学术投稿

体外培养表达人β-NGF基因的猫角膜内皮细胞

李东侃;黄维艺;张悦;侯家敏

关键词:人β-NGF, 转基因, 角膜内皮细胞
摘要:目的:体外培养表达人β-神经生长因子基因(β-nervegrowth factor,β-NGF)的工程化猫角膜内皮细胞,为进一步猫角膜内皮细胞的移植做准备.方法:将人β-NGF重组真核表达载体pcDNA4-β-NGF,通过EffeeteneTM脂质体介导转染到体外培养的猫角膜内皮细胞中,选择性培养基筛选转基因后细胞,人NGF单克隆抗体行细胞免疫组织化学染色(immunohistochemistry).结果:选择性培养基培养2wk后筛选出独立细胞克隆,该细胞高表达人β-NGF基因.结论:转基因方法可体外培养出表达人β-NGF基因的工程化猫角膜内皮细胞.
国际眼科杂志相关文献
  • 局部抗青光眼药物治疗导致眼表毒性反应误诊临床分析

    目的:分析局部抗青光眼药物对眼表的毒性作用.方法:回顾性分析12例青光眼患者局部抗青光眼药物治疗诱导的局部不良反应.结果:12例青光眼患者均使用2种以上局部抗青光眼药物≥0.5a,出现眼部刺激症状,眼球充血、角膜点状染色,给予至少1种抗生素、1种抗病毒眼药水,和抗过敏眼药点眼,病情加重.停用所有眼局部用药后,眼部表现缓解、消失.结论:长期抗青光眼治疗,出现眼表疾病,或眼表疾病控制不满意、加重时均应考虑药物毒性的发生;局部抗青光眼药物导致的结膜和角膜改变是可逆的.

    作者:卢艳 刊期: 2008年第12期

  • 曲安奈德玻璃体腔注射治疗视网膜分支静脉阻塞继发黄斑水肿

    目的:观察玻璃体腔注射曲安奈德(tviamcinolone ace-tonide,TA)治疗视网膜分支静脉阻塞(branch retinal veinoccusion,BRVO)继发黄斑水肿的疗效.方法:经眼底榆查、荧光眼底血管造影(FFA)、光学相干断层扫描(OCT)检查确诊的BRVO继发黄斑水肿22例(22眼)行玻璃体腔曲安奈德注射,治疗后随访(4.2±0.4)mo,对比治疗前及治疗后1,3mo视力、眼压、眼底、FFA表现、OCT所显示黄斑水肿高度以及黄斑中心凹阈值.结果:治疗的22眼中19眼(82%)视力明显提高,3眼(14%)视力不变,治疗前平均视力0.10±0.06,治疗后1,3mo平均视力分别为0.25±0.12、0.28±0.13,黄斑中心凹厚度(OCT)治疗前平均厚度(519.0±137.5)μm,治疗后1,3mo平均厚度分别为(256.4±68.3)μm、(239.4±52.2)μm,黄斑中心凹阈值(dB):治疗前(18.8±4.2)dB,治疗后1,3mo分别为(24.0±6.0)dB、(24.6±5.2)dB,治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.01).22眼中有6眼(27%)治疗后暂时性眼压升高,经局部抗青光眼药物治疗后恢复正常.5例(23%)患者2次注药.结论:玻璃体腔注射TA在短期内可有效改善BRVO继发黄斑水肿,但也要注意对原发病治疗.

    作者:吴航;刘大川;郭丽;杨慧清 刊期: 2008年第12期

  • 西藏地区角膜病200例临床分析

    目的:探讨西藏地区的角膜病发病情况及特点.方法:收集2006-08/2008-08我院治疗的各种角膜病患者共200例进行整理和分析.结果:发现感染性角膜病主要以细菌性角膜炎多、占59.0%,其次单疱病毒性角膜炎占34.5%、角膜变性4.0%、真菌性角膜溃疡1.5%、角膜化学伤和角膜热烫伤仅占1.0%.细菌性角膜炎农村高于城市,两者比较有显著差(P<0.05).单疱病毒性角膜炎汉族明显多于藏族,两者有非常显著性差异(P<0.01),和以往的单疱病毒性角膜炎和种族无关的观点有所不同.真菌性角膜溃疡3例占1.5%,而存过去10a里尚未见过.结论:西藏感染性角膜炎以细菌性角膜炎多,这和当地的医疗条件落后和健康意识淡薄有关.单纯疱疹性角膜炎藏族发病率明显低于汉族,这和以往的观点不同,有待进一步的基因学研究.而真菌性角膜溃疡患病率有逐渐上升趋势,值得引起重视.

    作者:杨真龙;李培红;贾卉 刊期: 2008年第12期

  • 农村小学生性别与近视患病率的调查分析

    目的:凋查并分析1-5年级学生的近视患病率以及各年级男女学生之间的近视患病情况.方法:共调查天祝和永登两县1~5年级学生45414名,调查项目包括性别、年级和学生左右视力.结果:总的趋势是年级越高,学生的视力越低,3~5年级学生中,女生的近视患病率要明显高于男生,两者之间有显著性差异(P<0.05),而1~2年级学生中近视患病率没有性别差异.结论:长时间学习是学生近视的主要发病因素,女生的视力更容易受其影响.

    作者:司宏宗;格鹏飞;任晓岚;Park Albert 刊期: 2008年第12期

  • 玻璃体腔注射Bevacizumab治疗病理性近视眼黄斑脉络膜新生血管

    0 引言继发于病理性近视眼的黄斑部脉络膜新生血管(CNV)是中青年视力丧失的主要原因,其发生率大约占病理性近视眼的5%~10%[1],遗憾的是既往由于缺乏有效治疗手段,该类患者往往得不到针对性治疗.

    作者:高磊;东长霞;于华军;陈宁 刊期: 2008年第12期

  • 神经短肽NAP在缺氧环境中对体外小鼠Müller细胞的保护作用

    目的:观察神经短肽NAP对小鼠Mtiller细胞在缺氧环境中的保护作用.方法:用重组腺相关病毒作为载体,将含NT4-NAP融合基因的rAAV-NAP和含报告基因的rAAV-GFP对体外培养的小鼠Müller细胞进行感染,用MTT法和流式细胞仪检测感染细胞和未感染细胞在缺氧24h时的增殖活性和凋亡率.结果:感染rAAV-GFP的小鼠Müller细胞表达出明显的绿色荧光,缺氧24h时,感染rAAV-NAP的细胞与未感染细胞相比,增殖活性高(A=0.109,P<0.05).两组细胞凋亡率分别为8.13%和18.72%,感染有NAP细胞的凋亡率显著低于正常细胞(P<0.05).结论:神经短肽NAP可以减轻缺氧对Müller的损害.

    作者:郑玉萍;余华宁;冯朝晖;张璐琰;王肖华;熊全臣 刊期: 2008年第12期

  • 眼底荧光造影、眼科B超对脉络膜黑色素瘤的诊断应用

    目的:探讨荧光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiog-raphy,FFA),眼科B超的影像学特征对脉络膜黑色素瘤的诊断帮助.方法:2005/2008年取FFA、眼B超诊断为脉络膜黑色素瘤的患者11例,并对脉络膜黑色素瘤疾病的不同检查影像结果进行对比分析.结果:FFA肿瘤早期无荧光显影,晚期荧光增多,呈现斑驳样高低荧光混杂的斑驳形态;B超:多自球壁凸向玻璃体腔的实性肿物,多呈蘑菇形、圆顶形的均质结构,肿瘤内可见挖空现象及脉络膜凹陷.结论:在临床中,FFA和眼科B超检查应相互结合,相互补充,FFA和B超检查可清晰显示病变部位及发展过程,可用于指导临床治疗.

    作者:李婷;加米拉 刊期: 2008年第12期

  • 视网膜母细胞瘤的病理改变与预后

    从病理学角度对视网膜母细胞瘤的光镜、电镜、免疫组织化学和分子遗传学等方面简要阐述,并将这些病变特征与预后之间关系逐一分析,提出可能影响视网膜母细胞瘤患者生存时间的因素.

    作者:卢颖;肖利华;李光 刊期: 2008年第12期

  • SD大鼠暗视阈值反应波形记录的特征

    目的:研究SD大鼠暗视阈值反应(scotopic threshold re-sponse,STR)的特点.方法:SD大鼠21只,随机分成3组,每组7只,完全暗适应12h,麻醉后采用RETI-port系统(Roland Consult,德国)分别记录不同通频带(0.1~50,0.1~100,0.1~300,1~50,5~50Hz),不同刺激频率(0.25,0.50,0.75,1,2Hz),不同闪光强度(-6.3,-6.0,-5.7,-5.4log(ed·s)/m2)下的STR.结果:本实验条件下可以记录到稳定的STR,分为正向的pSTR和负向的nSTR.通频带对STR有影响,随着高频段的增大,附加在波形上的杂波比较多,pSTR和nSTR潜伏期和振幅变化不明显.随着低频段升高,nSTR逐渐消失,尤其是低频段达到5Hz时,振幅有显著差异(P<0.05).刺激频率小于1.0Hz时,pSTR和nSTR波形比较稳定,而且nSTR振幅和潜伏期没有明显差异.当刺激频率大于2Hz时,负向波消失,并且正向波振幅明显升高(P<0.05).随着刺激光强的增加,pSTR振幅增大,尤其是在光强为-5.7,5.4log(ed·s)/m2时,振幅有显著差异(P<0.05),nSTR逐渐平坦消失,未见a波.结论:sD大鼠STR波形记录与刺激和记录参数密切相关,在完全暗适应条件下,低光强刺激(-6.3和-6.0 l0g(cd·s)/m2)、低通带(0.1~50Hz)、适当刺激频率(<1Hz)下可以记录到完整的稳定的STR波形.

    作者:刘兰涛;郭群;夏峰;张作明 刊期: 2008年第12期

  • 盐酸奥布卡因表面麻醉剂在斜视矫正术中的应用

    目的:探讨盐酸奥布卡因滴眼液表面麻醉下行斜视矫正术的临床麻醉效果.方法:对118例斜视患者术前滴盐酸奥布卡因滴眼液5次,常规行斜视矫正术.结果:Ⅰ级麻醉效果83例(70.3%),Ⅱ级麻醉效果34例(28.8%),因眼胃反射终止手术1例.结论:盐酸奥布卡因表面麻醉下行斜视矫正术安全、有效、并发症少,简单易行.

    作者:肖紫云;李红艳;李家璋;李拓 刊期: 2008年第12期

  • 17-AAG对人RPE细胞PDGFR和EGFR基因表达的调控

    目的:通过检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中PDGFR和EGFR基因表达的调控.方法:体外培养人RPE细胞株.当加入17-AAG并作用0,2,5,10μmol/L及0,16,24,48h后,收集细胞,抽提RNA进行反转录.同时根据PDGFR、EGFR的基因序列,设计PDGFR、EGFR的引物,利用ABI 7300PCR仪和SYBRGreen,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct值进行基因表达的相对定量分析.结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,17-AAG可以下调PDGFR基因的表达(P<0.05),上调EGFR基因表达(P<0.05).结论:SYBR Green实时荧光PCR可特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件.

    作者:许志洋;姚家奇;刘庆淮;李建民;王强 刊期: 2008年第12期

  • 内皮抑素对培养的血管内皮细胞增殖的影响

    目的:探讨血管生成抑制因子内皮抑素(endostatin,ES)对培养的血管内皮细胞增殖的影响,以获得佳作用浓度、作用时间及佳条件.方法:将培养ECV304细胞分别培养在含倍比稀释的ES培养液中,其中培养液分为有无血清和VEGF无血清组,在不同的作用时间(24,48h及72h),应用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法测定ES对ECV304细胞增殖的影响.结果:ES可显著抑制各种条件下ECV304细胞的增殖,以无血清条件下抑制作用达到大,ES作用于ECV304细胞的佳作用敏感时间区为24~48h,佳作用浓度敏感区为157~2500mg/L.结论:ES对各种条件下ECV304细胞增殖有明显抑制作用,但未发现诱导内皮细胞凋亡.

    作者:杨获;张美霞;张军军;严密 刊期: 2008年第12期

  • 视网膜新生血管形成过程中VEGF对TGF-β表达的影响—生长因子冗余性的初步探索

    目的:研究早产儿视网膜病变新生血管形成过程中VEGF对TGF-β表达的影响.方法:体外培养人视网膜血管内皮细胞(HRCECs),分别转染重组腺相关VEGF病毒和VEGF的RNA干扰质粒到HRCECs,增高和抑制VEGF的表达,通过二氯化钻诱导HRCECs缺氧,观察TGF-β在不同VEGF水平下的mRNA表达变化,同时观察HRCECs增殖的变化.结果:高表达VEGF组(C组),低表达VEGF组(D组),阴性对照组(E组),阳性对照组(F组)的VEGF/actin分别为:1.15±0.77,0.36±0.31,0.28±0.16,0.83±0.72;而TGF-β/actin为:0.55±0.39,0.92±0.57,0.18±0.07,0.70±0.45,当VEGF高表达,TGF-β的mRNA表达下调;在VEGF低表达时,TGF-β的mRNA表达上调.结论:TGF-β能部分代偿VEGF的功能,视网膜新生血管形成过程中生长因子具有冗余性.

    作者:李斌;李贵刚;向艳;徐玲娟 刊期: 2008年第12期

  • 糖尿病早期大鼠视神经的变化以及脑源性神经营养因子BDNF的治疗作用

    目的:观察糖尿病大鼠早期视神经轴突纤维形态和数量变化以及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophicfactor,BDNF)对糖尿病视神经的保护作用.方法:雄性Wistar大鼠腹腔注射STZ建立糖尿病模型,模型建立2wk后开始玻璃体腔注射BDNF,lmo后灌注处死大鼠,取眼球及球后视神经6~8mm,电镜方法包埋,制作半薄切片,甲苯胺蓝染色,光镜观察视神经形态,同时图像分析和轴突纤维计数.结果:糖尿病组与对照组相比,视神经轴突排列紊乱,数量明显减少,间质增多,BDNF治疗组与糖尿病组相比形态和数量有明显改善;轴突数量和神经纤维密度3组之间两两比较均有显著差异(P<0.01).结论:糖尿病大鼠早期视神经纤维结构明显损害,数量明显减少,BDNF对糖尿病性视神经损害有保护作用.

    作者:卢艳;张婧;孙异临;王蓉;李林 刊期: 2008年第12期

  • 以眼内炎为首发症状的弥漫浸润型视网膜母细胞瘤1例

    弥漫浸润型视网膜母细胞瘤是视网膜母细胞瘤中一种少见的病理类型,发病率约为视网膜母细胞瘤的1%~2%,通常会由于检查不到明显的肿块而误诊为内源性眼内炎,本文报道1例以眼内炎为首发症状的弥漫浸润型视网膜母细胞瘤,并对其组织病理进行探讨.

    作者:董凯;何为民;Darius M.Moshfeghi;徐筑萍 刊期: 2008年第12期

  • 自发性结膜下出血患者泪液及眼表改变的临床观察

    目的:观察自发性结膜下出血患者的泪液及眼表改变.方法:本研究包括在眼科门诊无明显诱因结膜下出血患者110例(119眼),其中男54例.针对每位患者完成一份干眼症状调查问卷,进行测量泪液分泌量、泪膜破裂时间、观察角结膜荧光染色状态,进行描述性统计分析.结果:在110例患者中不同程度干眼的发生率达93.6%,符合日本干眼诊断标准的患者为81例(73.6%).在自发性结膜下出血119眼中,泪液分泌量≤5mm为35眼,5~10mm为47眼,共计68.9%;泪膜破裂时间≤5s为53眼,5~10s为38眼,共计76.5%.眼表荧光染色轻度异常24眼,中度异常48眼,重度异常35眼,共计89.9%.结论:自发性结膜下出血往往伴随不同程度的干眼,应引起临床关注.

    作者:王海瑛;皇甫晓瑾;李若溪 刊期: 2008年第12期

  • 囊腔植管术用于泪囊鼻腔吻合失败病例的治疗

    0 引言泪囊鼻腔吻合术是治疗慢性泪囊炎的经典术式,但因技术原因或其它因素失败者多见,而手术后复发的病例再手术又是一难点.我科2005年至今有5例泪囊鼻腔吻合手术失败而进行囊腔置管术,术后效果良好,报告如下.

    作者:李宏科;姚强;张洪勋 刊期: 2008年第12期

  • 结缔组织生长因子与后发性白内障的研究进展

    后发性白内障(又称后囊膜混浊)已成为白内障术后视力再度下降,影响术后远期视力恢复的突出问题,主要是由于残留的晶状体上皮细胞向后囊膜移行、增殖形成.结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是近年来倍受关注的促纤维化细胞因子.本文对近年来CTGF与后发性白内障关系的研究进展综述如下.

    作者:卜文娟;徐国兴 刊期: 2008年第12期

  • 儿童春季卡他性角结膜炎与干眼症相关性分析

    目的:探讨春季卡他性角结膜炎患儿的泪膜功能,并分析其与儿童干眼症发生的相关性.方法:取临床诊断为春季卡他性角结膜炎的86例患儿作为观察组,取年龄与之匹配的正常儿童86例作为对照组,分别做基础泪液分泌试验(sehirmer Itest)、泪膜破裂时间(BUT)、角膜荧光素(FL)染色检查.结果:儿童春季卡他性角结膜炎常合并干眼症的相关症状:瞬目次数增加(33%),干涩感(14%),烧灼感(10%).观察组泪膜功能相关检查:双眼泪液分泌试验均低于对照组(P=0.01),双眼泪膜破裂时间短于对照组(P<0.01),双眼角膜荧光素染色评分高于对照组(P<0.01).泪膜功能改变与疾病严重程度有关,与病程、亚型分类无关.结论:春季卡他性角结膜炎患儿泪膜功能发生改变,是干眼症的易患人群.

    作者:王婷婷;徐国兴 刊期: 2008年第12期

  • 上海市区学龄前儿童屈光异常852例分析

    目的:了解上海市区部分学龄前儿童屈光的异常状态及视力矫正情况.方法:视力异常学龄前儿童852例(1 615眼)作散瞳验光检查,并对检查结果进行分析探讨.结果:单纯近视443眼(27.43%),复性近视散光255眼(15.79%),单纯远视287眼(17.77%),复性远视散光347眼(21.49%),混合性散光283眼(17.52%).随着年龄的增长,就诊的学龄前近视患者逐渐增多;父母近视对学龄前儿童近视发生率的增加有影响;屈光不正大都以轻中度为主(82.43%),视力大多(80.40%)是可以矫正的.结论:学龄前儿童近视和近视散光的发生率有明显增加的趋势.

    作者:朱煌;赵立全;田琳璐;沈亚;王亚夫;冯婕妤;华飞 刊期: 2008年第12期

国际眼科杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:中华医学会西安分会