学术投稿

藤黄微球菌RPF基因蛋白的克隆、表达与鉴定

苏明权;岳乔红;杨柳;王薇;刘家云;郝晓柯

关键词:藤黄微球菌, 促进复活因子(RPF), 克隆, 表达
摘要:目的 构建表达藤黄微球菌RPF基因蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达获得基因重组蛋白.方法 提取藤黄微球菌基因组DNA,以PCR扩增RPF基因,克隆入pGEX-4T-2表达载体,测序证实正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),在30℃用IPTG诱导3 h后进行SDS-PAGE分析.结果 测序结果 证实获得了藤黄微球菌RPF基因,其序列与GenBank中报道完全一致;SDS-PAGE分析表明,RPF基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达了重组蛋白,表达的蛋白量约占菌体蛋白的33.8%.结论 成功克隆了藤黄微球菌RPF基因,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,为进一步研究该蛋白的生物学活性及其功能奠定基础.
现代检验医学杂志相关文献
  • XT-1800i全自动血细胞分析仪常见故障及处理

    我科2004年9月引进该款仪器,该仪器为日本SYSMEX生产,可提供21个参数,具中英文操作系统,仪器操作简便、结果准确可靠,具较高的性价比.现将我们在工作中常见故障和处理方法报告如下,供同行们参考.

    作者:罗晓璐 刊期: 2007年第03期

  • 不同定量PCR法测定血清和外周血单个核细胞HBV DNA的评价

    目的 探讨乙肝患者外周血单个核细胞和血清中HBV-DNA含量及其与HBVM之间的关系.方法 62例乙肝患者为检测对象,20例健康献血者为对照组,分别用FQ-PCR定量测定,内对照法定量测定血清HBV-DNA,免疫荧光定量测定HBVM.结果 外周血单个核细胞HBV-DNA检出阳性率为72.6%(45/62),与血清的符合率为87.1%,但慢性乙肝患者外周血单个核细胞HBV-DNA检出率高于血清,且与病情呈正相关.结论 三个指标的联合检测有助于反映肝细胞病毒复制情况,对进一步指导抗病毒治疗有一定意义.

    作者:毛丽萍;王惠民;王陆军;吴月平;凌勇武;鞠少卿;王跃国 刊期: 2007年第03期

  • Sysmex SE-9000全自动血液分析仪常见故障及排除

    日本东亚希森美康公司生产的SE-9000全自动五分类血液分析仪在临床应用已久,每小时可检测120个标本,它具有自动、手工和预稀释三种检测模式,能满足临床不同标本检测要求.SE-9000采用了流式细胞技术和直流电阻法与射频法相结合的检测技术,具有多通道检测和试剂系统,可以专门检测幼稚细胞(IMI)、末梢血干细胞(HPC),可以设置不同年龄段参考范围,数据动态连续观察,还具有全自动网织红细胞检测系统.我院使用6年来,该仪器一直处于良好状态,但近半年来由于该仪器已老化,故障较多,笔者在这里讨论的是较常见的故障及排除方法.

    作者:郝婉莹 刊期: 2007年第03期

  • 多媒体超高倍显微分析仪在诊断泌尿生殖系感染中的应用

    目的 研究超高倍显微分析仪在诊断泌尿生殖系感染中的应用价值.方法 用清华同方多媒体超高倍显微分析仪检测3 544例门诊妇科和泌尿科患者阴道或尿道分泌物,并对部分标本与PCR法和培养法作对照分析.结果 一种病原体感染者占54.56%,两种至四种病原体混合感染者占41.49%.超高倍显微分析仪病原体检出率占96.05%.超高倍显微分析仪对沙眼衣原体和解脲支原体的检出率与培养法和PCR法比较无显著性差异(P>0.05).结论 超高倍显微分析仪可同时动态观察多种病原体,对于多重混合感染患者可避免漏检.方法 简便、快速、准确、直观,为泌尿生殖系感染的诊断、指导用药和疗效观察提供了可靠依据.

    作者:李志清;魏瑞全;李彤;李旭光;高西娥;倪颖 刊期: 2007年第03期

  • UF-100尿液分析仪与传统方法检测浆膜积液的比较及意义

    目的 为探讨UF-100尿液分析仪检测浆膜积液的临床价值.方法 运用传统手工法和UF-100全自动尿液分析仪同时检测患者浆膜积液.结果 两种方法中白细胞数(WBC)无显著性差异(P>0.05),漏出液与渗出液间白细胞数、间皮细胞、细菌数均有显著性差异(P<0.05),非化脓性与化脓性细菌感染性积液中WBC数、细菌数均有显著性差异(P<0.05),间皮细胞数无显著性差异(P>0.05).结论 用UF-100尿液分析仪检测脑脊液、胸腹水标本简单、易行,检测结果

    作者:董莉;张波 刊期: 2007年第03期

  • 我院5年临床用血情况统计分析及体会

    目的 加强临床用血的管理,进一步做好节约血资源、指导临床科学、合理、安全用血.方法 对5 y临床用血情况进行回顾性总结并分析.结果 成分输血比例2005年达到99.8%,各种成分输血的比例分别为:血浆48%,红细胞制品36%,血小板8%,冷沉淀6%,白细胞0%.手术自体血回输比例2005年达到19.4%,手术用血平均比例为64%.结论 成分输血的理念得到进一步的加强,但要降低血浆应用的比例,提倡手术自体血回输,要积极开展血液成分病毒或病原体的灭活工作.

    作者:李振江;成军;孙长贵;张伟强 刊期: 2007年第03期

  • 日立7020全自动生化分析仪故障排除与应用

    我科在对日立7020全自动生化分析仪几年的使用过程中,不断摸索和探讨,积累了一些故障排除及应用方面的经验,在此介绍如下.

    作者:阴志琦 刊期: 2007年第03期

  • 日立7170S自动生化分析仪试剂针光藕感应器故障一例

    我科于1999年引进一台日立公司生产的日立7170S自动生化分析仪,该仪器操作简便,采用触屏电脑操作控制,为分立式生化仪,小加样量可达到2μl,具有340~800 nm的12个波长(单波长或双波长),处理能力达800次测定/h,自引进该仪器大大提高了工作效率,更快地提供及时准确的检验结果,但是在实际应用中也会出现一些报警,参照说明书即可解决,但是前段时间却遇到一例未曾遇到的报警,现将解决过程总结如下:

    作者:刘丹 刊期: 2007年第03期

  • 经日立-罗氏检测系统量值传递后的新鲜混合血清作临时酶校准品的可行性

    目的 分析经日立-罗氏检测系统(A系统)量值传递后的新鲜混合血清作临时酶校准品的可行性.方法 先用日立-罗氏检测系统将c.f.a.s的酶的量值传递给新鲜混合血清作临时酶校准品,然后用A系统、Roehe Modular P分析仪与科华-东菱试剂(B系统)、Dade Dimension RxL分析仪与配套试剂(C系统)、Dade Dimension RxL分析仪与科华-东菱试剂(D系统)、Beckman CX9分析仪与配套试剂(E系统)、Hitachi 7170A分析仪与Randox试剂(F系统)、Olympus 640分析仪与北京中生试剂(G系统)测定50份新鲜血清和临时酶校准品的ALT,AST,CK,LDH,ALP,γ-GT活性,后用临时酶校准品标示值与测定值之比作为校正因子,校正50份新鲜血清的测定结果,并进行校正前后的结果 比较和临时酶校准品互通性分析.结果 校正前各检测系统测定结果 间有较大的差异(CV4.99%~13.98%),校正后差异变小(CV1.30%~10.34%),其中B,C,E,F系统中ALT,AST,CK,LDH,ALP,γ-GT和D,G系统中ALT,AST,CK与A系统结果偏差明显变小,并且仪器与试剂配套的C,E系统间为备检测系统间小;但D,G系统中LDH,ALP,γ-GT差异改变不明显.结论 采用新鲜混合血清作临时酶校准品有一定的应用价值,但使用前必须进行酶校准品互通性检验,才能保证每项酶的测定结果 的准确和可靠.

    作者:顾国龙;谢智光;梁景云;唐芳玫;徐文丽;冯玉清;李颖;黄冬梅 刊期: 2007年第03期

  • 干化学和湿化学检测电解质的初步比较

    目的 干化学FDC3500和湿化学AVL9180两种方法 检测电解质结果 的初步比较及相关性分析.方法 收集50份新鲜血浆标本,分别在FDC3500和AVL9180上检测电解质(K+,Na+,Cl-).结果 两种方法测定结果间比较无显著性差异(P>0.05),分析结果一致;K+r>0.975呈高度正相关,Na+,Cl- r>0.870正相关性较好.结论 干化学FDC3500和湿化学AVL9180可同样准确、快速地为临床诊断提供电解质项目的参考依据.

    作者:聂庆东;张秀梅 刊期: 2007年第03期

  • 介绍一种永久性标本染色制片法

    钩虫头部的结构,尤其是口囊结构、形态以及钩齿是鉴别本虫种的重要依据之一.因此,在医学院校中常需经常制作此标本,以供教学之用.我们用卡拉唑黑染料E(Chlorazol Black E)(此法过去文献未见报道)对虫体进行染色制片,经二十多年教学重复使用,至今标本没有褪色,口囊内的钩齿依然清晰,效果很好.现将染色方法介绍如下:1 染色液配制甲液:95%(v/v)酒精170 ml,甲醇160 ml,冰醋酸20 ml,石炭酸20 ml,1 g/L磷钼酸12 ml,蒸馏水618 ml,共1000 ml.

    作者:林丽卿;洪延波;李洁藏 刊期: 2007年第03期

  • 检验医学实验室的全面质量控制管理

    检验医学的重要任务是为临床提供科学、准确、及时的实验诊断依据;为临床发展较多的测定项目;与临床沟通并开展咨询服务.检验医学实验室的产品是要获得准确可靠的检测结果,为了保证结果的科学准确,必须进行全面的质量控制管理,即从临床医师申请检验开始至完成检测以及登记、审核、发出报告等全过程中一系列保证检验质量的方法和措施,包括检验前、检验中和检验后质量管理三个方面.

    作者:张勇棋;王伦;德吉 刊期: 2007年第03期

  • CA530血凝仪常见故障及处理

    CA530血凝仪是日本Sysmex公司生产的全自动血凝分析仪,因其具有设计先进、操作方便、性能可靠等特点而在我国得到较广泛的应用.我们自2000年引进后使用良好,但长期使用或操作不当也会出现一些问题,现将常见故障及处理措施介绍如下.

    作者:范永熙;逄明英;吕志海 刊期: 2007年第03期

  • 温度对BV Blue法诊断细菌性阴道病的影响

    目的 探讨不同温育温度对BV Blue检测法诊断细菌性阴道病的影响.方法 用无菌棉拭子采集460例妇科病人阴道分泌物,用BV Blue法检测分泌物中的唾液酸酶活性,比较三种不同温育温度(25,30,37℃)对细菌性阴道病阳性率的影响,所得数据进行统计学分析.结果 460例标本37℃温育条件下,BV阳性率为15.4%,30℃温育时,BV阳性率为3.3%,25℃温育时,BV阳性率为2.6%,三种不同温育温度比较,BV阳性率有统计学差异.结论 温育温度对BV Blue试剂盒检测细菌性阴道病有较大的影响,应该引起实验室的高度重视,随时监测温箱的温度,防止由于温度的差异,引起细菌性阴道病的阳性率降低.

    作者:贾忠兰;王青;徐鸿雁 刊期: 2007年第03期

  • 血自由基和肿瘤坏死因子的含量与肝炎病毒感染关系的研究

    目的 探讨肝炎病毒感染与自由基及肿瘤坏死因子的关系.方法 用ELISA、显色、比色法检测肝炎病毒感染者、肝炎患者血液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、脂质氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、肿瘤坏死因子(TNF)的含量.结果 肝炎病毒感染者、肝炎患者血中LPO,MDA,TNF含量明显高于对照组(P<0.05,P<0.01);而SOD,GSH-PX,CAT的含量明显低于对照组(P<0.05,P<0.01),与肝炎病毒感染的种类及肝炎发生的程度密切相关.结论 肝炎病毒感染者、肝炎患者的SOD,GSH-PX,CAT,LPO,MDA,TNF的含量检测,对了解肝脏损伤及肝炎的防治有一定意义.

    作者:崔相法;卢志明;王红霞 刊期: 2007年第03期

  • 意大利AUTOLAB-18全自动生化分析仪故障分析

    引进意大利AUTOLAB-18全自动生化分析仪六年多来,严格按照仪器操作规程使用并认真保养,在仪器的使用过程中,其检测结果的准确性、重复性、稳定性等方面均很理想.室内质量控制检测结果及参加陕西省室间质量控制的全部生化检验项目均由该仪器完成,并取得优良成绩.但在近的使用中发生了二次故障,影响到正常工作,现将故障原因及处理情况作以下报道,为同行遇到同类问题时借鉴.

    作者:王秦芳;安银东;余妍 刊期: 2007年第03期

  • 在HBV DNA检测中使用的若干新PCR改良技术

    自1988年PCR技术被成功地应用于检测血清HBV DNA以来,因其具有灵敏度高、速度快、简便,被广泛应用于临床HBV DNA的检测,并在使用过程中不断的被改进,该文介绍了目前国内外使用较多的几种新PCR改良技术.

    作者:王萍 刊期: 2007年第03期

  • 日立7080全自动生化分析仪常见故障处理及保养

    我科于2004年2月使用日立7080全自动生化分析仪,该机具有操作简便、灵敏度高、稳定性好、自动化程度高等优点.虽然该机的故障率低,但也发现一些常见问题,若处理不当会影响正常工作.现将我们遇到的常见故障、处理及仪器保养作一介绍,仅供同行参考.

    作者:张粤;郝伟;廉科;王岚平 刊期: 2007年第03期

  • 藤黄微球菌RPF基因蛋白的克隆、表达与鉴定

    目的 构建表达藤黄微球菌RPF基因蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达获得基因重组蛋白.方法 提取藤黄微球菌基因组DNA,以PCR扩增RPF基因,克隆入pGEX-4T-2表达载体,测序证实正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),在30℃用IPTG诱导3 h后进行SDS-PAGE分析.结果 测序结果 证实获得了藤黄微球菌RPF基因,其序列与GenBank中报道完全一致;SDS-PAGE分析表明,RPF基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达了重组蛋白,表达的蛋白量约占菌体蛋白的33.8%.结论 成功克隆了藤黄微球菌RPF基因,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,为进一步研究该蛋白的生物学活性及其功能奠定基础.

    作者:苏明权;岳乔红;杨柳;王薇;刘家云;郝晓柯 刊期: 2007年第03期

  • Roche E170检测系统测定促甲状腺激素(TSH)分析灵敏度的验证

    目的 对Roche E170检测系统测定促甲状腺激素(TSH)项目的 检测低限、功能灵敏度进行验证.方法 对空白样品进行连续20 d在天间重复性实验,验证TSH检测低限;制备系列低浓度的TSH样品,验证其功能灵敏度.结果 Roche E170检测系统测定TSH的低检测限为0.005 μIU/ml,与Roche厂家产品说明书声称的一致;其功能灵敏度该室验证值为0.011 μIU/ml,与Roche厂家产品说明书声称有差异(0.014 μIU/ml).结论 实验室必须验证和建立本实验室条件的分析灵敏度,为甲状腺患者提供准确可靠的促甲状腺激素(TSH)低值结果.

    作者:郑沁;黄亨建;张国福;张林;郭丹 刊期: 2007年第03期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院