学术投稿

人毛乳头细胞HSPC016基因在毕赤酵母中的表达和鉴定

邹锋;郝飞;宋志强;易勇;杨希川;杨斌;叶庆佾

关键词:毛乳头细胞, HSPC016基因, 毕赤酵母, 真核表达
摘要:目的构建人毛乳头细胞HSPC016基因的真核表达载体,诱导其表达并对目的蛋白基本生物学特性进行鉴定.方法用PCR从pET-28a(+)/HSPC016中扩增出195 bp目的基因,克隆至酵母表达载体pPIC9K质粒,经酶切鉴定后转化毕赤酵母菌GS115,G418-YPD平板筛选高拷贝转化子,甲醇诱导表达后进行Western blot检测和目的蛋白N-端氨基酸测序鉴定.结果用PCR成功扩增出目的基因;pPIC9K/HSPC016转化GS115用G418-YPD平板筛选高拷贝转化子,甲醇诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定:目的蛋白相对分子量约为7.2×103,与理论预测值相吻合;UVP扫描表明目的蛋白表达率约18%;Western blot检测具有良好的免疫反应性;N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致.结论HSPC016基因能通过酵母表达载体pPIC9K及宿主菌GS115进行高效、正确地表达,为研究HSPC016基因在真核细胞水平表达的生物学意义奠定了基础.
第三军医大学学报杂志相关文献
  • 早期康复训练结合电针治疗对脑缺血损伤大鼠IL-6、IL-1影响及可能机制的探讨

    目的探讨早期康复训练结合电针疗法对脑缺血损伤的疗效及其可能机制.方法采用线栓法制备大鼠脑缺血模型,观察早期康复训练结合电针治疗对脑缺血大鼠缺血脑组织形态结构、血清IL-6含量以及海马区IL-1表达的影响,并与单纯电针治疗比较.结果早期康复训练结合电针治疗与单纯电针疗法均显著改善缺血后脑组织病理结构变化,显著降低脑缺血损伤后血清IL-6含量,促进海马区IL-1的释放,而早期康复训练结合电针治疗效应更强.结论早期康复训练结合电针治疗能降低大鼠脑缺血损伤,促进机体康复,提高生存质量.

    作者:田家林 刊期: 2005年第14期

  • 重庆市社区人群高血压病的流行病学调查

    目的了解城市居民原发性高血压(hypertension,HP)的流行情况及其危险因素,为该病的干预措施提供科学的依据.方法采用横断面调查研究方法,于2002年1~5月对重庆市某高校和某厂矿职工共计3 717人进行流行病学调查.结果该人群平均年龄(56.66±13.49)岁,高血压现患率为43.29%,其中男性为45.54%,女性为39.88%,随着年龄的增长,HP的患病率逐渐增加;高胆固醇血症现患率为25.86%;超重率为34.35%,超重的人(体质量指数BMI≥25 kg/m2)其平均收缩压(systolic blood pressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DBP)、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)值均较未超重者高,而高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)值较后者低.文化程度高者(受教育年数≥10年)HP现患率较中低文化程度者低,前者血压、血脂、血糖(glucose,Glu)水平均较后者低.多元非条件Logistic逐步回归分析结果显示:性别、年龄、BMI、高血脂史、高血压家族史、TC值与HP的患病有关.结论抽样人群中老年人HP的患病率处于较高水平,他们是HP防治的主要对象.年龄、BMI>25 kg/m2、HP家族史、高血脂等可能是当地HP患病的主要危险因素.加强健康教育,倡导健康的生活方式,提倡合理的膳食结构,是控制和预防HP的重要措施.

    作者:牟李红;李革;张素华;任伟;唐晓君;卢仙娥;吴羽;李启富;唐兰 刊期: 2005年第14期

  • 多囊肾并发尿毒症肾移植8例

    多囊肾(polycystic kidney,PKD)是一类遗传性肾脏疾病,其病程发展的终结果是并发尿毒症[1].PKD中5%~10%的透析患者原发病为PKD[2].肾移植是终末期PKD理想的治疗方法.现将我院自1993年开展肾移植以来收治的8例PKD施行肾移植的临床研究报告如下.

    作者:孙煦勇;赵月涛;文宁;赖彦华;文海涛;谭刘欣;曲海燕;叶常青;李壮江 刊期: 2005年第14期

  • NGF促周围神经再生过程中对血管生成的影响

    目的探讨再生周围神经中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)促血管生成作用及其促血管作用对周围神经再生的影响.方法用单通道的硅胶管桥接75只Wistar大鼠1 cm的坐骨神经缺损,在桥接管内给药,并将它们随机分为4组:生理盐水组(A组)、几丁糖组(B组,医用几丁糖简称几丁糖),NGF+几丁糖组(C组),NGF+几丁糖+抗VEGF组,前3组每组20只,术后7、14、30 d,用免疫组化的方法检测大鼠再生坐骨神经新生血管内皮细胞中CD34、FactorⅧ、VEGF的表达,并作半定量分析.术后14 d,Holmes染色再生坐骨神经纤维.结果生理盐水组、几丁糖组再生坐骨神经中表达的CD34、FactorⅧ、VEGF比较没有显著性差异,NGF+几丁糖组上述三抗原的表达比生理盐水组或几丁糖组有明显增加(P<0.05),NGF+几丁糖+抗VEGF组再生坐骨神经血管中的CD34和VEGF的表达完全被抑制,FactorⅧ的表达与NGF+几丁糖组相比也显著减少(P<0.01 46).Holmes染色发现,术后14 d再生坐骨神经纤维数量及排列规则程度:NGF+几丁糖组>几丁糖组>生理盐水组>NGF+几丁糖+抗VEGF组.结论NGF可能通过促进VEGF产生发挥促周围神经再生作用.

    作者:张玉波;伍亚民;杨恒文;李应玉 刊期: 2005年第14期

  • 28例青春期前儿童上尿路结石诊断治疗的临床分析

    目的探讨儿童上尿路结石的外科诊断和治疗经验.方法回顾性地研究分析了28例1995-2003年入住我科青春期前儿童肾结石和输尿管结石的诊断和治疗情况.本组研究包含17例男孩和11例女孩;年龄从10个月至14岁(平均8.6岁).26例解剖正常,1例肾盂输尿管交界处狭窄,1例双侧输尿管口囊肿.术前行血生化检查.根据患儿病情分别采用ESWL、输尿管镜取石、溶石等方式进行了治疗.结果所有患儿均存在血生物化学检查的异常.9例患儿接受ESWL治疗后,结石完全排出8例,1例结石负荷降低;1例接受输尿管镜取石术,无术后感染和输尿管狭窄发生;1例患儿放置导管以进行溶石治疗;7例单个输尿管结石患儿接受排石治疗;6例多发性结石,或同时存在的解剖异常的患儿接受开放性手术手术治疗,均达到治疗效果;4例明确诊断后未作治疗自动出院.结论青春期前儿童上尿路结石形成可能与胆固醇及尿酸和钙磷代谢异常有关,治疗方式依据病情而定,ESWL和微创手术应是青春期前儿童上尿路结石治疗的首选方法.

    作者:王坚;李普云;柳建军;吴宏;洪伟平;黄兴端;许志坚;吴舟;苏劲 刊期: 2005年第14期

  • 自动切割针CT引导下经皮肺活检的成功率

    CT引导下经皮肺活检是一个安全、高效的诊断肺结节良性和恶性病变方法[1].诊断准确度达96.2%,敏感度95.1%,气胸发生度16.0%~44.6%,出血(肺实质出血,咳血)6.4%.

    作者:陈琉;陈涛;陈金鳌 刊期: 2005年第14期

  • 黑熊肌酸激酶及其同工酶活性的检测

    目的对圈养的健康四川黑熊血清中的肌酸激酶(CK)及其同工酶CK-MB活性进行测定,建立起黑熊肌酸激酶(CK)及其同工酶CK-MB活性的生化参考指标,为研究黑熊积累资料,并为黑熊的疾病防治提供科学依据.方法根据酶促反应速率原理,结合分光光度法,对CK和CK-MB的活性进行人工检测.对检测结果进行统计分析,求出酶活性的平均值、变异系数和期望值置信区间.结果在30℃条件下,雄性黑熊CK活性平均值为162.70 U/L,变异系数为11.90%,期望值置信区间为148.90~176.50 U/L;CK-MB活性平均值为17.4 U/L,变异系数为17%,期望值置信区间为15.26~19.54 U/L;雌性黑熊CK活性平均值为149.3 U/L,变异系数为8%,期望值置信区间为140.68~157.92 U/L;CK-MB活性平均值为15.8 U/L,变异系数为18.6%,期望值置信区间为13.70~17.90 U/L.结论所得结果可以作为健康黑熊的部分生化指标.

    作者:侯万儒;李家烈 刊期: 2005年第14期

  • 老年人严重创伤后免疫抑制的研究

    目的对比老年人与青中年人严重创伤后免疫指标与炎性介质的变化,探讨老年人群创伤后免疫抑制的程度与变化特征.方法31例年龄>65岁,平均(72.4±7.6)岁,ISS评分>20分,平均(27±5)分的老年创伤病人与中青年创伤病人[平均年龄(30.6±16.2)岁,平均ISS评分(29±6)分]配对分组,在来诊后和伤后2、4、6、8 d采用流式细胞术连续检测T细胞亚群比例和CD14+单核细胞人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)表达,同时观察免疫球蛋白IgA、IgG、IgM,补体C3、C4,C反应蛋白(CRP)和促炎介质肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6),白介素10(IL-10)血浆水平.结果老年组伤后TNF-α、IL-6、IL-10低于青中年组,但持续上升时间延长,在6~8 d后IL-10血浆浓度已高于青中年组.老年组伤后4~8 d Th1/Th2比值下降明显,CD14+HLA-DR表达下调.结论老年人创伤后发生的免疫抑制比青中年人群更显著,表现为单核-T淋巴细胞免疫功能受抑,而抗炎细胞因子清除不利可能是导致这一免疫功能紊乱的重要原因.

    作者:孟海东;赵晓东;陈晓光;郭旭生;孙丹;果应菲;党伟 刊期: 2005年第14期

  • 深低温停循环下颅内巨大基底动脉瘤手术的麻醉处理

    目的探讨颅内基底动脉瘤手术中深低温停循环技术(DHCA)的应用和围术期的麻醉管理.方法根据7例深低温停循环下颅内巨大基底动脉瘤手术中脑氧饱和度(rS02)以及体温、心电图等监测指标的变化,调控围术期的管理措施,以期维护术中脑等重要生命器官的氧供需平衡;并观察、记录术后患者的转归和并发症发生情况.结果即使在深低温的条件下,停循环也可使rS02明显降低,恢复循环后可逐渐得以改善.低流量灌注与停循环相比较,前者可使脑氧供需平衡得以更好的维持.本组7例患者术后未出现停循环所致全脑缺氧的情况,尽管有3例患者死亡.结论DHCA辅以相应的脑保护措施和监测手段可有效的应用于颅内巨大基底动脉瘤的手术,而在避免全脑缺氧的同时,降低局部血管损伤的发生率也是改善手术预后的重要一环.

    作者:李宝伟;米卫东;李佳春 刊期: 2005年第14期

  • 脑出血患者血清S100b蛋白与神经功能损害的相关性研究

    目的探讨脑出血患者血清S100b蛋白与神经功能损害的相关性.方法①病例分组:ICH组,37例;对照组,30例(健康体检者).②测试方法:采用双抗体夹心ELISA法测定患者血清S100b蛋白含量;患者急性期头颅CT扫描,根据多田公式(V=S×L×Slice×π/6)计算血肿体积;急性期采用CSS量表评价患者神经功能,恢复期(发病后3个月)采用Barthel指数评定患者日常生活能力.结果ICH急性期血清S100b蛋白水平显著高于对照组(P<0.01);ICH急性期血清S100b蛋白含量与血肿体积、CSS评分均呈显著正相关(n=37,r=0.965,P<0.01;n=37,r=0.949,P<0.01),与Barthel指数呈显著负相关(n=37,r=-0.972,P<0.01).结论测定ICH患者急性期血清S100b蛋白含量有助于评价血肿体积、神经功能缺损及预后.

    作者:廖群纷;梁德胜;王为民;刘宁 刊期: 2005年第14期

  • 腺病毒介导gax基因转染对血管平滑肌细胞迁移的影响

    目的以腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞(VSMC),探讨gax基因表达增强后VSMC迁移的变化.方法以携带大鼠gax基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(AdCMV-gax)常规转染VSMC后,应用免疫细胞化学染色检测gax基因表达的变化,Boyden's小室观察gax基因表达增强对VSMC迁移的影响.结果①AdCMV-gax转染前,PDGF-BB下调Gax蛋白的表达,接近正常生理浓度的PDGF-BB(2 ng/ml)即可使VSMC的Gax蛋白表达率由36.42%显著降低至22.83%(P<0.05),随着PDGF-BB浓度的升高,gax基因表达下降程度更加显著;AdCMV-gax转染后,无论有无PDGF-BB刺激,VSMC中gax基因的表达均比转染前显著增高.②AdCMV-gax转染使VSMC表达gax增强后,VSMC迁移数较未转染组显著减少.结论增强gax基因表达,可抑制由有丝分裂原刺激所引起的VSMC迁移.

    作者:王耿;何国祥;冉擘力;张萍;景涛;陈渝 刊期: 2005年第14期

  • FGF8在神经胚形成和NTD中的表达变化及其与STAT3的关系研究

    目的探讨FGF8在神经胚形成和神经管缺陷(NTD)发生过程中的作用及其可能的分子调控机制.方法采用全胚胎原位杂交技术观察FGF8在胚胎神经胚形成中的表达;通过喂服过量的维甲酸(retinoic acid,RA)诱导NTD模型,观察NTD鼠胚FGF8和STAT3的表达变化.结果①在E8.75d整个鼠胚几乎没有FGF8的表达;到E9.5d、E10.5d,在前脑泡的前缘、脑峡部位和神经管的末端观察到较局限的紫蓝色阳性区域,但到E10.5d时,上述3个部位的染色较E9.5d减弱;E11.5d时阳性信号主要集中在中脑部位.②FGF8在NTD鼠胚的表达,E9.5d时脑峡部位的染色减弱,前脑泡的前缘和神经管的尾端染色略有减弱;E10.5d,脑峡部位染色加深,且范围扩大,前脑泡的前缘和神经管的尾端染色较正常减弱.③STAT3在NTD鼠胚的表达,E9.5d和E10.5d时,STAT3的表达较正常鼠胚明显减少,在前脑泡和中脑泡均无明显的STAT3 mRNA表达的阳性信号.结论FGF8可能作为STAT3的上游分子,二者共同参与了神经管的关闭.

    作者:纪华;李泽桂;丁震宇;马路;李红丽;蔡文琴;常智杰;刘力;傅新元 刊期: 2005年第14期

  • 亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1单核细胞趋化蛋白-1 mRNA表达的影响

    目的观察亚硒酸钠对HBZY-1细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的影响,从而研究硒在防治糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的作用机制.方法分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGE)刺激HBZY-1细胞;先加入100 nmol/L亚硒酸钠预处理后,再分别给予以上4种刺激因素孵育HBZY-1细胞,分别检测HBZY-1细胞MCP-1 mRNA的表达并比较.结果4种刺激因素均可作为独立因素,导致HBZY-1细胞MCP-1 mRNA表达量增加;亚硒酸钠能抑制上述4种因素所致的MCP-1mRNA的表达.结论亚硒酸钠通过抑制MCP-1 mRNA在HBZY-1细胞中的表达,从而有效防治糖尿病肾病的发生发展,表明硒在糖尿病肾病的防治过程中发挥积极作用.

    作者:魏倩萍;邓华聪;赵劼;Harvest F.Gu 刊期: 2005年第14期

  • 缺氧预处理对L02肝细胞缺氧复氧损伤的抗凋亡保护作用

    目的研究缺氧预处理对正常肝细胞株L02缺氧复氧损伤的抗凋亡细胞保护机制.方法建立缺氧预处理细胞模型,随机分为正常对照组、缺氧复氧损伤组(hypoxia reoxygenation,H/R组)和缺氧预处理组(hypoxic precondition,H/P组).使用流式细胞术,检测细胞缺氧复氧处理后l、6、12、18、24 h细胞凋亡率,并分别检测各组细胞缺氧复氧处理后12 h时bcl-2、bcl-xl、bax和P53蛋白的表达量,同时通过透射电镜观察细胞超微结构变化.结果H/P组和H/R组比较,细胞凋亡率显著下降,bcl-2、bcl-xl蛋白表达显著升高,P53、bax蛋白表达量显著降低,透射电镜下可见细胞结构基本维持正常.结论缺氧预处理对缺氧复氧导致的L02肝细胞损伤有明显的保护作用.肝缺氧预处理过程中,bcl-2、bcl-xl、bax及P53蛋白参与了细胞凋亡调控作用.

    作者:邹忠东;王瑜;王烈;刘庆宏;姚和祥 刊期: 2005年第14期

  • 低剂量硫芥诱导大鼠脾脏氧化应激状态的改变

    目的探讨低剂量硫芥诱导大鼠脾脏氧化应激状态的改变及其意义.方法皮下注射硫芥,梯度离心法分离大鼠脾线粒体.用紫外分光光度法检测ROS、SOD、MDA及细胞色素含量;荧光分光法检测细胞内GSH含量;HE染色法观察脾脏病理损伤.结果低剂量硫芥作用下,脾脏出现水肿;组织和线粒体内ROS、SOD、MDA、GSH、GSSG含量出现不同程度的改变;线粒体电子传递链成分(细胞色素)含量出现不同程度的丢失.结论氧化应激状态的改变是低剂量硫芥诱导机体免疫器官(脾)损伤的毒作用机制之一.

    作者:曾惠;刘勇;朱明学;张黎明;董兆君 刊期: 2005年第14期

  • OPSpecs图在凝血实验室内质控方法设计中的应用

    目的设计保证临床质量要求的凝血试验室内质控规则.方法以卫生部检验中心室间质评结果计算偏倚Bias,以连续4个月的室内质控测定CV为方法的不精密度,CLIA88能力比对检验评价限为总允许误差TEa,利用OP-Specs图,选择凝血试验项目的室内质控规则.结果一批测定两个浓度的质控品,凝血酶原时间PT、部分凝血活酶时间APTT和纤维蛋白原Fib的室内规则分别为1_3s/1Ox、4_1s、1_3s/10x.结论质控性能均达到误差检出率大于90%且假失控率小于5%,质量控制符合临床质量要求.

    作者:张凤川;汤蓓;石凌波;王露霞 刊期: 2005年第14期

  • 体外循环下心内直视手术后ARDS69例临床分析

    目的观察心内直视手术后ARDS的病情演变与临床特征,并探讨其发病机制与诊治原则,以提高其抢救成功率.方法回顾性分析了1996年1月至2004年3月我科ICU收治的69例心内直视手术后ARDS病人临床资料.结果共发生心内直视手术后ARDS 69例,占同期4680例体外循环心内直视手术的1.47%.多数发生于术后早期.所有病例术后均出现顽固性低氧血症,对常规的治疗效果不明显;同时存在气道压升高、肺顺应性降低;先后出现胸片改变.术后早期死亡15例,死亡率21.74%.其中12例死于多脏器功能衰竭,3例死于致死性的心律失常.术前心功能差,合并肝肾功能不全、糖尿病、高血压等多种疾病,存在哮喘、慢性支气管炎等病史、吸烟史、脑血管意外史,术中长时间转流或心肌保护不良,麻醉或体外循环过程中意外情况发生,急诊手术是心内直视手术后ARDS发生的高危因素.结论在心内直视手术后ARDS的诊治过程中强调早期发现与早期处理.尤其是针对具有高危因素的病人,作出早期诊断与处理,有利于争取抢救时机提高抢救成功率.在治疗中强调积极应用小潮气量保护性通气治疗,同时应用大剂量的激素与前列腺素E,积极防治防止其它脏器功能的损害.

    作者:陈柏成;肖颖彬;钱桂生;陈林;钟前进;王学锋;王惠春;刘晓莉 刊期: 2005年第14期

  • 急性重症胰腺炎治疗的临床体会

    急性重症胰腺炎(severe acute panceratitis,SAP)是目前为严重的急腹症之一.其特点是发病急骤,病情危重,治疗困难,病死率高.我们自1995-2004年共收治53例,为总结经验现报告如下.

    作者:隆永效;孙英信 刊期: 2005年第14期

  • 缺氧复合氯霉素处理对大鼠脑皮质线粒体氧化呼吸功能及COX活性的影响

    目的观察大鼠经不同时间低压缺氧并复合线粒体蛋白翻译特异抑制剂氯霉素(CAP)处理后,脑组织线粒体呼吸功能和COX活性的变化以及CAP处理对缺氧过程中线粒体氧化呼吸功能的影响.方法成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、单纯药物处理组和缺氧复合药物处理组,后者为模拟海拔5 000 m高原连续低压缺氧暴露1、5、15 d和30d,分别于动物处死前7 d按100 mg/kg体质量,腹腔注射0.5%CAP.高速离心密度梯度法分离大鼠脑皮质线粒体,Clark氧电极法测定线粒体呼吸活性,极谱法测量COX活性.结果与对照组相比,单纯CAP处理大鼠脑线粒体ST3、RCR、OPR及COX活性显著降低;复合缺氧后则线粒体呼吸功能及COX活性明显改善,且随缺氧时间的延长而基本恢复到平原对照组水平.结论缺氧可以改善氯霉素处理大鼠脑皮质COX活性及线粒体的氧化呼吸功能,提高氧化磷酸化效率,其改善程度具有时间依赖性,随缺氧时间的延长而逐渐恢复.

    作者:宋熔;柳君泽;陈丽峰 刊期: 2005年第14期

  • 度米芬渗透泵型控释片包衣处方的优化研究

    目的制备度米芬渗透泵片,以控制体外释药维持零级释放达80%以上.方法采用均匀设计优化包衣处方,对度米芬渗透泵片进行体外释放度试验.结果佳处方为:衣膜厚度(膜重表示)10.75 mg,致孔剂用量为12%.按优化处方制备的3批样品在12 h内体外释放曲线拟合符合零级过程.结论该方法制备过程简单,能达到初设计要求.

    作者:何凤慈;陈亮;宋宏宇 刊期: 2005年第14期

第三军医大学学报杂志

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主管:第三军医大学

主办:第三军医大学