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丙型肝炎病毒E1蛋白的模拟表位研究

曹凤;史宣玲;杜勇;侯利华;季阳;王海涛

关键词:肝炎病毒, 丙型, E1蛋白, 模拟表位
摘要:目的研究HCV E1蛋白的B-细胞表位。方法将携带HCV E1基因的重组质粒pQE-30- HCVe118在E.coli M15中进行大量诱导、表达;对表达的E1蛋白进行分离、纯化;再以纯化的蛋白捕获HCV 感染者血清中能与HCV E1蛋白特异反应的IgG,以此IgG作为筛选分子,对随机十二肽库进行淘洗,经ELISA筛选噬菌体阳性克隆并测序。结果 HCV E1蛋白获得了高纯度的纯化,这种蛋白可特异地与部分丙型肝炎患者血清发生反应。在获得的10个模拟表位中, 6、2和2个递呈肽分别与HCV E1蛋白的320~336aa、251~263aa和225~248位aa具有大同源性。结论在E1蛋白中存在多个B-细胞表位,320-336位极可能为HCV E1蛋白的优势表位。
中华肝脏病杂志相关文献
  • 肝细胞基因转导新载体-日本血凝病毒-脂质体

    脂质体是基因转导的重要方法,其与日本血凝病毒(hemoagglutinating virus of Japan,HVJ)形成的融合脂质体(fusogenic liposomes,FLs)较传统脂质体在性能上有了很大提高,具有更高的稳定性、安全性和转导效率,制备、使用更加快捷方便。

    作者:代文杰;姜洪池 刊期: 2001年第04期

  • 丙型肝炎病毒核心蛋白激活肝癌细胞血管内皮生长因子的表达

    目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对肝瘤细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响。方法将HCV核心基因cDNA插入真核表达载体PBK-CMV的HindⅢ和BamHⅠ位点间,构建重组质粒PBK-HCVc。再将重组质粒PBK-HCVc和空载体分别导入肝癌细胞株HepG2中,G418筛选,RT-PCR、蛋白印迹鉴定HCV核心蛋白表达。免疫组织化学,蛋白印迹检测VEGF蛋白表达;原位杂交,RT-PCR检测VEGF mRNA。结果重组质粒PBK-HCVc在HepG2细胞中有稳定表达;表达HCV核心蛋白的细胞HepG2-C的VEGF在蛋白水平和mRNA水平较转染空载体的细胞HepG2-CMV明显升高。结论 HCV核心蛋白能激活VEGF表达,可能对肝细胞癌的生长具有促进作用。

    作者:刘重阳;刘为纹;杨建民;房殿春 刊期: 2001年第04期

  • 胸腺肽联合干扰素治疗慢性乙型肝炎54例4年随访

    1. 病例选择和治疗方法:我院1995年6月以来门诊和住院54例患者为联合治疗组,男38例,女16例,年龄19~43岁。病程6月~13年,平均(1.2±5.6)年。ALT波动于2~10倍正常值,总胆红素在正常值4倍以内(个别例外)。选择同时期用干扰素α-2b治疗的慢性乙型肝炎患者49例为对照组,两组临床资料统计学差异无显著意义。治疗方法:联合组胸腺肽α1 1.6mg/次,皮下注射,每日一次,连续5d,以后改每周2次,每次1.6mg,胸腺肽注射后4d加用干扰素α-2b(干扰能)3MU肌注,每日一次,连续20~60d不等,以后隔日一次。每例共用胸腺肽50~70支,干扰素100~150支,大多为100支。对照组仅单纯按上法注射干扰能5MU/次。

    作者:胡毅文;刘惠明;文彬 刊期: 2001年第04期

  • 严重肝病腹腔感染的致病菌变迁和耐药趋势研究

    为阐明自发性细菌性腹膜炎(SBP)致病菌分布与变迁、耐药趋势,对我院1975年1月至1999年12月间住院的3734例重型肝炎和肝硬化患者经腹水细菌培养阳性证实的SBP 136例进行回顾性研究。

    作者:叶英;余鑫之;徐元宏 刊期: 2001年第04期

  • 乙型肝炎病毒表面抗原双顺反子的真核表达载体构建

    利用双顺反子元件构建含HBsAg双体基因的真核表达载体,以增强DNA疫苗的免疫疗效。方法我们首先酶切pcDNA3.1-S获得目的基因HBsAg片段,将其克隆到pCI-neo载体得到pCI-S表达载体;另外通过PCR扩增获得目的基因IRES-S并定向克隆到pBluescript K+S载体,相应酶切后再次克隆到pCI-S得到两价HBsAg真核表达载体pCI-S-IRES-S,并进行酶切图谱分析和测序分析。结果 pCI-S-IRES-S经相应酶切电泳显示740bp和1350bp左右的目的基因片段,经测序鉴定,HBsAg与GeneBank HBsAg adw亚型相符,IRES-S亦无任何变异。结论乙型肝炎表面抗原双体的双顺反子的真核表达载体构建成功,为在真核细胞的高效表达和基因治疗作了必要的准备。

    作者:王波;张定凤;黄爱龙;姚云清;刘杞;任红 刊期: 2001年第04期

  • 重庆医科大学病毒性肝炎研究所正招收博士研究生和博士后

    作者: 刊期: 2001年第04期

  • 丙型肝炎病毒E1蛋白的模拟表位研究

    目的研究HCV E1蛋白的B-细胞表位。方法将携带HCV E1基因的重组质粒pQE-30- HCVe118在E.coli M15中进行大量诱导、表达;对表达的E1蛋白进行分离、纯化;再以纯化的蛋白捕获HCV 感染者血清中能与HCV E1蛋白特异反应的IgG,以此IgG作为筛选分子,对随机十二肽库进行淘洗,经ELISA筛选噬菌体阳性克隆并测序。结果 HCV E1蛋白获得了高纯度的纯化,这种蛋白可特异地与部分丙型肝炎患者血清发生反应。在获得的10个模拟表位中, 6、2和2个递呈肽分别与HCV E1蛋白的320~336aa、251~263aa和225~248位aa具有大同源性。结论在E1蛋白中存在多个B-细胞表位,320-336位极可能为HCV E1蛋白的优势表位。

    作者:曹凤;史宣玲;杜勇;侯利华;季阳;王海涛 刊期: 2001年第04期

  • 肝硬化门静脉高压患者食管动力学研究

    我们对肝硬化食管静脉曲张患者进行食管动力和酸反流研究,并探讨其机理。一、资料与方法经胃镜检查证实有食管静脉曲张的肝硬化患者为研究对象,按国内标准根据范围、形态和内径对食管静脉曲张进行分级。肝性脑病、活动性出血和凝血酶原活动度小于30%者除外。符合条件者40例,男31例,女9例,年龄为(43.3±4.6)岁,其中乙型肝炎后肝硬化34例,酒精性肝硬化6例。按Child-Pugh等级分类,A级11例,B级13例,C级16例。AB级两组患者食管静脉曲张程度显著差异(P<0.05),BC级两组无显著差异。健康对照组22例,平均年龄(43.3±4.6)岁,无胃肠道症状和累及食管的全身性疾病。

    作者:林向飞;朱启槐;韩清锡 刊期: 2001年第04期

  • 565例重型病毒性肝炎的临床特点分析

    为了对重型病毒性肝炎临床诊断标准重新进行探讨,特将我院1997年至1999年收治的565例重型病毒性肝炎患者的临床主要特点进行分析。

    作者:邹正升;陈菊梅;辛绍杰;邢汉前;沈宏辉;李建宇;刘艳萍;李保森 刊期: 2001年第04期

  • 从机体清除乙型肝炎病毒的规律探讨抗病毒治疗的新策略

    乙型肝炎患者自体每日可清除外周血中大量乙型肝炎病毒(HBV)根据近对HBV在人体内动力学研究, HBV的半衰期为26.4h, 病毒存活期为36.6h, 日更新率为48%, 所以控制人体病毒感染的关键在于清除HBV ccc DNA, 抑制病毒复制[1,2]。根据目前研究, 可能通过两种途径清除HBV cccDNA, 即非溶细胞性及溶细胞性, 而且以前者为主[3]。至于其具体途径目前尚不完全了解。但是肝脏及肝细胞在清除HBV ccc DNA过程中具有重要作用是无庸置疑的。

    作者:张定凤 刊期: 2001年第04期

  • 对氨基苯甲酸甘氨酸结合代谢率定量检测试验对白兔肝功能的研究

    目的评估急性肝坏死兔甘氨酸结合对氨基苯甲酸(PABA)转变成马尿酸的代谢能力。方法 30只雄性大耳白兔随机分组成实验组(20只)用D-氨基半乳糖致大耳白兔急性肝坏死,对照组(10只)注射生理盐水。采用高效液相色谱法测定血清中不同时间的对乙酰氨基马尿酸(PAAHA)、对氨基马尿酸(PAHA)和对乙酰氨基苯甲酸(PAABA)的含量。结果实验组与对照组比较,马尿酸的形成明显减少。在不同时间分析马尿酸的代谢率,显示与肝损伤的程度相关,而PABA的乙酰化程度与肝损伤程度无明显相关,在严重急性肝损伤时PAHA的浓度为零。结论甘氨酸结合PABA的代谢率的测定可作为肝功能定量试验和急性肝坏死的灵敏指标。

    作者:孙月庭;刘斌剑;万军;涂洪章 刊期: 2001年第04期

  • 一氧化氮和前列腺素在门静脉高压性胃病大鼠胃粘膜灌注中的作用

    目的探讨一氧化氮(NO)和前列腺素在门静脉高压性胃病(PHG)大鼠胃粘膜灌注中的作用。方法部分结扎大鼠门静脉主干2周后,采用中性红清除率法测定大鼠胃粘膜血流量(GMBF),同时观察门静脉压力(PVP)的变化。结果 PHG组大鼠GMBF和PVP显著高于假手术组(t=3.431、3.312,P<0.01)。低剂量的NO合成酶抑制剂L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)呈剂量依赖性降低PHG大鼠GMBF,而对假手术组GMBF无明显影响;高剂量的L-NAME(12mg/kg)能非常显著降低PHG和假手术组大鼠GMBF。前列腺素环氧合酶抑制剂消炎痛能明显降低PHG组大鼠GMBF,而对假手术组GMBF无明显影响;预先给消炎痛处理后在假手术组大鼠中,静脉注射低剂量L-NAME(4mg/kg)前后GMBF无明显变化,高剂量L-NAME(12mg/kg)降低大鼠的GMBF与未用消炎痛处理组比无明显变化;预先给消炎痛处理后在PHG组大鼠中,L-NAME剂量(4mg/kg、12mg/kg)依赖性降低大鼠的GMBF与未用消炎痛处理组比无明显改变。结论 NO、前列腺素在调节PHG大鼠的GMBF起重要作用,但两者无协同作用。

    作者:乐桥良;张捷;许其增;高河元 刊期: 2001年第04期

  • p53对肝癌P-糖蛋白的表达和耐药表型的影响

    目的证明野生型p53调节肝癌细胞P-糖蛋白(p-glycoprotein, P-gp)表达的设想。方法通过采用脂质体介导转染技术,将野生型p53 cDNA导入一种p53和Rb基因缺失的肝癌细胞株Hep3B。结果经G418筛选获得稳定整合了野生型p53的克隆(wt-p53)和空载体克隆(pNeo);经northern和western印迹鉴定,wt-p53细胞表达p53;p21waf1/cip1蛋白的升高证实wt-p53细胞的p53有转录活性,并致使P-gp表达降低。细胞毒性试验表明:与pNeo细胞相比,wt-p53细胞对阿霉素和丝裂霉素化疗敏感。流式细胞仪显示:wt-p53细胞的阿霉素荧光量为pNeo细胞的13倍。结论在肝癌细胞Hep3B中重建野生型p53的活性由于降低P-gp的表达而对化疗药敏感。

    作者:韩雨生;梁力建;黄洁夫;明文玉 刊期: 2001年第04期

  • 乙型肝炎病毒X蛋白对NFκB启动子和增强子反式激活作用

    应用杆状病毒穿梭质粒载体与HBV X表达质粒共转染HepG2细胞,研究HBV X蛋白对杆状病毒载体中的NFκB启动子和增强子反式激活作用,作为进一步杆状病毒载体应用研究的基础。

    作者:郭亚兵;杨继雄;杨洁;冯筱榕;梁炽森 刊期: 2001年第04期

  • 乙型肝炎病毒前C区变异的临床意义

    一、资料与方法1.病例来源:30例慢性HBV感染者系我院门诊及住院患者。男20例,女10例,其中无症状HBsAg携带者9例(AsC组);慢性乙型肝炎12例(CHB组);慢性重型肝炎9例(CHF组),平均年龄36.4岁(13~58岁)。21例行肝活检。肝炎分级分期按1995年北京传染病与寄生虫病学术会议修定标准。所选病例全部为HBsAg(+)抗-Hbe(+)、及抗-HBc(+)。

    作者:戴炜;郭亚兵;杨大国;舒丹;唐蔚;袁静;王召钦 刊期: 2001年第04期

  • 自身免疫性肝炎小鼠肝组织神经细胞粘附分子的表达

    目的观察实验性自身免疫性肝炎(EAH)肝组织中神经细胞粘附分子(NCAM)的表达,并探讨其表达强度与肝组织学分级的相关性。方法以同种系S-100肝抗原与弗氏完全佐剂充分乳化后于第1和第7天于C57BL/6小鼠腹腔注射诱导EAH模型。分别于首次免疫后第7、14和21天处死小鼠。以免疫组织化学和RT-PCR法研究NCAM表达。结果 EAH模型组小鼠肝内NCAM表达逐渐增强,淋巴细胞浸润和肝细胞破坏逐渐加重。强的松龙可改善肝组织学分级,并抑制NCAM的表达。NCAM的表达强度与肝组织学分级呈正相关(r=0.71, P<0.01)。结论 NCAM作为移行信号而便于淋巴细胞的肝内浸润,从而诱导肝细胞的损伤。

    作者:马雄;邱德凯;彭延申;陈晓宇 刊期: 2001年第04期

  • 缺血预处理对肝超微结构的保护作用

    我们通过对肝细胞重要超微结构改变进行统计学分析,旨在对PC在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用作进一步研究。

    作者:黄幸青;何劲松;姜立华;吴义方;吕新生 刊期: 2001年第04期

  • 低蛋白腹水的肝硬化患者出现自发性细菌性腹膜炎的危险因素调查

    我们采用多元回归分析对低蛋白腹水的肝硬化患者发生SBP的高危因素进行了调查。1. 资料和方法:(1)病例为本院1998年4月至2000年3月门诊及住院的肝硬化伴低蛋白腹水的患者98例,男69例,女29例,平均年龄为(56±6)岁

    作者:赵超;肖文;陈少波;张柱林;何维雄;冯干炘;李怀仁;周建平 刊期: 2001年第04期

  • 人工肝联合肝移植治疗重型肝炎的初步研究

    目的观察并评价混合人工肝支持系统联合肝移植在救治重型病毒性肝炎(重型肝炎)中的作用与疗效。方法采用自行研制的体外混合人工肝支持系统对8例中晚期重型肝炎患者进行人工肝过渡支持治疗,3~14d后行原位肝移植术。结果 8例重型肝炎患者经混合人工肝支持,肝衰竭得到有效控制,均成功等到肝移植。肝移植后4例存活,存活率为50%,另4例因肺部感染、肝肾综合征等死亡。结论人工肝支持系统与肝移植联合可作为中晚期重型肝炎肝衰竭患者治疗的有效手段。

    作者:王英杰;董家鸿;王宇明;王曙光;别平;刘俊;牛润章;何念海;刘国栋;李嘉佳;文红伟;罗宾伟 刊期: 2001年第04期

  • 反义胰岛素样生长因子-Ⅱ对人肝癌细胞生物学特性的影响

    我们将人工合成的反义胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)转导入体外培养的HepG2人肝癌细胞内,观察细胞生物学特性的改变,旨在为反义IGF-Ⅱ应用于肝癌的基因治疗提供实验依据。

    作者:宁晓燕;杨冬华;杜江;徐重;梁巧明;杨波 刊期: 2001年第04期

中华肝脏病杂志

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