杜晓刚；甘华；陈雪梅
目的:了解小鼠淋巴细胞体外抗御弓形虫速殖子的效果.方法:采用大鼠脾细胞培养技术,以乙酰螺旋霉素作为阳性对照,观察淋巴细胞本身以及加入扁桃酸(MA)后,对虫体侵入淋巴细胞及在淋巴细胞内增殖的影响.结果:与其他体细胞相比较,淋巴细胞在受到弓形虫侵害时,仍可抑制和杀灭弓形虫.当存在免疫作用的情况下,安全剂量的MA抑制弓形虫侵入的作用不显著,但抑制细胞内弓形虫增殖的作用显著.结论:以细胞介导的免疫作用是宿主抗弓形虫感染的重要因素,因此,应注重提高机体的细胞免疫,同时加用药物,以增强机体抗虫的效果.
作者：石琦；郝炳华；周玉玲；石兴民；杨安宁；张瑾；程彦斌；李哲 刊期： 2003年第05期
蓖麻毒素(Ricin)是一种毒素蛋白,由A、B两条多肽链组成,通过二硫键结合,毒素进入人体后,B链结合到细胞表面,A链内转化到细胞浆,使核糖体失活,从而抑制蛋白质的合成,造成人体中毒死亡,对成人的平均致死剂量为1.5 μg[1].
作者：郝兰群；郭胜清；郭振泉；宋凤卿；刘云 刊期： 2003年第05期
目的:构建编码抗人精浆蛋白抗体Fab基因的表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法:从克隆载体pUC19-К和pBluescript KS(M13-)-Fd中,酶切获得抗人精浆蛋白单克隆抗体(mAb)Fd基因和К链基因.然后将Fd和К链基因重组到Fab表达载体pComb3中,构建抗人精浆蛋白Fab基因的重组表达载体pComb3-Fab,并在XL1-Blue菌中表达.结果:经重组表达载体转化的XL1-Blue菌株可表达Fab基因.Western blot和免疫细胞化学分析表明,表达产物Fab具有特异性结合精浆蛋白的活性.结论:抗人精浆蛋白Fab基因成功地获得,为进一步将其与抗肿瘤药物偶联用于前列腺癌的导向治疗创造了条件.表达为构建其它基因工程抗体提供了基础.
作者：孙脊峰；杨洁；郝晓柯；赵晶；温伟红；金明；王成济；杨安钢 刊期： 2003年第05期
目的:探讨地龙提取物(AL)对小鼠腹腔MΦ和脾细胞分泌NO和TNF-α的影响.方法:将不同剂量的AL与小鼠腹腔MΦ或脾细胞孵育24 h,收集上清液分别采用重氮化反应和MTT比色法,检测NO和TNF-α的水平.结果:0.1 g/L的AL组与正常对照相比较,可明显提高MΦ和脾细胞分泌NO的水平,并可以拮抗地塞米松(Dex)对MΦ和脾细胞分泌NO的抑制作用.1×10-4,1×10-3 g /L的AL组可促进MΦ和脾细胞分泌TNF-α,并可拮抗Dex的抑制作用.结论:AL可以激活ΜΦ和脾细胞,使其分泌NO和TNF-α的水平增加,并可拮抗Dex对ΜΦ和脾细胞的抑制作用.
作者：唐小云；梁再赋；贾秀坤；纪晓丽；杨丽群 刊期： 2003年第05期
目的:观察不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF),对大鼠胚胎脊髓运动神经元生长活性的作用.方法:取大鼠胚胎脊髓腹侧组织体外分离,进行原代细胞培养,应用抗神经微丝单克隆抗体(mAb) SMI32进行运动神经元的免疫细胞化学染色,从细胞形态学及应用MTT比色法,研究GDNF对大鼠脊髓运动神经元的影响.结果:GDNF能明显促进体外培养的大鼠脊髓运动神经元存活及突起的生长(P<0.05),且具有剂量依赖的趋势.结论:不同浓度的GDNF对体外培养的大鼠胚胎脊髓运动神经元,有不同程度的促生长作用.
作者：宋学琴；吴淑玉；李春岩；王丽琴；王晓娟 刊期： 2003年第05期
目的:构建人LIGHT-Fc基因的真核表达质粒,并表达获得有较高生物学活性的纯化人LIGHT-Fc融合蛋白.方法:从cDNA文库中PCR扩增LIGHT全长编码基因,并导入克隆载体.测序证实后,继续用PCR扩增其膜外区cDNA,用重叠延伸技术(SOE)引入CD137信号肽基因.将SOE产物与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中,瞬时转染293T细胞,用夹心ELISA检测其表达情况,经蛋白A亲和纯化,用SDS-PAGE检测其纯度与Mr,并以肿瘤细胞为靶细胞,检测其生物学活性.结果:测序证实构建的LIGHT与LIGHT-Fc cDNA阅读框完整,连接部位序列正确;ELISA和SDS-PAGE证实LIGHT-Fc融合蛋白的表达与纯度;MTT证明人LIGHT-Fc蛋白对一些肿瘤细胞系具有生长抑制作用.结论:获得了有抗肿瘤活性的纯化hLIGHT-Fc融合蛋白,为探讨LIGHT在免疫自稳调节中的地位、结合相应受体后的动力学与信号转导机制,以及探索LIGHT的其他生物学功能奠定了坚实的实验基础.
作者：黄钢；白云；姜曼；黎万玲 刊期： 2003年第05期
目的:探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制. 方法:将培养的妊娠早期滋养层细胞,分为正常对照组(细胞+培养液)、H2O2组(细胞+培养液+H2O2)和胰岛素+H2O2组(细胞+H2O2+胰岛素).采用透射电镜观察及流式细胞术,观察H2O2诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2O2诱导的细胞凋亡的抑制作用.并检测胰岛素对滋养细胞caspase-3的活性及Bcl-2蛋白表达的影响.结果:H2O2可诱导培养的滋养细胞凋亡,透射电镜下可见特征性的细胞核改变.胰岛素可显著抑制H2O2诱导的细胞凋亡,流式细胞仪检测其凋亡率较H2O2组显著下降(P<0.01).H2O2组滋养细胞中caspase-3的活性较对照组显著增高(P<0.01),而Bcl-2蛋白的表达则较对照组显著下降(P<0.01).结论:胰岛素可明显抑制H2O2诱导的滋养细胞凋亡,其机制可能与降低caspase-3的活性和促进Bcl-2蛋白的表达有关.
作者：于月成；辛晓燕；张峰；马向东；王德堂；郭惠玲 刊期： 2003年第05期
目的:探讨131I标记的美罗华用于CD20表达阳性的晚期难治非何杰金淋巴瘤(NHL)患者治疗的疗效.方法:15例晚期NHL患者,年龄46～68岁,以剂量为50～100 Bq的131I作为标记物标记100 mg的Rituxan,按剂量的1/3直接注射于局部病灶,2/3静脉滴注.每2～3个月1次,2～3次为1疗程.结果:完全缓解(CR)者5例,部分缓解(PR)者7例,病情稳定(SD)者2例,病情进展(PD)者1例,总有效率(ORR)80%.定期检查患者血清HAMA,未发现阳性者.结论:131I标记的美罗华是NHL极有前景的治疗方法.
作者：潘春华；罗荣城；菜红兵 刊期： 2003年第05期
目的:探讨炎症反应与冠心病(CHD)之间的关系.方法:101例CHD患者分为3组,即稳定型心绞痛(SAP)组(19例)、不稳定型心绞痛(UAP)组(33例)和急性心肌梗死(AMI)组(49例).分别采用免疫浊度法及血细胞计数仪,检测外周血中的C-反应性蛋白(CRP)水平及白细胞(WBC)总数.20例AMI死亡患者的心肌组织切片进行病理学检查.结果:AMI和UAP组血中CRP的水平和WBC总数明显高于对照组(P<0.01).病理学检查发现,AMI患者心肌中有大量白细胞浸润.结论:CHD发生、发展有炎症反应的参与,检测血中的CRP和WBC可作为监测病情、预测冠心病危险性的常规指标之一.
作者：王勇；丁体龙；张玲玲；严家春；俞小忠；石坚 刊期： 2003年第05期
目的:探讨乙酰肝素酶mRNA(acetyl-heparanase mRNA)、层黏连蛋白(laminin,LN)及其受体(laminin recepter,LR),在50例卵巢癌、33例淋巴结转移卵巢癌及10例浆液性囊腺瘤中的表达,及其在卵巢癌转移中的作用.方法:应用原位杂交和免疫组化染色方法,检测乙酰肝素酶mRNA转录水平及LN和LR的蛋白的表达及定位.结果:乙酰肝素酶mRNA在卵巢癌病灶及转移淋巴结中的转录水平明显增强,原发灶与转移灶之间的表达差异显著(P<0.05),恶性肿瘤与良性肿瘤之间表达的差异更为明显(P<0.01).LN在癌组织及转移淋巴结中的表达少;而LR的表达却明显增强.乙酰肝素酶mRNA与LN表达呈负相关,与LR的表达呈正相关.结论:乙酰肝素酶mRNA的表达与LN和LR的表达之间分别呈正、负相关性,提示乙酰肝素酶是参与肿瘤的生长、侵袭和转移的方式之一.
作者：刘玉；辛晓燕；韩良辅；王德堂 刊期： 2003年第05期
目的:构建能抑制MHC-Ⅱ类分子表达的MHC-Ⅱ类分子反式激活因子(MHC class Ⅱ transactivator, CⅡTA)基因的突变体, 并探讨其抑制MHC-Ⅱ类分子表达的机制.方法: 用PCR、酶切及连接技术, 构建不含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA2, 含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA3以及含起始密码子及NLS(nuclear localization signal)的pcDNA3mCⅡTA4突变体.用脂质体转染法, 将上述3种突变体及空载体pcDNA3转入Hela细胞和Raji细胞中.用流式细胞术和RT-PCR法, 观察他们对Hela/Raji细胞HLA-DR/DQ分子的诱导性和组成性表达的影响.将mCⅡTA4转移到对四环素浓度依赖的质粒pUHD10-3上, 通过改变培养环境中四环素的浓度, 调节外源CⅡ TA突变体的表达量, 观察突变体的表达量与MHC-Ⅱ类分子受抑率的关系.结果: 细胞和基因水平证实, pcDNA3mCⅡTA3和pcDNA3mCⅡTA4对Hela/Raji细胞HLA-DR/DQ的表达均有明显的抑制作用; 而pcDNA3mCⅡTA2和空载体pcDNA3无此作用.MHC-Ⅱ类分子被抑制的程度与外源转入CⅡTA突变体(pUHD10-3mCⅡTA4)的量明显相关.结论: 成功地构建pcDNA3mCⅡTA3和pcDNA3mCⅡTA4, 并能抑制HLA-Ⅱ类分子的表达.初步证实CⅡTA突变体是通过与胞内的野生型CⅡTA竞争性结合反式激活蛋白, 来抑制MHC-Ⅱ类分子的转录和表达.
作者：欧启水；林琳；黄立东；陆佩华；周光炎 刊期： 2003年第05期
目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)变异s基因真核表达载体,检测其诱导小鼠产生特异性体液免疫应答.方法:利用限制性内切酶定位克隆构建s基因nt587 G→A的真核表达载体pCMV-S2.S+145R(PR).用其转染人肝癌细胞系Hep G2后,用EIA、ELISA及免疫细胞化学法,观察其抗原性.以重组变异型s基因真核表达载体(PR)和载体pcDNA3.0分别免疫C57BL/6小鼠各5只.每只小鼠各肌肉注射纯化质粒100 μg.用ELISA法检测血清抗-HBs及抗-HBs2抗体的效价.结果:体外实验证实,变异型HBsAg可与抗-HBs结合;PR免疫小鼠可诱导其产生抗-HBs抗体及抗-HBs2抗体,但抗-HBs2抗体的出现早于抗-HBs抗体约1～2 wk.结论:HBV变异s基因(nt587 G→A)的真核表达载体的表达产物具有良好的抗原性,能够诱导C57BL/6小鼠产生体液免疫应答.
作者：葛军辉；刘惠敏；何金；李玉莉；余宏宇；叶忠；张乐之；胡以平 刊期： 2003年第05期
目的:研究荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA对辨别病毒复制的临床意义.方法:采用FQ-PCR和ELISA方法,检测79例患者血清HBV-DNA拷贝数和免疫学血清指标.结果:26例HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性的标本,HBV-DNA也全部阳性,平均拷贝数为2.7×105/mL.8例HBsAg、HBeAg阳性的标本,HBV-DNA也全部阳性,平均拷贝数为5.2×104/mL.21例HBsAg、抗-HBe、抗-HBc均阳性的标本HBV-DNA阳性率为66.7%,平均拷贝数为3.1×104/mL.9例HBsAg阳性的标本HBV-DNA阳性率为11%.平均拷贝数为1.4×103/mL.结论:荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA可以更加准确地判断HBV的感染和复制情况.
作者：许丽艳；敬华；杨晋德；刘春雷 刊期： 2003年第05期
碘是人体必需的微量元素之一,是机体合成甲状腺激素T3、T4的主要原料,而且又是重要的甲状腺功能调节因子,在自身免疫性甲状腺疾病(autoimmune thyroid disease,AITD)的发病机制中起着非常重要的作用,但其具体的发病机制尚未阐明.
作者：余霄龙；闫胜利；王颜刚；綦玉芹；王娈 刊期： 2003年第05期
目的:原核表达神经生长相关蛋白-43(GAP-43),并制备抗GAP-43的单克隆抗体(mAb).方法:从含有GAP-43 cDNA的质粒中,用PCR扩增GAP-43 cDNA的全长编码序列,克隆入表达载体pGEX-4T-1中,构建GAP-43的高表达工程菌,并以IPTG诱导表达目的蛋白.通过亲和层析法纯化表达的GST-GAP-43融合蛋白,并以此为抗原制备mAb.结果:酶切鉴定证明,获得含有目的基因片段的重组质粒.表达的GST-GAP-43融合蛋白以可溶性的形式存在.ELISA检测表明,获得的抗GAP-43 mAb效价为1∶108,其IgG的亚类为IgG2a,亚型问型. 用Western blot 检测大鼠脑匀浆蛋白,在相对分子质量(Mr)为50 000处有一条特异性带.用此mAb进行荧光免疫法检测表明,在致敏豚鼠的肺切片中,有GAP-43阳性的神经纤维.结论:所获抗GAP-43 mAb的特异性强、效价高,对进一步研究GAP-43在神经系统中的作用提供了有用的试剂.
作者：段小莉；黄文晋；王百忍；宋俊峰；金卫林；郭翔；鞠躬 刊期： 2003年第05期
外膜蛋白gp120是HIV-1主要结构蛋白之一,它的V3区存在着中和抗体决定簇、CTL决定簇,以及对巨噬细胞和脑组织纤维特异性识别的区,与HIV-1可诱导中和抗体应答、特异性细胞毒反应及分子致病机制密切相关[1,2].
作者：江文正；金宁一；李子健；张立树 刊期： 2003年第05期
目的:探讨核因子-κB(NF-κB)p65在口服耐受发生中的活性改变及其意义.方法: 雌性Wistar大鼠30只随机分成两组: ①口服耐受组, 用小剂量(每次8 mg/2 mL PBS)的Fx1A抗原灌胃.②对照组, 用PBS 2 mL/次灌胃.观察大鼠迟发型超敏反应(DTH), 进行脾淋巴细胞增殖试验, 了解大鼠免疫功能的改变.以免疫组化和ELISA法, 检测大鼠淋巴组织中NF-κB p65的活性及TGF-β1的表达.结果: 与对照组相比较, 口服耐受组大鼠DTH和抗原特异性淋巴细胞增殖反应明显受抑制; 肠黏膜Peyer's淋巴结(PP结)中NF-κB p65的活性及TGF-β1的表达明显增加.脾淋巴组织中NF-κB p65的活性降低, 但TGF-β1的表达明显增加.结论: 低剂量Fx1A抗原诱导的口服耐受的发生, 可能与不同部位免疫细胞内NF-κB p65的活性改变有关.
作者：杜晓刚；甘华；陈雪梅 刊期： 2003年第05期
目的:构建携带截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因的真核表达载体, 并将其在HER2阳性SKBR-3肿瘤细胞及HER2阴性Hela肿瘤细胞中表达.方法: 用 PCR法获得截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因片段, 并克隆构建真核表达载体,以脂质体法转染SKBR-3细胞及Hela细胞, 用免疫细胞化学染色检测其在不同细胞中的表达及对细胞形态的影响.结果: 成功构建了编码截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因的真核表达载体pCMV-e23sFv-FSD-GrB, 用免疫细胞化学检测发现, 绝大多数Hela细胞可高表达e23sFv-FSD-GrB 蛋白, 且细胞形态正常, 而表达e23sFv-FSD-GrB 蛋白的SKBR-3细胞形态发生变化, 出现固缩细胞.结论: 截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因真核表达体系的建立, 为确定PE转位肽的小转位功能区段奠定了基础.
作者：张莉；赵晶；王智；温伟红；张盈华；王成济；杨安钢 刊期： 2003年第05期
目的:探讨海马5-HT3受体神经免疫调节的神经功能通路及可能的途径.方法:采用SABC免疫组化染色法,测定不同脑区c-fos的表达.结果:给海马核团内注射5-HT3受体激动l-phenylbiguanide(1-PBG)后1 h,海马及大脑皮层中有大量的c-fos表达,随时间的推移表达量渐减少.下丘脑在注射1-PBG后8 h,中脑导水管周围灰质在16 h出现有意义的表达.1-PBG诱导的c-fos的表达可被其相应受体拮抗剂tropisetron(TROP)所阻断.结论:海马-大脑皮层-下丘脑-中脑导水管周围灰质形成一个神经网络,这个神经网络可能与免疫调节有关.
作者：刘社兰；张小玉；许德义 刊期： 2003年第05期
目的:制备兔抗小鼠脾酪氨酸激酶(Syk)抗体,分析其在乳腺癌诊断中的价值.方法:应用重组小鼠Syk蛋白,常规免疫雄性家兔制备抗Syk抗体.用免疫印迹法检测Syk抗体的纯度和特异性.应用免疫组化法,检测乳腺组织中Syk蛋白的表达.结果:用重组小鼠Syk蛋白免疫家兔6 wk后,静脉血中抗Syk抗体效价为1∶6 400(A450=1.03).将Syk经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为72 000的蛋白条带,与理论值相符.用抗Syk血清做免疫印迹证实,在Mr为72 000处有1条明显的带,证明是抗Syk特异性抗体.乳腺组织切片经抗Syk抗体免疫组化染色,在正常乳腺组织细胞胞浆中可见棕黄色颗粒,而浸润性乳腺导管癌组织的细胞浆不着色.结论:制备了高效价、特异性的兔抗Syk抗体.用该抗体检测证实,Syk在正常乳腺组织细胞中呈高表达,在乳腺癌组织细胞中表达缺失. 有可能用于乳腺癌的临床诊断.
作者：单保恩；董青；王晓玲；陈兴；董金琢；马洪 刊期： 2003年第05期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
