学术投稿

阴沟肠杆菌染色质ampD基因定点突变致AmpCβ-内酰胺酶由非持续高产型转变为持续高产型

涂婉;赵虎

关键词:β内酰胺酶类, 肠杆菌, 阴沟, 基因, 突变
摘要:目的 了解ampD基因特异突变对阴沟肠杆菌AmpCβ-内酰胺酶由非持续高产型转变为持续高产型的影响因素.方法 筛选染色质介导的持续高产型AmpCβ-内酰胺酶的阴沟肠杆菌,扩增其ampD基因并测序,确定其有义突变位点.采用定点突变的方法对野生型阴沟肠杆菌进行上述特异位点的突变,用头孢西丁三维试验测定突变前后菌株产酶类型的改变.结果 121株阴沟肠杆菌中15株为染色质介导的持续高产型,共筛选出8个有义突变化点.形成7株定点突变菌株.Ecl MA(274位插入A)、Ecl MC(327位缺失C)和Ecl MF(27位插入G)由非持续高产型转变为持续高产型,而Ecl MB(371化插入T)、Ecl MD(515位缺失c)、Ecl ME(324C→A)、Ecl MG(两点同时的突变,238C→A,302T→A)的产酶类型未发生变化.结论 能够引起产酶类型发生改变的ampD基因特异突变均为可造成大片段氨基酸改变的框移突变,并且该改变至少从124位之前的氨基酸开始.但并不排除部分持续高产型AmpCβ-内酰胺酶的产生存在其他调控机制.
国际检验医学杂志相关文献
  • 流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用

    目的 探讨胸水、腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群的榆测方法及临床价值.方法 采用流式细胞术检测良、恶性疾病患者的50例胸水、46例腹水、47例肺泡灌洗液(BALF)中T淋巴细胞亚群的水平并分组进行比较.结果 1)胸水:结核性胸膜炎组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(27.36±41)%、Th细胞占T淋巴细胞的(67.98±7.41)%、Th/Ts比值为2.60±0.64,肺部恶性肿瘤组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(67.97±4.20)%、Th细胞占T淋巴细胞的(37.61±4.80)%、Th/Ts比值为0.47±0.10,与结核性胸膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著下降(P<0.01)而Ts显著升高(P<0.01);2)肺泡灌洗液:肺良性疾病组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(44.54±9.56)%、Th细胞占T淋巴细胞的(49.28±12.88)%、Th/Ts比值为1.13±0.29,肺部恶性肿瘤组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(65.11±7.77)%、Th细胞占T淋巴细胞的(34.57±6.65)%、Th/Ts比值为0.54±0.19,与良性病变组比较,恶性组Th下降(P<0.05),Th/Ts比值显著下降(P<0.01),而Ts显著升高(P<0.01).3)腹水:结核性腹膜炎组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(33.11±3.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(66.69±3.78)%、Th/Ts比值为2.03±0.28,恶性组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(56.64±9.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(35.86±3.30)%、Th/Ts比值为0.65±0.10,与结核性腹膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著下降(P<0.01),而Ts显著升高(P<0.01).结论 胸腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群检测可用于分析性质并有助于评估患者局部免疫功能状态.

    作者:莫扬;许小东 刊期: 2010年第01期

  • 乳腺癌患者外周血中趋化因子及其受体的研究

    目的 研究乳腺癌患者外周血中趋化因子及其受体表达变化在乳腺癌发病机制中的作用.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测30例乳腺癌患者及健康者血清中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、活化后可调节的、正常T细胞表达和分泌物因子(RANTES),白介素8(IL-8)及间质细胞衍生因子1(SDF-1)等水平变化.同时用流式细胞仪分析外周血 CD3~+T淋巴细胞表面趋化因子受体CCR2、CCR5、CXCR1、CXCR4的表达.结果 与健康者相比,乳腺癌患者血清中SDF-1及RANTES水平显著升高(均P<0.01),外周血CD3~+T淋巴细胞表面趋化因子受体表达水平无显著性差异.结论 乳腺癌患者血清SDF-1及RANTES水平升高可能在乳腺癌的发病及进展过程中发挥作用.

    作者:郭满盈;陈扬;王栋;罗媛烨 刊期: 2010年第01期

  • 血浆BNP测定对老年人心衰诊断价值及预后评估

    目的 测定心衰患者的血浆BNP水平,探讨血浆BNP对老年人心衰的诊断价值及心功能的评估.方法 选择本院住院心力衰竭的老年患者77例,健康对照老年组46例,分别测定血浆BNP浓度,比较不同患者的血浆BNP水平.结果 心衰组血浆BNP水平[(662.31±326.18)ng/L]显著高于对照组[(51.26±19.16)ng/L](P<0.01);且随着心衰程度的加重,心力衰竭患者的血浆BNP水平逐渐增高.结论 血浆BNP测定对心力衰竭的诊断和心功能的分级及预后判断都有重要的临床价值.

    作者:王克俊;荆蕊平;任更朴;翟春玺;苏子德 刊期: 2010年第01期

  • 葡萄糖-6-磷酸异构酶免疫复合物检测方法的建立及其在类风湿关节炎诊断中的应用

    目的 建立葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)免疫复合物测定方法,初步探讨其与类风湿关节炎(RA)发病机制的关系及其对RA辅助诊断、病情监测的作用.方法 建立Clq抗体捕获ELISA方法,并对311例m清标本(RA患者176例、其他免疫疾病患者35例和健康体榆者100例)和44例关节液标本(RA患者33例、非RA关节疾病患者11例)中的G6PI/G6PI抗体/Clq免疫复合物水平进行检测.结果 以波长450 nm吸光度值(A_(450nm))表示复合物含量,176例RA患者血清中G6PI免疫复合物为0.918±0.507,显著高于其他免疫疾病对照组(0.746±0.399)和健康对照组(0.696±0.362),P<0.01;而两对照组间差异无统计学意义.RA活动组为1.045±0.529,显著高于非活动组(0.764±0.436),P<0.01.以健康对照组A_(450 nm)值建立正常参考区间,结果G6PI免疫复合物对RA诊断的敏感性和特异性分别为60.2%和67.4%,活动期RA的阳性率为74%,显著高于非活动期(43.7%).33例RA患者、11例其他关节疾病患者关节液中G6PI免疫复合物A_(450nm)分别为0.835±0.497和0.596±0.132,RA患者组显著高于其他关节病组,P<0.05.结论 RA患者血清和关节液G6PI免疫复合物含量增高,且增高程度与RA病情活动相关;G6PI免疫复合物可能在RA发病中起重要作用,且与疾病的活动性密切相关.

    作者:宗明;范列英;杨蔺;杨达人;吕红根;叶勤 刊期: 2010年第01期

  • 胶体金法联合涂片镜检法在诊断外阴阴道假丝酵母菌病中的应用

    目的 探讨胶体金法联合涂片镜检法检测假丝酵母菌的临床诊断价值.方法 对280例外阴阴道假丝酵母菌病患者的白带标本同时进行真菌培养、胶体金法和涂片镜检法检测,以真菌培养作为诊断金标准对胶体金法和涂片镜检法的阳性检出率进行比较研究.结果 280例真菌培养阳性标本中,胶体金法和涂片镜榆阳性检出率分别为68.93%和56.07%,胶体金法显著高于涂片法(P<0.005),两种方法联合检测阳性率可达纠79.96%.结论 胶体会法的阳性检出率高于涂片镜检法,两法联合使用可明显提高检出率,能为临床提供便捷、可靠的诊断依据.

    作者:马建伟;袁应华;范列英;丁媛媛;赵华萍;李永明 刊期: 2010年第01期

  • 对CD-1800与Coulter Ac.T 5diff cp 2台血液分析仪的比对评价

    近年来,随着医学检验水平的提高,各地区、各医院检验结果之间的可比性也愈来愈受临床诊疗的重视,为了提高本院血液分析报告的准确性、一致性,特地对我科2台运用于门诊和住院的血液分析仪进行了比对分析评价.

    作者:刘晓燕 刊期: 2010年第01期

  • 肿瘤患者配合性血小板输注的临床研究

    目的 研究肿瘤患者配合性血小板输注的临床效果.方法 选择36例反复输注血小板的肿瘤患者,随机分为2组,包括交叉配合组及对照组.其中交叉配合组18例,应用单克隆抗体固相血小板抗体试验(MASPAT)进行血小板交叉配合试验,对照组18例采用血小板随机输注.并于输注前和输注后1 h和24 h进行血小板计数,并以血小板正计数增值(CCI)判断输注效果.结果 交叉配合组与对照组输注有效毕分别为83.3%、32.5%,交叉配合试验组其CCI显著高于随机输注组.结论 经MAsPAT进行肿瘤患者血小板配合输注,能显著提高血小板临床输注效果.

    作者:肖倩;辛荣传 刊期: 2010年第01期

  • IgE高亲和力受体FcεRIα亚基基因多态性

    IgE 与高亲和力受体FcεRI的结合存过敏性疾病的发病机制中发挥关键作用.随着基因多态性功能分析的深入,近几年,对于FcεRIα亚基的基因结构和变异认识有了相当大的进展,本文就FCERIA基因突变筛查和关联研究的新进展进行了归纳和分析.其中,有意义的足FCERlA基因多态性与血清总IgE水平之间的关联,FCERIA基因表达水平可能参与血清总IgE的系统调节.这或许可以为通过间接抑制FcεRI的表达以降低IgE水平米治疗过敏性疾病提供基本依据.

    作者:周娟;李莉 刊期: 2010年第01期

  • 骨髓增生性疾病JAK2~(V617F)突变检测方法的比较研究

    目的 研究较好的检测骨髓增生性疾病(MPD)患者中JAK2~(V617F)点突变的方法.方法 分别应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)、等位基因特异性聚合酶链式反应(AS-PCR)检测16例慢性粒细胞白血病(CML)、22例真性红细胞增多症(PV)、26例原发性血小板增多症(ET)、12例慢性特发性骨髓纤维化(IMF)外周血单个核细胞基因组DNAJAK2~(V617F)点突变,结果经测序鉴定.结果 测序证实经AS-PCR检测PV的阳性率为72.7%,比PCR-RFLP的阳性率(50%)检测提高22.7%;ET的阳性率为42.3%,比PCR-RFLP的阳性率(34.6%)检测提高7.7%.其中经PCR-RFLP检测的阳性样本全部包含在AS-PCR检测的阳性样本之中,二者结果均与测序结果相符.结论 ASPCR与PCR-RFLP相比检测敏感性高,且操作简便、快捷,更具有临床大规模检测的应用价值.

    作者:李伟达;李建勇;张苏江;宋君红;李秀梅;韩秀华;庄万传 刊期: 2010年第01期

  • 整合子耐药机制的动态检测

    目的 通过对呼吸道反复感染铜绿假单胞菌,久治不愈,药敏试验从全敏感、部分敏感到全耐药所留菌种染色质和质粒上的整合子Ⅰ的基因及其所携带的耐药基因盒的检测,并结合临床症状与病史分析细菌整合子的耐药特性及机制.方法 用VITEK Ⅱ鉴定细菌、KB法药敏试验、试剂盒抽提质粒和基因组DNA经PCR扩增整合酶Ⅰ,基因后琼脂糖凝胶电泳,LA-PCR扩增可变区耐药基因盒并电泳,可变区耐药基因测序,结合患者病史及临床分析耐药现象.结果 该菌株在耐药前后均检测出整合子Ⅰ,耐药前全敏感时未测得耐药基因盒,多重耐药时可变区所测得的耐药基因盒有耐β-内酰胺类、CatB8、aad4以及aac(6')-Ib等耐药基因盒,分别对头孢菌素类、氯霉素类、氨基糖苷类和氨基糖苷-喹诺酮类组合耐药,还测得了MexR-OprD表达系统的基因盒,提示排出泵增强和外膜通透性降低的耐药机制也可以由整合子以基因盒形式摄取并表达.未测得碳青霉烯类耐药基因盒.结论 该菌株在耐药前后均带有整合子Ⅰ,该整合子在铜绿假单胞菌耐药中起重要作用.

    作者:陈丹华;张如霖;丁星;李莉 刊期: 2010年第01期

  • 儿科重症监护病房临床标本中微生物的分布常态分析

    目的 了解和分析儿童重症临护病房患者的病原菌分布情况,为指导临床第一线合理用药提供科学依据.方法 对重症监护病房儿童患者的标本(包括气管分泌物、创伤部位分泌物、尿液和血液)进行微生物培养.结果 从重症监护病房儿童患者的标本中分离出微生物共计101株,其中革兰阴性菌76株(75.2%),革兰阳性菌25株(24.8%).在76株的革兰阴性菌中,分离率依次为:克雷伯氏菌属、艾希氏菌属、非发酵菌和肠杆菌属;而25株革兰阳性菌的分离率则依次为:葡萄球菌属、链球菌属、酵母样真菌和肠球菌属.结论 革兰阴性菌是重症监护病房儿童患者的重要致病微生物,应引起临床第一线高度重视.

    作者:欧阳彬 刊期: 2010年第01期

  • 葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原、抗体测定在类风湿关节炎诊断中的作用

    目的 探讨血清和关节液中葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)抗原和抗体含量变化与类风湿关节炎(RA)病情活动状态的关系.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定RA患者176例、其他免疫疾病患者35例、健康体榆者100例的血清标本及RA患者33例、其他免疫疾病患者11例的关节液标本中G6PI抗原和抗体水平.结果 G6PI抗原在诊断RA中的敏感度和特异度分别为75.0%和93.3%;176例RA患者血清G6PI含量为(4.37±8.65)μg/mL,显著高于疾病对照组(0.07±0.07)μg/mL(P<0.01)和健康对照组(0.34±1.30)μg/mL(P<0.01);在RA组中,活动期患者血清G6PI含量为(7.61±10.69)μg/mL,显著高于缓解组(0.47±0.47)μg/mL(P<0.01);关节液G6PI表达量也显著高于疾病对照组,分别为(1.39±0.58)μg/mL和(0.16±0.17)μg/mL(P<0.05).以波长450 nm吸光度值(A_(450 nm))表示抗体含,G6PI抗体的含量在RA组、疾病对照组以及健康对照组之间差异无统汁学意义(P>0.05),在RA活动组与非活动组之间差异无统计学意义(P>0.05);关节液中G6PI抗体含量RA患者与疾病对照组差异尤统计学意义(P>0.05).结论 G6PI抗原在RA患者中高表达,并且与疾病活动性有密切关系.因此G6PI抗原可以作为敏感度、特异性俱佳的RA辅助诊断指标,尤其对病情判断有重要作用.而G6PI抗体在RA的诊断中价值不大,与病情活动亦无关.

    作者:杨达人;范列英;宗明;杨蔺;吕红根;叶勤 刊期: 2010年第01期

  • 从化市幼儿园学龄前儿童乙型肝炎疫苗免疫效果评价

    乙型肝炎足一种严重威胁人类健康的传染性疾病,据不完全统计,约有25%的乙肝携带者可以发展为肝硬化或者肝癌~([1]).为了解从化市学龄前儿童乙肝病毒的感染现状,为今后乙肝的防治工作提供指导性依据,我们总结分析了我市从1995年至2005年间共19 883例学龄前儿童的HBV榆测资料,并将当年来我院体检的农村幼儿园学龄前儿童资料作为对照资料并进行比较.现将结果报道如下.

    作者:张栋武 刊期: 2010年第01期

  • 血脂研究的新进展

    高密度脂蛋白是血浆脂蛋白中体积小、密度高的脂蛋白,由肝脏及小肠黏膜细胞合成,是唯一将胆固醇从外周组织运回肝脏清除至体外而产生抗动脉粥样硬化作用的载脂蛋白.其代谢是一个复杂的生物过程,任何环节发生变化,都会引起脂质代谢紊乱.

    作者:岳连虎;王焱煜;刘丹 刊期: 2010年第01期

  • Fcγ-Der f2载体构建及融合蛋白表达

    目的 构建人IgG Fcγ1片段Fcγ与粉尘螨Ⅱ类抗原Der f2嵌合基因真核表达载体pDisplay-Fcγ-Der f2,并转染入HEK293T细胞系瞬时表达,获得Fcγ-Der f2融合蛋白.方法 以pMD19-T-Der f2载体为模板,设计引物并加入linker序列,经PCR扩增得到linker-Der f2 DNA片段.经限制性内切酶酶切后,先后将人Fcγ及linker-Der f2基因片段接入pDisplay真核表达载体.用Attractene转染试剂将其转染至HEK293T细胞使之表达融合蛋白.免疫荧光检测转染后72 h的HEK293T细胞并裂解细胞进行Western Blot检测.结果 pDisplay-Fcγ-Der f2质粒经双酶切鉴定及DNA测序鉴定证实序列完全正确,真核表达载体构建成功.免疫荧光鉴定转染细胞可见明显红色荧光.Western Blot检测证明融合蛋白相对分子质为40×10~3,与理论预期值相符合,并证明了Fcγ与Der f2双功能特性.结论 构建的融合蛋白Fcγ-Der f2符合目的要求.

    作者:蔺丽慧;崔玉宝;孔存权;周娟;王娟;彭霞;李莉 刊期: 2010年第01期

  • NGAL与慢性粒细胞性白血病

    中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是一个25×10~3的分泌蛋向,先在1993年被Kjeldsen L发现存在于人类中性粒细胞的特殊颗粒中.NGAL在小鼠身上的同源基因表达蛋白24p3也已经被确定,它可以诱导正常血细胞的凋亡,包括小鼠原始骨髓细胞、脾细胞、胸腺细胞、人类中性粒细胞以及外周血淋巴细胞.另外,很多以小鼠为实验模型的实验数据也证实其作用机制.本文主要介绍NGAL及其鼠同源基因与慢性粒细胞性白血病的关系.

    作者:陈林兴;张丽玲;黄华;陈慎仁 刊期: 2010年第01期

  • 云南省血细胞分析二级标准检测系统的结果比对

    血细胞分析是临床常用的检测项目之一,其检测结果的准确性对疾病的诊断及治疗有重要影响.根据国际血液学标准化委员会(international council for standardization in haema-tology,ICSH)颁布文件的要求,血细胞分析的榆测结果只有溯源至参考方法,才能保证结果的准确性和可比性~([1,2]).

    作者:陈玲;牛华;苏敏;董云华;曹研;唐敏;陈影倩;平竹仙 刊期: 2010年第01期

  • 抗线粒体抗体阳性患者的AMA-M2亚型检测及ANA核型分析

    目的 了解不同滴度抗线粒体抗体(AMA)阳性患者AMA M2亚型抗体(AMA-M2)浓度分布状况及存原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者中的阳性率及相件ANA核型.方法 采用间接免疫荧光法检测自身抗体,采用酶联免疫吸附试验检测502例AMA阳性标本中的AMA-M2,并对已明确诊断的71例PBC患者进行AMA-M2亚型及ANA核型分析.结果 在502例AMA阳性患者中AMA-M2阳性率为76.1%;71例PBC中95.8%AMA抗体效价大于1:160、90.1%AMA抗体效价大于1:320、73.2%AMA抗体效价大于1:640.95.8%AMA-M2阳性:67.6%M2>200 RU/ML、84.5%M2>100 RU/ML,并有56.3%存在ANA.结论 PBC中AMA、AMA-M2呈高滴度、高浓度集中,高效价AMA、AMA-M2及ANA的部分核型有助于PBC的诊断.

    作者:杨国香;李丽君;董小娟;胡朝军;张蜀澜 刊期: 2010年第01期

  • 荧光定量RT-PCR检测类风湿关节炎患者葡萄糖-6-磷酸异构酶mRNA表达水平的研究

    目的 通过比较分析葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PT)mRNA在类风湿关节炎(RA)、其他自身免疫性疾病及健康人群之间的表达差异,探讨其在RA中的致病机制.方法 建立实时定量RT-PCR方法,并利用该法检测128例RA患者(RA组)、32例其他自身免疫件疾病患者(疾病对照组)、100例健康体检者(健康对照组)G6PI基因的表达水平.结果 经GAPDH校正后G6PI基因表达水平在RA组为2.72±2.09,其中活动组和缓解组分别为3.12±2.40和2.13±1.34,疾病对照组为2.14±1.43,健康对照组为1.25±0.73.RA组显著高于健康对照组(P<0.01),RA活动组基因表达水平显著高于缓解组(P<0.01),也显著高于疾病对照组(P<0.01).结论 G6PI在RA患者中表达的显著增加表明G6PI可能参与了RA的发病过程,并与疾病的活动性相关,可作为RA的辅助件诊断指标及早期筛查指标.

    作者:宗明;范列英;杨蔺;杨达人;吕红根;叶勤 刊期: 2010年第01期

  • 1898例胎膜早破临产妇宫颈分泌物细菌培养及药敏分析

    目的 了解胎膜早破临产妇宫颈分泌物中病原菌的分布及药物敏感性情况.方法 标本经需氧培养分离后,再鉴定到种并进行相应的药敏试验.结果 1 898例胎膜早破临产妇宫颈分泌物标本分离出507例阳性标本,培养阳性率为26.7%.这507株病原菌中,革兰阳性菌占检出菌的66.2%,以葡萄球菌和白色念珠菌占多数.革兰阴性菌占检出菌的33.8%,以大肠埃希氏菌为主.常见的致病菌依次为大肠埃希氏菌(占22.3%)、真菌(占21.7%,以白色念珠菌为主,占检出真菌的90%)、表皮葡萄球菌(占19.9%)和金黄色葡萄球菌(占15.4%).大肠埃希氏菌对丁胺卡那、环丙沙星、氧氟沙星、第三代头孢类抗菌素的耐药率在13%以下,对第一、二代头孢类抗菌素、氨曲南的耐药率均在40%以上,而对青霉素类的耐药率在60%以上,对第四代头孢类抗菌素(头孢吡肟)的耐药率为零;葡萄球菌对万古霉素和第四代头孢类抗菌素(头孢吡肟)的耐药率也为零,对第一,二、三代头孢类抗菌素的耐药率在30%左右,对青霉素类、红霉素的耐药率均在60%以上,对环丙沙星的耐药率在10%以下、对氧氟沙星的耐药率在20%以下,对阿奇霉素的耐药率在50%以上.真菌感染率明显上升.结论 临床医生要重视胎膜早破临产妇宫颈分泌物的细菌培养结果,及时采取控制措施,预防减少母婴感染.

    作者:刘秀卿;张镇松 刊期: 2010年第01期

国际检验医学杂志

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主管:重庆市卫生局

主办:重庆市卫生信息中心