学术投稿

非洲紫罗兰原生质体的制备及不同组分培养基对细胞增殖的影响

陈鑫;李骏;余汝媛;张扬;赖育菠;陈志宽;罗俊明;陆幸妍

关键词:非洲紫罗兰, 愈伤组织, 悬浮细胞系, 原生质体, 细胞增殖
摘要:目的 探讨非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha)原生质体的制备方法,并比较不同组分培养基对原生质体再生及增殖的影响.方法 以非洲紫罗兰愈伤组织制备悬浮细胞,以细胞生长曲线确定佳培养时间,并将纤维素酶(cellulase R-10)和果胶酶(pectinase Y-23)按2∶1(质量比)混合分别酶解悬浮细胞18、21、24 h,比较原生质体得率和细胞活力以确定佳酶解时间.分别以愈伤组织提取物、根尖提取物及培养土浸出物配制培养基培养原生质体16 d,观察原生质体细胞壁再生并比较细胞增殖率.结果 悬浮细胞培养8d细胞增殖率大,细胞活力93.8%;4%(质量分数)纤维素酶和2%(质量分数)果胶酶混合酶解21 h原生质体得率达到峰值,细胞活力为75.2%,延长至24 h后得率与21 h相比,差异无统计学意义,但细胞活力降至69.5%.以不同组分培养基培养原生质体,早于第6天在愈伤组织提取物培养基中观察到再生细胞壁及细胞分裂;第16天,愈伤组织和根尖提取物培养基细胞增殖率显著高于原生质体基础培养基和培养土浸出物培养基,并以愈伤组织为佳,而培养土浸出物无促进作用.结论 以非洲紫罗兰愈伤组织悬浮细胞培养8d并以4%(质量分数)纤维素酶和2%(质量分数)果胶酶混合酶解21 h能获得较多高活力的原生质体;愈伤组织提取物培养基能有效促进原生质体再生及细胞增殖.
广东药科大学学报杂志相关文献
  • 组织蛋白酶-B和MMP-9在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

    目的 探讨组织蛋白酶-B(CB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在非小细胞肺癌发生、发展及转移中的作用.方法 应用免疫组织化学法检测75例非小细胞肺癌组织及28例肺良性病变中CB和MMP-9的表达情况,并与临床病理特征进行综合分析.结果 CB和MMP-9的表达主要定位于细胞质,CB和MMP-9在非小细胞肺癌中表达的阳性率明显高于肺良性病变;且MMP-9的表达与有无淋巴结转移情况密切相关;CB和MMP-9的表达水平呈显著正相关.结论 CB和MMP-9在非小细胞肺癌中的表达上调,联合检测CB和MMP-9对肿瘤的诊断和预后判断有一定的临床意义.

    作者:薛兴阳;孟江;周明;赵光日;傅文凡;杨嵘皓;赵健 刊期: 2012年第05期

  • HPLC法同时测定矮地茶配方颗粒中岩白菜素和槲皮苷

    目的 建立矮地茶配方颗粒中岩白菜素和槲皮苷的含量测定方法.方法 以Diamonsil C18柱(4.6mm× 250 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈(A)-0.1%(体积分数)H3PO4(B)为流动相,进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长256 nm,柱温30 ℃.结果 岩白菜素在0.082 5 ~ 1.32 μg之间呈良好的线性关系(r =0.999 6),平均回收率为99.45%,RSD为1.62%.槲皮苷在0.022 8 ~0.364 8 μg之间呈良好的线性关系(r =0.999 8),平均回收率为99.21%,RSD为1.87%.结论 该方法精密度、重复性良好,可为矮地茶配方颗粒质量控制提供参考.

    作者:陈向东;张光大;刘法锦;孙冬梅;何文江 刊期: 2012年第05期

  • 建立小鼠深静脉血栓模型的实验研究

    目的 建立小鼠深静脉血栓动物模型.方法 采用下腔静脉结扎法制备动物模型,观察血管中血栓形成的病理变化并与假手术组比较.结果 模型小鼠下腔静脉内形成稳定的血栓,且符合人体静脉血栓形成的病理特性.病理观察显示模型组静脉可见血栓并充满管腔,且与管壁无粘连,而假手术组静脉中无血栓形成.结论 成功建立了小鼠深静脉血栓模型.

    作者:温定文;李小强;朱桂平;勾红菊;方海燕;桂亚丽;吴腾;兰天;唐富天;王丽京 刊期: 2012年第05期

  • 均匀设计法优化马缨丹提取工艺研究

    目的 优选马缨丹总黄酮的佳工艺条件.方法 以马缨丹中总黄酮的含量为评价指标,采用均匀设计法优选佳工艺条件.以索氏加热回流提取法提取,芦丁为对照品,采用紫外-可见分光光度仪在406 nm波长处测定吸光度.结果 马缨丹总黄酮佳提取工艺条件为:乙醇体积分数90%,液料比60∶1,药材粉碎度24目,提取时间4h.结论 所优选的工艺可行、重复性好.

    作者:尹永芹;严优芍;崔红花;沈志滨;谢浚明 刊期: 2012年第05期

  • 苹果多酚对Triton WR-1339诱发的高脂血症小鼠抗氧化能力的影响

    目的 研究苹果多酚对Triton WR-1339诱发的高脂血症小鼠抗氧化能力的影响.方法 采用苹果多酚(200、400 mg·kg-1)对NIH小鼠进行连续口服灌胃7d,第6天尾静脉注射Triton WR-1339 (300 mg·kg-1)诱导高脂血症,18h后收集各组小鼠血清,测定总胆固醇和三酰甘油的含量及血清MDA和NO水平、SOD和GPx活性.结果 苹果多酚(200、400 mg·kg-1)能明显降低高脂血症小鼠血清MDA的含量,升高NO水平,提高SOD、GPx活性.结论 苹果多酚可以显著提高高脂血症小鼠的抗氧化能力.

    作者:胡明月;姚楠;曾晓会;黄雪君;何蓉蓉;栗原博 刊期: 2012年第05期

  • 肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌的表达和纯化

    目的 分析重组肠道病毒71型外壳蛋白VP1 (EV71VP1)在大肠杆菌的表达及其部位,纯化重组蛋白VP1,为后续制备抗VP1单克隆抗体奠定基础.方法 采用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导VP1在质粒转化菌BL21中的表达;用Ni-NTA亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE和Western blot分析VP1的表达形式和抗原性;优化EV71 VP1原核表达条件.结果 SDS-PAGE检测结果表明重组蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后的VP1为一单一条带,相对分子质量约36 000,与预期大小相符;Western blot检测证实该蛋白能分别与兔抗EV71外膜蛋白和兔抗His-tag多克隆抗体发生特异性结合,其佳表达条件为37℃,1.25 mmol/L IPTG诱导4h.结论 原核表达了EV71 VP1,经纯化复性后VP1具有良好的抗原性,为后续工作奠定了基础.

    作者:吴亚安;邓丽芬;龚雨婷;陈端萍;谢端;肖承荣;蔡陈珣;赵晓蓉 刊期: 2012年第05期

  • 苦参的成分及质量分析研究进展

    目前已经从苦参中分离鉴定的化学成分有生物碱类、黄酮类、脂肪酸类、氨基酸类、挥发油类等化合物,对其化学成分的质量分析方法主要有:薄层色谱扫描法、酸碱滴定法、酸性染料比色法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用以及毛细管电泳法等.本文对这些质量分析方法进行综述.

    作者:陈静;梁生旺 刊期: 2012年第05期

  • 粉末直接压片法制备硝苯地平片及其稳定性考察

    目的 优选硝苯地平片粉末直接压片法的佳制备工艺.方法 采用正交设计筛选硝苯地平片直接压片处方,以休止角、脆碎度及溶出度为评价指标,制备样品并进行质量考察.结果 所选处方粉末流动性好,药物溶出速率高(60 min时溶出度达到95%以上),各项指标均符合规定.经6个月加速及室温留样考察,样品的外观、质量分数、有关物质及溶出度均未发生明显变化.结论 优选的处方工艺操作简便、经济、生产周期短,制备的产品质量稳定,适合产业化生产.

    作者:刘春平;刘再强;全向阳;向飞军 刊期: 2012年第05期

  • HPLC法测定三桠苦中山柰酚的含量

    目的 建立三桠苦中山柰酚的HPLC含量测定方法.方法 采用反相高效液相色谱法.色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-0.4% H3PO4(体积比55∶45);流速:1 mL·min-1;检测波长:368 nm;柱温:25℃;进样量:10 μL.结果 山柰酚在0.48 ~4.80 μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 4),平均回收率为98.52%,RSD为2.45%(n=6).结论 该方法简便、准确、分离度好,可用于三桠苦中山柰酚的含量测定.

    作者:王腾华;高幼衡;张丽媛;卢锦熙;万明珠;谭敏 刊期: 2012年第05期

  • 丹参对人粘连组织成纤维细胞MMP-1与TIMP-1mRNA表达的影响

    目的 考察丹参及其化学成分对人粘连组织成纤维细胞(ATF) MMP-1与TIMP-1 mRNA表达的影响.方法 使用组织块培养的方法获取ATF,分别加入丹参提取物、丹参素钠、丹参酮ⅡA磺酸钠与地塞米松培养48 h,提取总RNA并逆转录为cDNA,采用Real-time PCR法检测各组MMP-1与TIMP-1 mRNA的表达水平.结果 与空白对照组比较,丹参提取物与丹参素钠10、40 μg·mL-1剂量组MMP-1 mRNA水平差异有统计学意义(P<0.01),丹参素钠40μg·mL-剂量组TIMP-1 mRNA水平差异有统计学意义(P<0.01),其余各组差异均无统计学意义(P>0.05).结论 上调MMP-1 mRNA水平是丹参抑制ATF胶原过度合成,防止粘连产生的作用机制之一,丹参素在其中起主要作用.

    作者:曾煦欣;蒋泓;何振辉;邝嘉乐;张丽华 刊期: 2012年第05期

  • 鸡骨草总黄酮超声提取工艺及含量测定研究

    目的 筛选鸡骨草中总黄酮超声提取的佳工艺,并建立其含量测定方法.方法 以芹菜素-6,8-C-二葡糖苷为指标,采用三乙胺显色-紫外可见分光光度法(TEA-UV-VIS法)测定鸡骨草中总黄酮含量,采用L9(34)正交试验优选鸡骨草总黄酮提取工艺条件.结果 芹菜素-6,8-C-二葡糖苷线性范围为0.000 507~0.101 4 mg/mL(r =0.999),平均加样回收率为99.72%(RSD为1.54%).鸡骨草总黄酮超声提取工艺试验因素影响由大到小依次为超声时间>乙醇体积分数>提取次数>科液比,超声提取时间对提取量的影响有统计学意义,优选的佳提取工艺为20倍量的50%(体积分数)乙醇超声提取2次,每次45 min,3次试验鸡骨草总黄酮的平均提取量为4.655 mg/g.结论 TEA-UV法具有良好的专属性和稳定性,适用于鸡骨草中总黄酮的含量测定和评价;优选的总黄酮佳提取工艺方法稳定可行.

    作者:袁旭江;林励 刊期: 2012年第05期

  • 姜黄素半乳糖化十六酰壳聚糖聚合物胶束的制备

    目的 制备姜黄素半乳糖化棕榈酰壳聚糖聚合物胶束,并考察制备工艺对包封率和载药量的影响.方法 以半乳糖化十六酰壳聚糖(GHC)为载体材料,采用乳化-溶剂挥发法制备姜黄素聚合物胶束;应用正交试验考察药物∶载体质量比、油相∶水相体积比、超声时间对载药聚合物胶束包封率和载药量的影响,以对制备工艺进行优化;以透射电镜(TEM)和动态光散射粒度分析仪(DLS)对聚合物胶束的形态、粒径和Zeta电位进行测定.结果 药物∶载体质量比对胶束的包封率和载药量影响大,其次为油相∶水相体积比和超声时间.佳条件为药物∶载体质量比为1∶15,油相∶水相体积比为1∶7,超声时间为30min.制备的载药胶束的形状为球形,大小均匀,平均粒径为179.7 nm,Zeta电位约为76.46 mV,包封率为96.3%,载药量为9.1%.结论 所采用的乳化-溶剂挥发法制备工艺适于制备姜黄素聚合物胶束.

    作者:姜羽凤;王晓明;胡巧红;黎燕君 刊期: 2012年第05期

  • HPLC法同时测定轻身消胖丸中大黄素和大黄酚的含量

    目的 建立HPLC法同时测定轻身消胖丸中大黄素和大黄酚的含量.方法 采用HPLC法,色谱柱:C18色谱柱(5μm,4.0mm×250 mm);流动相:甲醇-0.1%(体积分数)H3PO4溶液(体积比88∶12);流速:1.0 mL/min;检测波长:254 nm;柱温:30℃;进样量:10 μL.结果 大黄素、大黄酚均在0.05 ~2.00μg范围内与峰面积呈良好的线形关系:r=0.999 9,平均回收率分别为99.53%、99.51%,RSD分别为0.6%、1.0%.结论 本方法简便可行、重复性好,为轻身消胖丸质量控制提供依据.

    作者:朱焕容;黄晓丹 刊期: 2012年第05期

  • 多枝雾水葛不同提取物对小鼠皮下脓肿的作用

    目的 研究多枝雾水葛提取物不同萃取部位对感染引起的皮肤脓肿的消肿排脓作用.方法 建立由金黄色葡萄球菌引起的小鼠皮肤脓肿模型,观察多枝雾水葛不同萃取物对小鼠皮下脓肿外观形态、体积及病理形态的影响,评价不同萃取部位的消肿排脓作用.结果 多枝雾水葛水提取物、氯仿萃取部位、水部位能使小鼠皮下脓肿体积变小,中性炎性细胞浸润逐步减轻、肉芽生长,显示良好的治疗效果.结论 多枝雾水葛提取物对感染引起的皮肤脓肿具有消肿排脓以及促进皮肤愈合的功效,其有效部位是氯仿部位和水部位.

    作者:李开莹;谢郁峰;陈艳芬;刘天竹;郭丽冰 刊期: 2012年第05期

  • 熊去氧胆酸片溶出度差异分析

    目的 比较国内不同厂家熊去氧胆酸片溶出度差异,以便对其质量进行更好地控制.方法 分别考察了2种不同溶出介质和不同转速对溶出曲线的影响,并以磷酸盐缓冲液(pH7.5)为溶出介质,转速50r/min进行HPLC分析,计算不同时间点熊去氧胆酸的溶出率,利用相似度值(AV值)对溶出曲线进行相似度比较,并对溶出均匀度(A)进行评价.结果 国内14家生产企业中有5家的产品溶出曲线与参比溶出曲线相似,仅有3家企业的所有产品溶出均匀性较好.结论 本研究建立的方法能有效对熊去氧胆酸片的工艺水平和质量进行考察,可作为该品种质量控制的重要补充.

    作者:邓锋;林向华;余燕 刊期: 2012年第05期

  • 生麦芽生物碱对高泌乳素血症模型大鼠激素水平的影响

    目的 研究生麦芽生物碱对高泌乳素血症(HPRL)模型大鼠泌乳素(PRL)、雌二醇(E2)、孕酮(P)等激素水平的影响,初步明确生麦芽回乳作用的有效部位.方法 选用雌性未孕Wistar大鼠,背部皮下注射盐酸甲氧氯普胺注射液制备HPRL模型.造模成功后,各组均胃饲给予相应的药物治疗,连续20d.末次给药后取血,应用ELISA法检测血清中PRL、E2、P、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)的含量,观察生麦芽生物碱对HPRL大鼠各激素水平的影响.结果 与模型组比较,生麦芽生物碱高、低剂量组大鼠血清PRL水平明显下降(P<0.01),高剂量组还可升高E2、P水平(P<0.05或P<0.01).结论 生麦芽生物碱对HPRL模型大鼠有保护作用,其作用机制可能与其对PRL、E2、P水平的调节作用有关.

    作者:胡敦全;陈永刚;吴金虎;王雄;曹金红 刊期: 2012年第05期

  • 大黄不同提取液的成膜材料筛选

    目的 考察主要成膜材料在大黄的水提液及不同体积分数乙醇提取液中的成膜性能,为含大黄的中药制剂成膜材料的选择与应用提供参考.方法 根据成膜材料的溶解性,选择加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)、乙基纤维素(EC)、甲基纤维素(MC)、聚乙烯醇缩丁醛(PVB)等成膜材料,通过显微镜和图像拍摄软件对膜结构进行分析.结果 PVP-K30在大黄的水提液以及不同体积分数的乙醇提取液中具有良好的成膜性,且膜的质地细密、光滑、平整;PVP-K90在大黄各提取液中均能成膜,但在大黄40%、60%乙醇提取液中成膜性较差.PVA-17-88在大黄各提取液中均能成膜,但膜的表面凹凸不平、较粗糙,有少量颗粒分散.EC在大黄的无水乙醇提取液中成膜性能优良,能形成1层厚实、平整、致密的膜.MC在大黄提取液中的成膜性随提取液乙醇体积分数的升高而降低.PVB只在大黄的无水乙醇提取液中成膜.结论 成膜材料的选择与大黄提取液溶媒的极性相关;PVP-K30在大黄的水提液和不同体积分数乙醇提取液中成膜性均较好,是含大黄中药喷膜剂的优选成膜材料.

    作者:林华燕;魏刚;何坦;刘东辉;许日鑫;林微微;石添香;欧斯健 刊期: 2012年第05期

  • 芦丁铬(Ⅲ)配合物的合成、表征及其抗氧化活性研究

    目的 合成芦丁-铬(Ⅲ)配合物后对其进行表征,并研究其抗氧化活性.方法 以芦丁为先导化合物与微量元素铬合成芦丁-铬(Ⅲ)配合物.通过红外光谱、紫外可见光谱、元素分析、热重分析和原子吸收光谱对配合物进行表征.采用羟自由基(·OH)和超氧自由基(O2-·)模型测定了芦丁和芦丁-铬(Ⅲ)配合物的抗氧化活性.结果与结论 确定芦丁-铬(Ⅲ)配合物中芦丁与铬的摩尔比为1∶1,推测分子式为CrCl2C27H32O18· 7H2O.芦丁-铬(Ⅲ)配合物抗氧化作用比芦丁配体强.

    作者:杨武群;吕华冲;蔡金艳;高奥;周鹏飞;王平;王健壮 刊期: 2012年第05期

  • 1,3-二苯基-1,2,3,6-四氢嘧啶-4,5-二甲酸二乙酯抗炎镇痛作用的研究

    目的 探讨1,3-二苯基-1,2,3,6-四氢嘧啶-4,5-二甲酸二乙酯(LH-2703)体内外的抗炎镇痛活性.方法 采用乙酸所致小鼠扭体反应和热板致痛模型评价镇痛作用;二甲苯致小鼠耳郭肿胀和角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型评价抗炎作用.细菌脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞活化作为体外炎症模型.酶免疫分析法(EIA)检测前列腺素E2(PGE2)的含量,Griess试剂法检测氧化亚氮(NO)的含量.结果 LH-2703能减少乙酸所致小鼠的扭体次数,延长热板致痛的痛阈值,抑制二甲苯诱导的小鼠耳郭肿胀和角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀.体外能抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞产生炎症因子PGE2和NO,低有效浓度分别为20、40 μmol/L(P <0.01,P<0.05).结论 化合物LH-2703具有抗炎镇痛作用,其作用机制可能与抑制炎症因子PGE2和NO有关.

    作者:夏鸿;何概易南;黄利;伦玉宁;余传林;陈娜娜;雷林生 刊期: 2012年第05期

  • 白色念珠菌生物膜的形成及其机制的研究进展

    深部真菌感染较难治愈,且研究发现深部真菌多伴随有真菌生物膜的出现,影响深部真菌的治疗效果.了解生物膜形成过程的特点及其机制对治疗深部真菌感染具有重要意义.本文综述了白色念珠菌生物膜的形成及其分子生物学机制和耐药机制的新进展,为白色念珠菌的研究及临床防治策略提供参考.

    作者:杨梦琪;杨帆 刊期: 2012年第05期

广东药科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:广东药科大学