宋斐；邢金良；张思河；杨向民；陈志南
目的:探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制. 方法:将培养的妊娠早期滋养层细胞,分为正常对照组(细胞+培养液)、H2O2组(细胞+培养液+H2O2)和胰岛素+H2O2组(细胞+H2O2+胰岛素).采用透射电镜观察及流式细胞术,观察H2O2诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2O2诱导的细胞凋亡的抑制作用.并检测胰岛素对滋养细胞caspase-3的活性及Bcl-2蛋白表达的影响.结果:H2O2可诱导培养的滋养细胞凋亡,透射电镜下可见特征性的细胞核改变.胰岛素可显著抑制H2O2诱导的细胞凋亡,流式细胞仪检测其凋亡率较H2O2组显著下降(P<0.01).H2O2组滋养细胞中caspase-3的活性较对照组显著增高(P<0.01),而Bcl-2蛋白的表达则较对照组显著下降(P<0.01).结论:胰岛素可明显抑制H2O2诱导的滋养细胞凋亡,其机制可能与降低caspase-3的活性和促进Bcl-2蛋白的表达有关.
作者：于月成；辛晓燕；张峰；马向东；王德堂；郭惠玲 刊期： 2003年第05期
目的:应用本室制备的抗单链DNA(ssDNA)单克隆抗体(mAb),检测多种化疗药物对不同肿瘤细胞株凋亡的诱导作用,并根据凋亡率判断肿瘤细胞对化疗药物的敏感性. 方法:用血浆峰值浓度(PPC)的9种化疗药物,分别诱导肿瘤细胞株K562和Hep-2的凋亡.用抗ssDNA mAb免疫组化染色法,检测肿瘤细胞株的凋亡并计算调亡率.结果:以抗ssDNA mAb建立的检测细胞凋亡的免疫组化法,能够区分凋亡细胞和非凋亡细胞.该法检测证明,化疗药物可诱导敏感肿瘤细胞株凋亡,但不同化疗药物诱导同一肿瘤细胞株或不同肿瘤细胞株凋亡的程度不同.结论:抗ssDNA mAb免疫组化法,可用于检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.
作者：吴晓燕；徐志伟；吴国庆；苗乃法；冯永堂 刊期： 2003年第05期
目的:研究支气管哮喘(哮喘)患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中肥大细胞的功能特性.方法:29例轻度哮喘患者BALF中的细胞经冲洗后,加入含抗IgE抗体、腺苷、缓冲液或腺苷+抗IgE抗体的LP4试管中进行激发试验.检测BALF肥大细胞中的组胺释放量.结果:腺苷浓度达100 μmol/L时,仍无明显刺激组胺释放的作用,仅在浓度高达1 000 μmol/L时,方可诱导哮喘患者BALF中肥大细胞释放约17%的组胺.抗IgE抗体的浓度大于1×10-4 g/L时对哮喘患者BALF中肥大细胞的释放组胺有明显的促进作用;仅3×10-5 g/L的抗IgE抗体与腺苷联合应用的实测值,明显高于对应的单独作用组的相加值.结论:哮喘患者BALF中的肥大细胞对腺苷的刺激反应较差,但对抗IgE抗体刺激的反应性明显增强.仅低浓度的抗IgE抗体和腺苷具有协同作用.
作者：谢华；何韶衡；陈萍 刊期： 2003年第05期
外膜蛋白gp120是HIV-1主要结构蛋白之一,它的V3区存在着中和抗体决定簇、CTL决定簇,以及对巨噬细胞和脑组织纤维特异性识别的区,与HIV-1可诱导中和抗体应答、特异性细胞毒反应及分子致病机制密切相关[1,2].
作者：江文正；金宁一；李子健；张立树 刊期： 2003年第05期
目的:探讨瞬时表达的反义CD40 RNA,对EB病毒转化的健康人B细胞膜表面CD40分子表达和增殖能力的影响. 方法:应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建人反义CD40 RNA的真核表达载体pcDNA3/CD40,并以其转染本室建立的EB病毒转化的健康人B细胞.应用流式细胞仪(FACS),检测B细胞膜上CD40分子表达的变化.应用MTT比色法检测反义CD40 RNA对B细胞增殖能力的影响.结果:与转染空载体pcDNA3组相比,转染pcDNA3/CD40细胞上CD40分子的表达降低(P<0.01),其增殖能力明显降低(P<0.01).结论:反义CD40 RNA技术,可作为有效的免疫调控手段.CD40基因本身在细胞的生长代谢中也起着重要作用.
作者：郑祥雄；李和军；李频；周小玲 刊期： 2003年第05期
目的:探讨核因子-κB(NF-κB)p65在口服耐受发生中的活性改变及其意义.方法: 雌性Wistar大鼠30只随机分成两组: ①口服耐受组, 用小剂量(每次8 mg/2 mL PBS)的Fx1A抗原灌胃.②对照组, 用PBS 2 mL/次灌胃.观察大鼠迟发型超敏反应(DTH), 进行脾淋巴细胞增殖试验, 了解大鼠免疫功能的改变.以免疫组化和ELISA法, 检测大鼠淋巴组织中NF-κB p65的活性及TGF-β1的表达.结果: 与对照组相比较, 口服耐受组大鼠DTH和抗原特异性淋巴细胞增殖反应明显受抑制; 肠黏膜Peyer's淋巴结(PP结)中NF-κB p65的活性及TGF-β1的表达明显增加.脾淋巴组织中NF-κB p65的活性降低, 但TGF-β1的表达明显增加.结论: 低剂量Fx1A抗原诱导的口服耐受的发生, 可能与不同部位免疫细胞内NF-κB p65的活性改变有关.
作者：杜晓刚；甘华；陈雪梅 刊期： 2003年第05期
目的:探讨HSV-1在诱导Hela细胞凋亡中, 细胞内游离钙浓度的变化及钙离子螯合剂对HSV-1诱导Hela细胞凋亡的抑制作用.方法: HSV-1感染Hela细胞后, 用扫描电镜及透射电镜观察凋亡情况.用荧光探针标记细胞内游离Ca2+, 在不同时间观察细胞内游离Ca2+浓度的变化.结果: HSV-1感染Hela细胞后,出现了典型的凋亡形态学变化.细胞内游离Ca2+浓度在HSV-1感染Hela细胞后12 h达高峰; 典型的凋亡形态学变化出现在HSV-1感染Hela细胞后24 h.细胞内Ca2+螯合剂能显著抑制HSV-1诱导的Hela细胞凋亡.结论: 细胞内游离Ca2+在HSV-1诱导的Hela细胞凋亡过程中, 具有重要作用, 此实验结果为临床治疗相关疾病提供了有用的线索.
作者：杨秋霞；姜洪池；李斌；郗雪艳；刘玉；王兰；吕雪莹；谷金宇；李殿俊 刊期： 2003年第05期
目的:研究荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA对辨别病毒复制的临床意义.方法:采用FQ-PCR和ELISA方法,检测79例患者血清HBV-DNA拷贝数和免疫学血清指标.结果:26例HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性的标本,HBV-DNA也全部阳性,平均拷贝数为2.7×105/mL.8例HBsAg、HBeAg阳性的标本,HBV-DNA也全部阳性,平均拷贝数为5.2×104/mL.21例HBsAg、抗-HBe、抗-HBc均阳性的标本HBV-DNA阳性率为66.7%,平均拷贝数为3.1×104/mL.9例HBsAg阳性的标本HBV-DNA阳性率为11%.平均拷贝数为1.4×103/mL.结论:荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA可以更加准确地判断HBV的感染和复制情况.
作者：许丽艳；敬华；杨晋德；刘春雷 刊期： 2003年第05期
目的:证实新分离出的冠状病毒与SARS患者的关糸.方法:应用IFA诊断试剂做免疫荧光染色,检测2003-02-04～04-13期间,广东地区3所医院临床诊断为SARS的72例患者血清特异性抗体,以及直接参加救治SARS患者但末发生感染的109名医护人员的血清标本,并以疾病流行期间70例健康体检者作为正常对照组.结果:72例SARS患者中,62例血清特异性IgG呈阳性;而109例密切接触但末发生感染的医护人员及70例SARS流行期间健康体检者,血清特异性IgG和IgM均呈阴性.结论:SARS冠状病毒是引发广东地区SARS的病原体.
作者：石玉玲；李林海；徐德兴；祝庆余；司炳银；于曼 刊期： 2003年第05期
传统的免疫球蛋白只能结合单一特异性的抗原分子,而双特异性抗体的两个抗原结合位点具有不同的特异性,能够结合不同的抗原分子.双特异性抗体在生物医学领域特别是在肿瘤免疫治疗方面已取得了较大成就.鉴于用传统的方法很难大量制备符合临床要求的双特异性抗体,近年来,双特异性抗体片断制备技术进展很快.然而,在双特异性抗体的临床应用中,许多需要其具备完整的IgG形式.因为这种形式含有包括CH2区域和CH3区域的Fc片段,可以提供较长的血浆半寿期及引发效应功能.因此,随着高效制备双特异性IgG(BsIgG)新技术的日臻成熟,BsIgG的应用研究将会进一步深入.
作者：方敏；黄华樑 刊期： 2003年第05期
目的:探讨炎症反应与冠心病(CHD)之间的关系.方法:101例CHD患者分为3组,即稳定型心绞痛(SAP)组(19例)、不稳定型心绞痛(UAP)组(33例)和急性心肌梗死(AMI)组(49例).分别采用免疫浊度法及血细胞计数仪,检测外周血中的C-反应性蛋白(CRP)水平及白细胞(WBC)总数.20例AMI死亡患者的心肌组织切片进行病理学检查.结果:AMI和UAP组血中CRP的水平和WBC总数明显高于对照组(P<0.01).病理学检查发现,AMI患者心肌中有大量白细胞浸润.结论:CHD发生、发展有炎症反应的参与,检测血中的CRP和WBC可作为监测病情、预测冠心病危险性的常规指标之一.
作者：王勇；丁体龙；张玲玲；严家春；俞小忠；石坚 刊期： 2003年第05期
目的:观察大鼠异体异位心脏移植术后不同时间点, 淋巴细胞相关免疫分子的表达水平、供心存活率及心肌组织的病理学改变, 探讨免疫排斥反应的相关时间进程.方法: 分别经供体SD大鼠的心脏主动脉、肺动脉与受体Wistar大鼠的腹主动脉及下腔静脉吻合, 进行异位心脏移植术.于术前及术后不同时间点, 取血分离淋巴细胞.用流式细胞仪分别检测淋巴细胞上CD4、CD8、IL-2R、ICAM-I和MHC-II类分子的表达水平.对供心心肌组织进行常规病理学检查.结果: 于移植后24 h, 只有MHC-II类分子的表达水平增加, CD4 、IL-2R和ICAM-I的表达水平降低, CD8无改变.术后72 h, CD4 、CD8及IL-2R的表达增加, 其中CD8和IL-2R达峰值.术后7～10 d, 除CD4的表达继续增加外, 其他4种免疫分子的表达水平逐渐降低.术后不同时间点移植心脏的存活率分别为: 100%(24 h)、85.7%(72 h)、16.7%(7 d)、0(10 d和12 d).病理学检查显示, 移植后24 h, 心肌组织无明显的病理学变化, 术后3 d, 7只大鼠中4只出现Ⅰ A级及以上病理改变.术后7 d, 6只大鼠全部发生Ⅱ级以上的病理学变化.结论: 大鼠心脏移植后的24 h内, 外周血淋巴细胞为以MHC-II分子表达为主的抗原识别、呈递期, 并伴有一过性免疫功能降低; 术后24～72 h为T细胞活化期, 术后3～7 d为免疫排斥反应效应期.CD4、CD8和IL-2R等免疫分子表达的峰值与开始出现轻度排斥反应时病理学变化的时间相一致.
作者：顾云；黄益民；张永科；吕燕宁；林筝；张颖；葛六平 刊期： 2003年第05期
有关多发性肌炎(PM)/皮肌炎(DM)外周血淋巴细胞亚群的研究仅见早期报道,且尚无统一结论.为探讨PM/DM外周血单个核细胞(PBMC)HLA-DR的表达及其意义,我们应用双荧光抗体标记、流式细胞仪(FACS)进行了检测.
作者：张士发；梁再赋；许静；赵丽萍；王良明；顾绍裘 刊期： 2003年第05期
蓖麻毒素(Ricin)是一种毒素蛋白,由A、B两条多肽链组成,通过二硫键结合,毒素进入人体后,B链结合到细胞表面,A链内转化到细胞浆,使核糖体失活,从而抑制蛋白质的合成,造成人体中毒死亡,对成人的平均致死剂量为1.5 μg[1].
作者：郝兰群；郭胜清；郭振泉；宋凤卿；刘云 刊期： 2003年第05期
目的:利用噬菌体随机肽库,体内筛选可与胃癌移植瘤血管内皮细胞特异结合的多肽片段,为肿瘤的血管抑制治疗提供有效的方法和手段.方法:采用肾包膜下移植法(SRCA),建立免疫抑制小鼠肾包膜下人胃癌移植瘤模型.在小鼠体内对噬菌体十二肽库进行4轮淘筛,回收移植瘤和对照组织(脑)中的噬菌体并滴定计数.同时,用免疫组织化学染色法,检测噬菌体在移植瘤组织中的分布情况.结果:与胃癌移植瘤血管特异结合的噬菌体得到富集,为对照组织(脑)的3.4倍.随机挑取单个克隆测序鉴定,发现十二肽YESIRIGVAPSQ的出现次数多,免疫组化染色显示,噬菌体注入小鼠尾静脉5 min 后,定位于移植瘤血管的内皮细胞.向小鼠体内单独注入呈现十二肽YESIRIGVAPSQ的噬菌体,从胃癌移植瘤组织回收的噬菌体数量为对照组织(脑)的4.2倍,肺的4.9倍,心脏的5.4倍.结论:筛选到的模拟短肽YESIRIGVAPSQ,有可能成为肿瘤血管靶向治疗的有效工具.体内淘筛噬菌体随机肽库,筛选与靶器官血管内皮细胞特异结合的短肽是可行的,具有推广和应用价值.
作者：王瑜；吴开春；聂勇战；韩者艺；韩全利；乔泰东；樊代明 刊期： 2003年第05期
目的:探讨地龙提取物(AL)对小鼠腹腔MΦ和脾细胞分泌NO和TNF-α的影响.方法:将不同剂量的AL与小鼠腹腔MΦ或脾细胞孵育24 h,收集上清液分别采用重氮化反应和MTT比色法,检测NO和TNF-α的水平.结果:0.1 g/L的AL组与正常对照相比较,可明显提高MΦ和脾细胞分泌NO的水平,并可以拮抗地塞米松(Dex)对MΦ和脾细胞分泌NO的抑制作用.1×10-4,1×10-3 g /L的AL组可促进MΦ和脾细胞分泌TNF-α,并可拮抗Dex的抑制作用.结论:AL可以激活ΜΦ和脾细胞,使其分泌NO和TNF-α的水平增加,并可拮抗Dex对ΜΦ和脾细胞的抑制作用.
作者：唐小云；梁再赋；贾秀坤；纪晓丽；杨丽群 刊期： 2003年第05期
目的:探讨重症肌无力(MG)胸腺细胞凋亡异常、Fas表达异常在自身免疫应答形成中的作用.方法:用手术切除的MG患者的胸腺,制备胸腺提取液和胸腺细胞悬液,用MTT比色法测定胸腺细胞的增殖;用DNA电泳及细胞形态学观察细胞凋亡;用流式细胞仪检测细胞表面Fas的表达,用RT-PCR结合单链多态构象性分析(SSCP),探讨Fas基因的转录及可能存在的Fas基因突变.结果:MG患者的胸腺提取液,能抑制正常胸腺细胞增殖,但不能抑制MG患者胸腺细胞增殖.在地塞米松作用下,正常人及患者胸腺细胞的增殖均可被抑制,细胞增殖抑制率分别为58.33%和54.26%.MG患者胸腺细胞的DNA电泳可见梯状条带,并且胸腺细胞上Fas的表达百分率增加[(20.38±6.07)%],与空白对照组[(12.43±4.32)%]相比较P<0.05.对MG患者胸腺细胞Fas mRNA进行RT-PCR-SSCP分析,部分MG患者出现异常电泳条带.结论:MG患者胸腺细胞的凋亡及Fas分子表达均异常,而且存在Fas基因突变,提示与本病的发生发展有关.
作者：杜英；张清勇；阮丽荣；梁长春；李倩如；何炜 刊期： 2003年第05期
目的:构建能抑制MHC-Ⅱ类分子表达的MHC-Ⅱ类分子反式激活因子(MHC class Ⅱ transactivator, CⅡTA)基因的突变体, 并探讨其抑制MHC-Ⅱ类分子表达的机制.方法: 用PCR、酶切及连接技术, 构建不含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA2, 含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA3以及含起始密码子及NLS(nuclear localization signal)的pcDNA3mCⅡTA4突变体.用脂质体转染法, 将上述3种突变体及空载体pcDNA3转入Hela细胞和Raji细胞中.用流式细胞术和RT-PCR法, 观察他们对Hela/Raji细胞HLA-DR/DQ分子的诱导性和组成性表达的影响.将mCⅡTA4转移到对四环素浓度依赖的质粒pUHD10-3上, 通过改变培养环境中四环素的浓度, 调节外源CⅡ TA突变体的表达量, 观察突变体的表达量与MHC-Ⅱ类分子受抑率的关系.结果: 细胞和基因水平证实, pcDNA3mCⅡTA3和pcDNA3mCⅡTA4对Hela/Raji细胞HLA-DR/DQ的表达均有明显的抑制作用; 而pcDNA3mCⅡTA2和空载体pcDNA3无此作用.MHC-Ⅱ类分子被抑制的程度与外源转入CⅡTA突变体(pUHD10-3mCⅡTA4)的量明显相关.结论: 成功地构建pcDNA3mCⅡTA3和pcDNA3mCⅡTA4, 并能抑制HLA-Ⅱ类分子的表达.初步证实CⅡTA突变体是通过与胞内的野生型CⅡTA竞争性结合反式激活蛋白, 来抑制MHC-Ⅱ类分子的转录和表达.
作者：欧启水；林琳；黄立东；陆佩华；周光炎 刊期： 2003年第05期
目的:克隆结核杆菌热休克蛋白70(TBhsp70)基因,并在大肠杆菌中表达.方法:利用PCR技术从结核杆菌H37Rv中扩增Hsp70基因,并将其克隆到pUC19中,进行测序.将得到的Hsp70基因克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-TBhsp70,在大肠杆菌DH5α中进行表达.结果:成功地克隆了TBhsp70基因.DNA测序证实,与GenBank公布的序列一致.含pGEX-TBhsp70基因表达质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后,能够表达相对分子质量(Mr)约为96 000的融合蛋白.结论:获得了TBhsp70基因,成功地构建了原核表达质粒pGEX-TBhsp70,并在大肠杆菌得到表达,为其相关研究奠定了一定的基础.
作者：叶菁；隋延仿；陈广生；张秀敏 刊期： 2003年第05期
目的:阐明重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内早期感染抗原呈递细胞(APC)的动态变化规律.方法: 用一定剂量的表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550(Pyagfp)口服接种BALB/c小鼠.3 d后, 取腹腔巨噬细胞培养24 h, 用荧光显微镜观察.另以该细菌静脉注射小鼠, 于感染后3、6和12 h, 制备脾脏、肝脏低浮密度细胞.用流式细胞术检测巨噬细胞和树突状细胞的感染率.结果: 巨噬细胞感染X4550(Pyagfp)的百分率, 腹腔中约为50%, 肝脏和脾脏中约为20%～40%. 树突状细胞感染X4550(Pyagfp)的百分率, 脾脏中约为4%～10%, 肝脏中约为10%～20%.巨噬细胞的吞噬能力明显高于树突状细胞.结论: 感染早期, 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内已被APC所摄取, 为诱导有效的免疫应答提供了先决条件.
作者：王芳；焦新安；顾健；马莉；Richard Lo-Man；Claude Leclere；刘秀梵 刊期： 2003年第05期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
