学术投稿

鼠抗人肥大细胞类糜蛋白酶N端片段抗体的制备与鉴定

陈章权;黄震;梁晓东;陆田田

关键词:肥大细胞, 糜蛋白酶, 抗体, 制备
摘要:目的:在大肠杆菌中表达人肥大细胞类糜蛋白酶(hMCC)N端片段(hMCC-N),并制备其鼠源性多克隆抗体.方法:通过PCR法扩增hMCC-N端基因片段,将其克隆至pMAL-c2x原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Amylose树脂亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠抗hMCC-N端片段多克隆抗体.并以间接ELISA测定抗体效价,以Western blot鉴定抗体的特异性.结果:PCR扩增得到360 bp的hMCC-N端基因片段,克隆入表达载体pMAL-c2x,构建了与标签蛋白麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体pMAL-c2x/hMCC-N,融合蛋白在大肠杆菌中得到了稳定表达,并经亲和层析,纯化出可溶性的重组蛋白,用其免疫小鼠,获取了鼠抗hMCC-N端片段的多克隆抗体,ELISA结果显示效价达1:12 800,Western blot分析表明该抗体能特异结合hMCC.结论:成功地制备了效价高、特异性较强鼠抗hMCC-N端片段抗体,为进一步建立hMCC的ELISA检测方法打下了良好的基础.
实用医学杂志相关文献
  • 钻孔置管引流联合尿激酶治疗非急性硬膜外血肿47例

    目的:探讨钻孔置管引流联合尿激酶治疗非急性外伤性硬膜外血肿的手术适应证及疗效.方法:回顾性总结采用该方法治疗的47例患者的临床特征、CT特点及救治体会.结果:所有患者恢复良好,无手术并发症发生.均痊愈出院.结论:钻孔置管引流联合尿激酶治疗非急性硬膜外血肿创伤小,安全性高,术后恢复快,费用低廉,是一种行之有效的手术治疗方法,适应于基层医院开展应用.

    作者:林伟民;张佩英;郑少钦 刊期: 2008年第11期

  • 超声定位针刺胸膜活检68例

    目的:探讨B超定位针刺胸膜活检在胸膜疾病诊断中的阳性率和安全性.方法:对近4年诊断为胸膜疾病并行针刺胸膜活检、胸水脱落细胞检查的68例患者的临床资料进行回顾性分析.结果:68例胸膜活检中提示结核性胸膜炎23例(33.8%)、慢性炎症13例(19.1%)、腺癌11例(16.1%)、鳞癌5例(7.0%)、小细胞癌3例(4.4%)、不明部位的转移癌3例(4.4%)、间皮瘤1例(1.4%),活检失败得到胸膜组织病理报告为骨胳肌组织和纤维脂肪组织9例(13.2%),胸膜活检恶性阳性率33.8%,胸水脱落细胞阳性率仅为29.4%,总病理确诊率为86.7%.术后并发症主要是气胸3例(4.4%),胸膜反应2例(2.9%),出血1例(1.4%).结论:在胸膜疾病中,B超定位针刺胸膜活检是一种有效的诊断手段,阳性率高,致命并发症极少.

    作者:谢衬梨;赵一菊;蔡杰;郭庆玲 刊期: 2008年第11期

  • 肺癌患者经外周静脉置入中心静脉导管置管化疗的护理体会

    经外周中心静脉置管术又称经外周静脉置入中心静脉导管(PICC)置管术,是一种用于为患者提供长时间性的静脉输液的留置中心静脉导管,化疗是肿瘤患者常用的治疗方法之一,与外科手术、放疗等治疗方法结合,能使多种癌症得到缓解,延长病人生存期.由于化疗药物的毒副作用,患者常承受渗漏性损伤及静脉炎的痛苦,而血管的破坏,往往会影响患者下一个周期的治疗.

    作者:丁小娟;姚亚宏 刊期: 2008年第11期

  • 乌司他丁对慢性阻塞性肺疾病并呼吸衰竭患者呼吸力学及氧化应激的影响

    目的:研究乌司他丁注射刺对慢性阻塞性肺疾病(COPD)并呼吸衰竭患者机械通气过程中呼吸力学及氧化应激的影响.方法:COPD并呼吸衰竭机械通气患者,在机械通气过程中分别采用乌司他丁注射剂治疗,监测气道峰压(PIP)、平台压(Pplat)、平均气道压(Pm)、内源性呼气末正压(PEEPi)、静态顺应性(Cs)、动态顺应性(Cd)和吸气阻力(Ri)变化,并检测血清丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化能力(TAO)水平.结果:乌司他丁治疗显著降低患者Ri、PIP、Pplat、Pm、PEEPi水平,显著增高Cs、Cd水平,并使血清MDA含量显著降低,SOD、GSH及TAO水平显著提高.结论:乌司他丁治疗COPD并呼吸衰竭机械通气患者呼吸力学状态具有明显改善作用,并能减轻患者氧化应激水平,对呼吸机相关性肺损伤具有保护作用.

    作者:向镜芬;杨祥;曾峰;刘杰雄;潘桂嫦 刊期: 2008年第11期

  • 肋间神经冷冻和硬膜外自控镇痛在肺癌根治术术后镇痛中的比较

    目的:比较肋间神经冷冻和硬膜外自控镇痛在肺癌根治术术后镇痛中的效果和副作用.方法:将60例择期后外侧切口开胸的肺癌根治术患者分为A、B两组.A组为肋间神经冷冻止痛组(n=30),使用北京KOOLAND医疗设备有限公司生产的JT-Ⅰ型冷冻手术治疗机,在关胸前对切口所在肋间及上、下各两个肋间和留置胸腔引流管所在肋间的肋间神经进行冷冻.B组为连续硬膜外自控镇痛组(n=30),采用日本wells公司生产的电子泵,用吗啡加氟哌利多行连续硬膜外自控镇痛.两组患者均采用视觉模拟评分法(visual analogue seale,VAS)评定术后疼痛程度.观察两组患者手术后第1、2、3、4、5、8天的VAS评分.对患者术后两种镇痛方法的整体满意度进行评级,并记录患者术后8 d内恶心、呕吐,呼吸抑制,瘙痒,尿潴留,肠麻痹等术后镇痛并发症的发生率.结果:A组手术后止痛效果好于B组,术后两种镇痛方法的整体满意度A组好于B组,手术后镇痛副反应A组少于B组.结论:在肺癌根治术术后镇痛中,肋间神经冷冻优于硬膜外自控镇痛.

    作者:唐继鸣;陈刚;崔建修;肖朴;贲晓松;谢亮;周海榆 刊期: 2008年第11期

  • 第二产程延长的病因探讨及对母儿的影响

    目的:研究导致第二产程延长的临床病因,及其对新生儿窒息,孕妇产后出血发生的影响.方法:统计167例第二产程延长的初产妇的临床病因及比较各种临床病因的剖宫产、顺产、阴道助产例数;比较第二产程延长初产妇的剖宫产、顺产、阴道助产产后出血,新生儿窒息的发生例数.结果:(1)胎头位置异常在不同分娩方式间差异有统计学意义、宫缩乏力、产道异常在不同分娩方式间的差异均无统计学意义.(2)新生儿窒息及产后出血在不同分娩方式间差异均无统计学意义.结论:正确决定第二产程延长的孕妇分娩方式是在准确判断导致第二产程延长病因基础上作出的,对减少第二产程延长对母儿的损害有重要的临床意义.

    作者:田耕;钟惠敏;许梅艳 刊期: 2008年第11期

  • 护士的心灵独白

    躺在床上翻来覆去怎么都睡不着,起来打开床头灯,从枕头旁边拿来一本前几天买回还来不及看的<散文选刊>,斜靠在床头翻阅,可是,怎么也看不下去,满脑子都是同事张三忙忙碌碌忧伤又无奈的身影,像放电影似的一幕幕地展现在眼前.

    作者:韦莲素 刊期: 2008年第11期

  • 妊娠β地中海贫血患者红细胞及网织红细胞观察

    目的:观察妊娠的β地中海贫血(β地贫)妇女红细胞参数:平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞体积分布宽度(RDW).网织红细胞参数:网织红细胞百分率(RET%)、网织红细胞绝对值(RET#)、未成熟网织红细胞指数(IRF)、低荧光强度网织红细胞(LFR)、中荧光强度网织红细胞(MFR)、高荧光强度网织红细胞(HFR)在妊娠后的变化情况.方法:用Sysmex XE-2100全自动血液分析仪测定β地贫妊娠妇女红细胞及网织红细胞,将各项测定结果与正常妊娠妇女、非妊娠β地贫妇女进行比较.结果:β地贫妊娠妇女的MCV、MCH低于正常妊娠妇女,RDW高于正常妊娠妇女;β地贫妊娠妇女RET%、RET#、IRF、MFR、HFR高于正常妊娠妇女,LFR低于正常妊娠妇女.β地贫妊娠妇女的MCV、MCH、IRF、MFR、HFR高于β地贫非妊娠妇女,LFR低于β地贫非妊娠妇女.结论:β地贫妇女在妊娠后造血功能会更旺盛,红细胞、网织红细胞参数变化更明显,MCV、MCH、RDW、RET%、RET#、IRF、LFR、MFR、HFR可作为产前地中海贫血筛查的参考指标.

    作者:赵应斌;黎华莲;丁燕玲;刘钢毅;刘宇 刊期: 2008年第11期

  • 妊娠期糖尿病对妊娠结果的影响

    目的:探讨妊娠期糖尿病(GDM)对母婴健康的影响,减少母婴并发症的发生.方法:对121例GDM孕妇和121例非GDM孕妇的妊娠结局进行分析.结果:GDM孕妇手术分娩率、妊娠高血压综合征、巨大儿发生率及新生儿并发症发生率都较非GDM孕妇高.GDM的早期诊断和及时治疗可使巨大儿、妊高征发生率和手术产率降低,减少新生儿并发症.结论:GDM严重影响母婴健康,早期诊断GDM及控制血糖是减少母婴并发症的关键.

    作者:袁中草 刊期: 2008年第11期

  • 双对比钡餐检查中的异常影1例

    患者男,48岁,职员.主诉饥饿感.中上腹不适,时有胀痛,以进食后为甚,偶有恶心、反胃,已有数月.无便血、腹泻等其他症状.临床检查:神清、消瘦、心肺听诊无异常.腹部平软无压痛,肝脾未扪及.B超:肝、胆、胰未见占位.实验窜检查:尿及大便常规无特殊.X线检查:胸部透视心、肺、膈无明显异常.双对比钡餐检查:食管正常.胃呈鱼钩型,紧张度中等,位置正常.于卧位或站立位都可见到胃体部0.4 cm×0.6 cm类圆形密度增高异常影,边缘尚光整,加压相更明显.位置较固定,且无明显移动.卧位、立位多次观察始终存在,俯卧位也可见.

    作者:陆洋;黄伟新 刊期: 2008年第11期

  • 皮肤淀粉样变溃疡修复1例护理体会

    原发性局限性皮肤淀粉样变性因淀粉物质沉积于原先外观正常的皮肤而致病,并无内脏器官受累证据[1],但导致所沉积的组织及器官有不同程度功能障碍,目前临床上并无特别有效的治疗办法[2].2007年4月,我科收治1例双胫前皮肤淀粉样变致双胫前慢性皮肤溃疡,经多种方法治疗取得满意疗效,现报告如下.

    作者:郭肖霞;洪彩梅 刊期: 2008年第11期

  • 儿童结节性硬化症58例临床分析

    目的:了解儿童结节性硬化症(tuberous sclerosis,TS)的临床特征,以提高对儿童TS的认识.方法:对58例TS患儿的临床症状、体征及实验室检查等方面的资料进行回顾性分析.结果:58例TS患儿中,53例(91%)出现癫痫,头部CT扫描和MRI的异常检出率分别为98%(42/43)和83%(10/12),25例(43%)诊断出智力低下,48例(83%)具有皮肤损害,其中色素减退斑36例(62%)、面部血管纤维瘤19例(33%)及咖啡宽11例,心脏错构瘤检出率96%(42/44).结论:所有癫痫患儿均应注意有无TS相关损害,儿童TS相关损害常见于脑、心脏及皮肤,色素减退斑是TS患儿常见的皮损.

    作者:刘启文;李建红;李萍;刘建中;冯进云 刊期: 2008年第11期

  • 喘息性疾病并肾脏损害患者尿NAG的检测

    近年来喘息性疾病的发病率逐渐增加,其发生发展过程中可以引起肾脏损害,常规的肾脏损害指标如血尿素氮、血肌酐(Cr)难以发现早期肾损害,若异常时往往病情已较重.N-乙酰-B-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)检测在早期发现肾损害方面有其独特的临床意义.NAG的测定目前已广泛应用于临床,对喘息性疾病检测尿NAG报道甚少,笔者对96例喘息性疾病的住院患儿检测尿NAG及Cr,以探索喘息性疾病尿NAG及Cr的变化及其临床意义.现报告如下.

    作者:徐旭;章国忠;涂芳芳;李显取;彭乃杰 刊期: 2008年第11期

  • 急性重症胰腺炎胰外损害78例临床分析

    目的:探讨急性重症胰腺炎的胰外损害情况.方法:对78例急性胰腺炎病例临床资料进行分析,统计其胰外损害发生率.结果:78例急性重症胰腺炎发生胰腺外众多器官损害,如消化系统、呼吸系统、泌尿生殖系统、神经系统等,其中以肝脏和心血管系统并发症为常见,其发病率分别为71.8%和24.3%,其次为应激性消化道出血和急性呼吸窘迫综合征.结论:急性重症胰腺炎常合并胰腺多种器官损害,应加以积极处理.

    作者:崔丽芳 刊期: 2008年第11期

  • 改良小切口甲状腺腺瘤切除术32例

    甲状腺腺瘤为常见的多发病,占甲状腺疾病的38%~56%,甚至达62%,女性多于男性.本病一经明确诊断,多采用外科手术治疗.传统甲状腺腺瘤切除术,因切口大,影响美观而受到挑战.我科于2003年6月至2006年8月对32例甲状腺腺瘤患者采用小切口单纯腺瘤切除法进行治疗,术后恢复好.现将诊治体会报告如下.

    作者:徐少华 刊期: 2008年第11期

  • 肝素尿激酶混合液在预防深静脉留置导管功能丧失中的应用

    目的:观察肝素尿激酶混合液和肝素在颈内静脉留置双腔导管封管中的效果.方法:将60例带涤纶环深静脉留置导管维持血液透析患者分成实验组(以肝素尿激酶混合液封管)和对照组(以肝素封管),观察与比较两组留置导管时间、导管堵塞、溶栓后再通和导管动静脉端的静态管路压.结果:实验组留置导管时间明显长于对照组,导管堵塞发生率明显低于对照组,两组静态管路压差异也有显著性,但溶栓后再通率差异无显著性.结论:肝素尿激酶混合液是较好的留置管封管液,有预防留置导管功能丧失的作用.

    作者:赵微燕;陈法东;包国豪;周秀华;缪初升;卢婵 刊期: 2008年第11期

  • 细胞间黏附分子-1在家兔急性鼻窦炎上颌窦黏膜中的表达

    目的:探讨细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)在家兔急性鼻窦炎上颌窦黏膜中的表达及意义.方法:健康成年新西兰白兔24只,随机分成鼻腔置入Merocel 高分子膨胀海绵+鼻腔注入肺炎链球菌组(A组,8只)、单纯鼻腔置入Merocel 高分子膨胀海绵组(B组,8只)及空白对照组(C组,8只).10 d后将动物处死,完整取出实验侧上颌窦,脱钙3周后采用免疫组化检测上颌窦黏膜中ICAM-1的表达.结果:ICAM-1在A组家兔上颌窦黏膜上皮细胞、腺上皮细胞、血管内皮细胞及固有层炎性细胞中大量表达;B组上颌窦黏膜ICAM-1的表达量也明显增加,但阳性表达强度弱于A组;C组上颌窦黏膜上皮细胞、腺上皮细胞极少量表达ICAM-1,3组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论:ICAM-1在实验性急性鼻窦炎鼻窦黏膜中大量表达,在急性鼻窦炎炎症进程中起重要作用.

    作者:卫红齐;袁辉;刘志勇;朱政文;邬晓帆;杜建斌 刊期: 2008年第11期

  • 罗哌卡因-芬太尼腰硬联合阻滞用于可行走分娩镇痛的效果

    目的:观察罗哌卡因复合芬太尼用于腰硬联合阻滞(CSEA)用于可行走分娩镇痛的临床效果.方法:选择ASA Ⅰ~Ⅱ级条件相同单胎足月无产科并发症的初产妇90例,分成A组、B组和C组,每组30例.宫口开至3 cm时,A组产妇蛛网膜下腔注入罗哌卡因2.5 mg+芬太尼20μg,B 组产妇蛛网膜下腔注入罗哌卡因2.5 mg,A、B两组产妇当觉宫缩痛视觉模拟评分(VAS)≥2时,硬膜外输入0.1%罗哌卡因+2μg/mL芬太尼混合液;C组单纯用0.1%罗哌卡因行硬膜外镇痛.观测疼痛评分、肌张力评分(改良Bromage评分)、各产程时间、分娩方式、催产素使用率(%)和罗哌卡因用量,新生儿出生后Apgar评分;观察镇痛期间的副作用.结果:镇痛后A组VAS评分低于B、C组(P<0.05和P<0.01);罗哌卡因用量A组小于B、C组(P<0.05和P<0.01),3组平均动脉压、心率、血氧饱和度镇痛前后均无统计学差异,各产程时间、Bromage评分、分娩方式和新生儿评分3组无统计学差异.结论:蛛网膜下腔加用小剂量芬太尼行罗哌卡因复合芬太尼用于CSEA分娩镇痛,具有起效更快、镇痛效果确切、罗哌卡因用药量少、运动阻滞轻、可行走、可控性强等优点,对产妇、胎儿及新生儿无不良影响,产妇镇痛满意度高.

    作者:吕波;任永功;吴世民 刊期: 2008年第11期

  • 舒氧康对急性肺损伤家兔肺组织肿瘤坏死因子-αmRNA表达的影响

    目的:探讨舒氧康对急性肺损伤(ALI)家兔肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的影响及其对肺损伤的治疗作用.方法:将45只家兔随机分为对照组(A组)、肺损伤组(B组)和舒氧康组(C组),每组15只,B和C组采用特制多功能撞击机制成ALI模型,C组经耳缘静脉给予舒氧康静滴[0.3 mL/(kg·min)],分别在损伤前及损伤后2、4、6 h采血测定TNF-α水平,6 h后处死动物.取肺组织测定肺组织TNF-α水平、TNF-α mRNA表达、肺水含量、肺体质量比值及观察病理变化.结果:与A组相比,B组损伤后肺组织及血浆TNF-α水平、肺组织TNF-αmRNA表达显著升高(P<0.05),PaO2显著降低(P<0.05),肺水含量及肺体质量比值显著增高(P<0.05),镜下见肺间质、肺泡水肿,大量炎细胞浸润.C组经舒氧康治疗后,与B组比较,肺组织及血浆TNF-α水平、肺组织TNF-α mRNA表达降低(P<0.05),PaO2明显升高(P<0.05),肺水含量及肺体质量比值减少,肺水肿减轻.结论:舒氧康能抑制ALI家兔肺组织TNF-α mRNA的表达,降低肺组织和血浆TNF-α水平,减轻肺组织的病理损害从而治疗ALI.

    作者:程青;唐忠志;陈忠庆;李军尧;陈谦;王忠强;邬明;郭亮 刊期: 2008年第11期

  • 红霉素眼膏联合复方妥布霉素眼膏在泪道阻塞激光术后的应用

    泪道阻塞应用激光泪道成形术,手术时间短,无皮肤切口,不影响面部外观,受到患者欢迎[1].但手术成功与否与激光术后泪道支撑物的选择有较大关系,且术后的正确处理和用药又能更好地巩同疗效.我院自2005-2006年应用红霉素眼膏联合复方妥布霉素眼膏作为激光泪道成形术后泪道支撑物取得了很好的效果,现报告如下.

    作者:黄玮英 刊期: 2008年第11期

实用医学杂志

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主管:广东省卫生厅

主办:广东省医学情报研究所