学术投稿

多重PCR-反向线点杂交技术在检测女性念珠菌和阴道毛滴虫感染中的应用

向华国;熊礼宽;樊超;黄玉佳;赵良玉

关键词:聚合酶链反应, 核酸杂交, 阴道毛滴虫, 念珠菌, 寡核苷核探针
摘要:目的 建立和评价多重PCR-反向线点杂交技术(mPCR-RLB)快速同时检测阴道毛滴虫和念珠菌感染的方法.方法 分别选择阴道毛滴虫特异性DNA重复序列设计一对特异性引物,以念珠菌属28s rRNA 至5.8s rRNA间隔序列Ⅱ(ITS2)为靶基因设计一对检测念珠菌的通用引物,构建二重PCR同时扩增阴道毛滴虫、白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念球菌、近平滑念珠菌、都柏林念株菌DNA,然后与通过氨基标记固定在尼龙膜上的各特异性寡核苷核探针杂交,并对女性阴道试子标本进行检测.结果 多重PCR可同时扩增阴道毛滴虫、白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念球菌、近平滑念珠菌、都柏林念株菌临床或标准菌株DNA,上述念珠菌标准菌株可扩增出302~441bp DNA片段,阴道毛滴虫临床株可扩增出262bp DNA片段.6种念珠菌和阴道毛滴虫的特异性寡核苷酸探针可分别与其相应的PCR产物杂交.通过对150例女性阴道试子进行检测,mPCR-RLB检测念珠菌的阳性率为47.33%,阴道毛滴虫的阳性率为6.67%,二者同时阳性率为1.33%.而培养法检测念珠菌阳性率为36.00%,阴道毛滴虫的阳性率为2.00%,二者同时阳性率为0.67%.明显高于培养法(P<0.05).结论 多重PCR-RLB可快速同时检测念珠菌和阴道毛滴虫,为女性阴道炎的临床诊断提供了一种可靠的方法.
中国皮肤性病学杂志相关文献
  • 瘢痕疙瘩发病诱因及相关因素分析

    目的 探讨瘢痕疙瘩的发病诱因及相关影响因素,为治疗及预防提供依据.方法 于2006年8月~2008年4月对本科门诊的瘢痕疙瘩患者进行问卷调查和皮肤科专科体检,根据皮损的部位、形态、数目和对称性将瘢痕疙瘩分为五个临床类型,采用SPSS 13.0软件对相关数据进行统计学分析.结果 154例瘢痕疙瘩患者发病的主要诱因为痤疮(48.70%)、毛囊炎(35.71%)、手术(10.39%)、外伤(9 74%)、搔抓(9.09%)、疫苗接种(7.14%)和烫伤(2.60%).胸背下颌多发型男女比为3.67∶1,发病高峰年龄为11~20岁,87.50%由痤疮诱发;胸部单发型患者几乎各年龄组均有发生,54.90%由毛囊炎诱发,23.53%为搔抓所致;四肢多发型患者发病年龄小,四肢多发型加混合型患者家族性患病率为66.67%,皮肤损伤后易形成瘢痕疙瘩皮损.胸外单发型患者几乎各年龄组均有发生,手术居其发病诱因的首位.结论 瘢痕疙瘩的临床类型不同,其发病诱因及相关影响因素亦不同.

    作者:赵庆利;冯燕君;杨庆琪;蔡瑞康 刊期: 2009年第08期

  • 口服特比萘芬治疗甲真菌病83例疗效观察

    目的 了解特比萘芬治疗甲真菌病的疗效和安全性. 方法 将2005年5月~2008年10月就诊的159例甲真菌病随机分为两组,治疗组83例,口服特比萘芬250mg,1次/d,连续服药;对照组76例口服伊曲康唑200mg,2次/d,冲击治疗,连用 1周 ,停药 3周为1个疗程 ,共3~ 4个疗程.结果 治疗组和对照组停药时痊愈率分别为63.86%和50.00%,有效率分别为83.13%和69.74% ,真菌学痊愈率分别为79.52%和65.79%;停药后16周痊愈率分别为84.34%和75.00%,有效率分别为97.60%和94.74% ,真菌学痊愈率分别为93.98%和88.16%.不良反应发生率分别为9.64%和9.2%.两组在停药时及停药后16周痊愈率、有效率和真菌学治愈率,差异均无显著意义 (P均>0.0 5);不良反应发生率差异也无显著性意义(P>0.0 5).结论 特比萘芬治疗甲真菌病疗效好 ,安全性高 .

    作者:王新华 刊期: 2009年第08期

  • 星形奴卡菌性足菌肿1例

    患者女,40岁.左足背被田间竹枝戳伤后出现结节、肿块,部分破溃伴少量溢脓,逐渐加重8年.皮损组织病理示:真皮组织中见散在分布放射状结构的杵状体,周围有大量中性粒细胞、淋巴细胞及组织细胞浸润.深部组织真菌镜检和培养均(-),深部组织脓液培养见菌落生长,菌种鉴定为星形奴卡菌.诊断:星形奴卡菌性足菌肿.予复方磺胺甲恶唑、青霉素G和阿米卡星联合治疗,局部清创处理后好转.

    作者:陈欣玥;刘玲;张韡 刊期: 2009年第08期

  • 成人斯蒂尔病1例

    患者女, 69岁.右侧面部红斑、水疱后疼痛14个月,反复发热、关节痛1年,全身散在分布皮疹5月.体检:面部片状暗红斑,上覆暗红色和黄色痂皮,痂皮下可见点状溃疡和脓性分泌物;背部及双侧上肢散在分布10余个约1.0cm×1.5cm大萎缩性斑块,表面有少许痂屑,部分挤压后有少许脓液;右侧肘部可见淡红色斑块,内侧有一直径约0.5cm的厚壁水疱,疱液稠.实验室检查:血白细胞、中性粒细胞均升高,血清铁蛋白增高,类风湿因子、抗核抗体阴性,抗生素治疗无效.皮损组织病理示:真皮浅层及血管壁部分淋巴细胞、中性粒细胞浸润,淋巴结活检呈反应性增生改变.诊断: 成人斯蒂尔病.

    作者:成先桂;林泉;谢方明;杨建均 刊期: 2009年第08期

  • 梅毒194例夫妻间发病情况分析

    目的 了解梅毒在夫妻间的发病情况,探讨近年来梅毒发病率不断升高的原因.方法 对194例首诊为梅毒的患者及其配偶的临床资料进行分析.结果 有114对夫妻同患梅毒,占58.76%.其中男性首诊患者49例,主要为一期梅毒,女性首诊患者65例,主要为二期梅毒,另有4例妊娠梅毒.114对夫妻同患梅毒的患者中,在一方首诊为梅毒后,有86例的配偶同时追访被诊断为梅毒,其余28例在1~2个月后才被确诊.配偶被追访而诊断的梅毒患者中主要为潜伏梅毒,占69.30%(79/114).结论 夫妻同患梅毒比例较高,潜伏梅毒发生率较高,提高性伴通知确切性和孕前梅毒筛查是降低梅毒发生和提高生殖健康水平必要和有效的方法.

    作者:权哲;梅莉红;干慧慧;王红枫;曾义斌;方芳;翁孟武 刊期: 2009年第08期

  • 芳维A酸氨丁三醇对HaCaT细胞分化的影响

    目的 观察芳维A酸氨丁三醇作用于无血清培养的HaCaT细胞后,细胞内分化相关基因TGase1表达的变化,探讨其剂量-时间曲线,并比较芳维A酸氨丁三醇与依曲替酸对HaCaT分化的影响. 方法将不同浓度的芳维A酸氨丁三醇和依曲替酸 (0.001~1.0μm/L )分别加入无血清培养的HaCaT细胞培养液中,在添加芳维A酸氨丁三醇6h、12h和24h后分别回收总RNA ,逆转录PCR(RT-PCR)法检测HaCaT细胞分化的特异性标记基因TGase1 mRNA的表达情况;芳维A酸氨丁三醇和依曲替酸分别在孵育24h后回收总RNA, 用RT-PCR法检测TGase1 mRNA的表达,比较这两种药物对HaCaT细胞分化的差异.结果 0.001~1.0μm/L浓度的芳维A酸氨丁三醇作用于HaCaT细胞6h、12h和24h后能显著促进HaCaT细胞内分化基因TGase1 mRNA表达,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05).芳维A酸氨丁三醇及依曲替酸都可促进TGase1 mRNA表达,且TGase1 mRNA的表达呈剂量依赖性,这两种药物的剂量曲线非常相似,其促进TGase1 mRNA表达程度比较,差异无显著性意义( P>0.05).结论 芳维A酸氨丁三醇能显著促进HaCaT细胞内分化基因TGase1 mRNA的表达,且呈时间和剂量依赖性,其促进HaCaT细胞分化的作用与依曲替酸的效果类同.

    作者:陈洁;顾军;李斌 刊期: 2009年第08期

  • 兰州地区儿童浅部真菌病及其病原菌构成分析

    目的 了解兰州地区儿童浅部真菌病的发病情况及病原菌的分布特点.方法 对临床拟诊为浅部真菌病的患儿(年龄≤14岁)进行真菌学镜检、培养及分离鉴定.详细登记患儿的相关临床资料,分析儿童浅部真菌病的发病特点.结果 临床拟诊为儿童浅部真菌病的314例患儿,真菌镜检阳性282(89.80%)例,其中头癣186(65.95%)例,体癣84(29.78%)例,足癣6(2.12%)例,股癣3(1.06%)例,甲真菌病3(1.06%)例;培养分离菌株201株,犬小孢子菌190(94.52%)株,红色毛癣菌6(2.98%)株,石膏样小孢子菌1(0.49%)株,念珠菌4(1.99%)株.结论 兰州地区儿童浅部真菌病中头癣病居首位,致病菌以亲动物性的犬小孢子菌为主.

    作者:康潇潇;骆志成;李军友;牛桃香;周晓黎 刊期: 2009年第08期

  • 5α-还原酶对雄激素诱发痤疮的研究进展

    雄激素可以促进皮脂腺生长和脂质合成.5α-还原酶通过将雄激素睾酮转变为活性更强的双氢睾酮,进一步促进皮脂腺分泌皮脂,在痤疮的发病中具有重要作用.本文就雄激素与痤疮的相关研究的进展进行综述,主要包括雄激素在皮肤代谢的途径及5α-还原酶在该生理过程中的作用等.

    作者:丁薇;邹大进 刊期: 2009年第08期

  • 嗜酸性脓疱性毛囊炎1例

    患者男,22岁.面部红斑、丘疹和脓疱,伴脱屑3月余.面部可见数个红色或暗红色斑块和丘疹,顶部可见针尖大脓疱,伴破溃.血常规正常.皮损组织病理示:表皮角化过度、棘层轻度增厚.毛囊及真皮内可见大量以嗜酸性粒细胞为主的炎性细胞浸润,毛囊内见嗜酸性脓肿.

    作者:宋维芳;陈胜平;刘向农 刊期: 2009年第08期

  • 复发与未复发女性尖锐湿疣患者Th1/Th2细胞因子检测

    目的 观察复发与未复发女性生殖器尖锐湿疣(CA)患者外周血Th1/Th2细胞因子水平,探讨CA复发与Th1/Th2细胞因子的相关性.方法 选取女性生殖器CA初发患者37例,经电灼治疗后随访3个月(期间不使用任何免疫制剂),再次复发者计入A组(15例),未复发者计入B组(22例).用ELISA法测定电灼治疗前各组血清标本的细胞因子IL-2、IL-12、IL-4和IL-10的浓度,比较A,B两组血清细胞因子及Th1/Th2比值的差异,分析CA复发与Th1/Th2细胞因子水平的相关性.结果 A组治疗前的血清IL-2,IL-12,IL-4,IL-10分别为65.86±20.31,21.09±5.84,98.31±10.95,25.87±9.24,B组分别为82.81±27.24,25.74±10.63,89.02±13.80,25.62±9.84;用Th1/Th2比值来预测CA不复发的敏感性为86.4%,特异性为80.0%,ROC曲线下面积为0.812.结论 CA复发与否与患者血清Th1/Th2细胞因子水平呈负相关, 以Th1/Th2比值预测CA复发与否有较高的敏感性和特异性,Th1/Th2比值可作为评价CA复发与否的一个参考指标.

    作者:涂权梅;吕杰强;陈小鸣;杨安素;邱海凡 刊期: 2009年第08期

  • hTERT基因永生化人毛乳头细胞系的生物学特征

    目的 研究hTERT基因永生化人毛乳头细胞(DPC)系的生物学特征.方法 采用脂质体转染法,将hTERT基因导入体外培养的正常人DPC,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养.检测转染细胞内hTERT mRNA的表达,并分析转染细胞的生物学特征.结果 转染后获得1个阳性细胞克隆,扩大培养后细胞生长良好,现已连续传至65代.检测证实转染细胞稳定表达hTERT mRNA,且此转染细胞具有体外培养正常DPC的生物学特征.结论 hTERT基因永生化人DPC系保持了正常DPC的生物学特征.

    作者:刘官智;伍津津;朱堂友 刊期: 2009年第08期

  • 骨化三醇对角质形成细胞作用机制的差异蛋白质组学研究

    目的 研究骨化三醇对角质形成细胞蛋白质表达的影响,寻找骨化三醇作用的靶蛋白.方法 常规培养HaCaT细胞、药物诱导,避光培养48h后用反复冻融法提取细胞全蛋白.将提取的蛋白样品采用固相pH梯度双向凝胶电泳进行分离,应用ImageMaster 2D Platinum 5.0软件对图像进行匹配分析,选取各组中有重叠的药物作用前后浓度改变的10个蛋白质点,经基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行质谱鉴定.结果 成功获得HaCaT细胞的蛋白质组电泳图谱,图像重复性好.药物作用后蛋白质表达有明显变化,以抑制为主.共鉴定出四种蛋白质,其中一种为卵清蛋白样丝氨酸蛋白酶抑制剂1(MNE1).结论 成功建立了HaCaT细胞蛋白质二维展示平台.MNE1是骨化三醇的治疗机制中的靶蛋白之一.

    作者:李慧;顾军;张春华;孙青菊;郭志丽;毕新岭 刊期: 2009年第08期

  • 克银丸联合NB-UVB治疗寻常性银屑病疗效观察

    目的 观察克银丸联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗寻常性银屑病的疗效.方法 将2005年6月~2007年5月就诊的68例寻常性银屑病患者随机分为两组,治疗组36例,口服克银丸10g/次,2次/d,联合UVB照射;对照组32例单用UVB照射,观察两组的疗效和安全性.结果 治疗组临床有效率、PASI评分改善程度均明显优于对照组(P均<0.05),且无严重不良反应发生,仅治疗组有3例AST和ALT轻度升高.结论 克银丸联合NB-UVB治疗寻常性银屑病疗效好,但临床应用时需监测肝功能.

    作者:吕萍 刊期: 2009年第08期

  • 毛囊粘蛋白病1例

    患者男,21岁.头部浸润性斑块伴脱发8年.组织病理示毛囊周围可见粘蛋白样物质沉积,甲苯胺蓝染色呈紫红色.诊断:毛囊粘蛋白病.

    作者:吴娜;郑焱;王俊民;肖生祥;郗彦萍 刊期: 2009年第08期

  • 梅毒患者血清对HIV明胶颗粒凝集试验的影响

    目的 了解梅毒患者血清对艾滋病病毒(HIV)明胶颗粒凝集试验(PA)的影响.方法 收集用甲苯胺红不加热试剂(TRUST)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试剂(TPPA)确认为梅毒的患者血清225份和性病门诊非梅毒人群血清95份,同时用艾滋病病毒(HIV)明胶颗粒凝集试剂(PA)和两种不同厂家的酶联免疫吸附试剂(ELISA)筛查其艾滋病病毒抗体.结果 第1次检测的225份梅毒患者血清中,37份HIV 1/2-PA致敏颗粒和非致敏颗粒都凝集;10份HIV 1/2-PA非致敏颗粒凝集,致敏颗粒孔未凝集;5份致敏颗粒凝集,呈弱阳性,非致敏颗粒未凝集,其它173份血清HIV1/2-PA检测结果都为阴性.对52份标本进行第2次复检,5份第1次检测致敏颗粒凝集的标本结果均为阴性,非致敏颗粒未凝集;其他标本检测结果与第1次一致.两种ELISA试剂检测结果均为阴性.对照组95份标本HIV 1/2抗体检测结果均为阴性.结论 梅毒患者血清用PA法检测HIV抗体时有干扰现象.

    作者:符克英;钟娜;张丽芬;蔡俊宏 刊期: 2009年第08期

  • 结节性胶样粟丘疹2例

    例1女,39岁,右额角可见蚕豆大的淡黄色结节,周边散在分布绿豆大丘疹4年;例2女,41岁,左颊部可见一1.5cm×2.5cm大淡红色斑块,表面覆少许鳞屑.该2例均日晒后皮损加重,但无疼痛和瘙痒.皮损组织病理:例1示真皮上层胶原组织增生,可见嗜伊红色无结构均质性胶样物质,其间有裂隙;例2示表皮大致正常,真皮内可见大量粉红色均质性物质胶样团块,轻度嗜伊红改变,其间可见裂隙.2例结晶紫染色均(-).

    作者:黄萌;陈柳青;姜一化;段逸群 刊期: 2009年第08期

  • 多重PCR-反向线点杂交技术在检测女性念珠菌和阴道毛滴虫感染中的应用

    目的 建立和评价多重PCR-反向线点杂交技术(mPCR-RLB)快速同时检测阴道毛滴虫和念珠菌感染的方法.方法 分别选择阴道毛滴虫特异性DNA重复序列设计一对特异性引物,以念珠菌属28s rRNA 至5.8s rRNA间隔序列Ⅱ(ITS2)为靶基因设计一对检测念珠菌的通用引物,构建二重PCR同时扩增阴道毛滴虫、白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念球菌、近平滑念珠菌、都柏林念株菌DNA,然后与通过氨基标记固定在尼龙膜上的各特异性寡核苷核探针杂交,并对女性阴道试子标本进行检测.结果 多重PCR可同时扩增阴道毛滴虫、白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念球菌、近平滑念珠菌、都柏林念株菌临床或标准菌株DNA,上述念珠菌标准菌株可扩增出302~441bp DNA片段,阴道毛滴虫临床株可扩增出262bp DNA片段.6种念珠菌和阴道毛滴虫的特异性寡核苷酸探针可分别与其相应的PCR产物杂交.通过对150例女性阴道试子进行检测,mPCR-RLB检测念珠菌的阳性率为47.33%,阴道毛滴虫的阳性率为6.67%,二者同时阳性率为1.33%.而培养法检测念珠菌阳性率为36.00%,阴道毛滴虫的阳性率为2.00%,二者同时阳性率为0.67%.明显高于培养法(P<0.05).结论 多重PCR-RLB可快速同时检测念珠菌和阴道毛滴虫,为女性阴道炎的临床诊断提供了一种可靠的方法.

    作者:向华国;熊礼宽;樊超;黄玉佳;赵良玉 刊期: 2009年第08期

  • 多形红斑45例临床分析

    目的 加强临床医生对多形红斑(EM)的认识,提高其治愈率.方法 回顾性分析45例多形红斑患者的临床症状及实验室检查资料.结果 45例均有EM典型临床表现,男∶女发病比为1∶1.5,平均年龄35.74±22.03岁.轻症EM 37 (82.22%)例,重症EM 8 (17.78%)例.其中17例皮损组织病理示基底细胞液化变性空泡改变,真皮浅层淋巴细胞浸润为主.结论 EM是一个病谱病,临床上具有特征性,去除病因,及时控制感染,重症EM早期应用足量、短程糖皮质激素可提高治愈率.

    作者:杨汝斌;刘彤云;刘玲;万屏;何黎 刊期: 2009年第08期

  • 腹壁切口子宫内膜异位症1例

    1 临床资料 患者女,28岁.腹壁切口包块,伴月经期疼痛1年.患者4年前因巨大儿行经腹子宫下段剖宫产术,手术顺利,术后切口甲级愈合.1年前发现腹壁切口上端近脐部出现一枣核样大小包块,质硬,每逢经期包块增大如枣状,触痛明显,月经后疼痛减轻或消失.既往体健.月经正常,无痛经史.家族无类似病史.体检:各系统检查未见异常.皮肤科情况:腹平软,下腹部可见一长约9.0cm的横向瘢痕,瘢痕上端近脐部可扪及一约1.0cm×0.8cm大肿块,表面皮肤呈紫蓝色,边界欠清,活动性差,触痛明显,无波动感.实验室检查:血、尿、粪常规,血沉,胸部X线片均正常.腹部B超示:腹壁内低回声肿块,界清,不规则,无完整包膜,包膜内无明显血流信号.

    作者:王松挺 刊期: 2009年第08期

  • 盐酸布替萘芬软膏治疗浅部真菌病疗效观察

    目的 探讨盐酸布替萘芬软膏治疗浅部真菌病的临床疗效.方法 使用1%盐酸布替萘芬软膏,早、晚各1次薄薄涂于患处,1~4周判断疗效;并以克霉唑软膏作对照.结果 盐酸布替萘芬软膏治疗体股癣痊愈率59.01%,有效率和真菌清除率均95.45%;治疗手足癣痊愈率为44.44%,有效率为92.60%,真菌清除率为88.89%;治疗花斑癣痊愈率为56.25%,有效率为93.75%,真菌清除率93.75%.各病种治疗组与对照组治愈率、有效率及真菌清除率分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 盐酸布替萘芬软膏治疗浅部真菌病安全、有效.

    作者:周培媚;苏晓杰;路永红;向丹黎;陈前明;刘兰;宋丹萍;魏培迪;康红宇;康每 刊期: 2009年第08期

中国皮肤性病学杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:西安交通大学