学术投稿

丙型肝炎病毒感染的实验模型

秦山;赵连三

关键词:丙型, 肝炎病毒感染, 全基因克隆, 黑猩猩, 实验模型, 动物试验, 分子生物学特性, 接种, 体外转录, 输血感染, 试验模型, 实验动物, 全基因组, 静脉注射, 检测方法, 感染模型, 感染方式, 肝内穿刺, 持续存在, 外周血
摘要:对HCV分子生物学特性的深入探讨很大程度上依赖于实验模型。近年来,随着HCV全基因组的克隆以及多种HCV感染检测方法的建立并运用于动物试验,HCV感染的实验模型已取得重要进展。一、动物试验模型 黑猩猩是目前唯一成功用于HCV感染模型的实验动物。以完整的HCV病毒静脉注射接种是常用的实验感染方式,这与人类输血感染HCV的方式极为相似。除了完整的HCV病毒及HCV感染者的血清外,用HCV全基因克隆也能感染黑猩猩,Beard等[1]用HCV-1b型的全基因cDNA克隆在体外转录为RNA后,行肝内穿刺接种黑猩猩,3周后即可在外周血中检出HCV RNA,接种后13周即能检出高滴度持续存在的抗-HCV。
中华肝脏病杂志相关文献
  • 刺五加皂甙对肝癌细胞细胞动力学的影响

    1. 材料与方法:刺五加皂甙(acan-thophopanaxenticosus,ASS)由白求恩医科大学化学教研室提供,1640培养液稀释抽提。人HepG2肝癌细胞株由空军广州医院肝病研究所提供。细胞周期动力学测定:将HepG2肝癌细胞置37℃二氧化碳孵箱培养,调节细胞浓度为1×109/L,分别加入含ASS和RA的1640完全培养液,ASS终浓度为1g/L、0.5g/L及0.25g/L,按上述浓度分为高浓度组、中浓度组及低浓度组,另设细胞空白对照组,每组测定3管。继续培养16h、24h和48h,收集细胞,流式细胞仪检测,记录细胞周期各时相的比例,计算凋亡细胞百分率。

    作者:叶红军;叶炯贤;房家智 刊期: 2000年第03期

  • 乙型肝炎病毒X蛋白对肝细胞癌生长因子激活作用的研究

    目的研究乙型肝炎病毒X(hepatitis B virus,HBx)蛋白对生长因子激活作用,探讨HBx蛋白对肝细胞癌生长的影响。方法构建X基因真核表达载体,转染入HepG2细胞后,细胞组织化学和免疫印迹法检测胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(insulin-like growth factor Ⅰreceptor,IGF-ⅠR)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达。结果转染HBx基因HepG2细胞(X细胞)IGF-ⅠR表达阳性率为84%±3%,转染空载体对照细胞(X0细胞)为26%±4%;免疫印迹法检测X细胞有明显条带。VEGF表达X细胞阳性率为83%±5%,X0细胞为28%±6%,差异有非常显著意义;X细胞IGF-ⅠR表达增高近1.5倍。结论 HBx蛋白可同时激活IGF-ⅠR和VEGF,在肿瘤恶性生长、转移中起有重要作用。

    作者:陶小红;张晓实;任红;张大志;叶珈;古柏燕;沈鼎明 刊期: 2000年第03期

  • 肝癌组织碱性磷酸酶及其同工酶的研究

    我们对人肝癌组织ALP比活性及同工酶的改变以及手术前后血清中ALP及其同工酶的动态变化进行研究,以探讨原发性肝癌时其来源及变化情况。 1. 资料与方法:PHC患者31例,取手术切除的新鲜肝脏标本分为肿瘤和癌旁组织,分别称取1g湿重组织A和B两份:A份加5ml匀浆液(pH8.6,0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液)提取可溶性ALP;B份加5ml含0.5% TritonX-100匀浆液,提取总ALP。在YQ-3型匀浆机上高速匀浆后,离心留上清液备用。其中4 例有肿瘤细胞变性、坏死。其中22例收集到血清标本,分别与术前1d,术后1周(第7天),术后2周(第14天)清晨空腹采血 (其中2例术后住院不足2周,仅收集到术后1周血)。正常组为体检正常者血清30例。血清及匀浆液中ALP总活性、匀浆液蛋白及ALP同工酶测定参照文献[1]。

    作者:肖明兵;黄介飞;鲍柏军;张弘;倪润洲;魏群;江枫 刊期: 2000年第03期

  • 生长抑素与垂体后叶素治疗肝硬化食管静脉曲张破裂出血的疗效

    我们应用生长抑素(施他林,瑞士Serono药厂生产)治疗食管静脉曲张破裂出血与垂体后叶素治疗效果对比观察,旨在探讨一种新的有效的止血方法。一、资料与方法 1.病例选择:52例均经胃镜检查证实为食管静脉曲张破裂出血的住院患者。男性43例,女性9例,平均年龄(48±12)岁,其中肝炎后肝硬化42例,酒精性肝硬化10例,随机分成两组:施他林组25例,首次静脉推注施他林250μg,继以250μg/h的速度持续静脉滴注24~96h;垂体后叶素组27例,首次静脉推注10U垂体后叶素(15min),继以0.4U/min速度持续静滴24~96h。两组对象的年龄、性别、出血量,食管静脉曲张程度和肝功能Child-Pugh分级等项目差异无显著性意义。

    作者:高健;沈鼎明;李孝生;吴显才;梅浙川 刊期: 2000年第03期

  • 甘氨脱氧胆酸激活大鼠肝细胞磷脂酶A2和对血清磷脂酶蛋白及mRNA水平的表达

    实验证实甘氨脱氧胆酸(glycodeox-ycholic acid,GDC)≥250μmol/L可导致大鼠肝细胞坏死,细胞膜流动性降低[1]。磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)过量释放和/或激活在多系统器官衰竭的发展中起着关键作用。用GDC处理原代培养大鼠肝细胞,以探讨GDC对sPLA2酶活性的激活,酶蛋白和基因表达的影响。

    作者:黄文方;杨明清;康格非;涂植光;陈宏础;蒋虹;颜英俊;唐中 刊期: 2000年第03期

  • 同胞兄妹患先天性肝纤维化2例

    例1:兄,12岁,因腹胀2年,双下肢浮肿2周以肝炎后肝硬化收入院。在院外按肝炎后肝硬化治疗近2年无明显疗效。家族史:其伯父40岁死于肝硬化,其父B超提示多发性肾囊肿。查体:皮肤巩膜无黄染,无肝掌蜘蛛痣,心肺无异常,腹膨隆,腹壁静脉曲张,肝肋下2cm,剑突下3cm,脾肋下8cm,质硬,移动性浊音阳性,双下肢轻度凹陷性水肿。入院时查肝功能ALT、AST、胆红素均正常,总蛋白60g/L,白蛋白35g/L,ALP 194U/L,凝血酶原活动度76%,蛋白电泳γ21.4%。血常规:血红蛋白(Hb)61g/L,血小板75×109/L,白细胞3.1×109/L。抗HAV IgM、HBV M、HBV DNA、抗HCV、HCV RNA、抗HGV、HGV RNA、抗CMV IgM、抗EBV IgM均阴性,DNA、dsDNA、抗线粒体抗体、抗平滑肌抗体、类风湿因子等自身免疫指标均阴性。B超:肝脾肿大,腹水,双肾水肿。肝活检光镜检查结果:宽的纤维组织间隔包绕肝小叶,间隔内条索状胆管增生明显,肝细胞未见明显病变。诊断:先天性肝纤维化。经对症治疗,病情好转出院。

    作者:朱世殊;张鸿飞;杨晓晋;赵景民 刊期: 2000年第03期

  • 乙肝散治疗乙型肝炎的多中心实验与临床研究

    乙肝散是一种用于治疗慢性乙型肝炎的中药,系苗族药改进而成。主要含天王叶、地人参及猕猴桃等成分;主要功能为清热解毒、疏肝利胆、健脾化湿、活血化瘀等,近年发现它还具有抗HBV作用。现将全国十六家单位有关乙肝散治疗乙型肝炎的多中心基础与临床情况总结如下。

    作者: 刊期: 2000年第03期

  • 丙型肝炎病毒感染的实验模型

    对HCV分子生物学特性的深入探讨很大程度上依赖于实验模型。近年来,随着HCV全基因组的克隆以及多种HCV感染检测方法的建立并运用于动物试验,HCV感染的实验模型已取得重要进展。一、动物试验模型 黑猩猩是目前唯一成功用于HCV感染模型的实验动物。以完整的HCV病毒静脉注射接种是常用的实验感染方式,这与人类输血感染HCV的方式极为相似。除了完整的HCV病毒及HCV感染者的血清外,用HCV全基因克隆也能感染黑猩猩,Beard等[1]用HCV-1b型的全基因cDNA克隆在体外转录为RNA后,行肝内穿刺接种黑猩猩,3周后即可在外周血中检出HCV RNA,接种后13周即能检出高滴度持续存在的抗-HCV。

    作者:秦山;赵连三 刊期: 2000年第03期

  • 肝病患者纤维化不同分期时肝左叶上下径和前后径的测定及意义

    目的研究慢性肝炎患者纤维化不同分期时肝左叶上下径、前后径的变化规律及其联合血清纤维化指标对无创诊断中晚期肝纤维化或早期肝硬化的价值。方法经肝活检确定72例慢性肝炎患者肝纤维化分期。肝穿前一日,B超测定肝左叶上下径、前后径等及肝穿刺点定位。放射免疫法测定血清HA、LN、CⅣ和PCⅢ含量。结果随纤维化程度增加,肝左叶上下径呈缩短趋势,其S4期测值为(5.7±1.5)cm明显短于S0期测值(7.7±1.4)cm;肝左叶前后径呈增长趋势,其S4期测值长于S0期分别为(6.5±1.1)cm和(5.3±0.7)cm。血清HA、LN、CⅣ和PCⅢ含量亦随纤维化增加而升高,HA、PCⅢ在S3期开始显著升高,均高于同组S0期[(273.4±131.3)μg/L对(66.2±35.0)μg/L、(167.4±48.1)μg/L对(103.4±23.8)μg/L]。结论肝左叶上下径、前后径及血清HA、PCⅢ含量变化可能间接反映了活动性肝纤维化中晚期或早期肝硬化。

    作者:连粤湘;李月娥;雷春亮;唐小平;邓子德 刊期: 2000年第03期

  • 糖皮质激素治疗病毒性肝炎出现窦性心动过缓

    我们对1998年1~12月本院住院病历进行回顾性分析,发现黄疸型肝炎患者住院期间出现一过性窦性心动过缓(窦缓)与用糖皮质激素(激素)治疗密切相关。 1. 对象:共收集深度黄疸患者(血清总胆红素>170μmol/L)153例,有33例住院期间用激素治疗。

    作者:陈凯红 刊期: 2000年第03期

  • 降低肝癌切除术后复发率的措施

    原发性肝癌的治疗手段很多,但至今能手术切除的肝癌仍以切除的效果好。通过亚临床期肝癌的发现、肝癌的早期切除、肝癌复发后的再切除和不能切除肝癌的缩小后再切除等方法在一定程度上提高了术后生存率。然而有作者报道,40%~60%左右的肝癌在手术时已有肝内或远处转移,而部分病灶用常规的影像学检查,如超声显像、CT、MRI、肝动脉造影也难予分辨。国内外的学者报道,直径小于4cm的肝癌手术切除术后5年复发率60%左右,大部分的复发者在术后18个月内出现。国内外的资料表明,仅依靠单纯的外科手段来降低肝癌术后的复发率,已是非常困难,难以有新的突破,要采取综合措施。

    作者:李锦清 刊期: 2000年第03期

  • 内毒素对体外培养的肝细胞凋亡相关基因表达的影响

    内毒素(lipopolysaccharide,LPS)在体外可以诱导肝细胞发生凋亡[1]。细胞凋亡的发生发展与许多凋亡相关基因表达的改变有密切的关系。 1. 材料与方法:采用Seglen法将雄性Wistar大鼠的肝细胞分离后培养24h。在培养基中直接加入LPS 10mg/L,分别在3h、6h、12h、和24h收集肝细胞,同时设正常对照组。用Moore等[2]的方法提取培养细胞的DNA片段。一步法提取RNA。半定量RT-PCR法检测在不同时间点基因PCR产物的含量。

    作者:梁秀彬;尹镭;赵嘉惠;乔中东;贺晓东;韩德五 刊期: 2000年第03期

  • 肝癌患者血清可溶性Fas水平检测及意义

    通过对肝癌患者血清可溶性Fas(sFas)水平及免疫指标的检测,探讨肝癌患者血清sFas水平与免疫功能的关系及其临床意义。 1. 临床资料:186例肝癌初治患者,系本院1997年1月~1999年6月收治的患者,诊断依据肝穿刺活体组织检查、CT及MRI、AFP等确诊,其中男118例,女68例,年龄35~72岁,平均50.2岁。40例肝硬化患者,经肝穿刺活体组织检查证实,男30例,女10例,年龄30~68岁,平均49.8岁;所有患者不包括严重感染、自身免疫性疾病、造血系统疾病及肾衰等合并症。健康献血员为42例,男24例,女18例,年龄31~60岁,平均48.5岁。

    作者:谢家印;孙贵银;郑成位;张培炽 刊期: 2000年第03期

  • 腺苷蛋氨酸治疗肝内胆汁淤积性病毒性肝炎疗效观察

    目的观察腺苷蛋氨酸治疗胆汁淤积性病毒性肝炎的疗效。方法 110例肝内胆汁淤积性病毒性肝炎患者随机分为A(治疗组)、B(对照组)两组,分别用腺苷蛋氨酸和门冬氨酸钾镁治疗,疗程均为4周。结果腺苷蛋氨酸对淤胆型肝炎皮肤瘙痒的有效率为86.67%(13/15),与对照组比差异有显著性(P<0.05);对慢性肝炎合并肝内胆汁淤积患者皮肤瘙痒、纳差的有效率分别为88.24%(15/17)、82.35%(14/17),与对照组比差异有显著意义(P<0.05)。腺苷蛋氨酸治疗后,淤胆型肝炎和急、慢性肝炎合并肝内胆汁淤积患者血清总胆红素(STB)、血清结合胆红素(SCB)、总胆汁酸(TBA)、ALT、AST的降幅明显高于对照组(P<0.05),治疗后ALP的下降有显著性意义(P<0.05),STB、SCB、TBA的复常率显著高于对照组(P<0.05);淤胆型肝炎和慢性肝炎合并肝内胆汁淤积患者ALT的复常率较对照组差异有显著意义(P<0.05);慢性肝炎合并肝内胆汁淤积患者血清白蛋白在治疗后的增高也有显著性意义(P<0.05)。结论腺苷蛋氨酸治疗胆汁淤积性病毒性肝炎疗效较好,优于门冬氨酸钾镁,没有明显不良反应。

    作者:秦波;郭树华;赵有蓉;邹淑碧;张全海;王志毅;曾维群;张大志 刊期: 2000年第03期

  • 口服乳果糖对肝病肠源性内毒素血症及细胞因子的影响

    我们的目的了解乳果糖对肝病肠源性内毒素血症(endotoxaemia,ETM)治疗作用,并探讨细胞因子变化与ETM的关系。一、资料与方法 1. 研究对象:急性肝炎28例,慢性肝炎32例,肝硬化29例,男56例,女33例,平均年龄43.5岁, 诊断根据1995年北京第五次全国传染病寄生虫学术会议制订的病毒性肝炎方案标准。各病例组随机分为两组,在常规护肝的基础上,一组口服乳果糖,另一组不服乳果糖。乳果糖剂量10~30g/d, 并调节至大便2~3次,疗程为20d,并分别于入院后次日及20日常规抽血检测。

    作者:张顺财;戴茜;王吉耀;贺伯明 刊期: 2000年第03期

  • 丙型肝炎病人系列血清中5′-NCR和C区基因变异研究

    目的研究丙型肝炎病人的系列血清中HCV 5′-NCR及核心区基因变化。方法 4例因献血感染HCV病人的系列血标本, 用特异性引物扩增5′-NCR和核心区基因并进行测序。结果所有HCV分离株基因序列均为1b和2a型,5′-NCR序列差异只与型别有关,与病人和不同时点采集的标本无关。核心区基因序列差异因病人和基因型别而异,未发现同一病人的同一基因型序列随时间而变化。结论 5′-NCR序列保守性大于核心区。型别是导致基因变化的主要原因。未发现该2区段基因的核苷酸改变与时间有关。

    作者:张庶民;李河民;祁自柏;张华远;庄辉;Anders Widell 刊期: 2000年第03期

  • 肠源性内毒素血症在硫代乙酰胺所致肝损伤发病中的作用

    目的探讨肠源性内毒素血症在硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)所致肝损伤模型发病机制中的地位和作用。方法选用雄性Wistar大鼠26只,随机分为4组,即正常组(N)及结肠切除(C)对照组;TAA损伤组(T)和结肠切除+TAA组(C+T)。采用生化检测法测定血浆内毒素含量和ALT活性。结果单纯给予TAA组,血浆内毒素水平和ALT活性显著高于其它三个组;而结肠切除+TAA组的血浆内毒素水平与结肠切除对照组和正常对照组相比无明显升高,ALT活性结肠切除组+TAA组和正常对照组比较明显升高,但比TAA组却明显减低。T组与C+T组血浆内毒素水平与ALT活性变化之间呈正相关关系(r=0.985,P<0.01)。结论 TAA所导致的内毒素血症是肠源性内毒素血症;TAA本身有直接致肝细胞损伤的作用,但其所形成的肠源性内毒素血症造成的肝损伤更为严重。

    作者:刘立新;韩德五;任大宾 刊期: 2000年第03期

  • 血管内皮细胞生长因子与乙型肝炎病变的关系

    目的研究血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与乙型肝炎(乙肝)分级(G)和分期(S)的关系。方法 250例乙肝患者肝活检标本用VEGF单克隆抗体进行免疫组织化学(S-P法)染色。结果 VEGF在肝组织表达有胞浆型、膜窦型及窦内皮细胞型;VEGF主要由肝细胞分泌,其次在肝窦内皮细胞、贮脂细胞、成肌纤维细胞及单核细胞也示阳性。无明显病变的血管内皮细胞及肝细胞VEGF染色阴性。提示随分级增高VEGF表达增强,其间差异有极显著意义(χ2=90.43,P<0.01);而S低分值者VEGF多有阳性表达,分值较高者多为强阳性表达,两者差异明显(χ2=115.74,P<0.01)。结论 VEGF表达与乙肝G和S相关。

    作者:严家春;陈文笔;马勇;孙新华 刊期: 2000年第03期

  • 难切性肝癌的切除方法

    肝癌的有效治疗方法至今仍是根治性切除。一般周围型肝癌切除可采用常规肝脏部分切除术。但当肝癌巨大且与邻近解部结构紧密粘连时术野显露极差,侧支循环又极为丰富,按常规方法切肝常可造成大量以至不能控制的出血,肝癌累及下腔静脉者尤甚;肝癌侵犯膈肌或腹部、甚至胸部脏器时,强行经肝癌组织分离,既不能完整切除肝癌,又可能造成肝癌组织脱落种植,如先切除腹腔脏器再切断肝脏又易造成术野污染。因此手术困难、风险极大、并发症多的肝癌称为难切性肝癌,既往遇这种情况常放弃手术,为使这部分病人得到切除机会,不少学者在探索新的切除方法。1994年以来我们不使用特殊器械作逆行肝脏部分切除术切除难切性肝癌100例均取得成功。

    作者:吴志全 刊期: 2000年第03期

  • 原发性肝癌诊断标准

    编者按 1999年11月29至12月1日在四川成都召开了第四届全国肝癌学术会议,经与会代表充分讨论,修订并通过了原发性肝癌诊断标准,提出了原发性肝癌临床分期标准,并广泛征求意见。现将修订后的诊断标准刊出,供临床医师参考。

    作者:中国抗癌协会肝癌专业委员会 刊期: 2000年第03期

中华肝脏病杂志

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主管:中国科学技术协会

主办:中华医学会