梁国庆；李继承；杨则然
目的构建人抗汉坦病毒(HV)抗体重链可变区(VH)基因噬菌体表面展示文库,筛选人源性抗HV单克隆抗体(mAb).方法从HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,用RT-PCR扩增VH基因,与噬菌粒pHEN1连接,构建VH基因噬菌体表面展示文库.经3轮吸附一洗脱一扩增的亲和筛选后,用ELISA鉴定抗HV噬菌体抗体的活性.结果HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,成功扩增出VH基因,并构建了VH基因噬菌体表面展示文库.经3轮亲和筛选,获得24个具有与HV结合活性的重组噬菌粒克隆.对其中一个克隆的VH基因(VH-D10)的序列分析表明,该基因的全长为363bp,编码121个氨基酸,与EMBL和GenBank中所有已知免疫球蛋白(Ig)基因进行同源性比较,其同源序列均为人Ig Vn基因.结论成功地构建了人抗HV抗体VH基因噬菌体表面展示文库,并筛选到有HV结合活性的重组噬菌体克隆,为制备人源性抗HV mAb奠定了基础.
作者：许国双；王汉民；陈威；杨为松；白雪帆 刊期： 2001年第06期
目的观察培养人视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)核因子κB(Nucleartranscriptionfactor-κB,NF-κB)的表达,及地塞米松对其表达的影响.方法培养人RPE细胞接种于24孔板,随机分为阴性对照组、脂多糖(Lipolysaccharide,LPS)刺激组和地塞米松及LPS作用组,做免疫组化ABC法染色,显微镜下观察.结果对照组NF-κB在培养RPE细胞胞浆中表达,LPS刺激后转入胞核表达,地塞米松作用后,再以LPS刺激,RPE细胞核及细胞浆内NF-κB的表达减弱,胞核中表达水平减弱明显,且减弱的程度与地塞米松浓度有关.结论LPS能够激活RPE细胞的NF-κB使其向核内转入,一定浓度的地塞米松对RPE细胞的NF-κB表达及向胞核转入有抑制作用.
作者：田艳明；惠延年；宋宗明 刊期： 2001年第06期
随着神经生物学的飞速进展,神经细胞原代培养成为神经药理、病理生理及活性物质等方面研究的一个很好模型.为此,观察和分析神经元体外特性(神经元存活、突起生长以及神经元形态变化等)的一些指标也相继出现.由于分散的单一细胞培养能够比较理想地反映在体情况,现多选用这一方法进行体外调控和观察.但是培养中细胞脱落和细胞重聚现象又给结果分析造成一定困难,影响了实验结果的客观性.因此,需选择合适的细胞外基质来解决这些问题.常用的细胞外基质有胶原和多聚赖氨酸.胶原Ⅳ(collagenⅣ)是一种细胞支持物,它是细胞外基质的主要成分,可直接或间接参与细胞的附着[1];多聚赖氨酸(PLL)可通过改善培养皿的电荷状况及吸附培养液成分,促进细胞贴壁[2,3].然而两种方法各有利弊,本实验在常规的技术方法基础上,联合应用两种基质,旨在探索更适于分散单一神经元生长和存活的新方法.
作者：王春婷；杨浩；许汉鹏；孟晋宏；游思维；鞠躬 刊期： 2001年第06期
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是一种针对中性粒细胞和单核细胞胞浆成分的自身抗体,1982年,Bavies等在少数非典型血管炎患者中发现.目前认为ANCA与某些疾病,尤其是自身免疫性病相关,并将其作为诊断系统性血管炎等相关疾病的血清学标志物.其主要检测方法为免疫荧光染色. 应用间接免疫荧光法(IIF)可将ANCA分为C-ANCA和P-ANCA两类.C-ANCA的靶抗原主要为蛋白酶3(PR-3)相对分子质量(Mr)为29000,P-ANCA针对的靶抗原主要为髓过氧化物酶(MPO)Mr为120000.抗PR-3自身抗体与韦格氏肉芽肿密切相关,抗MPO自身抗体与原发性局部坏死性肾小球肾炎密切相关.除PR-3和MPO以外粒细胞胞浆内碱性磷酸酶也可能是ANCA的靶抗原之一.随着ANCA及靶抗原研究的进展,检测ANCA的方法也逐步完善.
作者：靳淑玲；王北宁 刊期： 2001年第06期
聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽时，凝胶浓度通常在16％以上。对这类高浓度凝胶我们曾采用文献[1，2]的方法制干胶，但效果不好，凝胶易干裂或皱缩。经反复实验，我们摸索出一种极为简便的方法，仅用一张玻璃纸即可将高浓度凝胶制成平整光亮，清晰透明的理想干胶，此方法也适用于其他浓度的凝胶。具体方法如下：
作者：张延凤；张晓楠 刊期： 2001年第06期
目的应用酵母双杂交系统筛选人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外小配体结合域.方法采用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的Flt-1 cDNA,分别含胞外第2、1-2、2-3和1-3个loop,构建酵母双杂交系统融合表达质粒,并将pGBT9/hVEGF165与pGAD424/Flt-ls两两配对转化酵母菌SFY526.采用滤纸法和液体培养法对阳性克隆进行β-半乳糖苷酶活性分析.结果Flt-1胞外loop2-3与loop1-3的配体结合能力相差不大,loop1-2的结合力较弱,单独第2个loop无配体结合能力.结论利用酵母双杂交系统,筛选出了Flt-1胞外小配体结合域-2-3loop,这对研制分子量更小、安全性更高的可溶性Flt-1片段,开发其在肿瘤、糖尿病性视网膜病变等血管生成相关疾病基因治疗中的应用具有重要的指导意义.
作者：马骊；王小宁；张智清；曾革非；周小明；陈爱君 刊期： 2001年第06期
sTNF-R是细胞表面膜结合型肿瘤坏死因子受体(mTNF-R),经蛋白激酶等裂解而形成的.sTNF-R有两型:sTNF-RI和sTNF-RIⅡ.TNF(包括TNF-α和TNF-β)是一种具有多种生物学效应的炎性介质,其生物学活性通过与mTNF-R结合而介导[1].为了探讨HSP患儿血清sTNF-R的水平变化及其意义,我们检测了过敏性紫癜(HSP)患儿治疗前后、有无并发肾炎HSP患儿及其中9例治疗后复发的急性期HSP患儿血清sTNF-R的水平.
作者：马庆海；王玉龙；杨文东；安振国；綦映柳；魏延波 刊期： 2001年第06期
酒精对人体心、肝和脑等器官的损害已众所周知，其降低人体红细胞的变形性（RCD）也有报道，但其对人体红细胞免疫功能的影响，尚未见报道。为此，我们观察了山东省利津县长期大量饮酒者红细胞免疫功能的状态。
作者：杨文东；王光红；安振国；綦映柳；陈明 刊期： 2001年第06期
随着人类基因组计划的完成,蛋白质的功能研究将成为后基因组时代的主要任务[1].任何蛋白质功能的发挥,离不开与其他蛋白质之间的相互作用.随着分子生物学方法的发展,出现了以基因文库为基础的蛋白探测、噬菌体呈现等技术,但这些方法反映的都只是蛋白的体外相互作用.酵母双杂交系统是一种新的直接在真核细胞内检测蛋白相互作用的新方法,灵敏度高[2,3].双杂交系统是基于一些转录激活因子(如酵母的Gal4蛋白和细菌的Lex4蛋白),往往由两个在结构上可以分开、功能上相互独立的结构域构成,这两个结构域在同一细胞内只要空间上靠近,就可以激活下游报道基因的表达[4].第三代酵母双杂交载体系统由pGBKT7和pGADT7组成,编码诱饵蛋白的基因一般融合到质粒pGBKT7中,表达文库一般构建在质粒pGADT7中.
作者：吴元明；陈苏民；陈南春；程轶梦；纪宗玲；杨力军 刊期： 2001年第06期
目的寻找肝癌细胞表达的肿瘤抗原肽.方法应用0.2mol/Lph3.0柠檬酸缓冲液酸洗肝癌细胞系HHCC,经Sephadex G-25过滤及反向高效液相色谱分离纯化,获得可与HLA-Ⅰ类分子结合的不同组分短肽.将其与抗原加工缺陷的HLA-A2+T2细胞反应,进行肿瘤细胞特异性表位测定,同时进行CTL杀伤鉴定.结果获得4个可与HLA-A2结合的组分,其中2个可以激发较强的CTL杀伤反应.结论肝癌细胞系HHCC中存在能够激发CTL特异性反应的肿瘤抗原肽,并证实上述寻找肿瘤抗原肽的技术路线具有可行性.
作者：郭爱林；隋延仿；叶菁；曲萍；张晓楠；张延凤；李增山 刊期： 2001年第06期
目的探讨商业用腹膜透析液(commercial peritoneal dialysate,CDS)对腹腔巨噬细胞功能的影响.方法培养的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)在含不同葡萄糖浓度(15、25和42 g/L)的CDS中,经不同时间(10、30和60 min)的暴露,观察MФ还原MTF的能力及其NO的产量.结果低葡萄糖浓度(25 g/L)暴露10 min实验组,MФ还原MTT的能力(A570nm值)为0.210±0.008,NO的产量为(9.1±1.3)μmol/L,均明显低于对照组(P＜0.01);高葡萄糖浓度(42 g/L)和较长时间(60 min)暴露组,MФ还原MTF的能力(A570nm值)为0.056±0.004,NO的产量为(5.7±1.1)μmol/L,与对照组相比较,改变明显(P＜0.01).结论短时间CDS暴露,即可降低MФ的活力及NO产生,这种作用与CDS中的葡萄糖浓度以及MФ暴露于CDS的时间呈正相关.
作者：梁国庆；李继承；杨则然 刊期： 2001年第06期
随着噬菌体展示技术的发展,抗体库的构建方案日趋成熟,使人们可以从人源噬菌体抗体库中淘选到全人源化的基因工程抗体[1].为抗病毒、抗肿瘤以及自身免疫性疾病等的治疗,开辟了新的途径[2].
作者：张志超；胡学军；张红梅；安利佳；袁晓东 刊期： 2001年第06期
目的克隆腺病毒纤毛基因,为构建腺病毒靶向性载体创造条件.方法应用限制性内切酶酶切技术,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy-1,经多次亚克隆后完成克隆纤毛基因,并构建纤毛基因原核表达载体.用IPTG诱导纤毛蛋白的表达,再用SDS-PAGE和Western blot对其进行分析.结果成功地克隆纤毛基因.质粒pBS/Fiber经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性.经质粒pQE/Fiber转化的细菌,在IPTG诱导下可表达一种新的蛋白,并于5h表达量高.经Western blot证实,在变性条件下表达蛋白的Mr为62 000,在非变性条件下为186 000.结论已克隆的纤毛基因能在大肠杆菌中表达,并具有三聚体结构,可用于腺病毒载体靶向性构建.
作者：付员根；温博贵；刘志国；吴开春；樊代明；王晓侠 刊期： 2001年第06期
era基因是细菌生存繁殖所必需的重要基因,与细胞周期和细胞分裂有关.era基因首先在大肠杆菌被发现,由于其编码的氨基酸序列与人及酵母的BAS蛋白有部分相似之处,故命名为E.coli RAS-like(era)基因[1].era基因不仅广泛存在于原核生物中,而且在真核生物(如蠕虫、小鼠和人)的组织中都发现有与细菌era高度同源的基因存在[2-4].人era基因的全长cDNA于1998年被克隆,与原核era基因具有很高的同源性.人ERA蛋白与大肠杆菌ERA蛋白的氨基酸序列有30%相同,两者的相似性为53%.人era基因的功能尚不清楚.我们拟采用酵母双杂交技术,克隆了人era结合蛋白基因,研究了人era与其结合蛋白的相互作用,以便对其功能的研究提供依据.
作者：程轶梦；吴元明；陈苏民；陈南春；纪宗玲 刊期： 2001年第06期
目的探讨白细胞介素10(IL-10)的表达和调控,在角质形成细胞诱导免疫抑制作用中的意义.方法从体外建立的混合表皮淋巴细胞培养体系(MELC)中,分离贴壁的角质形成细胞,并分析IL-10的表达来源.我们将抗IL-10单抗引入培养体系中,观察其对角质形成细胞所诱导的免疫抑制的影响.结果在混合培养体系中,IL-10主要来源于角质形成细胞.抗IL-10单抗可有效地阻断角质形成细胞所诱导的免疫抑制效应.结论IL-10的表达在角质形成细胞所诱导的免疫抑制效应中可能起重要作用.
作者：周洪；沈佰华；李宁丽；郑泽铣；周光炎 刊期： 2001年第06期
目的通过计算机同源模建,寻找丙型肝炎高变区中保护性多肽抗原表位.方法用计算机同源模建预测多肽的抗原性,然后用淋巴细胞转化试验验证其抗原性.结果同源模建与实验结果相一致.结论同源模建是一种高效寻找具有保护性的抗原多肽的经济快速的方法.
作者：苏琴；郑宇；林芳；赵军；李伯安；李静；高蓉；程云 刊期： 2001年第06期
HLA-DQβ链第57位的非门冬氨酸(NA)或门冬氨酸(A)与l型糖尿病的易感性有关.国内外已有广泛报道,这些基因紧密连锁,使各单倍型由亲代完整传递到子代[1].现已明确,糖尿病(DM)家族成员发生糖尿病者远高于非DM家族成员,特别是DM患者一级亲属,在发生DM前有明显的β细胞功能减退[2].糖耐量低减(IGT)是糖尿病的前期表现,本研究通过对IGT患者的HLA-DQβ链第57位NA或A,以及β细胞功能变化的研究,进一步认识成人缓慢进展型l型糖尿病(Slowly pro-gressive IDDM,SPIDDM)家系一级亲属的IGT在糖尿病病程中的地位,这将有助于开展对糖尿病的预防研究[3].
作者：季洪赞；缪东培；段苏友；杨继红；李琳；胡拥军；商玮；邱龄龄；胡兰萍 刊期： 2001年第06期
目的分析子宫内膜异位症患者中γδ+T细胞和天然杀伤细胞(NK)功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ+T细胞和自然杀伤细胞(NK)功能的影响.方法采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中γδ+T细胞及NK细胞的表型与功能.结果子宫内膜异位症(疾病组)患者外周血、腹腔液中CD56+细胞与正常对照组相比较无明显差异,而疾病组腹腔液中γδ+T细胞的百分率高于其外周血和正常对照组.疾病组腹腔液中的γδ+T细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组.疾病组的腹腔液对正常人外周血γδ+T细胞及NK细胞的功能具有负调节作用.结论子宫内膜异位症患者的γδ+T细胞及NK细胞的功能低下,处于被抑制状态,提示患者的腹腔液中,可能存在γδ+T细胞及NK细胞的功能抑制因子.
作者：马安伦；葛海良；王树军；张冬青；余奇文；徐红；林其德 刊期： 2001年第06期
甘露糖结合凝集素(mannose-bindinglectin,MBL)是哺乳动物C型凝集素超家族的成员,在机体抗感染免疫反应中处于第一线[1].MBL能特异性地识别多种病原微生物表面的多糖结构,进而激活补体系统和调理吞噬杀灭病原[2,3].同时,它也参与多种免疫性疾病的发生[4].目前,有关其与疾病的关系,以及其在疾病治疗和预防中作用的研究正方兴未艾,因而获取有活性的MBL蛋白,并制备其特异性抗体,已成为这些研究必不可少的工具.
作者：金振晓；胡军；胡巧侠；刘维永；陈南春；陈苏民；纪宗玲 刊期： 2001年第06期
目的比较正常足月胎盘与胎儿宫内生长迟缓胎盘(IUGR)中的滋养细胞凋亡指数,以及bcl-2和fas的表达,以探讨滋养细胞的凋亡与bcl-2和fas表达的关系.方法取正常足月胎盘组织和Ⅰ-UGR胎盘组织各5例,固定、石蜡包埋、切片,每组分别TUNEL法以及ABC法抗bcl-2和抗fas免疫组织化学染色.镜下计数滋养细胞的凋亡指数,并对bcl-2和fas的表达量进行显微图像分析.结果与正常足月胎盘相比,IUGR胎盘的凋亡指数显著增多(P＜0.01),bcl-2表达量显著减低(P＜0.01),而fas表达量无显著差异(p＞0.05).结论IUGR胎盘滋养细胞的凋亡指数明显增多可能与细胞bcl-2表达量减少有关,而不受fas表达量的影响.
作者：卢小东；朱华英；徐昌芬 刊期： 2001年第06期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
