李燕；徐晓艳；刘宁；刘虎林
目的 建立嗜肺巴斯德菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法.方法 针对嗜肺巴斯德菌16SrRNA基因设计特异性引物和探针,建立嗜肺巴斯德菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异度、敏感度和稳定性.对2008～2011年采集的1 680份样本进行检测.结果 嗜肺巴斯德菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法具有高度特异性,对多杀巴斯德菌、产气巴斯德菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应,检测灵敏度达22拷贝.标准曲线显示备浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.488,PCR效率为100％.荧光定量PCR检测1 680份样本,检出137份嗜肺巴斯德菌阳性.该方法可直接从样本中特异性地检出嗜肺巴斯德菌.结论 TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有灵敏、特异、稳定的特性,适用于嗜肺巴斯德菌的快速检测.
作者：高正琴；岳秉飞；贺争鸣 刊期： 2012年第01期
目的 探讨基于生物学变异的质量规范在临床生化质控方案设计中的应用.方法 按照Westgard等[7]的报道方法对18个临床生化项目基于生物学变异不同水平质量目标对应的sigma值进行了计算.不精密度(CV％)的数据采用近6个月(2011年5月～10月)室内质控数据.偏倚(Bias)的数据采用该室参加Bio-Rad实验室间质控比对计划(Inter laboratoryQCProgram)中与对等组比较的近(2011年10月)的偏倚数据.根据sigma值及质控方案性能选择合适的质量目标及质控方案.结果 18个生化项目中,分别有7个、2个和6个项目选择了佳、期望和低水平的生物学变异的质量规范.Ca,Cl和Na目前的性能不能满足低水平生物学变异质量规范的要求,分别选择了CLIA' 88和德国Rilibak质控指南的标准.结论 应用基于生物学变异不同水平的质量规范,可以让临床清楚了解检测过程给实验结果带来的误差大有多少,更有利于检测结果的临床应用.
作者：尹利民；胡大春 刊期： 2012年第01期
目的 探讨全自动毛细管电泳仪在成人珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的应用价值.方法 使用法国Sebia公司的Capillarys2全自动毛细管电泳仪对18 003例成人血标本进行血红蛋白电泳分析,检测HbA,HbF,HbA2和异常血红蛋白含量,对筛查表型阳性的病例召回进行基因分析.结果 18 003例成人标本筛查出α珠蛋白生成障碍性贫血表型阳性者2 226例,筛查阳性率12.36％,其中召回1 070例行基因分析,626例为α珠蛋白基因缺失,符合率58.50％;β珠蛋白生成障碍性贫血表型阳性者1 329例,筛查阳性率7.38％,其中召回733例行基因分析,710例为β珠蛋白基因突变,符合率96.86％.结论 全自动毛细管电泳作为一种新型液相分离技术,具有快速、灵敏度高、分辨率高等优点,能对HbA2进行准确的定位及定量,可初步区分α,β珠蛋白生成障碍性贫血,有效筛出高危患者,全自动毛细管电泳分析技术与基因分析有良好的符合性,为珠蛋白生成障碍性贫血的诊断提供重要依据.
作者：万志丹；黄湘；吴学威；李冬秀；郑国兵；姚英姿；梁睿 刊期： 2012年第01期
目的 探讨醌氧化还原酶1[ (NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]C609T基因多态性在精神分裂症迟发性运动障碍( tardive dyskinesia,TD)发病中的作用.方法 采用病例-对照研究,运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)检测了233例精神分裂症患者(TD组55例和非TD组178例)NQOIC609T基因多态性.结果 TD组中NQO1 C609T位点CC,CT和TT基因型频率分别为45.5％,40.0％和14.5％；C和T等位基因频率分别为65.5％和34.5％.非TD组中CC,CT和TT基因型频率分别为36.0％,47.2％和16.8％;C和T等位基因频率分别为59.6％和40.4％.NQO1 C609T基因型频率和等位基因频率在TD组与非TD组之间差异无统计学意义(x2=1.61,P=0.448;x2=1.23,P=0.267).结论 NQO1基因C609T位点在中国云南汉族人群中存在多态性,其基因多态性与中国云南汉族精神分裂症的迟发性运动障碍不存在关联,该基因多态性在迟发性运动障碍发病中的作用机制还有待进一步研究.
作者：赵若莲；杨保春；龚毅；王玉明 刊期： 2012年第01期
目的 通过基因工程的方法获得风疹病毒E1蛋白在原核系统内可溶性表达,亲和纯化后,评价该重组蛋白在风疹病毒患者血清学诊断方面的可行性.方法 将PCR扩增得到的风疹病毒E1核酸序列克隆至原核表达载体pET-NusA中,利用原核系统表达融合蛋白NusA-E1,用Western Blot和ELISA方法对其抗原性进行初步评价.结果 NusA-E1蛋白以可溶性形式进行表达,亲和纯化后可以获得高纯度的重组蛋白.Western Blot和ELISA方法结果均证明该重组蛋白具有较强的抗原活性.结论 融合蛋白NusA-E1在大肠埃希菌中以可溶性形式表达,高纯度的重组融合蛋白NusA-E1抗原性强,临床上可以作为血清学诊断抗原,检测风疹病毒抗体.
作者：孙卫国；李邦印；王卫；张灵霞；李国利；程小星 刊期： 2012年第01期
目的 探讨ApoE基因多态性与唐氏综合征发病风险的相关性.方法 采用多重特异性扩增突变系统快速分型法检测80名唐氏综合征初筛高危孕妇,80名初筛低危孕妇和80名正常非孕对照女性的ApoE基因多态性,同时用化学发光法检测血清AFP,β-HCG和uE3,并对不同组基因型、等位基因频率及血清学标志物进行比较.结果 ①高危组、低危组AFP,β-HCG,uE3均明显高于对照组(P＜0.01)；与低危组相比,高危组AFP(15.43±15.26 μg/L),uE3(0.73±0.35ng/ml)明显降低(P＜0.01),β-HCG(45.01±35.63 μg/L)明显增高(P＜0.01),孕妇年龄(30±5岁)明显增大(P＜0.01).②经x2检验,不同ApoE基因型及等位基因在DS高危组、低危组及对照组分布差异无统计学显著性意义(P＞0.05).③经logistic分析ApoE E3等位基因与β-HCG升高,uE3降低,高龄对唐氏综合征风险交互作用差异有统计学显著性意义(P＜0.05),A值分别为422.9,12.08和22.72.结论 ApoE基因多态性不是唐氏综合征高危的风险因子,但E3等位基因与血清β-HCG,uE3水平,孕妇年龄的交互作用可能与唐氏综合征高危风险有关.
作者：刘薇；尹志农；程珍；王俊文 刊期： 2012年第01期
目的 对在怀柔区第一医院参加体检的健康成人血清总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)浓度水平和特征进行调查,并对现有参考范围进行评估.方法 利用全自动生化分析仪测定参加健康体检的3 812例成人血清总胆红素和直接胆红素水平,按照性别、年龄等因素对数据进行统计学分析,并依据统计结果对现有参考值进行评价.结果 怀柔地区健康成人血清总胆红素参考范围分别为男性15.07±5.55 μmol/L,女性12.59±4.59μmol/L,总体13.88±5.26 μmol/L；直接胆红素参考范围分别为男性5.00±2.07 μmol/L,女性3.91±1.72 μmol/L,总体4.48±1.99 μmol/L.不同性别间参考值水平差异具有统计学意义(P＜0.001),各年龄组之间参考值水平除男性TBIL外差异均具有统计学意义(P＜0.001),怀柔地区血清胆红素参考范围与文献提供参考值水平相比差异具有统计学意义(P＜0.001).结论 怀柔地区健康成人血清胆红素水平与原参考值相比发生了较大改变,建议各地实验室应根据不同性别及年龄建立各自的参考范围.
作者：马丽；陈慧娟；周绘；徐辉 刊期： 2012年第01期
目的 研究幽门螺旋杆菌(HP)感染与绝经前女性缺铁性贫血(IDA)的相关性.方法 收集陕西省人民医院2009年2月～2011年3月门诊及住院绝经前女性IDA患者154例及健康门诊体检绝经前女性87例,采用金标法检测血清HP尿素酶抗体.将HP阳性患者随机分为2组,其中1组(39例)及HP阴性组(76例)给予补铁治疗,2组(39例)给予补铁十清除HP治疗.所有患者治疗前、治疗后2周、4周复查血常规及血清铁蛋白.结果 ①154例女性IDA患者,HP阳性78例,感染率50.65％；对照组87例,HP阳性32例,感染率36.79％,二者相比差异具有统计学意义(P＜0.05)；②血清铁蛋白在治疗4周后HP阳性2组明显高于1组(0.005＜P＜0.01)及HP阴性组(P＜0.001).结论 幽门螺旋杆菌感染可能是缺铁性贫血的病因之一,有效地清除HP治疗能提高铁储存,从而可能提高这些IDA患者的疗效.
作者：连小赟；王一；牛倩；苗玉迪；翟欣辉；张玎；王岐山 刊期： 2012年第01期
目的 流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平.方法 将新生1天20只乳鼠随机分为3组(试验组15只,阴性和阳性对照组各5只),取乳鼠海马组织制备成单细胞悬液,经蓝莓花色苷、双氧水处理后,加入二氯荧光素-双乙酸盐(DCF-DA)孵育,DCF-DA进入细胞后可被ROS氧化生成发荧光的2',7'-二氯荧光素(DCF)52,通过流式细胞仪检测DCF荧光水平的变化,同时设立阴性及阳性对照.结果 蓝莓花色苷物质可以降低H2 O2刺激诱导的胞内ROS的产生,以1μmol/L效果为明显.结论 利用流式细胞仪检测过氧化物刺激后胞内产生的活性氧是一种简单、准确、稳定的方法.
作者：赵凯；陈琦；王利；贾宇臣 刊期： 2012年第01期
目的 对融合蛋白d-EGF二级、三级结构进行预测,为构建相应结构重组分子的可能性提供理论指导.方法 以融合蛋白基因序列为基础,用DNAStar软件预测其蛋白质的二级结构;用Insight Ⅱ软件对其三级结构进行建模预测.结果 DNAStar软件的Gamier Robson方法预测融合蛋白d-EGF含较多β-折叠结构；Charge Density-Charge显示其3～22,31～48区段含丰富的正电荷.Insight Ⅱ软件对其三级结构进行建模显示融合蛋白d-EGF存在一个由六个链内二硫键组成的结构域,同时存在3个反向平行的β-折叠结构,这些结构是融合前β-defensin-3,EGF两分子生物学活性所必需的部分.结论 融合蛋白d-EGF的二、三级结构预测结果显示该组合分子可能具有β-defensin-3,EGF两种分子的功能,该方法可以为构建具有相应结构重组蛋白的可能性提供理论基础.
作者：房兵；孙淼；李友建；李娜；耿家珍；邵先安 刊期： 2012年第01期
血气分析仪是医院抢救、监护和治疗危重病人的重要临床检验设备[1].该类仪器含有气路、液路和电路,是计算机技术、微电子技术及电化学整合设计的高科技产品.ABL-5型全自动血气分析仪,由丹麦雷杜公司生产的,具有准确度及精密度高,检测快速,用血量少,操作简便,结果稳定可靠等优点,但在实际应用中也经常会出现一些常见故障及报警,只要认真解读,大多可以自行解决.现将在日常使用过程中,所发生的常见故障及处理方法总结如下,供同行参考.
作者：钟伟明；黄家亮；韦干芬 刊期： 2012年第01期
目的 探讨一种快速、简便、效果好的OPRM1基因PCR产物和测序产物纯化方法,建立稳定的DNA测序技术平台.方法 采用乙醇/醋酸钠、过柱和SAP-Exonuclease Ⅰ结合BigDye Xterminator Purification Kit 3种纯化方法,对50份OPRM1基因PCR产物和测序产物进行纯化效果的比较.结果 SAP-Exonuclease Ⅰ法对PCR反应产物进行纯化的回收率显著高于乙醇/醋酸钠和过柱法,分别为0.86±0.01,0.48±0.08,0.65±0.01(t=32.5,P＜0.001；t=86.1,P＜0.001)；BigDye Xterminator Purification Kit法对测序产物进行纯化成功率显著高于乙醇/醋酸钠和过柱法,分别为100％,62％和84％(x2=23.46,P＜0.001;x2 =8.70,P=0.003).结论 SAP-Exonuclease Ⅰ结合BigDye Xterminator Purification Kit是一种快速、简便、效果好的测序纯化方法.
作者：李少英；马晓燕；张双全；张慧敏；黎青 刊期： 2012年第01期
目的 研究EHD2与肿瘤的关系及其表达抑制对乳腺上皮细胞转化能力的影响.方法 取3例浸润性乳腺导管癌及其配对癌旁正常组织,通过Western Blot比对EHD2的蛋白表达水平.siRNA干扰非癌乳腺上皮细胞HBL100的EHD2蛋白表达水平,研究EHD2下调对细胞悬浮性克隆生长能力的影响.结果 EHD2在癌组织中的蛋白表达均高于正常乳腺组织(F=5.389,P＜0.05)；siRNA干扰EHD2表达明显降低(t=101.458,P＜0.005),HBL100细胞的悬浮生长克隆数显著增加(t=88.754,P＜0.000).结论 EHD2可能是新乳腺抑癌基因,它的表达缺失可能引起正常上皮细胞的恶性转化.
作者：田刚；王学涵；李盼；王洪玉；郭立莎；肖春花；应国光 刊期： 2012年第01期
目的 探讨尿移行上皮细胞在膀胱炎和肾盂肾炎鉴别诊断中的应用价值.方法 应用普通光学显微镜对156例泌尿系感染的尿沉渣标本进行分析[取患者中段尿10 ml于无菌试管中送检,400×g离心5 min,剩余沉淀0.2 ml,混匀后吸沉淀物20μl,滴在波片上,用18 mm×18 mm盖玻片覆盖后显微镜检查,先用10×10低倍镜观察图片,后用10×40高倍镜仔细观察细胞,检查20个视野],探讨表层移行上皮细胞,中、底层移行上皮细胞对膀胱炎、肾盂肾炎的诊断与临床诊断结果进行对比分析,判断其符合情况.以临床诊断作为标准,计算尿沉渣检测结果对膀胱炎和肾盂肾炎诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度.结果 以白细胞＞5/HP、红细胞＞3/HP、移行上皮细胞＞3/HP为阳性,对156例尿沉渣标本结果与临床诊断相比较进行分析,表层移行上皮细胞对膀胱炎的诊断(x2=2.5,P＞0.05)及中、底层移行上皮细胞对肾盂肾炎的诊断(x2=0.1,P＞0.05),差异无统计学意义.表层移行上皮细胞对膀胱炎的诊断灵敏度为80.0％,特异度为98.3％,阳性预测值为94.1％,阴性预测值为93.4％,准确度为93.6％,中、底层移行上皮细胞对肾盂肾炎的诊断灵敏度为78.3％,特异度为96.2％,阳性预测值为78.3％,阴性预测值为96.2％,准确度为93.6％,与临床诊断有很好的符合率.结论 尿沉渣是泌尿系感染检查的重要检测手段,尤其是移行上皮细胞对膀胱炎和肾盂肾炎鉴别诊断有非常好的应用价值.
作者：刘婧；汪建军；余艳丽；任超杰 刊期： 2012年第01期
目的 探讨多药耐药基因MDR1在胃癌组织中的表达及临床意义.方法 收集2009年12月～2010年8月胃癌新鲜癌组织标本53例(实验组)、15例正常胃黏膜组织(对照组),采用逆转录-聚合酶链反应技术检测胃癌组织和正常胃组织中MDR1基因的表达,并分析与临床病理特征之间的关系及对化疗的指导意义.结果 MDR1基因在正常胃组织及胃癌组织中的表达分别为0.57±0.27和0.20±0.10(t=8.13,P＜0.001).MDR1基因的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移之间差异具有统计学意义(t=2.83,3.47;P=0.007,0.002),而与患者性别、肿瘤部位、大小之间差异无统计学显著性意义(t=1.41,0.54,1.16；P=0.16,0.60,0.25).结论 MDR1基因的高表达可能是胃癌多药耐药产生的基础,MDR1基因的检测对制定化疗方案和选择化疗药物有一定的指导意义.
作者：胡秀学；赵颖；杜汉芳；高波；吴玉竹 刊期： 2012年第01期
目的 研究血吸虫病患者是否有肝自身免疫性抗体存在.方法 收集来自荆州市第一人民医院住院的100例血吸虫病患者的血清,运用免疫印迹法检测肝抗原IgG谱,同时运用全自动生化分析仪检测其肝功能,并综合分析其结果.结果 100例血吸虫病患者肝抗原IgG谱显示,LKM-1,LC-1及SLA/LP均为阴性,但有21例血吸虫病患者AMA-M2阳性；对AMA-M2阳性和阴性患者血清肝功能进行比较发现,血清ALT,AST,ALP及γ-GT差异有统计学意义(P＜0.05),其t值分别为7.115,6.685,7.219和8.398.结论 血吸虫病患者可以出现肝自身免疫性抗体,且AMA-M2阳性患者往往伴随肝功能损伤.
作者：张家均；王娴默；雷鸿斌；黄娥；雷选斌；郭辉；董虹 刊期： 2012年第01期
目的 了解湖南省株洲市第一医院患者梅毒感染情况及其分布,为梅毒的全面预防工作提供科学依据.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对株洲市第一医院2010年1月～2011年3月门诊普通患者及术前拟输血患者共29 328例进行梅毒抗体检测,阳性标本用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)法确证.结果 29 328例标本中,男性阳性结果为426例,女性阳性结果为310例,总阳性率为2.51％.在各年龄组均发现有梅毒感染.其中20～40岁组阳性率高,占55.43％.在感染科室当中,外科患者阳性感染率高,其次是妇产科.结论 患者血清梅毒抗体在临床科室占一定比例的阳性率,因此对患者,尤其是术前患者进行梅毒抗体检测,可以及时阻断梅毒的传播,有效预防院内感染,并有利于医护人员的自我保护.
作者：唐满玲；顾敏；彭俊；李见红 刊期： 2012年第01期
目的 研究紫外线照射对骨髓间充质干细胞中survivin表达的影响及其意义.方法 分离并培养正常成人骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测其特异性表面标志.利用普通紫外线距离细胞20 cm分别照射2 min,5 min后,RT-PCR法检测其中survivin mRNA的表达情况,利用gel-pro analyzer软件比较未经照射、照射2 min、照射5 min后正常成人骨髓间充质干细胞中survivin的表达量,应用SPSS13.0软件,配对t检验方法分析结果.结果 经紫外线照射2 min组与未经照射组比较t值为2.013,P＞0.05,差异无统计学意义,而经紫外线照射5 min组与未经照射组比较t值为7.225,P＜0.01,差异有统计学意义,经紫外线照射5 min后正常成人骨髓间充质干细胞中survivin的表达量明显增高.结论 紫外线照射可以提高正常成人骨髓间充质干细胞中survivinmRNA的表达量,提示紫外线照射可能通过提高抗凋亡基因survivin的表达而延长间充质干细胞的寿命.
作者：周雅丽；白海；马丽；马得炳；张红 刊期： 2012年第01期
目的 了解耐碳青霉烯抗生素鲍曼不动杆菌的抗生素耐药情况,指导临床合理用药.方法 选取中国中医研究院望京医院2008～2010年期间临床和门诊患者样本的耐碳青霉烯抗生素的鲍曼不动杆菌分离株,通过药敏实验分析这些菌株对15种常见抗生素的耐药性.结果 从标本类型分布看,主要的是痰液标本,共110株(88％),其次是分泌物共9株(7.2％)和2株自导管(1.6％).从科室统计分析发现,ICU分离到的鲍曼不动杆菌数多,68株；其次是针灸科,分离的菌株是15株；神经外科、CCU、普通外科、心内科、内分泌科、呼吸科、创伤一科,分别分离到14,11,7,4,3,2和1株.选取的125株鲍曼不动杆菌对哌拉西林、美罗培南、替卡西林/克拉维酸、哌拉西林/三唑巴坦、环丙沙星、亚胺培南、头孢吡肟、阿米卡星、妥布霉素、头孢曲松和头孢他啶耐药率高达90％以上,依次为100％,99.2％,99.2％,98.4％,96.8％,96％,96％,94.4％,93.6％,92％和91.2％.其次是氨曲南、左氧氟沙星和头孢哌酮/舒巴克坦,耐药率依次是72.8％,64％和30.4％,对多黏菌素B的耐药率低,仅为0.8％.结论 该院耐碳青霉烯抗生素的鲍曼不动杆菌对大多数种类的抗生素均有较高的耐药性,仅对少数几种抗生素表现为敏感,临床上应严格按照科学的用药方案进行抗生素使用,防治耐药性的进一步产生和院内传播.
作者：郭洁；徐杰；王丽丽；王玉飞；苑锡铜；袁静；宋宏彬；黄留玉；张宁；陈泽良；陈永德；刘世巍 刊期： 2012年第01期
目的 旨在建立一种快速及高通量的CYP2C19药物代谢酶相关基因多态性的检测方法,为个体化治疗提供用药参考.方法 抽取96例人外周血DNA,应用带有生物素标记的扩增引物,经PCR扩增并制备焦磷酸测序单链模板,于PyroMark ID焦磷酸测序仪上进行焦磷酸测序,且以Sanger测序法测序结果为对照,观察分析准确性.结果 运用焦磷酸测序可以成功检测CYP2C19相关基因型；单个SNP位点检测经与Sanger测序方法比较,符合率为100％.同时,通过设计焦磷酸测序引物,两个PCR产物可合并于一管中进行焦磷酸测序,与单管检测一个位点的焦磷酸测序方法相比,能有效降低检测成本,节省检测时间.结论 该方法可准确、高通量、快速检测药物代谢酶相关基因多态性,该方法在个性化医疗上有较大的推广应用价值,也可以将该平台运用于其他疾病相关基因多态性检测.
作者：施宏；虞闰六；马金飞；任绪义 刊期： 2012年第01期
现代检验医学杂志
主管:陕西省卫生厅
主办：陕西省临床检验中心,陕西省人民医院
