学术投稿

基于二代测序的混合检材精细化分型研究

饶旼;赵鹏;张驰;武波;孙启凡;庞敬博;季安全;王乐;聂胜洁

关键词:法医物证学, 二代测序, 混合检材, 短串联重复序列, 序列多态性
摘要:目的 基于二代测序平台进行混合检材精细化STR分型,并评估其法医学应用价值.方法 收集性侵案件中3例混合检材及其比对样本,采用M48磁珠提取纯化试剂盒提取样本DNA,使用ForenSeqTMDNA Signature Prep试剂盒制备文库,MiSeq FGx平台进行测序,ForenSeqTMUniversal Analysis v1.2.1软件进行数据分析,将STR序列多态分型与长度多态分型进行比较.结果 对3例混合检材STR分型进行拆分,在D3S1358、D13S317与D9S1122基因座发现存在同一长度多态等位基因包含两个个体的序列多态等位基因的情况.结论 二代测序技术可对混合检材进行精细鉴别,为混合分型数据拆分提供更多线索和依据.
中国法医学杂志相关文献
  • 宁波甬江水域夏冬季节溺死兔内脏硅藻16SrDNA的鉴定

    目的 采用PCR法检测夏季7月和冬季12月宁波甬江水域溺死家兔内脏组织中硅藻16SrDNA,评估其在夏季7月和冬季12月溺死鉴定中的应用价值.方法 于夏季7月和冬季12月分别选取30只大白兔,总计60只大白兔,随机分为溺死组(n=10)、死后入水组(n=10)、空气栓塞组(n=10).各组分别提取心、肝、肺、肾组织,应用PCR技术检测上述兔内脏硅藻16SrDNA.结果 与死后入水组比较,夏季7月兔溺死组心、肝、肺、肾组织中硅藻16SrDNA检出率明显增高(P<0.05);而冬季12月溺死组仅心、肺组织中检见硅藻16SrDNA,与死后入水组比较无明显差异(P>0.05);夏季7月溺死兔组心、肝、肺、肾组织中硅藻16SrDNA检出率明显高于冬季季12月溺死兔组(P<0.05);夏季7月和冬季12月空气栓塞组心、肝、肺、肾组织中硅藻16SrDNA均未检出.结论 宁波甬江水域夏季溺死兔中硅藻16SrDNA检出率高,PCR技术可用于溺死诊断;而冬季硅藻16SrDNA检出率低,运用该技术诊断溺死应慎重.

    作者:傅润熹;应捷;邢景军;蒋雯雯;林荣;余荣军;庞宏兵;韦登明 刊期: 2018年第01期

  • UPLC-MS/MS测定唾液中的3种毒品成分

    目的 建立了超高效液相色谱-串联质谱法同时检测唾液中的甲基苯丙胺、氯胺酮和吗啡成分.方法 唾液样品经沉淀蛋白后,通过ACQUITY UPLC BEH Phenyl(100mm×2.1mm,1.7μm)色谱柱分离,以0.3%甲酸水和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源正离子(ESI+)多反应监测(MRM)模式进行质谱分析.结果 甲基苯丙胺、氯胺酮和吗啡在4μg/L~20μg/L质量浓度范围内线性关系良好;在4μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L五组添加样本下,添加回收率范围在87%~128%;甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡的检出限(LOD)和定量限(LOQ)均分别为0.2μg/L和4μg/L.结论 本方法采用乙腈沉淀蛋白提取,快速、简单、回收率高,适用于同时检测唾液中甲基苯丙胺、氯胺酮和吗啡.

    作者:赵蒙;王朝虹;刘帅;张文竞;李虹 刊期: 2018年第01期

  • 饿死1例分析

    1 案例资料某年7月25日,营口市某刑警大队接到报案称:张某饿死于家中.民警到达派出所后了解到:死者张某33岁,精神不正常,无独自生活能力,常年被圈养于家中.尸表检验女性尸体,身长162cm.发育正常,极度消瘦.头面部及胸腹部尸绿形成.尸斑浅淡,分布于肩背部、臀部及四肢背侧,压之不褪色.尸僵全部缓解.头皮表面未见异常.双眼球睑结膜苍白,未见出血点,角膜轻度混浊,双瞳孔等大正圆,左、右直径均为0.7cm.鼻骨居中,未触及骨折.双侧乳房基本消失,胸廓肋骨印迹明显,腹部凹陷、舟状腹,胸腹部皮肤表面未见异常.外阴萎缩,阴毛稀疏.双上肢前臂上段内侧皮肤青紫变色,大小3.5cm×1.5cm.左前臂上段外侧皮肤青紫变色,大小5cm×2cm.左手掌拇指侧皮肤青紫变色,大小4cm×1.5cm.左手拇指皮肤青紫变色,大小2.5cm×1.5cm.右手掌拇指侧皮肤青紫变色,大小5cm×1.5cm.双手指端青紫色.骶尾部及肛门周围压疮形成,大小12cm×10cm,局部溃烂.左小腿上段前侧皮肤紫黑色,大小7cm×6cm.左小腿中段前外侧陈旧性青紫变色,大小16cm×7cm.右小腿膝关节下、小腿前侧多处皮肤青紫变色,大一处大小为3.5cm×3.5cm.右小腿上段外侧片状皮肤青紫变色,大小3.5cm×1.5cm.四肢未见骨折.切开左小腿中段前外侧可见在皮肤暗紫红变色区相应部位皮下脂肪片状出血.(图1)

    作者:曹志鹏;官大威;李如波;田美慧;薛嘉嘉;肖莹;贾宇晴;王天琦;朱宝利 刊期: 2018年第01期

  • 性交致小脑动静脉畸形破裂死亡1例

    1 简要案情尹某,女,41岁.某日下午6时,在与同村宋某性交过程中突发意识丧失死亡.尸表检验左、右季肋区各见11cm×5cm、7cm×5cm片状皮肤青紫,切开见皮下出血,深达肌层,体表未见其他损伤.尸体解剖脑组织轻度肿胀,双侧小脑扁桃体疝形成,右侧为重,左颞顶部、右额颞部片状蛛网膜下腔出血,脑底部蛛网膜池、脚间窝和双侧小脑扁桃体广泛性蛛网膜下腔出血,第四脑室积血.脑底动脉环未见异常.肝右叶膈面见9.5cm长冠状走行浅表挫裂创,腹腔积血约300mL.

    作者:刘育洛;黄雯;黄伟胜;罗桑旦增;周亦武 刊期: 2018年第01期

  • 基于二代测序的混合检材精细化分型研究

    目的 基于二代测序平台进行混合检材精细化STR分型,并评估其法医学应用价值.方法 收集性侵案件中3例混合检材及其比对样本,采用M48磁珠提取纯化试剂盒提取样本DNA,使用ForenSeqTMDNA Signature Prep试剂盒制备文库,MiSeq FGx平台进行测序,ForenSeqTMUniversal Analysis v1.2.1软件进行数据分析,将STR序列多态分型与长度多态分型进行比较.结果 对3例混合检材STR分型进行拆分,在D3S1358、D13S317与D9S1122基因座发现存在同一长度多态等位基因包含两个个体的序列多态等位基因的情况.结论 二代测序技术可对混合检材进行精细鉴别,为混合分型数据拆分提供更多线索和依据.

    作者:饶旼;赵鹏;张驰;武波;孙启凡;庞敬博;季安全;王乐;聂胜洁 刊期: 2018年第01期

  • 特发性肺动脉高压尸检1例

    1 案例资料1.1 简要案情李某,女,20岁,2016年12月以来因反复咳嗽、咳痰、胸闷不适等症状多次就诊,听诊双肺呼吸音粗、房颤、心脏收缩音强大,予以消炎、抗病毒药物静脉滴注及口服抗心律失常药物治疗,其咳嗽、咳痰症状在服药后短暂好转又复发、加重,心脏症状一直未见改善;2017年1月26日下午口服止咳药物(磷酸苯丙哌林片、枇杷止咳胶囊)后出现口唇紫绀,继而意识丧失、呼之不应,经抢救无效死亡.

    作者:项明;何一泓;韩志杰 刊期: 2018年第01期

  • 体液法医学鉴定miRNA检测方法的建立与应用

    目的 建立针对体液特异性miRNA的SYBR Green检测方法,用于体液鉴定,探究法医实践中体液鉴定新方法.方法 根据文献选出6条miRNA为靶点,以合成的标准miRNA作为模板进行体系构建,再对实际样本进行验证,检测6条miRNA在外周血、月经血、唾液、精液中的相对表达量. 结果 miRNA205在不同体液间表达差异不明显;miRNA451、miRNA144可明显的区分血与非血;miRNA214可鉴定月经血;miRNA888、miRNA891在精液中高表达. 结论 建立的针对miRNA的SYBR Green检测方法合理有效,可用于法医实践中体液鉴定.

    作者:李冉冉;马星;李亚琳;孙迎迎;季安全;唐晖;李彩霞;孙启凡 刊期: 2018年第01期

  • 现场生物斑迹遗留时间推断研究进展

    就现场提取的生物检材而言,我们除了需要准确获得DNA STR分型进行个体识别和亲子鉴定,还希望能够通过技术手段获知其遗留时间、空间定位等更多信息.本文以血迹为主要研究对象,就国内外采用光学、细胞生物学、分子生物学等方法推断生物斑迹遗留时间进行总结,并对法医微生物学这一法庭科学新领域在时空线索推断中的应用做以介绍,为现场生物斑迹遗留时间推断研究提供参考.

    作者:张瑾;高珊;畅晶晶;张颖;杨雪莹;刘开会 刊期: 2018年第01期

  • 抗人SMCY抗原胶体金试纸条的研制

    目的 建立一种快速检测SMCY抗原的方法.方法 采用胶体金免疫层析技术双抗体夹心检测法,在金标垫上包被胶体金标记的SMCY兔多抗,制成胶体金试纸条,用于检测12份猪、牛、狗、鸡和小鼠等动物血清以及50份人血清.结果 制作的胶体金试纸条检测人和常见动物血清具有明显的种属特异性,能够区分男女血清.结论 该方法可尝试用于鉴别男女血清,并具有一定种属特异性,其为法医学快速鉴别人类样本性别提供了研究方向.

    作者:安志远;周怀谷;王建霞;冯晓燕;赵东 刊期: 2018年第01期

  • 联合应用常染色体、X染色体亲权鉴定完全性葡萄胎1例

    1 案例资料1.1 简要案情2016年4月8日,甘肃某县马某在家门口将章某诱骗至其家中强奸.一月后,章某因阴道不规则流血前往妇幼保健院治疗,经医院确诊为完全性葡萄胎,行葡萄胎清宫术治愈后出院,清宫产物送实验室进行DNA亲缘分析检验.

    作者:陶晓岚;刘贤海;雷亮;聂笑联 刊期: 2018年第01期

  • 超高效液相色谱-质谱联用法测定生物检材中乌头碱

    目的 建立一种简单、快速测定生物检材(血液、尿液、胃内容物)乌头碱的超高效液相色谱-质谱联用法.方法 样品采用乙腈沉淀处理.色谱柱为UPLC C18(2.1mm×50mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速为0.4mL/min,柱温40℃.采用ESI离子源,MRM模式检测.结果 乌头碱在血液0.5~500ng/mL,尿液1~1000ng/mL浓度范围内线性良好(r>0.995).乌头碱方法回收率在91.3%~110.2%之间;提取回收率在72.8%~83.5%之间;日内、日间RSD均小于14%.结论 本方法简单、快速检测生物检材中乌头碱.

    作者:张园;陈波;张美玲;赵海芹;林琳;林丹;王贤亲 刊期: 2018年第01期

  • 人体内血醇浓度变化及其影响因素分析

    目的 探索饮酒后人体内血醇浓度(BAC)变化及其影响因素,建立 BAC代谢的数学模型.方法 采用顶空气相色谱氢火焰离子化检测器和内标曲线法测量酒后人体内的BAC,利用SPSS20.0和R软件对数据进行相关性分析并建立数学模型.结果 女性的平均BAC消除速率为9.54mg/100mL/h,男性的平均BAC消除速率为12.19mg/100mL/h,女性消除速率小于男性,并且BAC消除速率与性别中等相关,与体重强相关,与年龄无关.通过构建混合效应模型可以准确的预测BAC,该模型的平均绝对误差(MAE)为1.60mg/100mL,其次利用决策树分析数据,其MAE为9.99mg/100mL.结论 饮酒后人体内BAC消除速率与性别、体重有关,通过时间、饮酒量、性别、体重建立混合效应模型可以准确推断BAC.

    作者:金君;戴家佳;杜彦斌;张艳 刊期: 2018年第01期

  • circRNA应用于体液斑鉴定的技术可行性研究

    目的 利用circRNA检测技术,探索circRNA分子应用于体液斑迹鉴定的可行性.方法 制备精液、唾液、阴道分泌物三种体液斑迹样本,以Qiagen RNeasy Micro试剂盒提取总RNA,经RNase R消化后得到circRNA,进行逆转录PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测分析. 结果 制备的体液斑迹样本均可检测到circRNA分子,提示circRNA普遍存在于法医常见体液斑迹中,具备一定的应用价值. 结论 circRNA的检测可与现有DNA检测技术兼容,利用其组织特异性,可成为体液斑迹鉴定的新标记,具备重要的研究价值.

    作者:赵禾苗;林清峦;陈静;李万水;王冲 刊期: 2018年第01期

  • 左主干冠状动脉瘤继发血栓栓塞猝死1例

    1 案例资料1.1 简要案情及病历摘要张某,男,22岁.2016年6月29日,张某驾驶摩托车与另一辆摩托车迎面相撞受伤1天入院,入院情况:活动受限,咯血,并有呼吸困难及恶心呕吐,查体:体温:36.5℃,脉搏:115次/分,呼吸:35次/分,血压:85/56mmHg,急性病容,平车推入,强迫坐位,右眉弓、左下肢多处挫伤,瞳孔对光反射迟钝,心率:115次/分.6月30日检验报告:LDH 1467U/L(参考范围120~250),CK 4060U/L (参考范围50~310),CK-MB 719U/L(参考范围0~25),hsTnI >5000pg/mL(参考范围0~26.2),查心电图示急性下壁、侧壁、广泛前壁心肌梗塞.于2016年7月5日12时30分经抢救无效死亡.

    作者:邓燕飞;任亮;梁曼;王荣帅;周小伟;黄锶哲;张骏超;孟小楷;刘良 刊期: 2018年第01期

  • 分段富集法在2例接触DNA检验中的应用及分析

    1 案例资料1.1 简要案情案例1 2016年1月初,一乡镇金店被犯罪嫌疑人蒙面抢劫,抢走贵重金项链几十条后砸门逃脱.犯罪嫌疑人携带的一根链条锁被金店保安抢夺后遗留在现场.案例2 2016年4月初,司机盛某失踪.一周后发现盛某被犯罪嫌疑人用自带的钢丝绳勒颈后倒立于一荒废窨井下.

    作者:高林林;常莹 刊期: 2018年第01期

  • 理疗减肥仪漏电电击死亡2例

    1 案例资料1.1 案例1简要案情崔某,女,45岁.某年7月18日14时许,在某美容院用理疗减肥仪做减肥过程中发生抽搐,急送医院,经抢救无效死亡.尸表检验左乳头下5cm处有3个平行的类圆形皮肤紫红印迹,直径2.5cm.腹中部脐上4.5cm处在37cm×16cm范围内有4排共35个类圆形皮肤印迹,直径2.5cm.皮肤印迹边缘表皮剥脱、凹陷,质地略硬、颜色略深,中心部苍白.有的皮肤印迹不完整,呈半圆形、弧形(图1),切开见局部皮内较致密、苍白,皮下散在紫红变色.解剖检验心腔内充满暗红色流动血液.双肺组织实质内暗紫色,淤血、水肿明显.病理组织学检查胸、腹部皮肤印迹处表皮层不完整,边缘区残留的表皮细胞核致密、浓染,棘细胞和基底细胞极性紊乱,细胞核伸长、浓染,呈栅栏状或梳状排列;真皮层致密,胶原肿胀,嗜伊红染色偏蓝;皮下组织内小血管内皮细胞、管壁平滑肌细胞、毛囊、汗腺上皮细胞核伸长、浓染,符合电流斑的病理形态学改变(图2).心外膜下和心肌间质血管扩张、淤血.心肌纤维嗜伊红染色增强、断裂、波浪变.心肌间质小血管内皮细胞、管壁平滑肌纤维和肺内小血管、支气管壁平滑肌细胞核伸长、浓染,呈栅栏状排列.肺淤血、水肿.

    作者:尤家斌;李如波;朱宝利;王鹏飞;王昌亮;徐国辉;王晓龙;冯春梅;于浩;张国华 刊期: 2018年第01期

  • 30个中低突变Y-STR基因座复合扩增体系的建立

    目的 建立30个中低突变Y-STR基因座的复合扩增体系,并对其性能进行评估.方法 采用六色荧光标记技术,选择 30个中低突变率、中高多态性的Y-STR基因座自行设计引物,进行复合扩增和毛细管电泳检测.检测该体系的准确性、特异性、灵敏度和耐受性,并观察其在混合检材的分型情况.结果 采用本体系,分型结果准确稳定、特异性好、耐受性强,灵敏度达0.0625ng,混合检材在1:4的比例下,可获准确分型.结论 本研究建立的30个Y-STR基因座的复合扩增体系分型结果良好,对于中国人群的法医Y-STR数据库建设和群体遗传学研究具有重要意义.

    作者:吴微微;郝宏蕾;王怀锋;刘冰;梅兴林;周翔;苏艳佳;任文彦;傅燕芳;郑小婷;吕德坚 刊期: 2018年第01期

  • 基于特征轮廓线的三维颅骨配准方法

    目的 针对三维颅骨模型在初始姿态和分辨率上差异较大的情况,提出一种基于特征轮廓线的颅骨配准方法.方法 首先,提取三维颅骨模型的眼眶、鼻框、颞骨、上颌骨以及下颌骨等轮廓线;然后,根据轮廓线的长度以及轮廓间的短距离判断轮廓线的类型,并建立两个待配准颅骨在轮廓线上的对应关系,从而实现颅骨的粗配准;后,通过添加权值的方式来改进迭代近点(iterative closest point, ICP)算法,并采用该改进的ICP算法实现颅骨的细配准,从而达到两个颅骨精确配准的目的.结果 通过将一个未知颅骨与颅骨数据库中的300个颅骨的配准实验表明,提出的基于特征轮廓线的配准算法可以实现三维颅骨模型的精确配准,并在细配准阶段取得了较高的配准精度和收敛速度.结论 基于特征轮廓线的配准算法是一种快速、高精度的三维颅骨模型配准方法.

    作者:赵夫群;耿国华 刊期: 2018年第01期

  • 从被移动尸体上提取检验嫌疑人DNA的方法探讨

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    作者:伊海;李呈核 刊期: 2018年第01期

  • 《永久性残损评定指南》下肢关节活动度评定原则

    本文对《永久性残损评定指南》有关下肢致残残损评定原则进行研究.介绍了GEPI下肢评定中活动度评定的理念,并对活动度检查和评定过程进行了说明.为完善我国的伤残评定体系提供借鉴.

    作者:杨天潼;于丽丽;项剑;向思阳;狄胜利;郭兆明;王旭 刊期: 2018年第01期

中国法医学杂志

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主管:中华人民共和国公安部

主办:中国法医学会 公安部物证鉴定中心