学术投稿

前列腺特异性膜抗原胞外区的真核表达及其纳米抗体的淘选

范校周;郭燕丽;涂追;童海鹏;李浪;王洛夫;黄海韵;许杨

关键词:前列腺特异性膜抗原, 纳米抗体, 噬菌体展示
摘要:目的 寻找能够特异性与前列腺特异性膜抗原(prostate-specific membrane antigen,PSMA)胞外区结合的纳米抗体.方法 通过RT-PCR技术在真核细胞HEK-293中重组表达PSMA胞外区.以该重组蛋白为包被抗原,采用固相淘选的方法在天然纳米抗体噬菌体展示库中淘选能够与之特异性结合的噬菌体,以Phage-ELISA方法筛选出具有结合活性的噬菌体克隆.通过细胞ELISA和细胞免疫荧光技术再次验证分子水平淘选到的阳性噬菌体克隆.结果 测序证明编码PSMA的重组DNA片段序列正确,Western blot验证该重组蛋白成功表达.4轮固相淘选天然库使具有结合活性的噬菌体克隆得到了有效富集,阳性率从8.3%提高到64.6%.细胞ELISA测值表明PSMA表达阳性细胞明显高于阴性细胞[PSMA+:(0.621±0.043);PSMA-:(0.148±0.014),P<0.01];细胞免疫荧光亦证实分子水平淘选的阳性噬菌体与表达PSMA阳性细胞能发生特异性结合.结论 从天然纳米抗体噬菌体库中淘选得到了在分子和细胞水平均能与PSMA胞外区特异性结合的阳性噬菌体克隆.
第三军医大学学报杂志相关文献
  • 重组慢病毒介导的内肽酶Meprinα对ApoE-/-小鼠主动脉粥样斑块形成的影响

    目的 观察重组Meprinα慢病毒质粒对ApoE-/-小鼠主动脉粥样斑块形成的影响,并初步探讨其机制.方法 15月龄ApoE-/-小鼠按随机数字表法分为对照组、LvMep1A组和LvGFP组,予高脂喂食,并于第11周分别给予病毒质粒.尾动脉测压法测量动脉血压,全自动生化分析仪检测血浆胆固醇、甘油三酯及脂蛋白含量.Western blot检测血管壁Meprinα蛋白,血管HE染色观测粥样斑块面积,ELISA法检测血浆中Meprinα蛋白和炎症因子含量.TUNEL法检测血管壁粥样斑块细胞凋亡情况.结果 与对照组比较,LvMep1A组小鼠血浆和血管壁中Meprinα含量分别增高3.7倍、3.4倍(P<0.05);相较于对照组,LvMep1A组小鼠体质量、甘油三酯、胆固醇和低密度脂蛋白显著升高(P<0.05),而高密度脂蛋白(HDL)则显著降低(P <0.05);HE染色结果提示,LvMep1A组小鼠主动脉粥样斑块面积较对照组显著升高(P<0.05);荧光显微镜下可见,与对照组比较,LvMep1A组小鼠粥样斑块内TUNEL阳性细胞百分比约增加了58.25%(P<0.05);ELISA结果提示,LvMep1A组小鼠血浆中炎症因子IL-1β、TNF-α、MMP-9含量较对照组明显升高(P<0.05),而MCP-1、IL-6则较对照组无明显变化(P>0.05).与对照组比较,LvGFP组各项指标无明显变化(P>0.05).结论 Meprinα促进粥样斑块形成、进展,其机制可能与Meprinα促进小鼠体内炎症因子分泌,诱导粥样斑块内细胞凋亡有关.

    作者:郜攀;司良毅;王笑梅 刊期: 2013年第21期

  • 泻剂结肠大鼠模型阿片受体表达变化

    目的 探讨3种阿片受体亚型(MOR、DOR、KOR)在泻剂结肠大鼠模型结肠内的表达变化及意义.方法 使用7~8周龄Wistar大鼠20只,体质量(200±20)g,雌雄各半,按随机数字表法分为对照组(n=10)及泻剂结肠组(n=10),单只分笼饲养(环境温度18 ~28℃,相对湿度40%~ 80%).对照组饲以普通饲料,泻剂结肠组饲以含酚酞饲料.通过RT-qPCR及Western blot法对阿片受体在结肠中的表达进行相对定量分析.结果 3种阿片受体亚型在泻剂结肠组及对照组大鼠结肠内均有不同程度的表达.RT-qPCR检测显示泻剂结肠组MOR、DOR及KOR mRNA相对表达水平均明显高于对照组[(5.093±1.410) vs (1.092±0.222),(2.612±0.612) vs (1.032±0.082),(2.607±0.327) vs (0.995±0.109),P<0.01].Western blot检测显示泻剂结肠组MOR、DOR及KOR的表达较对照组明显升高[(0.361 ±0.023) vs (0.152 ±0.021),(0.246 ±0.059) vs (0.159 ±0.005),(0.309 ±0.018) vs(0.201 ±0.015),P<0.01].结论 各阿片受体亚型在泻剂结肠大鼠结肠中表达均明显增强,提示其对泻剂结肠大鼠结肠运动及分泌功能可能存在明显的抑制作用.

    作者:吴劲松;刘宝华;童卫东;李凡;张安平;付涛;李春穴 刊期: 2013年第21期

  • 蒿甲醚自微乳化释药系统的制备及体外评价

    目的 研究蒿甲醚自微乳化释药系统处方组成和体外特性.方法 通过溶解度实验、伪三元相图绘制和正交实验设计筛选优化蒿甲醚自微乳化处方.以自乳化速率、粒径、稳定性和体外溶出度为指标评价自乳化微乳系统体外特性.结果 蒿甲醚自微乳化释药系统的佳处方选择Lauroglycol 90为油相,Cremophor RH 40为乳化剂,Gelucire 44/14为助乳化剂,佳配比为4∶4∶2,其中蒿甲醚的载药量为80 mg/g.自制的ARM-SMEDDS均在2 min以内完成自微乳化,粒径为(61.50±8.66) nm,常温下3个月基本保持稳定,体外溶出度结果显示120 min即能达到>99.5%的溶出率,累积溶出百分率为原料药的7倍.结论 所制备的ARM-SMEDDS外观和稳定性良好,能显著提高体外溶出度.

    作者:张亚红;林凤云;邱妍川;朱照静 刊期: 2013年第21期

  • 前列腺特异性膜抗原胞外区的真核表达及其纳米抗体的淘选

    目的 寻找能够特异性与前列腺特异性膜抗原(prostate-specific membrane antigen,PSMA)胞外区结合的纳米抗体.方法 通过RT-PCR技术在真核细胞HEK-293中重组表达PSMA胞外区.以该重组蛋白为包被抗原,采用固相淘选的方法在天然纳米抗体噬菌体展示库中淘选能够与之特异性结合的噬菌体,以Phage-ELISA方法筛选出具有结合活性的噬菌体克隆.通过细胞ELISA和细胞免疫荧光技术再次验证分子水平淘选到的阳性噬菌体克隆.结果 测序证明编码PSMA的重组DNA片段序列正确,Western blot验证该重组蛋白成功表达.4轮固相淘选天然库使具有结合活性的噬菌体克隆得到了有效富集,阳性率从8.3%提高到64.6%.细胞ELISA测值表明PSMA表达阳性细胞明显高于阴性细胞[PSMA+:(0.621±0.043);PSMA-:(0.148±0.014),P<0.01];细胞免疫荧光亦证实分子水平淘选的阳性噬菌体与表达PSMA阳性细胞能发生特异性结合.结论 从天然纳米抗体噬菌体库中淘选得到了在分子和细胞水平均能与PSMA胞外区特异性结合的阳性噬菌体克隆.

    作者:范校周;郭燕丽;涂追;童海鹏;李浪;王洛夫;黄海韵;许杨 刊期: 2013年第21期

  • 直肠内脱垂患者直肠顺应性变化与肠黏膜中TRPV1、5-HT表达的关系

    目的 探讨直肠内脱垂(internal rectal prolapse,IRP)患者直肠顺应性改变与TRPV1、5-HT在直肠黏膜层表达的关系.方法 选择临床诊断IRP的患者20例及对照组20例先进行肛管直肠测压,然后行结肠镜检查,在齿状线上方4cm处下段直肠取黏膜活检,行TRPV1和5-HT免疫组化染色,采用图像分析法分析免疫反应阳性情况.结果 与对照组比较,IRP组初始感觉容积明显增高(Z=-3.710,P<0.01),大感觉耐受容积明显降低(Z=-5.181,P<0.01),直肠顺应性明显降低;对照组黏膜层仅有少量TRPV1表达,IRP组直肠黏膜腺体可见大量TRPV1阳性染色,与对照组相比,IRP组直肠黏膜层TRPV1的表达显著增强(Z=-5.085,P<0.01);对照组黏膜层5-HT免疫阳性染色很少,而IRP组黏膜层腺体细胞内5-HT表达量显著升高(Z=-4.734,P<0.01).结论 IRP患者直肠顺应性明显低于对照组,与直肠黏膜层TRPV1和5-HT免疫反应阳性显著增强导致直肠高敏感有关,可能是IRP患者肛门坠胀、便意频繁等排便功能障碍的机制之一.

    作者:张鑫;田跃;童卫东;李凡;王李;赵松;叶景旺;刘宝华 刊期: 2013年第21期

  • 复方利多卡因乳膏在白癜风自体表皮移植术中的临床应用

    近年来,自体表皮移植术治疗白癜风在临床上已得到广泛应用,已成为治疗稳定期局限型白癜风的有效治疗方法[1].但在治疗过程中,因负压吸疱及表皮磨削产生的疼痛常常使患者难以忍受,影响治疗的顺利进行.我科术前采用复方利多卡因乳膏表面麻醉的方法,取得满意疗效报告如下.

    作者:唐莉;施宗平;林琳;肖艳;翟志芳 刊期: 2013年第21期

  • 慢传输型便秘的药物治疗新进展

    作者:方秀才 刊期: 2013年第21期

  • 多功能超声检测胎儿右室双出口及法洛四联症右心室功能

    目的 探讨脉冲多普勒(PW)、M型(MME)、实时三维容积(RT-3 DE)超声心动图在右室双出口及法洛四联症胎儿右心功能检测中的应用价值.方法 采用PW、MME、RT-3DE三种方法,分别测量30例右室双出口及法洛四联症胎儿和30例正常胎儿的Tei指数、右室舒张末期容积(right ventricular end-diastolic volume,RVEDV)、收缩末期容积(right ventricular end-systolic volume,RVESV)、每搏量(stroke volume,sv)和射血分数(ejection fraction,EF)等指标,并进行对比分析.结果 PW测量异常组胎儿右室Tei指数为(0.48±0.09),正常组为(0.36±0.05),异常组测值明显高于正常组;MME与RT-3DE测量的异常组胎儿右室EF分别为(60.04 ±7.69)、(52.04 ±7.26),差异有统计学意义(P<0.05);PW测量的Tei指数与RT-3DE的ROC诊断曲线较一致,与MME差异较大.结论 RT-3DE可不依赖于任何解剖假设准确地评价胎儿心功能,且具有较好的重复性;由于右心室形态的不规则,MME在心室内径的测量上存在较大的误差,其相关测值的准确性和可重复性均较RT-3DE差.

    作者:李晓瑜;郑俊平;蒋演;李佩倞;高云华;夏红梅 刊期: 2013年第21期

  • 急性心肌梗死早期血清和肽素、肌钙蛋白的变化及其临床意义

    急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的发病率逐年增加,早期诊治能有效挽救濒死心肌、降低AMI的病死率及病残率.目前诊断AMI的主要依据是临床胸痛症状、心电图改变以及心肌损伤标志物的增高.因部分患者心电图早期无特异性改变,检测心肌标志物在AMI诊断中起着重要作用,国内外的研究认为肌钙蛋白(cTn)是目前用于诊断心肌损伤较好的确定标志物,但肌钙蛋白Ⅰ (cTn Ⅰ)在AMI 6 h后才出现增高.寻找早期诊断AMI的标志物是当前研究的热点问题.本研究的目的在于观察急性心肌梗死患者血清和肽素、肌钙蛋白浓度的变化及与其严重程度的关系,旨在为急性心肌梗死早期病情判断提供借鉴.

    作者:余俊;朱武军;李红霞;杜燕;杨秀林 刊期: 2013年第21期

  • 3.0T常规MRI与髋关节镜检查髋臼唇撕裂的对比分析

    髋臼唇撕裂是临床上引起髋关节疼痛的常见原因之一,如果不及时诊断、治疗,终可引起关节软骨损伤,导致骨关节炎[1-2].关节镜是检查髋臼唇撕裂的金标准,髋关节MRI造影被认为是髋臼唇撕裂的首选影像学检查技术[3-4].但是,髋关节MRI造影与关节镜属于有创性检查,本研究采用3.0T常规MRI与髋关节镜检查髋臼唇撕裂,结果报告如下.

    作者:杨琴;刘杰;杜明珊;候文静;陈康;陈光兴;陈伟 刊期: 2013年第21期

  • 慢传输型便秘外科治疗进展

    作者:刘宝华;付涛 刊期: 2013年第21期

  • 结肠传输试验在慢传输型便秘诊断中的应用

    目的 探讨结肠传输试验在慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)诊治中的价值和意义.方法 收集2007年9月至2013年5月于我院行结肠传输试验的414例受检者的资料,包括男性87例,女性327例,年龄13~82岁,平均45.9岁,临床表现大便次数减少、便意减弱,可伴随有大便于结、排便费力,部分患者需要手助排便,病程3~37年,平均10.7年,病情符合罗马Ⅲ诊断标准.受检者口服含有20粒不透光标记物的胶囊,观察其在服药后24、48、72 h腹部立位片中标记物的分布情况,比较各组标记物数量的差异.结果 414例按72 h残留于大肠的标记物的数量进行分组,>20%为阳性组,≤20%为阴性组,阳性组197例,阴性组217例.两组在各时间点差异具有统计学意义(P<0.05).结论 结肠传输试验可以如实地反映在人群结肠传输功能方面确实存在的不同程度的异常,结肠传输试验宜反复、多次检查,使结果更为准确.

    作者:赵松;刘宝华;付涛;李光焰;龚水根;王郜 刊期: 2013年第21期

  • 杨梅素减轻高糖诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤

    目的 探讨杨梅素对高糖诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响.方法 体外培养原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分为正常对照组(葡萄糖浓度5.56 mmol/L)、甘露醇高渗对照组(5.56 mmol/L葡萄糖+27.8 mmol/L甘露醇)、高糖处理组(葡萄糖浓度33.36 mmol/L)、杨梅素保护组(0.1~10 μmo/L杨梅素+ 33.36 mmol/L葡萄糖),处理48 h后,CCK-8比色法检测细胞活力,Annexin-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,同时检测细胞内活性氧(ROS)含量,及培养上清液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性.结果 高糖处理HUVECs 48h后,与正常对照组比较,细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、ROS及MDA含量均显著增加(P<0.05),而SOD和CAT活性显著下降(P<0.05);杨梅素预处理HUVECs后,可显著抑制高糖引起的HUVECs细胞凋亡、ROS和MDA含量的增加以及细胞活力、SOD和CAT活性的下降(P<0.05).结论 杨梅素可减轻高糖诱导的血管内皮细胞氧化应激,抑制细胞凋亡.

    作者:梁馨予;张婷;周永;施琳颖;陈军丽;王丽;康超;朱俊东;糜漫天 刊期: 2013年第21期

  • 军校大学生社会、学业和身体自我性别、年级特点研究

    目的 研究军校大学生社会、学业和身体自我的性别、年级特点.方法 整群抽取某军校一至四年级大学生930名,采用大学生社会自我问卷、青少年一般学业自我量表、青少年身体自我量表为测试工具.结果 ①军校大学生社会自我的发展整体水平较高,男生与女生在人际威信、陌生人关系、团体地位、师生关系、异性同学关系、角色体验6个维度上存在显著差异(P<0.05,P<0.01),各年级在10个维度上均达到显著差异(P<0.01).②军校大学生的学业自我发展状况良好,男生与女生在各维度上未见显著差异(P>0.05),各年级在4个维度上均达到显著差异(P<0.01),呈现大二>大三>大四>大一的发展特点.③军校大学生身体自我的发展整体水平较高,男生与女生在运动特征、身材特征维度上存在显著差异(P<0.01),各年级在5个维度上均达到显著差异(P<0.01).④不同年级、不同性别的军校大学生社会、学业和身体自我在总均分上达到显著差异(P<0.05,P<0.01).结论 不同性别、年级的军校大学生社会、学业和身体自我的发展有差异,应因材施教以取得好的发展.

    作者:卢祖静;冯正直;李清;李嘉雯;朱姝;黄玲巧 刊期: 2013年第21期

  • APE1和p53蛋白在A549细胞和HeLa细胞中的结合作用

    目的 探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease,APE1)和p53蛋白内源性和外源性相互结合作用.方法 将重组质粒pET42a-hAPE1转染E.coli BI21(DE3),应用IPTG诱导GST-APE1蛋白表达,鉴定后经金属螯合层析技术纯化,通过Western blot鉴定纯化蛋白,得到GST-APE1融合蛋白.免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)和GST蛋白沉降实验分别检测内源性和外源性APE1和p53蛋白结合作用,免疫荧光标记结合激光共聚焦显微镜技术确定APE1和p53蛋白亚细胞定位.结果 转染质粒经IPTG诱导表达,应用SDS-PAGE发现GST-APE1在预期位置64×103处存在阳性条带,“Ni”柱纯化后得到GST-APE1融合蛋白,通过Western blot鉴定.免疫共沉淀和GST蛋白沉降实验证实APE1和p53存在内源性和外源性结合作用.激光共聚焦显微镜观察免疫荧光标记的APE1和p53蛋白均为核浆共表达蛋白,氧化应激处理后,蛋白逐渐由胞浆向胞核移位,二者共定位于核膜处较明显.结论 APE1和p53蛋白在A549和HeLa细胞中存在内源性和外源性结合作用,可能与其转录调控及肿瘤放化疗疗效有关.

    作者:张翀;李梦侠;程燚;李增鹏;王阁;王东;杨镇洲 刊期: 2013年第21期

  • Osterix基因敲除及过表达对小鼠脊椎骨量的影响

    目的 研究小鼠Osterix基因敲除及过表达后对其脊椎骨量的影响及作用机制.方法 将12周龄的野生型小鼠(WT)、Osterix基因敲除小鼠(Osterix-KO)和Osterix过表达转基因小鼠(Osterix-CA)分为3组(每组8只,均为雄性),分别采用X线摄像和HE染色观察小鼠腰椎骨量的变化,TRAP染色检测破骨细胞水平,免疫组织化学检测NF-KB受体活化因子配体(RANKL)、骨涎蛋白(BSP)和骨桥蛋白(OPN)表达水平,并将所得数据进行统计学分析.结果 OsterixKO小鼠在X线和HE染色表现为腰椎骨密度和骨量增加,破骨细胞数量显著减少(P<0.05),椎体中RANKL、BSP和OPN的表达水平显著降低(P<0.05),而Osterix-CA小鼠的脊椎X线、HE染色表现及破骨细胞数量与WT小鼠无明显差异.结论 Osterix基因敲除小鼠脊柱骨吸收活性减弱伴成骨细胞分化能力降低,进而发生骨量明显增加.

    作者:陈思旭;宗兆文;贾敏;华祥;沈岳;赵玉峰;郭庆山;刘道城 刊期: 2013年第21期

  • 不同术式对慢传输型便秘患者的疗效、营养和健康状况的影响

    目的 观察全结肠切除回直肠吻合术(ileorectal anastomosis,IRA)和次全结肠切除盲直肠吻合术(caeco-rectal anastomosis,CRA)治疗慢传输型便秘患者的效果,以及对患者营养状况和健康状况的影响.方法 收集5家医院提供的行全结肠切除回直肠吻合术的40例患者,以及行次全结肠切除盲直肠吻合术的32例患者临床资料,对手术资料和术后随访资料进行统计分析,观察患者术前和术后的血红蛋白、总蛋白和白蛋白含量;采用术后全身情况调查表、MNA营养状况调查表、健康调查评分量表(SF-36)、社会生活情况调查表,分析两种手术治疗效果,以及对患者营养状况和健康状况的影响.结果 IRA组和CRA组术后3个月患者对手术满意度为87.5%,术后6个月都在90.0%以上.两组大便次数增多的例数随术后时间延长而减少,与各自术后3个月的例数相比,IRA组术后1年的例数显著减少(P<0.01),CRA组术后6个月的例数也显著减少(P<0.05).IRA组和CRA组术后1年应用止泻剂例数显著少于各自术后3个月的例数(P<0.05,P<0.01).IRA组术后的血红蛋白和白蛋白含量较CRA组显著增高(P<0.05).两组MNA营养状况调查指标数值之间无统计学差异(P>0.05),两组各指标得分均接近高分.两组健康调查评分量表数值之间无统计学差异(P>0.05).两组的健康状况、情绪问题和对周围生活的感受的得分只有高分的68.8% ~ 82.4%.结论 IRA和CRA手术能缓解患者便秘症状,术后营养状况良好,健康状况和社会生活受到一定程度的影响.IRA和CRA手术都适用于治疗慢传输型便秘,可根据患者的个体情况选择手术方式.

    作者:刘宝华;魏东;杨向东;高峰;钱群;李凡;付涛;屈景辉;任彦武 刊期: 2013年第21期

  • 乳牙滞留伴多发性多生牙及恒牙阻生2例

    多生牙是一种牙齿数目的发育异常,可发生于牙弓内任何部位,常见于上颌前牙区,也称为额外牙.恒牙列多生牙发生率国内报道为1%~3%[1],国外报道为1.04%~2.00%[2].多生牙可能由牙胚发育期间形成过多牙蕾或牙胚分裂导致,其牙数常为1~2颗,3颗以上者较为少见[3].多生牙可单独发生,也常合并其他畸形,如腭裂、锁骨颅骨发育不全综合征等[4].我院治疗非综合征性乳牙滞留伴多发性多生牙及恒牙阻生2例,报告如下.

    作者:曾庆香;张碧;孙吉成;刘平;王涛 刊期: 2013年第21期

  • 下颌第一前磨牙显微根管治疗1例

    1 临床资料患者,男性,43岁,主诉:左下后牙疼痛3d.现病史:患者自述1年前左下后牙曾于外院行充填治疗,2周前充填物脱落,3d前感左下后牙冷热刺激痛,偶有自发痛,来我院就诊.既往史:平时体质较好,自述有支气管炎症史,否认传染病病史,否认药物过敏史.检查:全口卫生差,牙石Ⅱ度,软垢Ⅰ度,色素Ⅰ度,牙龈充血,无退缩.34牙颊侧楔形缺损,已累及髓腔,冷(+),探(+),叩(+),松动度(-),牙龈未见明显异常(图1A).

    作者:刘建党;王慧霞;陈永进;张旻 刊期: 2013年第21期

  • 载异烟肼、利福平白蛋白纳米粒的制备及其体外释药研究

    目的 研究载异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampicin,RFP)牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)纳米粒的制备及体外释药特性.方法 以白蛋白为载体聚乳酸为骨架,采用改良自乳化-溶剂扩散法制备纳米粒.采用透射电镜观察纳米粒形态;激光粒度衍射分析仪测定纳米粒粒径分布;高效液相色谱法测定纳米粒的载药量和包封率;动态膜透析法观察载药纳米粒的体外释药特性.结果 制备的INH-RFP-BSA-NPs电镜下观察外观圆整,大小均匀、分散性好,粒径为(60.5 ±4.6)nm.异烟肼、利福平的载药量分别为19.8%、20.1%,包封率分别为87.8%、98%.INH至6d时累计释放97.02%,RFP至5d时完全释放.结论 以白蛋白和聚乳酸为载药基质,采用改良自乳化-溶剂扩散法可制备出粒径小、载药量和包封率较高的载异烟肼、利福平白蛋白纳米粒,体外释药显示载异烟肼、利福平白蛋白纳米粒具有良好的缓释作用.

    作者:马荣;陈振;张惠勇;杨小英;王文萍;戈朝晖 刊期: 2013年第21期

第三军医大学学报杂志

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主管:第三军医大学

主办:第三军医大学