学术投稿

沉淀煮沸法不同提取条件对血清HBV-DNA扩增结果的影响

崔海丽;张全意

关键词:肝炎病毒, 乙型, DNA, 提取法
摘要:目的 探讨沉淀煮沸法不同提取条件对血清HBV-DNA扩增结果 的影响,筛选出适合临床实验室提取样本DNA的方法.方法 分别比较将沉淀煮沸不同时间、沉淀打散与否以及蒸气浴和沸水浴3种不同操作条件下提取的DNA对荧光扩增结果 的影响.结果 将沉淀分别煮沸5、10、15 min,其所提取的DNA的扩增结果 之间无显著性差异,P>0.05; 将沉淀打散后所提取的DNA,其扩增结果 明显高于沉淀未打散的扩增结果,P<0.01;蒸气浴10 min提取的DNA的扩增结果 明显低于沸水浴10 min提取的DNA,P<0.01.结论 在提取血清HBV-DNA时,在加入提取液2后应将沉淀打散,并且应将Eppendorf管的管底置于沸水中加热,煮沸时间在特殊情况下可以缩短,5 min即可.
国际检验医学杂志相关文献
  • 微量元素锌与轮状病毒感染性腹泻相关性探讨

    目的 探讨微量元素锌与轮状病毒(RV)感染性腹泻的相关性.方法 用原子吸分光光度法测定2 867例2岁以下轮状病毒感染婴幼儿和健康对照组婴幼儿全血中锌的含量.结果 轮状病毒感染组血锌含量(53.10±15.01)μmol/L,健康对照组血锌含量(64.58±15.72)μmol/L,轮状病毒感染明显低于未感染者,两组间差异有统计学意义(P<0.01).结论 轮状病毒感染时,幼儿血锌存在一定的失衡,是导致RV 感染全身扩散的诱发因素之一,因此需要及时补充和调理微量元素锌,对疾病的治疗和恢复有重要的意义.

    作者:高庆双;刘树平;高春燕;王晓波;杜潘艳 刊期: 2012年第04期

  • 荧光定量PCR检测解脲脲原体不同生物群的临床应用

    目的 探讨解脲脲原体(Uu)的感染状态及生物分群.方法 采用荧光定量PCR 技术对皮肤科和泌尿外科患者157例尿道/宫颈分泌物进行Uu分群;分析Uu不同生物群与不同性别患者泌尿生殖道感染的临床症状和体征的相关性.结果 157例标本中96例Uu呈阳性,其中生物1群57例(阳性率59.38%),生物2群39例(阳性率40.62%),男性患者临床症状和体征的阳性率与Uu分群无关(P>0.05),而女性生物1群感染者的临床症状和体征阳性率高于生物2群(P<0.05).结论 我院患者Uu以生物1群为主,生物1群可能是女性Uu感染的主要病原体,Uu对男性致病性与分群无关.

    作者:丁进亚;杨斌;黄前川;徐娟;徐鸣皋 刊期: 2012年第04期

  • 建立临床POCT血糖仪质量管理模式的实践与探讨

    目的 通过建立POCT血糖仪质量管理模式,保证临床POCT血糖检测结果 的准确性.方法 对全院各临床科室便携式(POCT)血糖仪进行统一购置和状态监控,以参加室间质评替代与生化仪的比对试验对血糖仪进行性能评价、对性能不合格的仪器实施改进措施并验证、定期综合评价仪器.结果 全院各临床科室POCT血糖仪PT评分合格率为100%.结论 实践证明,该模式提供了对仪器状态和性能监控的完整方案,对于保证临床POCT血糖检测结果 的可靠性、正确指导临床实施安全合理的诊疗措施起到积极作用.

    作者:贾建;陈艳清;肖翔;张伟龙;潘理想;张达秀;陈业洋 刊期: 2012年第04期

  • 肝硬化患者血清细胞间黏附分子-1和肿瘤坏死因子-α检测的临床意义

    目的 探讨细胞间黏附分子-1 (sICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在肝硬化发病中过程中的作用.方法 对于75例肝硬化患者,采用ELISA法测定其血清sICAM-1和TNF-α水平.结果 肝硬化患者血清sICAM-1和TNF-α水平分别为(943.4±99.8)ng/mL和(53.4±12.8)ng/L,均明显高于对照组[分别为(224.1±32.7)ng/mL和(6.7±2.3)ng/L](P<0.01),都随着肝功能分级增加而升高.血清sICAM-1水平与TNF-α呈显著正相关(r=0.893 2,P<0.01),与ALB呈显著负相关(r=-0.910 8,P<0.01),与ALT呈显著正相关(r=0.856 6,P<0.01).结论 sICAM-1和TNF-α在肝硬化的发生、发展过程中发挥重要作用,其升高程度与肝硬化严重程度密切相关.

    作者:武寿荣 刊期: 2012年第04期

  • HBV标志物检验结果互认研究

    目的 探讨不同医院之间HBV标志物检测结果 的可比性,为广州地区实现医院之间检验结果 互认的可行性提供实验依据.方法 收集30例不同浓度的新鲜血清用同一厂家ELISA试剂在5家医院进行HBV标志物的检测,以了解不同医院之间检测结果 的可比性;同时采用统一分装的7个浓度的标准液在5家医院用酶标仪进行检测,以评价不同医院间酶标仪测定结果 的差异;此外还召集原5家医院的原检测人员到同一医院对原30例标本进行HBsAg和抗-HBs的检测,以了解同一条件下不同操作者之间检测结果 的差异.结果 5家医院HBV标志物检测结果 的总符合率均未能达到100%.其中HBsAg(87.0%)和HBeAg(93.3%)的总符合率较高,而抗-HBs(53.3%)、抗-HBe(60.0%) 和抗-HBc (80.0%)的总符合率较低;统一分装的标准液在5家医院用酶标仪进行检测结果 差异也较大;同一浓度在不同医院间测定结果 具有显著性差异,P<0.05.但在同一条件下不同操作者之间检测结果 的总符合率则明显提高,P<0.05.结论 检测仪器、试剂和操作者的水平均可影响乙肝两对半的定性检测结果,不同医院之间乙肝两对半定性结果 实现互认尚待进一步研究.

    作者:张婷;廖伟娇;刘云峰;杨小华;陈卫文;钟硕贤 刊期: 2012年第04期

  • 类风湿因子对ELISA检测乙型肝炎表面抗原的影响

    目的 研究类风湿因子(RF)对酶联免疫法(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的影响,为临床检测中出现假阳性结果 的分析提供依据.方法 RF 采用速率散射免疫比浊法,HBsAg先后采用ELISA法和微粒子酶免疫分析法(MEIA).结果 RF 阳性血清经ELISA法检测HBsAg 阳性率为43.3%.通过ELISA法检测出HBsAg 阳性的血清经MEIA检测HBsAg 阳性率为0;RF浓度与ELISA法测定 HBsAg 的OD 值间无显著相关性(0.1500 IU/mL)干扰ELISA法检测HBsAg,产生较明显假阳性,但RF 浓度与是否产生假阳性并无显著相关性.

    作者:穆海霞 刊期: 2012年第04期

  • 送检时间对血清HCV-RNA定量检测结果的影响

    目的 探讨不同送检时间对血清HCV-RNA荧光定量检测结果 的影响.方法 收集HCV强阳性标本12例和弱阳性血清16例,分别在室温下0、6、12、18和24 h后进行PCR定量检测HCV-RNA含量,将0 h作为对照组.每份标本重复检测2次.数据结果 利用SPSS13.0软件进行统计分析.结果 强阳性组和弱阳性组HCV-RNA的拷贝数在室温放置6、12、18和24 h的结果 与对照组比较差异均无统计学意义(F=0.898,P=0.466;F=0.359,t=0.837).结论 送检时间在24 h内对HCV-RNA的荧光定量PCR检测结果 无显著的影响,各实验室间的差异应考虑实验者的操作熟练度.

    作者:梁耀荣;吴小燕 刊期: 2012年第04期

  • 聚乙二醇4000处理脂血后对生化结果的影响

    目的 探讨聚乙二醇4000(polyethylene glycol 4000,PEG-4000)处理脂血后对30项生化指标测定的影响.方法 选取20例澄清血清标本于处理前后各测30项生化指标,并用t检验进行统计学处理.结果 处理前后有19项生化指标差异无统计学意义,是K+、Na+、Cl+、Ca2+、IP、TCO2、BUN、Cr、UA、GLU、ALB、GGT、ALP、T-BIL、TBA、CK、CHE、MYO、AFU.有11项生化指标差异有统计学意义,是PA、TP、GLO、ALT、AST、LDH、D-BIL、AMY、CK-MB、α-HBDH、TNI.结论 PEG-4000适合用于去除脂血对K+、Na+、Cl+、Ca2+、IP、TCO2、BUN、Cr、UA、GLU、ALB、GGT、ALP、T-BIL、TBA、CK、CHE、MYO、AFU测定的干扰,不适合用于去除脂血对PA、TP、GLO、ALT、AST、LDH、D-BIL、AMY、CK-MB、α-HBDH、TNI测定的干扰.

    作者:刘万彬;隆维东 刊期: 2012年第04期

  • 1860例血培养结果及药敏分析

    目的 分析血培养结果 和细菌药敏情况,为合理使用抗生素控制菌血症提供参考依据.方法 使用BacT/ALERT 3D 60全自动血培养仪对2009年3月~2011年5月我院1 860例全血进行培养并将培养结果 和细菌药敏情况进行统计和分析.结果 血培养阳性率为10.4%,其中革兰阴性杆菌占45%,革兰阳性菌占46%,真菌占9%.革兰阳性球菌对青霉素、红霉素敏感性低,对万古霉素敏感性高达90%以上;革兰阴性杆菌对阿米卡星和碳青霉烯类以及含酶抑制剂抗生素敏感率较高.结论 革兰阳性菌和革兰阴性杆菌感染率无明显差异,真菌感染占一定比例,应注意合理使用抗生素,早期控制菌血症,减少多重耐药菌株的出现.

    作者:张红霞;杨芒庄 刊期: 2012年第04期

  • 新装生化仪性能验证与对比分析

    目的 对新装自动生化仪主要性能进行验证及与原有生化仪进行对比分析.方法 按美国临床实验室标准化委员会(NCCLs)公布的文件标准进行不精密度测试、准确度测试、线性评价、携带污染率检测和对比分析等.结果 新装的东芝TBA120FR全自动生化仪精密度良好.批内精密度CV在0.4%~2.2%,日间CV为0.7%~3.9%,均小于美国CLIA′88可接受范围的标准;准确度高,与控制血清靶值相对偏差均小于5.0,线性范围与试剂厂商给出的数据基本一致;高、低值标本间携带污染率小于0.03%;与雅培生化仪相关系数均大于0.981,P<0.01,相关性良好,相关有统计学意义.结论 新安装的东芝TBA120FR全自动生化仪各方面性能符合厂商给出的测试数据,性能稳定、准确高、精密度可靠、携带污染率低、与雅培生化仪相关性良好且测试速度快,适合本院门诊实验室的应用.

    作者:刘富新;郝爱军;苏大林 刊期: 2012年第04期

  • DPP(R)梅毒筛查和确证检测试剂(胶体金法)的临床应用评价

    目的 了解DPP(R)梅毒筛查和确证检测试剂(胶体金法)与RPR和TPPA的差异.方法 用DPP(R)梅毒筛查和确证检测试剂分别检测高危人群245例全血、血浆、100例手指末梢血,同时245例高危人群的血清用RPR和TPPA方法检测.结果 DPP(R)梅毒筛查和确证检测试剂检测全血、血浆和指血中的梅毒特异性抗体与TPPA比较,无显著性差异(χ2值0.25、1.5、0.0,P>0.05);全血、血浆和指血的非梅毒特异性抗体与RPR比较,无显著性差异(χ2值0.125、0.083、1.125,P>0.05).DPP(R)梅毒筛查和确证检测试剂的敏感性为94.3%~100%,特异性为78.6%~98.9%,准确性为92%~99%.结论 DPP(R)梅毒筛查和确证检测试剂操作简单、快速,结果 准确,可作为临床筛查和确诊梅毒的主要检测方法,值得推广应用.

    作者:黎小东;曹文苓;梁艳华;林路洋;毕超;宋卫忠;张莉;吴德标;张锡宝 刊期: 2012年第04期

  • GFR评估方程在不同人群中应用的一致性评价

    目的 采用pearson相关分析、Bland-Altman图及Bradley-Blackwood检验评价Cockcroft-Gault 方程(CG方程)和MDRD方程5估算肾小球滤过率(GFR)的相关性和一致性.方法 依据患者资料和临床诊断将纳入人群分为4组:健康人组、老年人组、单纯肥胖组和慢性肾脏病(CKD)组.碱性苦味酸法测定血清肌酐,CG方程和MDRD方程5计算GFR,在各组的估算结果 间进行简单相关分析和Bland-Altman分析,绘制一致性限度(limits of agreement)作为评价一致性的指标.同时,采用相同方法评价当血清肌酐水平发生较大变化时,两方程估算值变化的一致性.结果 两方程在不同人群的GFR估算值具有线性相关关系;Bland-Altman分析表明,不同人群中,两方程估算结果 差值具有临床意义,其估算GFR的一致性较差.并且,在病情发生变化时,运用不同方程估算GFR变化量间的差异不能被临床接受,一致性差.结论 CG方程和MDRD方程5估算GFR的一致性较差,估算结果 不具有等价性、可替代性,但估算值间具有相关性.

    作者:曾宪飞;马勇志;谈昀;李军民;王小刚 刊期: 2012年第04期

  • 血清高尔基体蛋白73在肝癌高风险人群中的诊断价值

    目的 定量检测肝癌、肝硬化患者及健康者血清中高尔基体蛋白73(GP73)和甲胎蛋白(AFP)含量,探讨GP73在肝癌高风险人群的早期诊断价值.方法 采用酶联免疫法(ELISA)定量检测血清GP73,采用Roche电化学发光法定量检测AFP,并对实验数据进行统计学比较(χ2检验)和ROC分析.结果 (1)在127例肝癌血清标本中,GP73的阳性率为77.2%,AFP的阳性率47.0%,经t检验,两者差异有统计学意义(χ2=24.18,P<0.01).(2)在231例非肝癌患者中,GP73的诊断特异性为95.2%(220/231),AFP的诊断特异性为83.9%(194/231);(3)ROC曲线分析显示,GP73和AFP的曲线下面积分别为0.89和0.73.结论 GP73用于肝癌患者临床检测时,显著提高了诊断肝癌的灵敏度和特异性,效果明显优于AFP.

    作者:杜利军;黎卓华;杨镍;吴丽川;钟结仪;郑凯 刊期: 2012年第04期

  • 某地区推广成分用血10年情况回顾与发展分析

    目的 分析四会市地区临床10年用血情况,各种成分用血的使用量和增长率,以及临床主要用血的应用特征.探讨临床用血合理性和未来发展的需求趋势,回顾临床成分用血的使用量,能够更加的准确地反映临床用血的实际情况.科学合理的预测、制定年度工作计划提供科学依据,同时发现用血需求大幅波动时应积极调查原因,及时纠正.方法 对2001~2010年间本地区用血情况进行数据分析.结果 临床成分用血不断增加,达到国际先进水平,合理用血不断提升,输血不良反应率逐年下降.结论 及时分析、掌握本地区成分用血情况,严格执行安全用血管理制度,加大宣传力度,对指导临床合理安全的成分用血和输血技术发展具有重要意义.

    作者:罗俭权;龙振洪;潘彩英;陶珊花;陈国新 刊期: 2012年第04期

  • MODULAR ANALYTICS E170全自动免疫分析仪精密度验证情况分析

    目的 验证MODULAR ANALYTICS E170全自动免疫分析仪的精密度情况.方法 取生产制造商提供的乙肝两对半精密度浓度附近的混合患者血清,按照EP15-A2的要求,两个浓度的血清分别在MODULAR ANALYTICS E170全自动免疫分析仪上测定5天,每天重复测定三次.结果 两个浓度的血清乙肝两对半测定值的重复不精密度(Sr)和中间不精密度 (S1)均小于制造商声明的重复不精密度(σr)和中间不精密度 (σ1).结论 本实验室使用的MODULAR ANALYTICS E170全自动免疫分析仪和罗氏公司提供的配套试剂精密度好,实验结果 稳定可靠;本实验室接受生产制造商提供的乙肝两对半的精密度报告情况.

    作者:马红霞;杨蔺 刊期: 2012年第04期

  • 高危人乳头瘤病毒检测在实时多重荧光核酸扩增技术中的意义

    目的 探讨实时多重荧光聚合酶链反应(PCR)检测宫颈脱落细胞内高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的临床意义,建立快速、准确、适于推广的检测方法.方法 采用实时多重荧光PCR技术检测1 560例宫颈脱落细胞高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)感染状况.结果 1 560例患者高危型HPV阳性率为21%(327/1 560).其中宫颈炎、湿疣、LSIL 、HSIL 、鳞状细胞癌患者的高危型HPV阳性率分别为10.3%、28.4%、21.6%、35.2%和88.9%.结论 实时多重荧光PCR技术检测宫颈脱落细胞内高危型HPV感染,具有快速、简便、灵敏、不易污染等优点,适用于大规模筛查和高危型HPV持续感染监测.

    作者:杜娟;李晓强;刘跃 刊期: 2012年第04期

  • 永州地区2006~2010年住院患者传染性标志物检测结果分析

    目的 了解本地区手术前、产前和输血前患者传染性标志物感染情况及发展趋势.方法 对来我院住院的手术前、产前和输血前的患者进行血液传染性标志物HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的检测.结果 5年合计30 645例患者血液传染性标志物HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的阳性率分别为:11.35%、1.00%、0.22%、1.20%.结论 手术前、产前和输血前患者的血液传染性标志物检测,对规范医疗行为、预防医院感染、预防血液传播性疾病、控制母婴传播、降低手术风险、减少因输血后感染引起的医疗纠纷均具有重要意义.

    作者:姜志刚;鲁君艳;周维新 刊期: 2012年第04期

  • 不同方法提取血清总RNA的性能评价

    目的 评价3种方法提取血清总RNA的性能.方法 分别用Trizol法、磁珠总RNA提取法(磁珠法)、柱式总RNA提取法(柱式法)提取血清总RNA.通过测定样品OD260/OD280值评价提取的总RNA纯度、产量;通过设计引物及TaqMan探针扩增总RNA的管家基因(GAPDH),以观察各方法提取的总RNA用于RT-PCR的效果.结果 3种方法提取总RNA纯度分别为Trizol法(1.83±0.19)、磁珠法(1.94±0.11)、柱式法(1.92±0.12);扩增管家基因GAPDH,其Ct值分别为Trizol法(19.37±3.51)、磁珠法(18.33±1.11)、柱式法(18.85±1.20).结论 磁珠法、柱式法明显优于Trizol法,磁珠法与柱式法结果 差异无统计学意义(P>0.05).

    作者:邱方;陈子祥;杨清玉;刘晨;董亮;李星 刊期: 2012年第04期

  • 自身抗体在原发性胆汁性肝硬化中的应用价值

    目的 研究抗核抗体、抗线粒体抗体、抗线粒体抗体亚型2(AMA-2)、抗线粒体抗体亚型4(AMA-4)、抗线粒体抗体亚型9(AMA-9)在原发性胆汁性肝硬化中的应用价值.方法 统计送该中心的诊断为原发性胆汁性肝硬化的病例32例检测自身抗体结果.抗核抗体、抗线粒体抗体采用德国欧蒙试剂,用间接免疫荧光法进行检测,AMA-2、AMA-4、AMA-9采用德国欧蒙试剂用免疫印迹法进行检测.以35例健康者作为对照组.结果 32例原发性胆汁性肝硬化患者的抗核抗体、抗线粒体抗体、AMA-2、AMA-4、AMA-9的阳性率明显高于对照组.结论 抗核抗体、抗线粒体抗体、AMA-2在诊断原发性胆汁性肝硬化疾病中具有重要的价值.

    作者:张玲;李玲;李云珍;吴丽华;肖晗 刊期: 2012年第04期

  • 232例体检者尿酮体阳性结果分析

    目的 探讨尿酮体在体检人群不同年龄段、不同性别的分布及其与血糖的相关性.方法 对232例尿酮体为阳性的体检者按年龄及性别分组进行分析,同时与其同期检测的血糖结果 进行对比分析.结果 尿酮体阳性者以1+和2+为主;主要出现在20~50岁年龄段中;大多数尿酮体阳性者其血糖不高(≤6.1).结论 在体检人群中尿酮体阳性与血糖高低不存在相关性,尿酮体阳性并不能准确反映患者的血糖水平;尿酮体阳性主要集中在20~50岁年龄组.

    作者:王会敏;何柯新 刊期: 2012年第04期

国际检验医学杂志

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主管:重庆市卫生局

主办:重庆市卫生信息中心