王庆美；任思坡；耿跃春
目的 通过程序设计软件实现样品号码编辑的批量生成,用软件代替手工编写样本号码表和仪器手工输入样本号.方法 利用Visual Basic与Microsoft Access 2003程序建立实验室需要的样本号码批量生成和输出打印程序.结果 样品号码批量生成程序可以实现样品号码表格的快速准确编辑和输出以及文本导出.结论 程序的应用提高了效率,减少了人为错误发生几率,可作为实验室信息化管理的一部分.
作者：李永利；朱姗薇；刘立明；马洪滨；王雪飞；王海滨 刊期： 2012年第05期
microRNA(以下简称miRNA)是一类长约22个核苷酸的内源性非编码单链小RNA分子,通过与靶mRNA的3' UTR端(非翻译区)互补匹配,在转录水平对基因表达进行负向调控,导致mRNA翻译抑制或降解.在基因调控的研究中,大量使用miRNA,其主要的工具是miRNA的表达载体.miRNA真核表达载体广泛运用于各种生物体内基因的功能研究,该文就近年来miRNA载体构建方法给予综述,为各种基因功能的进一步研究奠定基石.
作者：周琼芝；王玉明；段勇 刊期： 2012年第05期
目的 评估化学发光法检测低水平乙型肝炎病毒表面抗原性能及临床价值.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测西安市中心医院2010年5月~2012年6月间门诊及住院的8 408例患者的乙型肝炎病毒表面抗原患者,初筛出少见模式标本438例,再次对初筛标本进行化学发光法检测,化学发光检测过程中采用乙型肝炎表面抗原低水平标准物质进行质量控制和性能评估,检出的低水平乙型肝炎表面抗原标本再进行中和确认试验.结果 438例初筛标本经化学发光法分23次不同批次检测出27例低水平HBsAg分布于4种乙型肝炎模式中,其中包含21例原ELISA检测为HBsAg阴性标本.测定中标准物质阳性符合率和阴性参考品符合率均为100%,化学发光法与ELISA法两者符合率为94.7%,化学发光法和ELISA法检测HBsAg的低灵敏度分别为0.1 μg/L,0.4 μg/L.结论 化学发光法产品性能指标符合临床要求.灵敏度高、特异性好的化学发光法联合酶联免疫吸附试验有助于低水平HBsAg的检出,对低水平HBsAg的人群的诊断、治疗、流行病学研究有重要意义.
作者：计玉仙；张志明；姜小建；肖改娥；马莹；舒放；姜立茹；王鑫；李雅 刊期： 2012年第05期
目的 研究汉中地区血清学方法检测表现RhD阴性个体的RHD基因多态性分布状况.方法 应用PCR方法检测RhD阴性表型的个体,对特殊样本进行测序分析.结果 在351例样本中,检出d/d基因型248例,占70.7%;DEL型67例,占19.1%;RHD-CE(2-9)-D/d融合基因型22例,占6.3%;DⅥ,Ⅲ型7例,占2.0%,高于国内其他地区;弱D-15型、弱D25型和Dva型各1例;弱D33型和RHD711delC各2例;DEL血型个体中具有C抗原者比例较高,但亦有C抗原阴性表型存在;首次在中国报道发现弱D25型和弱D33型.结论 阴性表型个体中主要的RHD基因阳性个体是DEL型,对汉中地区Rh阴性无偿献血者D基因多态性进行研究,揭示了Rh阴性个体D基因多态性,既有临床意义,也有遗传学意义.
作者：丁珂；徐强 刊期： 2012年第05期
目的 利用杆状病毒表达系统表达耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a(PBP2a).方法 用EcoR I和BamHⅠ双酶切pGEMT-mecA重组质粒DNA,回收目的 基因mecA,与pFastBac1质粒连接转化入含有穿梭载体bacmid的大肠埃希菌DH10Bac中,筛选重组穿梭载体Bacmid-mecA并转染Sf9细胞,获取完整的重组杆状病毒.用免疫荧光(IFA),Western blot法进行蛋白鉴定.结果 成功地获得含mecA基因的重组杆状病毒.杆状病毒感染Sf9细胞形态变化明显,能够表达出与PBP2a多克隆抗体相结合的蛋白.结论 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功地表达了PBP2a蛋白.
作者：邹玉涵；朱祖怀；闫佩毅；朱元；黄德魁；朱晴晖；金姝 刊期： 2012年第05期
目的 使用地塞米松干预,动态观察出血性脑卒中患者白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量变化,探讨其在出血后继发性脑损伤中的作用.方法 采用ELISA法测定出血性脑卒中患者50例常规治疗组和50例常规治疗加地塞米松治疗组术后第1天、第3天、第7天、第10天血清中IL-6和TNF-α含量水平,并对两组患者预后生活质量进行比较.结果 两组患者术后第1天常规治疗组IL-6:134.73±29.64 μg/L,TNF-α:57.62±5.13 μg/L,地塞米松治疗组IL-6:136.65±31.56 μg/L,TNF-α:56.84±5.03 μg/L,二者相比差异无显著性意义(t=1.06,1.14,P>0.05);与正常对照组(IL-6:27.84±7.76 μg/L,TNF-α:40.27±4.85 μg/L)相比差异显著(t=5.29,4.41,P<0.001);术后第3天常规治疗组IL-6:120.51±30.75 μg/L,TNF-α:59.24±4.72 μg/L,地塞米松治疗组IL-6:108.47±26.73 μg/L,TNF-α:46.75±4.64 μg/L,二者相比差异显著(t=2.42,2.35,P<0.05);第7天常规治疗组IL-6:70.65±17.73 μg/L,TNF-α:50.62±5.11 μg/L,地塞米松治疗组IL-6:58.16±14.65 μg/L,TNF-α:41.64±5.01 μg/L,二者相比差异显著(t=2.81,2.76,P<0.05);第10天常规治疗组IL-6:34.52±8.92 μg/L,TNF-α:46.27±4.43 μg/L,地塞米松治疗组IL-6:28.17±7.45 μg/L,TNF-α:40.89±4.27 μg/L,二者相比差异显著(t=2.34,2.56,P<0.05).两组患者在入院时神经功能缺损评分(NDS常规治疗组37.12±4.56,地塞米松治疗组38.05±4.72)和日常生活质量评分(ADL)常规治疗组67.35±8.95,地塞米松治疗组69.02±7.74,差异无显著性(t=0.98,0.79,P>0.05),出院时两组患者NDS(常规治疗组26.13±3.89,地塞米松治疗组16.74±3.26)和ADL(常规治疗组45.43±6.77,地塞米松治疗组38.64±5.49)比较差异显著(t=3.54,2.96,P<0.01).结论 IL-6,TNF-α介导了出血性脑卒中患者的炎性反应,有效控制其含量,对于减少出血性脑卒中后继发性脑损伤和提高患者生存能力具有积极的意义.
作者：秋楠；党小军；刘晓斌；王继军；黄卫东；缪星宇；许彦钢；杨军；张越林 刊期： 2012年第05期
目的 应用6σ质量管理体系对临床定量检验项目质量进行评估,根据sigma水平可以对质控规则进行合理选择,为医学实验室提供了质量改进的客观依据.方法 对该实验室常规开展的32项临床化学项目,利用室内质控得到的平均CV和卫生部EQA获得的偏倚计算sigma值.结果 该室参加质控的32个检验项目其中18个检验项目的 性能达到6σ水平,占检验项目的 56.3%;5个项目达到5～6σ水平,占总项目的 15.6%,5σ水平以上可以采用单一的质控规则;3个项目达到4～5σ水平,占总项目的 9.4%;6个项目在4σ水平以下,占总项目的 18.7%,需采用westgurd多规则控制质量.结论 应用6σ质量管理体系进行评估临床定量检验质量及室内质控规则设计等以实现实验室质量改进的过程中,6σ体系依据数据进行决策,以实际调查的数据作为分析基础,在建立目标、确定关键因素以及提出改善方案上有更强的客观性和说服力.
作者：赵建忠 刊期： 2012年第05期
1型糖尿病,免疫介导形成的糖尿病,是相当普遍的一种疾病,它发生于遗传上易感的个体.此病同一系列抗胰岛自身抗体有关,此抗体可在高血糖发生前数年出现.该文将集中介绍临床和研究工作感兴趣的几种主要自身抗体,它们是:胰岛细胞胞浆自身抗体、谷氨酸脱羧酶自身抗体、胰岛素瘤2有关的自身抗体、胰岛素自身抗体以及锌转运蛋白8自身抗体等.
作者：王继贵 刊期： 2012年第05期
目的 探讨影响糖化血红蛋白(HbA1c)测定的影响因素.方法 同时用4种临床常用真空抗凝管空腹采集38例糖尿病患者的静脉血,在HLC-723 G7糖化血红蛋白分析仪上测定不同保存条件、保存时间及用新鲜蒸馏水、生理盐水及5 g/dl葡萄糖水按1∶1稀释后的HbA1c水平.结果 EDTA-K2、肝素锂、枸橼酸钠1∶4和枸橼酸钠1∶9抗凝后的全血即时HbA1c水平分别为(8.37±2.43)%,(8.62±2.63)%,(8.78±2.53)%和(8.31±2.49)%,不同抗凝剂采血管间HbA1c水平无明显差异(P>0.05).4℃室温-20℃保存至72 h血中HbA1c水平差异无统计学显著性意义,但用新鲜蒸馏水、生理盐水及5 g/dl葡萄糖水按1∶1稀释后的HbA1c水平明显高于稀释前(P<0.05).结论 用患者近3日内的抗凝血检测HbA1c没有明显影响,临床一定要按规范程序采血,否则,标本稀释后检测HbA1c结果明显偏高.
作者：曹晶晶；彭俊华；殷瑞鹏；朱晓红；王正；常亚丽 刊期： 2012年第05期
目的 检测IL-35在结核患者肺泡灌洗液中的表达.方法 80例诊断为进展期肺结核患者全部采用支气管镜检查,收集肺泡灌洗液和外周血,淋巴细胞分离液分离其中的单个核细胞,经50 μg灭活的结核杆菌提取物刺激36 h后,采用ELISA方法检测结核患者肺泡灌洗液中单个核细胞分泌细胞因子IL-35的水平,实时荧光定量PCR方法检测IL-35的两个亚单位IL-12a和EBI3的mRNA水平,Western blot检测IL-35的亚单位EBI3的蛋白表达水平;多色流式细胞术检测细胞调节性T淋巴细胞水平.结果 进展期结核患者肺泡灌洗液中单个核细胞培养上清中IL-35的水平是76.6±20.1 pg/ml,显著高于患者的外周血(t=23.07,P<0.01),Western blot能够检测到肺泡灌洗液单个核细胞培养上清中EBI3的条带,而外周血培养上清中未能检测到.IL-12a的mRNA水平较外周血增高约6倍(t=18.02,P<0.01),EBI3的水平较外周血增高约9倍(t=17.85,P<0.01).肺泡灌洗液中Treg细胞的比例(12.6%±3.3%)显著高于外周血(4.2%±1.8%),(t=12.24,P<0.01).肺泡灌洗液中Treg细胞表达EBI3的水平显著高于外周血Treg.结论 进展期肺结核患者肺泡灌洗液中单个核细胞(主要是Treg)分泌表达IL-35,IL-35可能在结核患者的细胞免疫中起到调节作用.
作者：丁春梅；张军；胡成进 刊期： 2012年第05期
血液输注已成为现代医疗救治过程中非常重要的环节之一,尤其是红细胞的输注.在各种血液病、慢性失血、慢性贫血等患者救治过程中,红细胞输注可有效纠正贫血和改善机体携氧状况,提高机体循环代谢功能.
作者：王文婷；穆士杰；张献清 刊期： 2012年第05期
目的 探讨多药耐药基因GST-πmRNA在胃癌组织中的表达及临床意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测53例新鲜胃癌组织标本(实验组)和15例正常胃黏膜组织(对照组)中GST-π基因的表达,并分析其表达与胃癌病理特征之间的关系.结果 ①53例胃癌组织中GST-πmRNA的表达(0.56±0.27)要高于15例正常胃黏膜组织的表达(0.18±0.13) (t=5.30,P<0.001).②GST-πmRNA的表达与胃癌的分化程度之间差异具有统计学意义(t=2.67,P=0.01),而与患者性别、肿瘤部位、大小之间、是否淋巴结转移差异无统计学显著性意义.结论 ①GST-πmRNA的高表达可能是胃癌产生多药耐药的机制之一;②GST-π的检测对临床制定化疗方案有一定指导意义.
作者：胡秀学；刘跃；王鹏；何月；李鑫；高波；杜娟 刊期： 2012年第05期
目的 探讨液流荧光技术在临床检测甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)中的应用,并与电化学发光技术检测结果进行比较和评价.方法 利用Luminex200和Cobas e-411两台仪器检测30例健康对照者外周血清中AFP与CEA含量,计算两种方法的检测阈值,同时检测41例乙肝患者的AFP与CEA含量,分析两种检测结果的一致性及相关性.结果 Luminex200与Cobas e-411的AFP与CEA的正常检测限分别为6.57,2.81 ng/ml与4.19,2.38 ng/ml.t值分别为2.799和1.485,P值分别为0.007和0.142 9.以Cobas e-411仪器作为参考仪器,Luminex200的AFP与CEA检测的灵敏度、特异度和准确度分别为94.4%,97.1%,95.8%与97.3%,88.2%,92.9%.两台仪器的相关性分析结果显示,AFP的相关系数达0.9以上,CEA的相关系数0.8左右.结论 AFP和CEA在两种仪器的检测结果有各自的正常检测限,检测结果虽相关性较好,但不同仪器不同试剂不同溯源,必须使用各自的正常值范围,检验单必须注明仪器方法,检验结果的互认好建立在同类仪器同种方法相同溯源的基础上.Luminex200以Cobas e-411为参考,具有较高的灵敏度、特异度和准确度,而且该仪器具有高通量特性,可以根据检测项目的 需求进行组合,在临床检测和科研上具有独特的优势,在实际操作上简便快捷,标本用量少,便于推广.
作者：胥萍；陈慧；周晓玲；吴敏娟；陈永井 刊期： 2012年第05期
目的 利用重组白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)抗原,建立测定人血清中抗白念珠菌Fba1 IgG抗体的ELISA法,评估其在侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)诊断中的应用价值.方法 收集经血培养确诊的各类IC患者(110例)、念珠菌定植者(50例)、细菌感染者(147例)及健康体检者(200例)血清,用重组Fba1包被ELISA微孔板,测定血清中的抗Fba1抗体,确定cut off 值并对方法的精密度和特异度进行考察.结果 以重组Fba1抗原建立的ELISA法精密度良好,批内变异系数(coefficient of variation,CV)=1.81%,批间CV=14.85%;阻断率=88.8%,证实此法对抗白念珠菌Fba1抗体具有特异性.依据ROC曲线,选择吸光度(absorbance,A)值0.61作为cut-off值.IC患者阳性率为74.5%(82/110),念珠菌定植患者阳性率为12% (6/50),二者差异有统计学意义(χ2=7.8,P<0.01);健康体检者及细菌感染患者的抗体检出与IC患者相比,差异有统计学意义(P均<0.001).结论 建立了检测抗白念珠菌Fba1抗体的ELISA法,在IC早期诊断中具有潜在应用价值.
作者：王颖；陆静芬；李芳秋；史利宁；黄梅；王卫萍；邵海枫 刊期： 2012年第05期
目的 了解川西地区细菌耐药状况.方法 收集川西地区18家医院2011年分离的病原菌进行鉴定和药敏试验,并对细菌耐药性进行分析.结果 共获得临床分离菌20 079株,其中革兰阳性菌5 625株,占28.0%,革兰阴性菌14 454株,占72.0%.革兰阳性菌中,以金黄色葡萄球菌为多,共1 867株,占阳性菌的33.2%;革兰阴性菌中,分离的大肠埃希菌多,共3 185株,占阴性菌的22.0 %.排名前5位的菌种依次为:大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和金黄色葡萄球菌.药物敏感性结果统计分析显示:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌的发生率分别为46.3%和87.1%;未发现万古霉素耐药葡萄球菌.粪肠球菌和屎肠球菌对万古霉素耐药率分别为0.7%和4.0%;未发现利奈唑胺耐药肠球菌.革兰阴性菌中,非发酵革兰阴性杆菌整体耐药率较高,其中,鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率分别为54.9%和19.7%.肺炎链球菌和流感嗜血杆菌等对喹诺酮类保持较高的敏感性,敏感率>85%.结论 川西地区细菌耐药现象较为严重,但对某些抗生素的耐药性具有地域差异性.
作者：刘敏；邓瑛；张峻梅；杨莉莉 刊期： 2012年第05期
目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期患者检测抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)的意义.方法 选取COPD急性加重期患者80例,COPD急性缓解期患者75例,以及100例健康人群.PT和TT检测采用全自动血凝仪,FDP检测采用ELISA法,AT-Ⅲ采用免疫浊度法测定.结果 对照组和COPD各分期组间的PT和TT指标差异无统计学显著性意义(P>0.05),COPD急性加重期患者的FDP水平与缓解期患者相比差异无统计学显著性意义(P>0.05).而两组AT-Ⅲ水平比较差异有统计学显著性意义(P<0.05).结论 AT-Ⅲ可作为COPD急性加重期患者凝血功能是否异常的常规检测指标之一.
作者：廖洪利；蒋小丽；田刚 刊期： 2012年第05期
目的 对家兔多次间断大量采血方法进行优化,以提高采血的成功率.方法 家兔50只,均为雄性,每只体重3～3.5 kg,随机分为常规组和优化组,每组25只,每间隔1周采血1次,共采血4次,每次采血量30 ml,取血部位为耳中央动脉.常规组运用30 ml注射器采血,取耳中央动脉采血.优化组利用30 ml注射器去掉针头与7号头皮针连接的自制采血器采血,其余方法相同.计录采血成功的次数,计算两组采血成功率,行卡方检验,运用SPSS14.0软件进行统计学分析.结果 常规组和优化组的家兔分别采血100次,常规组仅12次采血量可达30 ml,采血成功率为12%,其余采血量5～20 ml不等;优化组有98次采血量可达到30 ml,成功率为98%,两组数据行卡方检验,优化组与常规组比较差异有统计学意义(χ2=145.96,P＜0.01).同时,优化组采血时间缩短且很少有刺穿家兔血管情况发生.结论 运用自制采血器采血的成功率明显优于直接运用注射器采血.
作者：王庆美；任思坡；耿跃春 刊期： 2012年第05期
目的 利用多黏菌素B、氨曲南和万古霉素特殊的抗菌机制,拓展其在细菌分离及鉴定中的应用.方法 将直接涂片或增菌后革兰染色疑似肠杆菌和肠球菌共存的标本,直接接种于哥伦比亚血琼脂平板上,粘贴多黏菌素B 药敏纸片;对变形杆菌与革兰阳性球菌共存的混合培养物则粘贴氨曲南药敏纸片;对于形态不典型、革兰染色性不定的难以鉴定的菌株,采用KB药敏实验方法,同时粘贴多黏菌素B、万古霉素药敏纸片.35℃培养18～24 h观察结果.结果 多黏菌素B抑菌环内肠球菌生长良好而肠杆菌不生长,氨曲南抑菌环内革兰阳性球菌生长良好而变形杆菌不生长.取多黏菌素B、氨曲南抑菌环内细菌转种于哥伦比亚血琼脂平板,从而达到快速分纯菌株的目的.13份肠杆菌和肠球菌共存的胆汁及脓液标本,采取该方法仅需一代就可以将肠杆菌与肠球菌分离;5份变形杆菌与革兰阳性球菌共存的培养物也仅需一代就可将革兰阳性球菌分纯,而采用传统的方法,6份胆汁标本需2～3代才能分纯,剩余7份均未分离出肠球菌;5份变形杆菌与革兰阳性球菌共存的培养物采用传统的分纯方法也均未分离出革兰阳性球菌;对于形态不典型,革兰染色性不定的难以鉴定的菌株,对万古霉素敏感而多黏菌素耐药的多为革兰阳性细菌,对万古霉素耐药、多黏菌素B敏感的多为革兰阴性细菌.结论 利用多黏菌素B、氨曲南药敏纸片可将难以分纯标本中的肠球菌、革兰阳性球菌快速分纯;另外,对于形态不典型、革兰染色染色性不定的难以鉴定菌株,利用其对多黏菌素B、万古霉素的敏感性,可为待鉴定细菌选定正确的鉴定方向.
作者：王华；苍金荣；张利侠；苏宝凤；归巧娣；刘文康；任健康 刊期： 2012年第05期
目的 探讨一种乳腺癌患者石蜡包埋组织乳腺癌组织DNA提取方法并进行验证.方法 选择无自溶、退变或组织结构不清、大片出血的70例10 ml/dl甲醛固定石蜡包埋乳腺癌组织,在避免交叉污染的情况下,经过TES溶液水浴脱蜡后,先后用PBS缓冲液(pH7.2)及无水、95 ml/dl,75 ml/dl浓度梯度的乙醇60℃温浴4 h;加入含蛋白酶K的裂解液56℃消化72 h后,酚氯仿法抽提DNA.通过聚合酶链反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度仪测定A260nm/A280nm值,分析所提取DNA的质量.结果 62例(88.57%)石蜡组织标本DNA获得成功提取,所得DNA样本A260nm/A280nm比值为1.78±0.16,采用此条件处理的样本可获得足够数量的完整DNA,抽提率高,可满足后续临床研究需要.结论 改进的石蜡包埋组织提取DNA方法简单、经济,是较理想的非试剂盒法石蜡包埋组织DNA提取方法.
作者：康毓芝；王永兴；杨宝珍；韩恩善 刊期： 2012年第05期
目的 探讨血清标本冷藏保存时间对梅毒甲苯胺红不加热血清(TRUST)试验结果的影响.方法 2011年8月～9月收集45份有临床症状且TRUST试验阳性的梅毒感染患者新鲜血清标本,3 000 r/min离心4 min,血清保存于2～8℃冰箱,连续7天进行TRUST试验.将研究对象分为混合组(45份),效价≥1∶16组(20份),效价<1∶16组(25份).①3组检测结果做重复测量资料方差分析;②分别统计效价≥1∶16组和效价<1∶16组,1～7天转为阴性的比率(转阴率)、效价降低比率及重复测量资料方差分析组内多重比较.结果 ①3组重复测量资料方差分析组间效应比较、组内效应比较差异均具有统计学意义(P<0.05),分组与重复检测时间无交互作用(P=0.961).②3组检测时间多重比较,仅第1天与第2天检测结果差异无统计学意义(P=0.141).③效价≥1∶16组,转阴率7天均为0;效价降低率2～4天均为5%,后3天均>30%;组内多重比较,第2～4天与第1天差异无统计学意义P>0.05.④效价<1∶16组,转阴率前4天均为0,后3天均>8%;效价降低率7天均>16%;组内多重比较,仅第2天与第1天差异无统计学意义(P=0.425).结论 将血清标本保存于2～8℃冰箱,TRUST试验结果2天内稳定(效价≥1∶16的可稳定至第4天),滴度效价从第2天起开始下降.进行TRUST试验,尤其是滴度效价测定时,好使用新鲜血清标本.
作者：李小妹；佘尚扬 刊期： 2012年第05期
现代检验医学杂志
主管:陕西省卫生厅
主办：陕西省临床检验中心,陕西省人民医院
