李梅；倪润洲；黄介飞；肖明兵；张弘；魏群；江枫；孟宪镛
1. 材料与方法：刺五加皂甙（acan-thophopanaxenticosus，ASS）由白求恩医科大学化学教研室提供，1640培养液稀释抽提。人HepG2肝癌细胞株由空军广州医院肝病研究所提供。细胞周期动力学测定：将HepG2肝癌细胞置37℃二氧化碳孵箱培养，调节细胞浓度为1×109/L，分别加入含ASS和RA的1640完全培养液，ASS终浓度为1g/L、0.5g/L及0.25g/L，按上述浓度分为高浓度组、中浓度组及低浓度组，另设细胞空白对照组，每组测定3管。继续培养16h、24h和48h，收集细胞，流式细胞仪检测，记录细胞周期各时相的比例，计算凋亡细胞百分率。
作者：叶红军；叶炯贤；房家智 刊期： 2000年第03期
目的研究慢性肝炎患者纤维化不同分期时肝左叶上下径、前后径的变化规律及其联合血清纤维化指标对无创诊断中晚期肝纤维化或早期肝硬化的价值。方法经肝活检确定72例慢性肝炎患者肝纤维化分期。肝穿前一日，B超测定肝左叶上下径、前后径等及肝穿刺点定位。放射免疫法测定血清HA、LN、CⅣ和PCⅢ含量。结果随纤维化程度增加，肝左叶上下径呈缩短趋势，其S4期测值为（5.7±1.5）cm明显短于S0期测值（7.7±1.4）cm；肝左叶前后径呈增长趋势，其S4期测值长于S0期分别为（6.5±1.1）cm和（5.3±0.7）cm。血清HA、LN、CⅣ和PCⅢ含量亦随纤维化增加而升高，HA、PCⅢ在S3期开始显著升高，均高于同组S0期［（273.4±131.3）μg/L对（66.2±35.0）μg/L、（167.4±48.1）μg/L对（103.4±23.8）μg/L］。结论肝左叶上下径、前后径及血清HA、PCⅢ含量变化可能间接反映了活动性肝纤维化中晚期或早期肝硬化。
作者：连粤湘；李月娥；雷春亮；唐小平；邓子德 刊期： 2000年第03期
目的在大肠杆菌XL1-Blue中表达可溶性的抗HCV非结构蛋白NS3的人源单链可变区抗体（single-chain variable fragment antibody，ScFv）。方法以重组的HCV NS3为抗原，利用噬菌体抗体库技术筛选含有抗-HCV NS3 ScFv基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒，经SfiI/NotⅠ酶切鉴定后，亚克隆到pCANTAB5E载体；转化大肠杆菌XL1-Blue，提取质粒进行DNA序列测定；异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（isopropylthio-β-D-galactoside，IPTG）诱导表达HCV NS3可溶性单链可变区抗体。ELISA和斑点吸印杂交检测其与不同来源的抗原的结合活性。结果筛选到的HCV NS3的单链抗体基因，经限制性内切酶酶切和序列分析表明，该抗体基因由750bp组成，ELISA和斑点吸印杂交结果表明，在大肠杆菌XL1-Blue中表达的HCV NS3的单链抗体，可与不同来源的NS3抗原结合。结论大肠杆菌XL1-Blue表达的NS3-ScFv具有结合不同来源的HCV NS3的活性和特异性。
作者：钟彦伟；成军；刘妍；董菁；杨继珍；张玲霞 刊期： 2000年第03期
1. 材料与方法：乳哺动物细胞表达载体pBK-CMV，长约4.5kb，带有T7公用序列。pCP10是pBR322 EcoRI位点中插入双拷贝头尾相接的HBV ayw亚型全基因HBV DNA重组质粒。PCR引物XI1：1428-1448 nt 5′CGT CCC GTC GGC GCT GAA TCC 3′，XI2：1672-1653 nt 5′AGT CCA AGA GTC CTC TTA AG 3′。人肝癌细胞系SMMC-7721，由上海细胞所提供。将EcoRⅠ酶切后回收的全基因HBV片段，在T4 DNA连接酶作用下，与EcoRⅠ酶切后的pBK-CMV粘端连接。利用pBK-CMV具有T7公用序列，选用XI2、T7作为引物，PCR出现1.7kb阳性条带为反接，并命名为pBK-AHBV。用FUGENETM6转染试剂转染SMMC-7721细胞。在含10%FCS的RPMI 1640（pH7.4）培养基中培养至60h后，用总RNA抽提试剂（Trizol Reagent）提取转染的SMMC-7721细胞，依次获得总RNA、DNA。
作者：陈公英；娄国强；徐岱；王信子；陈智 刊期： 2000年第03期
目的从人源性噬菌体抗体库中筛选人抗HBsAg Fab噬菌体抗体。方法用固相化HBsAg对所构建的噬菌体抗体库进行三轮淘筛，从中筛选人抗HBsAg Fab噬菌体抗体。结果第三轮淘筛后洗脱下来的噬菌体，较第一轮增加80倍，含有抗体轻链基因和重链基因的克隆，也由淘筛前的17%增至100%，经ELISA证实，筛选到的抗HBsAg噬菌体抗体对HBsAg具有良好的结合活性，而与牛血清白蛋白和HAVAg等无关抗原均不反应。结论 HBsAg对抗体库的淘筛，富集了表面呈现抗HBsAg的单克隆抗体的噬菌体。
作者：王志毅；刘杞；张定凤；万泽生 刊期： 2000年第03期
我们的目的了解乳果糖对肝病肠源性内毒素血症（endotoxaemia，ETM）治疗作用，并探讨细胞因子变化与ETM的关系。一、资料与方法 1. 研究对象：急性肝炎28例，慢性肝炎32例，肝硬化29例，男56例，女33例，平均年龄43.5岁, 诊断根据1995年北京第五次全国传染病寄生虫学术会议制订的病毒性肝炎方案标准。各病例组随机分为两组，在常规护肝的基础上，一组口服乳果糖，另一组不服乳果糖。乳果糖剂量10～30g/d, 并调节至大便2～3次，疗程为20d，并分别于入院后次日及20日常规抽血检测。
作者：张顺财；戴茜；王吉耀；贺伯明 刊期： 2000年第03期
我们对1998年1～12月本院住院病历进行回顾性分析，发现黄疸型肝炎患者住院期间出现一过性窦性心动过缓（窦缓）与用糖皮质激素（激素）治疗密切相关。 1. 对象：共收集深度黄疸患者（血清总胆红素>170μmol/L）153例，有33例住院期间用激素治疗。
作者：陈凯红 刊期： 2000年第03期
编者按 1999年11月29至12月1日在四川成都召开了第四届全国肝癌学术会议，经与会代表充分讨论，修订并通过了原发性肝癌诊断标准，提出了原发性肝癌临床分期标准，并广泛征求意见。现将修订后的诊断标准刊出，供临床医师参考。
作者：中国抗癌协会肝癌专业委员会 刊期： 2000年第03期
对HCV分子生物学特性的深入探讨很大程度上依赖于实验模型。近年来，随着HCV全基因组的克隆以及多种HCV感染检测方法的建立并运用于动物试验，HCV感染的实验模型已取得重要进展。一、动物试验模型 黑猩猩是目前唯一成功用于HCV感染模型的实验动物。以完整的HCV病毒静脉注射接种是常用的实验感染方式，这与人类输血感染HCV的方式极为相似。除了完整的HCV病毒及HCV感染者的血清外，用HCV全基因克隆也能感染黑猩猩，Beard等[1]用HCV-1b型的全基因cDNA克隆在体外转录为RNA后，行肝内穿刺接种黑猩猩，3周后即可在外周血中检出HCV RNA，接种后13周即能检出高滴度持续存在的抗-HCV。
作者：秦山；赵连三 刊期： 2000年第03期
内毒素（lipopolysaccharide，LPS）在体外可以诱导肝细胞发生凋亡[1]。细胞凋亡的发生发展与许多凋亡相关基因表达的改变有密切的关系。 1. 材料与方法：采用Seglen法将雄性Wistar大鼠的肝细胞分离后培养24h。在培养基中直接加入LPS 10mg/L，分别在3h、6h、12h、和24h收集肝细胞，同时设正常对照组。用Moore等[2]的方法提取培养细胞的DNA片段。一步法提取RNA。半定量RT-PCR法检测在不同时间点基因PCR产物的含量。
作者：梁秀彬；尹镭；赵嘉惠；乔中东；贺晓东；韩德五 刊期： 2000年第03期
1. 资料与方法：67例为我科住院的重型肝炎患者，全部病例均有不同程度的乏力，纳差，肝脏肿大，病程10d以上，化验TBil＞200μmol/L，符合1995年北京全国传染病寄生虫病学术会议制定的诊断标准。67例患者随机分为治疗组和对照组。治疗组37例，男24例，女13例，平均年龄38.7岁，其中急性重型肝炎11例，亚急性重型肝炎19例，慢性重型肝炎８例；对照组30例，男19例，女11例，平均年龄34.6岁，其中急性重型肝炎９例，亚急性重型肝炎14例，慢性重型肝炎７例。两组患者的临床表现，肝功能检查，病程及年龄无明显差异，具有可比性。治疗组采用阿波莫斯针剂（德国MERZ制药有限公司生产，每１安瓿10ml中含有5g L-鸟氨酸、L-天门冬氨酸盐）。用5%葡萄糖液250ml中加入阿波莫斯针剂20ml静滴，每日２次。阿波莫斯应用１周后改为每日１次，20d为一疗程。对照组采用促肝细胞生长素，前列腺素E1等药物治疗。疗效判定：显效，黄疸完全消退或下降幅度达治疗前的70%以上；有效，黄疸下降70%；无效，黄疸下降幅度小于20%或无变化。
作者：缪新权；鲁慎文；梅光涛；杨智彬；孔庆芬；刘姝惠；陈华平；段云庆 刊期： 2000年第03期
我们对人肝癌组织ALP比活性及同工酶的改变以及手术前后血清中ALP及其同工酶的动态变化进行研究，以探讨原发性肝癌时其来源及变化情况。 1. 资料与方法：PHC患者31例，取手术切除的新鲜肝脏标本分为肿瘤和癌旁组织，分别称取1g湿重组织A和B两份：A份加5ml匀浆液（pH8.6，0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液）提取可溶性ALP；B份加5ml含0.5% TritonX-100匀浆液，提取总ALP。在YQ-3型匀浆机上高速匀浆后，离心留上清液备用。其中4 例有肿瘤细胞变性、坏死。其中22例收集到血清标本，分别与术前1d，术后1周（第7天），术后2周（第14天）清晨空腹采血 (其中2例术后住院不足2周，仅收集到术后1周血)。正常组为体检正常者血清30例。血清及匀浆液中ALP总活性、匀浆液蛋白及ALP同工酶测定参照文献[1]。
作者：肖明兵；黄介飞；鲍柏军；张弘；倪润洲；魏群；江枫 刊期： 2000年第03期
目的探讨靶向肝细胞的反义RNA抗HBV作用。方法以糖化多聚赖氨酸为载体，将能转录HBV C区反义RNA的真核质粒pREP4-aC定向导入2.2.15细胞，潮霉素筛选阳性克隆。研究过程中用ELISA和斑点杂交方法检测多个时期培养上清液中HBsAg、HBeAg 和HBV DNA，同时观察对细胞的毒性作用。结果导向后24h出现对HBsAg、HBeAg和HBV DNA的抑制，6d左右抑制率达高水平。未发现对2.2.15细胞的毒性作用。结论糖化多聚赖氨酸导向肝细胞的C区反义RNA，能有效抑制HBV抗原表达和DNA复制。
作者：张建军；陈枫；钟森；唐坤华；史小玲；王明勇；彭建一 刊期： 2000年第03期
目的研究血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）与乙型肝炎(乙肝)分级(G)和分期(S)的关系。方法 250例乙肝患者肝活检标本用VEGF单克隆抗体进行免疫组织化学(S-P法)染色。结果 VEGF在肝组织表达有胞浆型、膜窦型及窦内皮细胞型；VEGF主要由肝细胞分泌，其次在肝窦内皮细胞、贮脂细胞、成肌纤维细胞及单核细胞也示阳性。无明显病变的血管内皮细胞及肝细胞VEGF染色阴性。提示随分级增高VEGF表达增强，其间差异有极显著意义（χ2＝90.43，P＜0.01）；而S低分值者VEGF多有阳性表达，分值较高者多为强阳性表达，两者差异明显（χ2＝115.74，P＜0.01）。结论 VEGF表达与乙肝G和S相关。
作者：严家春；陈文笔；马勇；孙新华 刊期： 2000年第03期
我们用与野生模板等长和等效扩增的突变模板作为内参照,通过竞争PCR对HBV基因进行扩增，并引入微反应板酶联杂交技术对扩增产物定量分析。 1. 资料与方法：(1)HBV DNA标准品：质粒pADR-1 DNA 经BamH I酶切线性化后精确定量。(2)PCR2.1-WS319和PCR2.1-MS319质粒：均由长征医院感染科实验室（简称本室）构建。(3)HBV DNA阳性血清抽提物（10份）本室冻存。(4)竞争PCR：在0.2ml薄壁PCR反应管内，每管加入25μl PCR mix、引物EP1和EP2各1μl、按不同实验要求所需的各种模板，加双蒸水，使终体积为50μl。PCR扩增参数: 94℃，5min后；94℃，30s；54℃，30s；72℃，30s，共25个循环；再72℃延伸3min。(5)微反应板酶联杂交定量：由本室建立。(6)野生模板初始量的确定：采用Clementi等[1]介绍的公式: M/W=M'/W'。(7)统计学方法用Student's t检验。
作者：缪晓辉；孔宪涛；戚中田 刊期： 2000年第03期
肝癌的有效治疗方法至今仍是根治性切除。一般周围型肝癌切除可采用常规肝脏部分切除术。但当肝癌巨大且与邻近解部结构紧密粘连时术野显露极差，侧支循环又极为丰富，按常规方法切肝常可造成大量以至不能控制的出血，肝癌累及下腔静脉者尤甚；肝癌侵犯膈肌或腹部、甚至胸部脏器时，强行经肝癌组织分离，既不能完整切除肝癌，又可能造成肝癌组织脱落种植，如先切除腹腔脏器再切断肝脏又易造成术野污染。因此手术困难、风险极大、并发症多的肝癌称为难切性肝癌，既往遇这种情况常放弃手术，为使这部分病人得到切除机会，不少学者在探索新的切除方法。1994年以来我们不使用特殊器械作逆行肝脏部分切除术切除难切性肝癌100例均取得成功。
作者：吴志全 刊期： 2000年第03期
病毒性肝炎时凋亡的肝细胞可采用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的末端标记技术(TdT- mediated dUTP nick end labeling, TUNEL )进行原位显示，随着这一检测技术的广泛应用，逐渐发现操作过程中一些因素对实验结果的可靠性有较大的影响，我们以不同蛋白酶K浓度对TUNEL检测结果的影响进行了探讨。
作者：郎振为；廖慧钰；罗朝霞；李俊强；宋晨朝 刊期： 2000年第03期
例1：兄，12岁，因腹胀2年，双下肢浮肿2周以肝炎后肝硬化收入院。在院外按肝炎后肝硬化治疗近２年无明显疗效。家族史：其伯父40岁死于肝硬化，其父Ｂ超提示多发性肾囊肿。查体：皮肤巩膜无黄染，无肝掌蜘蛛痣，心肺无异常，腹膨隆，腹壁静脉曲张，肝肋下2cm，剑突下3cm，脾肋下8cm，质硬，移动性浊音阳性，双下肢轻度凹陷性水肿。入院时查肝功能ALT、AST、胆红素均正常，总蛋白60g/L，白蛋白35g/L，ALP 194U/L，凝血酶原活动度76%，蛋白电泳γ21.4%。血常规：血红蛋白（Hb）61g/L，血小板75×109/L，白细胞3.1×109/L。抗HAV IgM、HBV M、HBV DNA、抗HCV、HCV RNA、抗HGV、HGV RNA、抗CMV IgM、抗EBV IgM均阴性，DNA、dsDNA、抗线粒体抗体、抗平滑肌抗体、类风湿因子等自身免疫指标均阴性。Ｂ超：肝脾肿大，腹水，双肾水肿。肝活检光镜检查结果：宽的纤维组织间隔包绕肝小叶，间隔内条索状胆管增生明显，肝细胞未见明显病变。诊断：先天性肝纤维化。经对症治疗，病情好转出院。
作者：朱世殊；张鸿飞；杨晓晋；赵景民 刊期： 2000年第03期
1. 核医学检查的主要特点：核医学具有自己的特殊优势，是观察癌症微观分子结构与宏观组织器官变化的钮带，正在从受体水平迈向基因水平。核医学是利用组织或器官病灶内、外核素分布的浓度差为依据，显示组织器官和病变的位置、形态、大小等解剖学结构，同时提供了血流、功能、代谢方面十分有用的信息，是功能解剖学。核素显像的主要贡献是有助于疾病的早期诊断。 2. 肝癌的断层显像：单光子发射型计算机断层仪（single photon emission computed tomography，SPECT或称ECT），是以注入人体的放射性核素为放射源，通过仪器在体表连续或间隔一定角度旋转，采集多体位平面影像的数据，再由计算机重建成各断层影像，后对信息加工处理，重建断层影像。旋转总度数为360°，３°或6°/1帧、每帧10～12s（约120K计数）。由于计算机重建了横断面、矢状面及冠状面三维图像，对占位性病变的检出率不受深度的影响，对较小病变的检出率有明显提高。经过SPECT连续断层分析，能够鉴别某些由于正常结构所致的假缺损，从而使假阳性降低。敏感性可达94%，准确性为91.5%，特异性89%，检出的小病变为1.0cm。
作者：邓候富 刊期： 2000年第03期
目的研究乙型肝炎病毒Ｘ（hepatitis B virus，HBx）蛋白对生长因子激活作用，探讨HBx蛋白对肝细胞癌生长的影响。方法构建Ｘ基因真核表达载体，转染入HepG2细胞后，细胞组织化学和免疫印迹法检测胰岛素样生长因子－Ⅰ受体（insulin-like growth factor Ⅰreceptor，IGF-ⅠR）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达。结果转染HBx基因HepG2细胞（X细胞）IGF-ⅠR表达阳性率为84%±3%，转染空载体对照细胞（X0细胞）为26%±4%；免疫印迹法检测Ｘ细胞有明显条带。VEGF表达Ｘ细胞阳性率为83%±5%，X0细胞为28%±6%，差异有非常显著意义；Ｘ细胞IGF-ⅠR表达增高近1.5倍。结论 HBx蛋白可同时激活IGF-ⅠR和VEGF，在肿瘤恶性生长、转移中起有重要作用。
作者：陶小红；张晓实；任红；张大志；叶珈；古柏燕；沈鼎明 刊期： 2000年第03期
中华肝脏病杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
