董蕊；金岩；刘源
目的探讨体外筛选及鉴定人角朊干细胞(KSC)的方法. 方法利用KSC对细胞外基质的快速黏附性,选择不同时间黏附的细胞分为5、20和60分钟3组,并以不进行筛选的细胞作对照组.体外培养扩增后,以KSC的相对特异性标识分子β1整合素、角蛋白19(Ck19)的单克隆抗体,免疫组织化学方法对各组细胞进行鉴定,利用图像分析系统测平均灰度值.并用流式细胞仪、透射电镜对各组细胞进行检测. 结果各组细胞在10～14天均有克隆形成,组间比较5分钟组细胞生长较慢,但形成克隆较大,细胞体积较小.免疫组织化学β1整合素、Ck19在各组都有表达,各组平均灰度值统计学分析显示,β1整合素在5分钟组的表达与另3组间有统计学意义(P<0.05),Ck19的表达在5分钟组与20分钟组间无差异(P>0.05),60分钟组与对照组间差异不显著,而前两组与后两组之间比较有统计学意义(P<0.05).流式细胞仪检测提示5分钟组细胞大部分处于G1期,与其它3组有区别.透射电镜显示5分钟组细胞体小,核浆比大,细胞器不成熟. 结论利用细胞外基质筛选的5分钟组细胞处于幼稚状态,并有强克隆形成能力,符合预期的KSC特点,可利用KSC对细胞外基质的快速黏附性对其纯化筛选,同时利用β1整合素、Ck19的单抗加以鉴定.
作者：董蕊；金岩；刘源 刊期： 2003年第05期
目的探讨自体骨-前交叉韧带(ACL)-骨、同种异体骨-ACL-骨移植的形态学、组织学及超微结构的变化特点. 方法将日本大耳白兔和新西兰兔各60只随机分成自体骨-ACL-骨移植组和二步冷冻保存同种异体骨-ACL-骨移植组,每组分别有两种兔各30只,对照组为自体正常侧ACL.术中及术后均不使用免疫抑制剂.术后4、12周分别切取ACL作大体、组织学和电镜检测. 结果自体移植组重塑型速率要快于二步冷冻保存同种异体骨-ACL-骨移植组.4周时自体移植组和冷冻异体移植组前交叉韧带的胶原纤维中大直径纤维(≥80 nm)分别为6%、24%,小直径纤维(＜80 nm)分别为94%、76%.12周时前交叉韧带的胶原纤维中大直径纤维(≥80 nm)分别为0%、2%,小直径纤维(＜80 nm)分别为100%、98%,电镜下可见自体、冷冻异体移植组重塑过程均相似.光镜下两者有相似的组织学愈合过程. 结论自体骨-ACL-骨移植和二步冷冻保存同种异体骨-ACL-骨移植,具有相似重塑型过程和组织学愈合过程,自体移植组重塑形速率要快于二步冷冻保存同种异体骨-ACL-骨移植组.
作者：张长春；周建生；潘公平；胡汝麒 刊期： 2003年第05期
目的探讨苯丙酸诺龙对烧伤后成纤维细胞α1(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA表达的影响及其作用机制. 方法 Wistar 大鼠32只,制成20%TBSA深Ⅱ度烧伤模型,随机分为苯丙酸诺龙治疗(NP)组和对照组,于4、7、14和21天分别取创面肉芽组织,测定其成纤维细胞中雄激素受体及α1(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA含量,分析比较两组间成纤维细胞雄激素受体和α1(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA的表达及其相关关系. 结果 NP组在7、14和21天α1(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA的表达均高于同期对照组,两组间比较有统计学意义(P＜0.05).NP在4、7、14和21天成纤维细胞雄激素受体的表达均明显高于同期对照组,有统计学意义(P＜0.05).雄激素受体的表达与胶原蛋白基因的表达之间有相关关系,且有统计学意义. 结论 NP能促进Ⅰ型前胶原蛋白mRNA和成纤维细胞雄激素受体的表达,二者间存在正相关关系,NP在转录水平促进胶原蛋白的合成,这种作用与改变成纤维细胞雄激素受体的含量有关.
作者：岑瑛；刘宁；罗旭松；刘晓雪 刊期： 2003年第05期
目的探索尿道黏膜上皮细胞体外培养的技术和方法,为进一步采用组织工程技术构建尿道黏膜组织奠定基础,并为尿道黏膜的生理、药理、毒理学及微生态研究提供实验模型. 方法取刚离乳的雄性新西兰幼兔尿道黏膜组织,分别以DispaseⅡ消化液和混合消化液消化成单细胞悬液,以差速贴壁法排除成纤维细胞,接种后以L929细胞为滋养层细胞进行培养,定期换液,细胞生长、增殖至80%～90%融合时传代.细胞进行常规HE染色、流式细胞仪检测,以扫描电镜、透射电镜观察其超微结构.再分别设立实验组(n=20)、阳性对照组(正常尿道黏膜组织石蜡切片,n=20)及阴性对照组(成纤维细胞铺片,n=20)行免疫组织化学染色. 结果原代培养10天左右细胞逐渐生长融合成片,如铺路石状,细胞大小均一.上皮细胞为二倍体细胞,生长期内均为单一的上皮细胞,无成纤维细胞混杂生长,细胞可传11～13代,成活50～60天. 结论新西兰幼兔尿道黏膜上皮细胞可在体外进行培养,在一定时间内保持增殖活力,为构建组织工程化尿道奠定了基础,且为尿道黏膜的体外研究提供了实验模型.
作者：翟弘峰；李森恺；刘红；李养群；徐军 刊期： 2003年第05期
1995年6月～1999年6月我科共收治5例儿童特发性髋外展肌挛缩症,采用臀中、小肌起点松解术进行治疗,取得较好疗效,报告如下.
作者：兰玉平；赫荣国；顾章平 刊期： 2003年第05期
1987年～2000年,我院共收治颈外侧区淋巴结活检致副神经损伤5例,现就特点、治疗及术后随访进行总结.
作者：严旭；庞锡琴；邵擎东；江伦发；魏延云；陈德松 刊期： 2003年第05期
我科自2000年1月～2002年6月采用掌背动脉逆行岛状皮瓣修复手指皮肤缺损21例,效果满意,报告如下.
作者：刘加元；李耀胜；程驰 刊期： 2003年第05期
目的探讨复合富血小板血浆(PRP)的陶瓷人工骨对管状骨骨缺损的修复作用. 方法新西兰大白兔24只,体重2.5～3.0 kg,雌雄不限.随机选择一侧桡骨作实验侧,连同骨膜切除桡骨中上段1 cm,造成节段性骨缺损,填入复合PRP的人工骨;另一侧为对照侧,仅填入人工骨.分别在术后第2、4、8和12周通过大体观察、X线片、组织学及计算机图像分析等手段观察两侧桡骨愈合情况. 结果术后第2周,实验侧和对照侧的新生纤维组织和骨组织均主要集中在截骨端,实验侧新生组织略多于对照侧.第4、8周,实验侧人工骨表面及孔隙内被大量新生骨组织覆盖和填充,人工骨与宿主骨桥接紧密;对照侧的新生骨组织主要限于人工骨两端,且相对实验侧较幼稚.第12周,实验侧骨缺损完全修复,人工骨表面被皮质骨完全覆盖;对照侧仅于两侧截骨端区域出现板层骨,人工骨表面未见连续性骨痂形成. 结论复合PRP的人工骨可用于管状骨缺损的修复,并有明显加速骨愈合的作用.
作者：张长青；袁霆；曾炳芳；陶海荣；邵雷；徐铮宇；宋文奇；张晔；朱珍宏；眭述平 刊期： 2003年第05期
目的寻求使处于生长停滞期的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖寿命延长的方法. 方法将体外转录质粒pcDNA3-hTERT用BamHI酶切使之线性化,经T7 RNA聚合酶催化以转录合成hTERT mRNA.用脂质体法将hTERT mRNA导入处于生长停滞期的HUVEC.检测hTERT mRNA导入后细胞端粒酶活性表达与细胞生长增殖情况. 结果导入hTERT mRNA后,细胞有端粒酶活性的暂时表达,增殖寿命较单纯用脂质体处理的对照细胞延长了7代. 结论 hTERT mRNA导入细胞能可控地、瞬时地重建细胞端粒酶活性,可望广泛应用于人体细胞增殖寿命延长的尝试.
作者：屈艺；王正荣；黄翔；魏大鹏；杨春蕾；解慧琪；杨志明 刊期： 2003年第05期
1 病历介绍患者男,22岁.因高处坠落致左腕、左肘部肿痛2小时入院.检查:左腕部肿胀、压痛,可触及骨擦感,左肘关节肿胀,可闻及骨擦音,关节活动受限.桡动脉搏动良好,手部皮肤感觉正常.X线片显示左桡骨远端经关节面粉碎性骨折,尺骨鹰嘴及冠状突骨折,桡骨小头粉碎骨折.
作者：张增方；孙伟；杜建春；朱朝晖；张鑫 刊期： 2003年第05期
目的探讨脱细胞骨细胞外基质(AECM)的制备,并对其进行有机成分分析. 方法采用低渗和除垢剂脱细胞方法制备AECM.使用HE、Mallory-Heidenhain氏快速一步法染色和阿利新蓝染色观察形态学改变;免疫组织化学检测纤维连接蛋白(FN)和层连接蛋白(LN). 结果 HE、Mallory-Heidenhain氏快速一步法染色后镜下可见AECM胶原纤维排列规则,骨陷窝空虚;阿利新蓝染色可见AECM骨陷窝周边染色呈不同程度蓝绿色;免疫组织化学染色可见FN和LN的抗体染色阳性部位在细胞外基质(ECM). 结论低渗和除垢剂二步法脱细胞是AECM制备的有效方法.脱细胞过程中去除了细胞成分,保留了天然的胶原纤维分布及ECM主要支架成分蛋白多糖、FN和LN.
作者：王昊；柏树令 刊期： 2003年第05期
目的探讨胚胎面突外胚间充质细胞在体外的生长特性、表型特征及在无分化抑制剂-白血病抑制因子(LIF)的DMEM/F12培养基中向平滑肌细胞自分化的过程. 方法取孕50天人胚面突,用消化法培养获得外胚间充质细胞,倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况,免疫组织化学鉴定细胞分化表型.用无LIF的DMEM/F12培养基培养,2天后进行抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)单克隆抗体免疫组织化学检测,通过RT-PCR在mRNA水平检测α-SMA的表达,透射电镜观察细胞超微结构. 结果培养的细胞呈单层生长,成纤维状,长梭形,有2～4个突起,抗人自然杀伤细胞标志、波形丝蛋白、S-100蛋白、神经元特异性烯醇化酶、肌红蛋白及Ⅷ因子染色阳性,抗神经胶质纤维酸性蛋白、神经纤维细丝蛋白、α-SMA、角蛋白染色阴性.去除LIF 2天后,抗α-SMA免疫组织化学检测呈阳性,RT-PCR显示细胞在RNA水平表达平滑肌细胞特异的α-SMA,透射电镜可见超微结构与平滑肌细胞相类似. 结论所获得的外胚间充质细胞具有干细胞特性.在无分化抑制剂存在时,面突外胚间充质细胞呈明显向平滑肌细胞的自然分化.
作者：邓蔓菁；金岩；史俊南；刘源；赵宇 刊期： 2003年第05期
开放性胫腓骨骨折并软组织严重缺损是骨科常见的创伤,处理不当常造成骨不连、骨髓炎及骨外露,甚至截肢等严重后果.1996年8月～2001年10月,我们应用游离背阔肌肌皮瓣结合多功能单臂外固定器治疗严重软组织缺损的胫腓骨开放性骨折17例,取得了比较满意的效果,报告如下.
作者：张景贵；王文己；王建民 刊期： 2003年第05期
目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人血管内皮细胞(EC)增生的影响及其机制,明确bFGF对烟曲霉素衍生物(TNP-470)及地塞米松(Dex)作用的影响. 方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用MTT法测定EC生长活性,免疫组织化学方法检测EC中核因子(NF-κB)和ki-67的表达. 结果 bFGF有显著促进EC增生的作用,可使核内NF-κB和ki-67表达增强;TNP-470及Dex可抑制EC增生,使核内NF-κB和ki-67表达减少;bFGF逆转二者的抑制效应. 结论 bFGF能促进EC增生,其机制可能是通过激活NF-κB,使细胞由静止期进入增殖期,促进DNA合成,细胞分裂增殖.TNP-470及Dex可抑制NF-κB活化,bFGF可逆转二者的抑制效应.
作者：吕威力；董玉兰 刊期： 2003年第05期
目的观察磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和c-Jun蛋白在增生性瘢痕组织中的表达特征及其影响瘢痕形成和成熟的机制. 方法取16例住院的增生性瘢痕患者的瘢痕组织,并将其分为生长活跃期组(形成时间在1年以内,含1年者)、生长稳定期组,每组各8例;另取正常皮肤8例.所有取材均未经任何治疗.用免疫组织化学方法和常规病理技术检测磷酸化P38MAPK和c-Jun 两种蛋白,在增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中的表达和分布规律. 结果正常皮肤组织中,磷酸化P38MAPK主要分布于表皮基底层细胞的胞浆和胞核内,c-Jun蛋白则主要定位于表皮细胞和内皮细胞中,两种蛋白的阳性细胞率分别为21.3%±3.6%和33.4%±3.5%.在处于生长活跃期的增生性瘢痕组织中,磷酸化P38MAPK和c-Jun的阳性信号主要定位于表皮细胞和部分成纤维细胞内,阳性细胞率分别上升至69.5%±3.3%和59.6%±4.3%,明显高于正常皮肤组织(P＜0.01);而在成熟稳定的增生性瘢痕中,两种蛋白表达有所下降,但仍高于正常皮肤组织. 结论增生性瘢痕的形成和成熟可能与激活P38MAPK信号传递通路,影响c-Jun蛋白表达有关.
作者：陈伟；付小兵；孙同柱；杨银辉；赵志力；盛志勇 刊期： 2003年第05期
目的追溯近年有关小肠黏膜下层(SIS)的制备及其特性的研究与进展. 方法广泛查阅自1995年以来的相关文献,对SIS的制备及特有的性质,其中包括免疫原性、抗微生物活性、生物力学性质及生物相容性等进行综合分析. 结果 SIS来源方便,易于制备,有良好的生物相容性,能促进血管生成,并具有部位特异的组织再生能力. 结论 SIS是一种可广泛用于血管、肌腱、膀胱和腹壁等组织工程的良好生物衍生材料.
作者：罗静聪；杨志明 刊期： 2003年第05期
目的采用生物可降解材料与非降解材料复合制成人工食管,诱导自身食管组织爬行再生与生物材料降解相匹配,终再生食管完全替代人工食管. 方法将长50 mm、内径20 mm的医用聚氨酯内管表面覆盖海绵状胶原蛋白壳聚糖膜,体外制成人工食管,通过手术替换Ⅰ组(5只犬)和Ⅱ组(10只犬)颈段5 cm食管缺损,术后给予营养支持,禁食2周或4周后通过内镜分别取出Ⅰ、Ⅱ组聚氨酯内管,通过组织学及电镜等检测、观察新生食管上皮化过程. 结果禁食2周后取出Ⅰ组聚氨酯内管的5只实验犬,新生食管上皮再生不完全;术后4周内均出现进行性狭窄无法吞咽,致全身衰竭死亡.Ⅱ组禁食4周后取出聚氨酯内管的10只实验犬, 新生食管完全上皮化;12周时黏膜全层结构完整再生;24周时食管肌层部分再生,有3只犬生存8个月以上. 结论由聚氨酯内管提供暂时通道和支撑,海绵状胶原蛋白壳聚糖膜提供适宜细胞爬行再生的三维支架,维持4周的降解时间能够重建犬颈段5 cm长食管缺损.
作者：秦雄；徐志飞；赵学维；史宏灿；周建华；孙康；高向阳 刊期： 2003年第05期
目的综述有关骨形态发生蛋白(BMPs)诱导成骨的信号传导机制,深入了解BMPs基础及应用研究的理论依据. 方法查阅近期相关文献,了解BMPs相关蛋白(Smads)及其相关转录因子在BMPs诱导成骨的信号传导中的作用. 结果 BMPs的信号传导过程是:BMPs首先与Ⅱ型受体和Ⅰ型受体结合,Ⅰ型受体磷酸化Smads,Smads进入核内与转录因子相互作用影响相关蛋白的转录.Smads可分为受体调节Smads(R-Smads:Smad1、2、3、5、8和9)、共同介导者Smad(Co-Smad:Smad4)和抑制性Smads (I-Smads:Smad6、7).Smad1、Smad5和Smad8,可能还有Smad9涉及BMPs的信号传导.多种激酶如局部粘连激酶(FAK)、Ras-细胞外信号调节激酶(ERK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和Akt丝/苏氨酸激酶与Smads的信号传导有关.与Smad1和Smad5相关的转录因子有核心结合蛋白A1(CBFA1)、Smad相互作用蛋白1(SIP1)、鸟氨酸脱羧酶拮抗酶(OAZ)、激活蛋白-1(AP-1)、蟾蜍腹侧形成同源框蛋白-2(Xvent-2)、生长抑素(Ski)、抗增殖蛋白(Tob)、同源结构域转录因子-8(Hoxc-8)等.CBFA1与转化生长因子-β和BMP-2信号传导有关,能与Smad1、2、3、5相互作用,在骨形成中起重要作用.锁骨、颅骨发育不良被认为是CBFA1的杂合型突变引起的.CBFA1基因敲除的小鼠缺乏膜内和软骨内成骨,软骨的成熟及分化也受到了严重干扰. 结论 Smads及其相关转录因子尤其是Smad1、5、8和CBFA1在BMPs诱导成骨的信号传导中起重要作用.
作者：徐小良；戴克戎；汤亭亭 刊期： 2003年第05期
目的探讨软骨细胞体外培养过程中凋亡发生以及caspase-3的表达. 方法采用Annexin Ⅴ和TUNEL法检测第1～4代软骨细胞在体外正常培养体系中第3天和第7天的凋亡率;RT-PCR和Western blot分析caspase-3表达水平;ELISA检测caspase-3蛋白酶活性. 结果第1～4代软骨细胞在体外培养过程中均存在不同程度的凋亡现象,各代次软骨细胞第7天的凋亡率15.7%±0.3%,明显高于第3天的8.9%±0.6%,有统计学意义(P＜0.01).caspase-3 mRNA和蛋白质在整个培养过程中都有表达,随着时间延长表达上调,第7天的表达水平高于第3天.体外培养7天后caspase-3被激活,可检测到分子量为20 ku的裂解片段.caspase-3蛋白酶活性随着培养时间延长也逐渐增高,与细胞凋亡程度基本一致. 结论软骨细胞在体外培养过程中存在凋亡,caspase-3参与了凋亡事件并发挥着重要作用.
作者：肖娟；曹谊林；范华骅；邹萍；崔磊；刘伟；高峰；陆华中 刊期： 2003年第05期
目的探讨异体巩膜移植替代睑板重建眼睑的临床效果. 方法 1986年5月～2001年1月对45例部分眼睑缺损患者,采用异体巩膜替代睑板行眼睑重建.其中男31例,女14例.上睑18例,下睑27例;累及上或下眼睑内眦部9例,外眦部7例.眼外伤22例,眼睑肿瘤23例.眼睑缺损不超过眼睑总长度的1/2.术后观察重建眼睑的外观、功能及并发症. 结果 45例移植异体巩膜行眼睑重建均获成功.术后随访11～38个月,平均19.7个月.重建的眼睑完整,双侧眼睑长度及高度差值均小于2 mm.眼睑开闭及上提功能基本正常,对视功能无影响. 结论异体巩膜是替代睑板行眼睑重建的理想材料.
作者：郭波；郭祥文；罗清礼 刊期： 2003年第05期
中国修复重建外科杂志
主管:中华人民共和国卫生部 计划生育委员会
主办：中国康复医学会,四川大学
