵管整条增粗变形,粗处直径为4 cm。将输卵管与周围粘连组织分离后切除。术后检查切下输卵管发现,在伞端处有1个卷曲胎儿,将输卵管纵形切开,在伞端内面有另1个胎盘组织附着,右附件外观无异常。
作者：张萍；陈磊 刊期： 2001年第04期
:以0.2%康威达消毒片(主要成份为三氯异氰脲酸)的水溶液,对两种实验菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌)悬液分别作用5、10、15 min,杀菌率达100%。对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性血清作用30 min,HBsAg抗原破坏率达96.88%。表明此消毒剂杀菌效果好、作用持久。
作者：张亚莉；陈进华；李岚；汪能平；耿穗娜 刊期： 2001年第04期
目的探讨子宫动脉栓塞术治疗产后大出血的疗效和安全性。方法采用Seldinger技术对 8例产后大出血,急诊行双侧髂内动脉造影,超选择性子宫动脉插管后,双侧分别注入明胶海绵颗粒直至血流明显变慢。结果 7例出血完全停止,1例出血明显减少,经药物及激素继续治疗1周出血停止。3例栓塞时有一过性下腹隐痛,无严重并发症发生。结论子宫动脉栓塞治疗产后大出血,止血迅速、安全、可靠,并能保留子宫,当保守治疗无效时,可作为产后大出血的首选治疗方法。
作者：郭元星；李彦豪；陈勇；印建国；刘军 刊期： 2001年第04期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
