学术投稿

人类精子高质量RNA提取方案的优化

于艳;管群;张斌;闻姬;杨丽霞;菅福琴;杨伟娜;孙伟

关键词:精子, RNA, 男性不育, 功能基因
摘要:目的:人类精子所含RNA极少量,且由于精子中圆形细胞存在,使得分离精子RNA具有一定的挑战性.本研究旨在优化人类精子RNA的提取方案.方法:利用40%的单层梯度液及精子洗涤液纯化精子,使用TRIzol试剂和RNeasy Mini Kit提取RNA,反转录精子RNA,以eDNA为模板扩增PRM2、c-Kit、CD45、CDH1基因来确定所提精子RNA中是否存在基因组DNA或体细胞RNA的污染.结果:利用3倍体积的40%单层梯度液及精子洗涤液可以完全去除精液中体细胞的污染,利用TRIzol试剂提取RNA比RNeasy Mini Kit更有效.结论:人类精子中含有微量RNA,此方法既经济又有效,可以提取高质量的精子RNA,为人类男性生殖的功能基因组研究奠定基础.
实用医学杂志相关文献
  • Meis1在结直肠腺瘤癌中的表达及其临床意义

    目的:探讨meis1在结直肠正常黏膜腺瘤癌发展过程中的表达变化及其临床意义.方法:应用荧光定量RT-PCR及免疫组化检测meis1在结直肠腺瘤癌中的表达及其临床意义.结果:RT-PCR结果显示meis1在正常肠黏膜中有一定程度的表达,随着腺瘤癌的发展表达下调.免疫组化结果显示,在正常肠黏膜、腺瘤及癌中meis1的表达率分别为92.9%、87.5%及63.1%,腺癌与正常、腺瘤相比差异有显著性(P<0.05).meis1表达部位随着正常黏膜向腺瘤癌发展过程中出现典型的胞核至胞浆异位,且异位与患者淋巴结转移相关(P<0.05).结论:Meis1的表达下调及胞浆异位与结直肠癌的发生及进展相关.

    作者:邹云莲;杨慧;朱军;张进萍;严新民 刊期: 2013年第21期

  • 伴癫痫发作出血性脑血管病阴离子间隙分析

    阴离子间隙(anion gap,AG)指血浆中未测定的阴离子(undetermined anion,UA)与未测定的阳离子(undetermined cation,UC)的差值.由于细胞外液中阴阳离子总当量数相等,故有:已测定阳离子(Na+)+UC=已测定阴离子(C1-+ HCO3-)+ UA.AG可根据血浆中常规可测定的阳离子(Na+)与常规测定的阴离子(Cl-和HCO3-)的差算出.AG比值异常可表现为升高和降低两种情况,临床上以升高多见,且临床意义较大.本文研究自发性出血性脑血管病急性期伴癫痫发作患者的AG水平变化及其对急性期预后的影响.

    作者:胡小伟;董万利 刊期: 2013年第21期

  • β2肾上腺素受体激活与气道炎症的研究进展

    人肺中β2肾上腺素受体(β2adrenergic receptor,β2AR)分布广泛,不仅存在于气道平滑肌细胞,在气道上皮细胞和大量的炎性细胞包括肺泡巨噬细胞膜上也有大量表达[1-2].哮喘和慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是气道慢性炎症性疾病,是常见、多发、高致残率和高致死率慢性呼吸系统疾病,临床上这两种疾病的治疗中广泛使用β2AR激动剂[3].尽管β2AR激动剂的主要作用是松弛气道平滑肌,然而由于肺内除了气道平滑肌细胞外,炎性细胞膜上也表达大量的β2AR,因而对气道炎症和炎症因子的影响不尽相同,目前研究表明β2AR激动剂对炎症因子表达的差异主要与是否存在lipopolysaccharide (LPS)有关,在LPS 存在时,β2AR激动剂可以抑制LPS所致的炎症因子表达;无LPS时,β2AR激动剂激活受体后发挥促炎作用.本文对近年来体内外β2AR激活对气道炎症和(或)炎症因子表达作用的研究加以综述.

    作者:王伟 刊期: 2013年第21期

  • 冷冻消融在骨与软组织肿瘤治疗中的应用

    在肿瘤的综合治疗手段中,外科手术切除仍然是有效的一种措施.近年来各种新技术、设备和器械的出现,使以往外科医生的技术无法达到的手术“禁区”不复存在,更引领外科进入了“微创”时代,在肿瘤外科领域亦是如此.冷冻消融治疗肿瘤作为一项新出现的微创技术,具有独特的优势和良好的安全性,疗效令人期待.本文就其在骨与软组织肿瘤治疗中的应用进行回顾性述评,并作出展望.

    作者:陈国奋 刊期: 2013年第21期

  • 动脉粥样硬化患者基质金属蛋白酶组织抑制剂1基因DNA高甲基化的研究

    目的:探讨动脉粥样硬化(AS)患者基质金属蛋白酶组织抑制剂1 (TIMP-1)基因DNA启动子区甲基化修饰的改变.方法:选择经颈部多普勒超声确诊AS患者40例以及正常者作为对照组40例,采用ELISA法测定血浆TIMP-1蛋白水平,荧光定量PCR检测外周血TIMP-1的mRNA表达,巢氏降落式甲基化特异性PCR (ntMSP)测定外周血TIMP-1基因DNA启动子区的甲基化程度.结果:AS组血浆TIMP-1含量明显降低,外周血TIMP-1的mRNA表达也显著低于对照组(P<0.05),TIMP-1基因启动子区DNA甲基化程度显著高于对照组(P<0.05).结论:AS患者TIMP-1含量降低,其机制可能与TIMP-1基因启动子区高甲基化有关.

    作者:杨程;田珏;蔡欣;王磊;曹成建;杨晓玲;陈久凯;蒲雅洁;姜怡邓 刊期: 2013年第21期

  • 先天性双侧桡骨缺如畸形1例

    患儿2岁1个月,因双前臂短缩桡偏畸形2年入院,患儿出生后即被父母遗弃,故孕产史及家族史无从考证.生长过程中发现双前臂短小,拇指发育异常,双手向桡侧偏斜,手指关节不能伸屈,以示指中指夹持物体.查体:脊柱发育正常,双前臂短小畸形,双侧拇指细小,无功能,双前臂桡偏畸形约90°,并向内旋转,前臂桡侧软组织挛缩,手的肤色、皮温、感觉无异常,桡动脉搏动未触及,X线检查示:双侧前臂变短,桡骨未见显示,双侧尺骨粗短,尺骨鹰嘴形态尚可(图1).

    作者:周孝斌;李志忠 刊期: 2013年第21期

  • ERCC1基因多态性与大肠癌中肺耐药蛋白和P-糖蛋白表达的相关性

    目的:探讨核苷酸切除修复交叉互补基因1 (excision repair cross completion gene 1,ERCC1)C 19007T位点基因多态性与大肠癌中肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)和p-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的相关性,以评估ERCC1基因多态性与大肠癌化疗敏感性的关系.方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术检测86例大肠癌患者ERCC1 C19007T位点基因型;采用免疫组织化学技术检测86例大肠癌中LRP、P-gp的表达情况,分析其与各基因型间的关系.结果:ERCC1 C19007T位点基因型频率分别为C/C型占53.49%、C/T型占40.70%以及T/T型占5.81%.LRP在C/T+ T/T基因型组的阳性表达率为90.00%,高于在C/C基因型组的阳性表达率65.22%,差异有统计学意义(P<0.05).比较P-gp在两组间的表达,差异无统计学意义(P>0.05).结论:ERCC1基因多态性与大肠癌化疗敏感性有关,临床检测ERCC1 C19007T位点基因型可能有助于指导大肠癌的化疗.

    作者:孔易;贝雪艳;徐树雷;陈龙;郑纪宁 刊期: 2013年第21期

  • 主动脉瓣置换同期部分室间隔切除治疗重度主动脉瓣狭窄

    严重的主动脉瓣狭窄引起左心室流出道的阻塞,左心室后负荷增加,心肌细胞代偿性肥大并导致心室壁增厚,左心室向心性肥厚.单纯主动脉瓣置换虽解除瓣膜水平梗阻,但瓣下心肌肥厚所致流出道梗阻并无改善,并且由于左室流出道血流速度的增加导致的虹吸作用引起收缩期二尖瓣前瓣的前移进一步加重左室流出道的梗阻[1],因此主动脉瓣置换同时解除左室流出道梗阻,有利于患者术后心功能的恢复.2006年6月至2011年6月,我科共对13名主动脉瓣重度狭窄患者行主动脉瓣置换同期部分室间隔切除术,效果满意,现报告如下.

    作者:舒礼良;张竞超;苏刚;王磊;徐敬;赵文增 刊期: 2013年第21期

  • 射频、微波、冷冻消融治疗肿瘤的临床应用及优势对比

    肿瘤消融治疗因具有微创、安全、可操作性高及重复性好等优点,在肿瘤的临床治疗中得到越来越广泛的应用,国内外常见的消融手段主要是微波消融、射频消融和冷冻消融,其中微波消融和射频消融属于热消融.3种消融方式因其原理的差别而各有其临床特点,在肿瘤的消融治疗中能够优势互补.

    作者:范卫君 刊期: 2013年第21期

  • 胰高血糖素样肽-1对不同浓度葡萄糖刺激下NIT-1细胞胰岛素原合成的短期影响

    目的:探讨胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)在高、低浓度葡萄糖作用下对胰岛β细胞胰岛素原合成的短期影响及随时间的变化趋势.方法:将NIT-1细胞随机分为以下4组:LG组(培养液中含5.6 mmol/L的葡萄糖)、LGG组(培养液中含5.6 mmol/L的葡萄糖和20 nmol/L的GLP-1)、HG组(培养液中含16.7 mmol/L的葡萄糖)、HGG组(培养液中含16.7 mmol/L的葡萄糖和20 nmol/L的GLP-1).检测基线0h及葡萄糖和(或)GLP-1刺激后2、4、6、8、10h各组胰岛β细胞胰岛素原mRNA和蛋白表达.结果:基线时各组胰岛素原表达无统计学差异(P> 0.05),刺激2、4、6、8、10h后HG组、HGG组胰岛素原表达均显著增高(P<0.05),而LG和LGG组无明显变化(P>0.05).组间比较HGG组胰岛素原表达量显著高于LG组、LGG组及HG组(均P< 0.05).HG组胰岛素原表达量显著高于LG组、LGG组(均P<0.05).胰岛素原mRNA的相对表达量在刺激后4h达到高峰,而胰岛素原蛋白的表达量在2h达到高峰.结论:在高糖条件下,GLP-1短期刺激胰岛β细胞可显著增加胰岛素原合成,GLP-1联合高糖对胰岛素原合成具有协同作用.胰岛β细胞在受到高糖或高糖+ GLP-1刺激后胰岛素原蛋白表达的高峰要先于胰岛素原mRNA表达的高峰.

    作者:钟慕贤;刘红;荣曦;岳惠芬 刊期: 2013年第21期

  • 医用三氧治疗对慢加急性肝衰竭患者肾血流量及腹水的影响

    目的:观察医用三氧对慢加急性肝衰竭患者肾素(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AⅡ)、醛固酮(ALD)、肾血流量及腹水消退的影响.方法:将103例慢加急性肝衰竭患者随机分为医用三氧治疗组(治疗组)52例和对照组51例,治疗组为基础治疗加医用三氧治疗系统进行治疗,采用基本自血疗法,抽出患者静脉血100 mL,然后与100 mL(35 μg/mL)的医用三氧混合后再回输到患者体内,每天1次;对照组采用基础治疗.对两组疗效进行比较.结果:治疗20 d后,治疗组的PRA、AⅡ、ALD较治疗前明显下降,也显著低于对照组治疗后,肾血流量较治疗前增加,也较对照组治疗后增加,发生肝肾综合征2例(3.8%),对照组发生肝肾综合征9例(17.6%),两组差异有显著性(x2=5.14,P< 0.05).治疗组存活32例(61.5%),对照组存活18例(35.3%),两组差异有显著性(x2=7.1,P<0.05);存活者至出院时腹水消退,治疗组25例(78.1%)多于对照组的8例(44.4%),两组差异有显著性(x2=5.82,P<0.05);腹水消退时间,治疗组(30.22±3.21)d,短于对照组的(47.25±9.08)d,两组差异有显著性(t=12.1,P< 0.01).结论:在综合疗法基础上加医用三氧治疗慢加急性肝衰竭疗效显著,能使患者PRA、AⅡ、ALD下降,增加肾血流量,在一定程度上预防肝肾综合征的发生,有利于腹水消退,能提高患者的存活率.

    作者:杨美蓉;顾锡炳;陈伟明 刊期: 2013年第21期

  • 2型糖尿病患者血清CA19-9水平与代谢控制指标之间的关系

    目的:探讨2型糖尿病患者CA19-9升高的影响因素.方法:入选855例住院2型糖尿病患者,计算CA19-9与空腹血糖、糖化血红蛋白、身高、体质量、性别以及胱抑素C、年龄、病程、BMI、腰围、腰高比、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹胰岛素、空腹C肽、肌酐以及尿微量白蛋白肌酐比值的相关性.进行多因素Logistic回归分析,比较上述指标对CA19-9的影响程度.结果:CA19-9与空腹血糖、糖化血红蛋白、身高、体质量、性别以及胱抑素C存在线性相关,且与空腹血糖以及糖化血红蛋白相关性较好,其相关系数分别为0.122(P=0.000)与0.106(P=0.002).回归分析显示:空腹血糖、糖化血红蛋白的回归系数分别为0.354、0.278,均P<0.001.结论:空腹血糖与糖化血红蛋白是影响CA19-9的主要因素,长期血糖控制不佳可能导致CA19-9水平升高.

    作者:陈炜;崔世维;张荣萍;姚丽丽;王鑫蕾;王粹芳 刊期: 2013年第21期

  • UF-1000i尿有形成分分析仪和相差显微镜法对血尿来源定位的方法学评价

    目的:以肾脏病理活检结果作为金标准,评价UF-1000i尿有形成分分析仪和相差显微镜法诊断血尿来源的敏感性和特异性.方法:287例肾病理活检确诊为肾小球病变患者,肾活检前用UF-1000i分析法和尿相差显微镜检查结果,分别进行CUTOFF值的确定和检测性能的计算.结果:UF-1000i分析法检查结果:红细胞计数小值为25个/μL,大值为3 554个/μL,中位数为63个/μL;P70红细胞中位数为52个/μL;非均一型尿报警提示占80%.相差显微镜结果:红细胞计数小值为8个/μL,大值为825个/μL,中位数为55个/μL,非均一红细胞中位数为44个/μL.显微镜法的敏感性为97%,特异性为89.2%.AUC的面积为0.943,判断肾小球血尿诊断界值为:非均一型红细胞所占的比值>69%.UF-1000i分析法的敏感性为92.3%,特异性为86.8%,AUC的面积为0.928.判断肾小球血尿的诊断界值为:RBC-P70FSC 75.0ch.这两种方法的检测结果差异有统计学意义(x2=24.397,P< 0.01).结论:血尿来源定位肾活检是金标准,相差显微镜法和UF-1000i分析法对血尿来源的定位都是比较理想的诊断实验.相差显微镜法的敏感性和特异性优于UF-1000i分析法;相差显微镜法繁琐费时,UF-1000i操作简便快速,结果准确,自动化程度高,值得广泛应用于临床.

    作者:李小斌;夏运成;姜文玲;许向清;陈荩国;彭佑铭;刘伏友 刊期: 2013年第21期

  • 心肌血流储备分数在冠脉多支病变介入治疗中的应用

    目的:分析心肌血流储备分数(FFR)在冠状动脉多支血管病变的介入治疗中的指导价值及其临床预后.方法:回顾性分析65例冠脉造影(CAG)显示多支血管病变患者的临床资料,分为单纯CAG指导进行PCI组(A组,43例)和FFR指导行PCI组(B组,22例),分析比较两组的支架植入数量、造影剂用量及随访6个月主要不良心血管事件的发生率.结果:两组相比,B组较A组支架植入数量明显减少[(1.4±0.8)个vs.(2.5±1.1)个,P< 0.05],造影剂用量更少[(173.4±85.7)mL vs.(271.8±106.1)mL,P<0.05],经6个月随访,B组主要不良心血管事件发生率低于A组(13.6% vs.20.9%,P>0.05).结论:该研究表明,FFR指导的PCI治疗安全有效,在提高多支血管病变患者预后的同时,明显减少了不必要的支架植入.

    作者:高丽华;陈欣;卢成志;张淑翼 刊期: 2013年第21期

  • 微波消融在骨肿瘤治疗中的应用

    所谓骨肿瘤,是指来源或发生于骨及相关组织的肿瘤,包括原发与转移2类.骨肿瘤以实体瘤的形式存在,根据肿瘤性质及分期,其治疗手段除了放疗、化疗、生物治疗等内科方法外,手术治疗也尤其重要.对于骨肿瘤手术,分为保肢手术和截肢手术2类,按照国际骨肿瘤保肢协会的规范,骨肿瘤专科治疗的保肢手术率应该达到85%~90%,目前,保肢手术已成为骨肿瘤手术的主流.要完成保肢手术,必须经过3个手术步骤,即肿瘤的完整切除、硬组织功能重建、软组织覆盖修复,而金属假体是常见的硬组织修复假体.但是,当肿瘤位于解剖结构复杂部位难以彻底切除而复发风险增加,金属假体重建面临排异、感染、松动、断裂等近、远期并发症时,人们开始试图寻找另一种有效的治疗骨肿瘤的方法.

    作者:张余;柯晋 刊期: 2013年第21期

  • 人类精子高质量RNA提取方案的优化

    目的:人类精子所含RNA极少量,且由于精子中圆形细胞存在,使得分离精子RNA具有一定的挑战性.本研究旨在优化人类精子RNA的提取方案.方法:利用40%的单层梯度液及精子洗涤液纯化精子,使用TRIzol试剂和RNeasy Mini Kit提取RNA,反转录精子RNA,以eDNA为模板扩增PRM2、c-Kit、CD45、CDH1基因来确定所提精子RNA中是否存在基因组DNA或体细胞RNA的污染.结果:利用3倍体积的40%单层梯度液及精子洗涤液可以完全去除精液中体细胞的污染,利用TRIzol试剂提取RNA比RNeasy Mini Kit更有效.结论:人类精子中含有微量RNA,此方法既经济又有效,可以提取高质量的精子RNA,为人类男性生殖的功能基因组研究奠定基础.

    作者:于艳;管群;张斌;闻姬;杨丽霞;菅福琴;杨伟娜;孙伟 刊期: 2013年第21期

  • 室性早搏致心肌病与QRS宽度的关系

    目的:探讨射频消融术(RFCA)治疗室性早搏致心肌病(PVC-ICM)疗效及其与QRS宽度的关系.方法:63例频发室性早搏患者接受射频消融治疗,其中16例左室射血分数(LVEF)<50%的患者诊断存在心肌病,作为实验组,47例LVEF正常患者作为对照组.两组术前均检查心电图、24 h动态心电图、心脏彩超,3-6个月后复查;分别比较两组术前QRS宽度,以及术前、术后两组室早负荷量、LVEF、左室舒张末内径(LVEDd).结果:53例患者消融成功.实验组QRS宽度(150±21)ms明显高于对照组(142±21)ms(P<0.01).实验组术后LVEF(58±9)%较术前(41±7)%显著提高(P< 0.001),术后LVEDd(44±5)mm较术前(57±6)mm显著缩小(P<0.01).结论:射频消融术能够逆转PVC-ICM,较宽的QRS宽度可能更易发展为心肌病.

    作者:彭新辉;张飞飞;杨浩;萧钟波;赵冬华;何利伟;彭健 刊期: 2013年第21期

  • 早期应用含膳食纤维的肠内营养与全肠外营养对重型颅脑损伤患者肠黏膜屏障的影响比较

    目的:评价早期应用含有膳食纤维的肠内营养与早期应用肠外营养对重型颅脑损伤患者肠黏膜屏障的影响.方法:选取100例重型颅脑损伤患者随机分为膳食纤维+肠内营养组和肠外营养组,每组50例,膳食纤维+肠内营养组早期给予含有膳食纤维的肠内营养,肠外营养组给予全肠外营养,第1、5、9天分别测定血浆二胺氧化酶含量、D乳酸含量及血浆内毒素水平和尿乳果糖排泄率.结果:对比肠外营养组,膳食纤维+肠内营养组治疗1、5、9d后测血浆二胺氧化酶含量、D乳酸含量、血浆内毒素水平及尿乳果糖排泄率较肠外营养组低,且差异有统计学意义(P<0.05).结论:早期应用含有膳食纤维的肠内营养对重型颅脑损伤患者肠黏膜屏障具有保护作用,优于肠外营养,应首选肠内营养途径.

    作者:赵永华;杨开敏;贾秀艳;晁怀宇;孟伟 刊期: 2013年第21期

  • 图解阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者体质量指数与过筛检查若干主要指标的关系

    目的:探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者体质量指数(BMI)与过筛检查若干主要指标的关系.方法:以确诊为OSAHS受检者的BMI为横坐标,分别选取呼吸暂停低通气指数(AHI)、鼾声指数、呼吸暂停低通气累积总时间(min)、低氧血症累积总时间(min)、低血氧饱和度为纵坐标用SPSS12.0版统计软件制作散点图进行分析.结果:散点图显示:AHI在30以上、鼾声指数在200以上、呼吸暂停低通气累积时间和缺氧累积时间在50 min以上、低血氧饱和度在79%以下者皆以BMI在24 kg/m2以上的超重或肥胖OSAHS患者居中多.结论:AHI、鼾声指数、呼吸暂停低通气累积时间、低氧血症累积总时间、低血氧饱和度等OSAHS指标都与BMI有关.

    作者:黄鑫炎;谭卫平;黄建强;李志平;罗益锋 刊期: 2013年第21期

  • 慢性髓细胞白血病患者PRAME基因启动子甲基化改变

    目的:慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)基因启动子区域的甲基化改变其及其临床相关性.方法:应用实时定量甲基化特异性PCR (real-time quantitative methylation-specific PCR,RQ-MSP)技术对55例CML患者及20例对照组骨髓单个核细胞标本的PRA ME基因启动子甲基化状态进行检测.结果:28/55例(51%)CML患者出现PRA ME启动子低甲基化改变,而20例对照未显示低甲基化,两组差异有显著统计学意义(P< 0.001).PRAME低甲基化与患者血液学相关参数及染色体分组均无相关性.PRA ME启动子低甲基化频率随疾病进展而降低,在慢性期、加速期及急变期中分别为48%(22/46)、33%(1/3)及17%(1/6).结论:PRA ME基因低甲基化可能是参与CML发生的早期分子事件之一.

    作者:姚冬明;钱军;林江;李云;陈芹;陈星星 刊期: 2013年第21期

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主管:广东省卫生厅

主办:广东省医学情报研究所