学术投稿

小鼠原始生殖细胞分离培养方式和生物特性研究

王茜;李玉艳;梁志清;包碧慧

关键词:小鼠原始生殖细胞, 细胞培养, 减数分裂
摘要:目的:探索一种简单高效的分离、培养小鼠原始生殖细胞(PGCs)的方法,为小鼠模型提供充足的PGCs来源。方法体外分离小鼠12.5 dpc胚胎生殖嵴,剪碎后用含血清、胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂、卵泡刺激素、重组表皮生长因子的α-M EM培养基进行组织块贴壁培养;于倒置显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测阶段性特异性胚胎抗原,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、细胞免疫荧光等方法检测干细胞的多能性基因Oct4及减数分裂Ⅰ期的几个特异性基因的表达。结果体外分离培养的小鼠 PGCs具有良好的细胞形态、极强的增殖能力,SSEA-1表达阳性,SSEA-4表达阴性,同时检测到Oct4、Stra8、Vasa、SCP3、ZP3表达均为阳性。结论利用该实验方法能培养出高纯度、具有良好干性及极强增殖能力的小鼠PGCs ,并使该细胞进入减数分裂。
重庆医学杂志相关文献
  • 肿瘤错配修复基因PMS2及活化Akt1在不同卵巢癌细胞株中的表达及相关性

    目的:检测Akt1、P-AktS473和PMS2蛋白在人类不同卵巢癌细胞株(A2780、Caov3、C13*和ES2)中的表达水平及相关性。方法应用Western blot检测Akt1、P-Akt S473和PMS2蛋白分别于A2780、Caov3、C13*和ES2细胞中表达水平;应用Akt1激动剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及Akt1特异性抑制剂API-2调节Akt1活化水平,观察PMS2蛋白表达水平变化。结果 Akt1,P-Akt S473及PMS23种蛋白在A2780,Caov3,C13*和ES2卵巢癌细胞内均表达,但表达水平高低不一,即Akt1的活化形式P-Akt S473与PMS2蛋白表达呈负相关;应用IGF-1上调Akt1的活性后,ES2和Caov3中PMS2表达水平明显下降,且与IGF-1的作用存在时间依赖性;应用特异性抑制剂 API-2抑制Akt1的活性后,A2780中 PMS2表达水平明显升高,且与API-2的作用存在时间依赖性。结论人类卵巢癌细胞中PMS2蛋白的表达水平可能受活化Akt1的直接调控。

    作者:贾静辉;李春东;陈冰;李景轩;童英 刊期: 2016年第09期

  • 口服大剂量复方甘草片致戒断症状1例报道

    服用复方甘草片的常见不良反应为低血钾,戒断症状较少见,现将近期收治的1例口服大剂量复方甘草片致戒断症状的患者报道如下。

    作者:张宁;罗兰霞;张中伟 刊期: 2016年第09期

  • 小鼠原始生殖细胞分离培养方式和生物特性研究

    目的:探索一种简单高效的分离、培养小鼠原始生殖细胞(PGCs)的方法,为小鼠模型提供充足的PGCs来源。方法体外分离小鼠12.5 dpc胚胎生殖嵴,剪碎后用含血清、胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂、卵泡刺激素、重组表皮生长因子的α-M EM培养基进行组织块贴壁培养;于倒置显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测阶段性特异性胚胎抗原,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、细胞免疫荧光等方法检测干细胞的多能性基因Oct4及减数分裂Ⅰ期的几个特异性基因的表达。结果体外分离培养的小鼠 PGCs具有良好的细胞形态、极强的增殖能力,SSEA-1表达阳性,SSEA-4表达阴性,同时检测到Oct4、Stra8、Vasa、SCP3、ZP3表达均为阳性。结论利用该实验方法能培养出高纯度、具有良好干性及极强增殖能力的小鼠PGCs ,并使该细胞进入减数分裂。

    作者:王茜;李玉艳;梁志清;包碧慧 刊期: 2016年第09期

  • 陈伯钧教授中医药治疗慢性心力衰竭临床经验分析

    陈伯钧教授为广州中医药大学教授,广东省中医院心脏中心主任医师,博士研究生导师,广东省中西医结合学会心力衰竭专业委员会主任委员,从事临床工作25年,对治疗慢性心力衰竭(chronic heart failure ,CHF)有丰富的临床经验。笔者有幸随师学习,获益匪浅,现就其运用中医药治疗CHF的临床经验总结如下。

    作者:唐咏;陈伯钧;曾靖;赵帅;刘炜枫;张烈元;黄钜明;蔡海荣;黄永莲;陈冬杰 刊期: 2016年第09期

  • 肾上腺血管内大B细胞淋巴瘤1例及文献复习

    血管内大 B细胞淋巴瘤(intravascular large B cell lym-phoma ,IVLBCL)累及肾上腺的病例极其罕见,本文报道了1例原发于肾上腺的血管内大B细胞淋巴瘤,经过彩超、临床资料、组织病理切片及免疫组化染色等方法得以确诊,现报道如下。

    作者:卫惠杰;任俊伟;刘定荣;罗敏;傅春玲;李伟 刊期: 2016年第09期

  • 肛周多发鲍温病1例报道

    鲍温病(bowen diease ,BD)是一种皮肤的原位鳞状细胞癌,其表现为慢性病程且具有浸润性可能的低度恶性肿瘤。现将本院收治的1例肛周多发鲍温病报道如下。

    作者:詹玮;余蕾;刘幸;田甜;李珀;姬清华;张汝一;廖欣 刊期: 2016年第09期

  • 乳铁蛋白基因rs1126478多态性与龋病易感性的Meta分析

    目的:系统评价乳铁蛋白(LTF)基因rs1126478多态性与龋病易感性的关系。方法计算机检索Pubmed,Webof science ,Embase ,EBSCO ,Springerlink ,中国知网(CNKI),维普(VIP),万方及中国生物医学文献数据库(CBM ),收集发表的有关LTF基因rs1126478多态性与龋病发病风险的文献,以 OR及其95% CI为效应指标,运用RevMan 5.2及Stata 12.0软件进行统计学分析,并进行偏倚评估及敏感性分析。结果共纳入5个病例对照研究,累积病例720例,对照412例,M eta分析结果显示,4种模型中LTF基因rs1126478多态性与龋病发病风险相关性无统计学意义(GG+ AG vs .AA :P=0.75,OR=0.93,95% CI=0.59~1.46;G vs .A :P=0.88,OR=0.97,95% CI=0.68~1.38;GG vs .AA :P=0.84,OR=1.07,95% CI =0.57~1.99;GG vs .AG+ AA :P=0.52,OR=1.12,95% CI =0.79~1.58),按人种进行亚组分析结果显示,在Caucasian及Asian人群中LTF基因rs1126478多态性与龋病发病风险相关性亦无统计学意义(P>0.05)。结论乳铁蛋白基因rs1126478多态性可能与龋病易感性无关。

    作者:周政;刘高成;杨泽辉;李琦;徐江 刊期: 2016年第09期

  • 乳腺癌肿大腋窝淋巴结中BCSCs相关基因表达与肿瘤复发、转移的关系

    目的:探索乳腺癌干细胞(BCSCs)相关基因CD44、Twist1、OCT4在乳腺癌患者癌组织、腋窝肿大淋巴结中的表达与乳腺癌转移及复发的关系。方法以免疫组化法和组织免疫荧光聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测乳腺癌患者癌组织、腋窝淋巴结中BCSCs相关因子CD44、CD24、Twist1和OCT4的基因和抗原表达。结果在术前和术中确诊为乳腺癌的14例患者中均有癌细胞腋窝淋巴结转移。免疫组化法测得乳腺癌癌组织、腋窝肿大淋巴结BCSCs相关因子CD44、Twist1和OCT4抗原阳性过表达,而CD24呈低表达;RT-PCR检测乳腺癌组织、腋窝淋巴结中BCSCs相关因子CD44、Twist1和OCT4的基因表达增强(P<0.05),CD24基因低表达(P>0.05)。结论乳腺癌伴腋窝淋巴结肿大者BCSCs相关因子CD44、Twist1和OCT4的基因、抗原表达明显增高,可能表明BCSCs相关因子与乳腺癌细胞易早期转移、复发有关。

    作者:余天雾;龚建平;郭丹;周健 刊期: 2016年第09期

  • 瘦体质测定评估血液透析患者营养状态的临床研究

    目的:采用瘦体质(LBM)对血液透析患者的营养状态进行评估。方法对190例维持性血液透析患者进行直接人体测量、生化参数的测定,计算LBM 、标准化蛋白分解代谢率(nPCR)、体质量指数。结果根据LBM 测定,在营养良好、营养不良两组间进行营养指标的比较:肌酐法LBM 两组血清清蛋白、前清蛋白比较,差异有统计学意义。握力法LBM 两组血清蛋白、前清蛋白组、总铁结合力(tibc)、血红蛋白比较,差异有统计学意义。中臂肌围LBM 两组血清蛋白、前清蛋白比较,差异有统计学意义。肌酐法LBM、握力法LBM、中臂肌围法LBM有显著相关性。LBM与血清清蛋白、前清蛋白、tibc、nPCR无相关。血清清蛋白与tibc、前清蛋白、血红蛋白有显著相关(P<0.01),与nPCR无相关。结论肌酐指数法、握力指数法与中臂肌围法计算的LBM是反映肌肉蛋白质贮存的有效方法,其中握指数法与中臂臂肌围法比肌酐指数法更优。LBM 是评价血液透析患者营养状况的简便方法,但还需其他反映营养状况指标的补充,如nPCR、前清蛋白、tibc、血红蛋白。

    作者:周东池;潘丽华;朱栋良;金惠敏 刊期: 2016年第09期

  • 血浆置换术治疗1例肝移植术后严重高胆红素血症的疗效评估

    肝移植患者术后并发症多、生存质量较差,随着医学的发展,对术后并发症的控制有望得到提高。移植后患者长期存活主要受抗排斥药物不良反应、术后高胆红素血症、消化道大出血、胆汁淤积性黄疸、凝血功能障碍、原发病复发以及远期胆道并发症等的影响。高胆红素血症是指各种肝病引起的胆红素代谢障碍,血液中胆红素水平明显升高,造成一系列病理生理改变[1]。随着血浆置换技术越来越广泛地应用于临床各领域,尤其在中毒、危重患者及重症肝炎的治疗越来越受到关注。本文报道1例肝移植术后患者应用血浆置换术治疗严重高胆红素血症的临床效果观察。

    作者:吴建君;赵树铭 刊期: 2016年第09期

  • 不同部位胸腔闭式引流治疗自发性气胸观察

    目的:探讨不同部位留置胸腔闭式引流管治疗自发性气胸临床效果,为临床治疗提供参考。方法回顾该院胸外科2008年1月至2014年1月收治的182例自发性气胸患者资料,锁骨中线外侧第2肋间置管引流的患者列为对照组(n=112),腋前线第4、5肋间置管引流的患者列为观察组(n=70)。对比两组患者初次肺复张时间、置管疼痛情况、并发症发生率等临床指标。结果观察组初次肺复张时间、术后引流时间、住院时间分别为(2.89±0.74)d、(4.09±1.24)d、(8.48±2.04)d ,均与对照组相近,差异无统计学意义(P>0.05);观察组术后6 h VAS评分、术后12 h VAS评分、术后24 h VAS评分、曲马多平均用量均低于对照组,差异有统计学意义( P<0.01);观察组并发症发生率为28.57%,与对照组(34.82%)比较,差异无统计学意义(χ2=0.768,P>0.05)。结论不同部位胸腔闭式引流治疗自发性气胸可得到基本相同的引流效果,腋前线第4、5肋间置管引流易操作且损伤小,尤其适用于年轻女性及胸大肌发达患者。

    作者:吴道立;褚文炎;俞达辉;袁冲 刊期: 2016年第09期

  • 封闭负压引流技术联合游离皮片植皮在糖尿病足感染创面的应用研究

    目的:评价封闭负压引流技术(VSD)联合自体游离皮片植皮对于糖尿病足感染创面的治疗效果。方法选择糖尿病足感染需要植皮患者87例,其中对照组患者42例,试验组患者45例。对照组患者给予非VSD治疗,即药物治疗、换药及外科清创;试验组患者在清创的基础上采取VSD治疗。两组患者均待感染创面有肉芽覆盖时,采用邮票状植皮或打包法植皮。比较两组的创面治愈率时间、平均住院时间及平均住院费用等方面的差异。结果对照组与试验组比较,创面愈合时间(48.4±5.2) dvs.(22.5±5.1)d,平均住院时间(40.2±5.2)dvs.(22.8±4.2)d、平均住院费用(33652.8±211.4)元 vs.(24633.1±142.3)元,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 VSD联合游离皮片植皮是治疗糖尿病足感染创面的有效方法,值得临床推广应用。

    作者:耿艳侠;卢思英;刘岩 刊期: 2016年第09期

  • 维生素D对老年2型糖尿病患者胰岛素抵抗影响的研究

    目的:探讨维生素D对老年2型糖尿病(T2DM)患者胰岛素抵抗的影响,为该类患者的临床治疗提供可参考依据。方法共纳入160例该院诊断为T2DM的老年患者作为研究对象,采用随机数字法平均分为观察组与对照组,两组患者均给予常规降糖治疗,观察组同时加用骨化三醇(0.5μg/d ,12周)。所有患者均于治疗前及治疗后空腹抽取静脉血检测血糖相关指标及血清25羟基维生素D3[25-(OH)D3]水平。结果治疗后体质量指数(BMI)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素(Fins)、25-(OH)D3及胰岛素抵抗指数(IRI)均较治疗前有明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗后观察组BMI、FBG、HbA1c、Fins、25-(OH)D3及IRI较对照组改善更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。不同血清25-(OH)D3水平患者补充维生素D后IRI均有明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);血清25-(OH)D3水平低于25 nmol/L的患者同时伴有BMI、FBG、HbA1c、Fins、25-(OH)D3水平的明显改善,差异有统计学意义(P<0.05)。血清25-(OH)D3与BMI、FBG、HbA1c、Fins及IRI存在正相关关系(P<0.05)。结论老年T2DM患者在常规降糖治疗的基础上,补充维生素D可以更好地改善胰岛素抵抗状况,促进患者血糖的平稳。

    作者:汪晓红;李莉 刊期: 2016年第09期

  • 乳腺癌17号染色体异倍体对HER-2表达的影响及临床病理学意义

    目的:探讨乳腺癌17染色体异倍体(多体、单体)对人表皮生长因子受体-2(HER-2)表达的影响及其临床病理学意义。方法收集2013年1~12月,同时采用免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)技术检测 HER-2表达状态的乳腺浸润癌病例,共352例。根据17号染色体多体、单体及HER-2的表达情况分组,对各组患者的临床病理特征进行比较分析。结果17号染色体多体、单体与 H ER-2蛋白表达无相关性( P>0.05);17号染色体多体与 H ER-2基因扩增呈负相关( r=—0.162,P=0.001);17号染色体单体与 HER-2基因扩增呈正相关(r=0.282,P=0.000)。17号染色体多体组与HER-2阴性组比较,组织学分级,脉管瘤栓差异有统计学意义(P<0.05)。17号染色体多体组与 HER-2阳性组比较,组织学分级,脉管瘤栓,Ki-67表达, ER、PR阳性表达差异有统计学意义(P<0.05)。17号染色体单体组与HER-2阴性组比较,PR阳性表达差异有统计学意义(P<0.05)。17号染色体单体组与 HER-2阳性组比较,肿瘤大小差异有统计学意义(P<0.05)。17号染色体多体组与17号染色体单体组比较,脉管瘤栓,PR阳性表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论17号染色体多体、单体与HER-2的蛋白表达无相关性,而与H ER-2基因扩增有相关性。17号染色体多体组具有独特的临床病理特点,可能提示乳腺癌的预后。

    作者:张文进;刘月平;李云涛;吴雅轩;耿翠芝 刊期: 2016年第09期

  • 经后路防滑钢板结合空心钉治疗单髁 Hoffa骨折的疗效分析

    目的:探讨经后路防滑钢板结合空心螺钉治疗单髁Hoffa骨折的疗效,并系统分析Hoffa骨折的损伤机制、临床诊断、治疗方法及临床随访结果。方法回顾性分析2009年3月至2014年4月该院采用抗滑钢板结合空心螺钉治疗9例单髁Hoffa骨折患者的影像学资料和临床资料。结果所有骨折均在术后4个月内愈合。患者平均随访时间为34个月(24~50个月)。7例获得解剖复位,2例获得满意复位。所有患者均未发现复位丧失及固定失败。术后早期发现伤口感染1例,抗感染1周内伤口愈合。随访中发现1例患者发生膝关节僵硬伴疼痛。按 KSSs评分标准,膝关节预后功能优4例,良4例,差1例。结论防滑钢板结合空心螺钉固定 Hoffa骨折可对抗股骨髁承受的强大剪切力,具有固定可靠、可早期负重功能锻炼等优点。

    作者:闵竞;王群波;马坤龙 刊期: 2016年第09期

  • 血浆纤溶酶原与BDNF在抑郁模型大鼠海马区的表达及相关性研究

    目的:探讨血浆纤溶酶原和脑源性神经营养因子(BDNF)与抑郁症的相关性,加深对抑郁症发病分子机制的认识,为抑郁症的诊断和治疗提供新的思路。方法建立慢性轻度不可预见性应激大鼠抑郁模型,检测大鼠快感缺乏,行为活动减少,体质量减轻等抑郁样症状。采用蛋白免疫印迹法分析大鼠海马组织血浆纤溶酶原和BDNF蛋白表达情况。结果血浆纤溶酶原和BDNF在对照组和观察组大鼠海马区表达的差异均有统计学意义(P<0.01)。血浆纤溶酶原与BDNF的变化呈明显正相关(r=0.65,P<0.01),线性回归分析表明二者之间存在明显的依存关系(r2=0.423),回归方程为:YBDNF =0.750X血浆纤溶酶原+0.201。结论应激可影响神经细胞的生长和存活,导致大鼠抑郁样行为的发生。同时检测到血浆纤溶酶原和BD N F的表达下降,BDNF与血浆纤溶酶原的表达呈正相关,提示血浆纤溶酶原和BDNF共同参与抑郁症的发病机制。

    作者:林志雄;殷静雯;冼君定;颜海锋;邹晓波 刊期: 2016年第09期

  • 《重庆医学》开通微信公众平台

    作者: 刊期: 2016年第09期

  • 广东省高校离退休老人幸福度及影响因素分析

    目的:了解广东省高校离退休老人幸福度及其相关影响因素。方法采用多阶段分层整群抽样法,利用纽芬兰纪念大学幸福度量表(MUNSH )和社会人口特征调查问卷对广东省412名60岁及以上离退休老人进行调查,对其幸福度及相关因素进行横断面研究。结果教师组离退休老人正性因子(包括正性情感、正性体验)得分高,管理组离退休老人正性因子的得分较低,两组正性情感因子和负性情感因子得分差异有统计学意义(P<0.05)。居住情况和慢性疾病是影响广东省高校离退休老人主观幸福度的主要因素。结论高校离退休老人主观幸福度受人口社会学特征影响,要提高高校离退休老人的健康水平、改善生活质量和幸福度必须从个人、家庭、社会入手,联合社区保健,以及卫生政策等方面采取有效措施终提高其生活质量和幸福度。

    作者:李贝 刊期: 2016年第09期

  • 藻酸双酯钠对脂多糖所致小鼠肺微血管内皮细胞损伤的保护作用研究

    目的:研究藻酸双酯钠(PSS)对脂多糖(LPS)所致的小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤的保护作用。方法体外培养PMVEC ,随机将细胞分为空白对照组(C组)、LPS刺激组(L组)、PSS+ LPS组(LP组)。采用MTT 法检测 PSS对LPS刺激PMVEC的细胞活力的影响,虎红染色法测定中性粒细胞(PMN)对PMVEC黏附数量的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测3组培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的浓度。结果 PSS能抑制LPS所致的 PM-VEC细胞活力下降(P=0.001);与C组比较,L组的PMVEC与PMN的黏附数量明显增加(P=0.000),TNF-α和ICAM-1的表达显著增加(P=0.000);与L组比较,PSS预处理1 h能显著降低 LPS所致的 PMVEC与 PMN的黏附(P=0.000),LP组的TNF-α和ICAM-1表达显著降低(P<0.05)。结论 PSS能抑制LPS对PMVEC的损伤及PMVEC与PMN的黏附,其作用机制可能与降低ICAM-1和TNF-α的表达有关。

    作者:黄厚刚;史斌;税春玲 刊期: 2016年第09期

  • 广西地区1786例亲子鉴定STR基因位点突变的观察与分析

    目的:观察和分析17个STR基因位点在广西地区亲子鉴定案件中的突变特点。方法1786例“不排除”亲子关系的亲子鉴定案例中,三联体1430例,二联体356例,父母民族为汉族的有1001例,壮族2102例,其他民族113例。通过Chel-ex-100法提取DNA ,采用Power Plex?18D System试剂盒进行17个STR基因位点检测,筛查出含STR基因位点突变的案例,统计各STR基因位点突变的特异性、父源和母源特异性及突变率,分析突变的特点。结果17个被检测的STR基因位点中有16个位点观察到突变,共观察到75次突变,其中一步突变73次(97.34%),二步突变1次(1.33%),三步突变1次(1.33%),T POX点位未观察到突变。突变率为0.0311%~0.4042%,平均突变率约0.1458%。父系来源突变与母系来源突变的比例约5.4:1.0,差异有统计学意义(P<0.01)。汉族和壮族的突变率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 STR基因位点突变是亲子鉴定中较为常见的现象,应不断积累STR基因位点突变数据,选择其符合广西人群的遗传特点,及具有高鉴别能力的STR基因位点的遗传标记,以保证鉴定结果的准确可靠。

    作者:何保仁;申卫东;刘学军;周燕;莫秋红;吴国光 刊期: 2016年第09期

重庆医学杂志

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主管:重庆市卫生和计划生育委员会

主办:重庆市卫生信息中心,重庆市医学会