两种核酸提取方法对血清HBV-DNA定量检测的影响

许宏岳

关键词：二氧化硅吸附法, 煮沸裂解法, 核酸模板, HBV-DNA定量对比分析

摘要：目的比较二氧化硅吸附法与简易常用的煮沸裂解法提取样本核酸的差异,选择可靠的检测HBV-DNA提取方法.方法运用推荐的二氧化硅吸附法与简易常用的煮沸裂解法分别提取血清样本核酸模板,应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV-DNA.结果共80例HBsAg阳性患者血清,二氧化硅吸附法检测其中有55例HBV-DNA阳性(＞1000拷贝/ml定性为阳性),煮沸裂解法检测出41例阳性(均在上述55例中);两法都没有检测到25例(＜1000拷贝/ml).比较41例两法都检测出的HBV-DNA定量(拷贝数/ml)对数换算值,二氧化硅吸附法(-x±s)为7.124±1.282,煮沸裂解法为5.198±1.311.统计分析表明,两种方法定性检出率差异明显:阳性符合率100%,阴性符合率64.1%,x2=12.07、P＜0.005;定量检测值也具显著性差异,相关分析Y=0.947 7X+2.200 6,r=0.969 1,P＜0.005;另外,对比10次重复提取核酸后HBV-DNA检测,二氧化硅吸附法的重复性(以CV计)4.24%明显优于煮沸裂解法11.4%.结论煮沸裂解法提取核酸模板虽然操作简单,但重复性、阳性检出率与检测值均较二氧化硅吸附法低,直接影响临床对HBV感染的诊断、冶疗以及疗效判断.建议弃用煮沸裂解法用以检测HBV-DNA.

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作者：施纪文；徐简华；温惠萍刊期： 2005年第05期
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