刘社兰；张小玉；许德义
目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)变异s基因真核表达载体,检测其诱导小鼠产生特异性体液免疫应答.方法:利用限制性内切酶定位克隆构建s基因nt587 G→A的真核表达载体pCMV-S2.S+145R(PR).用其转染人肝癌细胞系Hep G2后,用EIA、ELISA及免疫细胞化学法,观察其抗原性.以重组变异型s基因真核表达载体(PR)和载体pcDNA3.0分别免疫C57BL/6小鼠各5只.每只小鼠各肌肉注射纯化质粒100 μg.用ELISA法检测血清抗-HBs及抗-HBs2抗体的效价.结果:体外实验证实,变异型HBsAg可与抗-HBs结合;PR免疫小鼠可诱导其产生抗-HBs抗体及抗-HBs2抗体,但抗-HBs2抗体的出现早于抗-HBs抗体约1～2 wk.结论:HBV变异s基因(nt587 G→A)的真核表达载体的表达产物具有良好的抗原性,能够诱导C57BL/6小鼠产生体液免疫应答.
作者：葛军辉；刘惠敏；何金；李玉莉；余宏宇；叶忠；张乐之；胡以平 刊期： 2003年第05期
外膜蛋白gp120是HIV-1主要结构蛋白之一,它的V3区存在着中和抗体决定簇、CTL决定簇,以及对巨噬细胞和脑组织纤维特异性识别的区,与HIV-1可诱导中和抗体应答、特异性细胞毒反应及分子致病机制密切相关[1,2].
作者：江文正；金宁一；李子健；张立树 刊期： 2003年第05期
目的:了解小鼠淋巴细胞体外抗御弓形虫速殖子的效果.方法:采用大鼠脾细胞培养技术,以乙酰螺旋霉素作为阳性对照,观察淋巴细胞本身以及加入扁桃酸(MA)后,对虫体侵入淋巴细胞及在淋巴细胞内增殖的影响.结果:与其他体细胞相比较,淋巴细胞在受到弓形虫侵害时,仍可抑制和杀灭弓形虫.当存在免疫作用的情况下,安全剂量的MA抑制弓形虫侵入的作用不显著,但抑制细胞内弓形虫增殖的作用显著.结论:以细胞介导的免疫作用是宿主抗弓形虫感染的重要因素,因此,应注重提高机体的细胞免疫,同时加用药物,以增强机体抗虫的效果.
作者：石琦；郝炳华；周玉玲；石兴民；杨安宁；张瑾；程彦斌；李哲 刊期： 2003年第05期
目的:证实新分离出的冠状病毒与SARS患者的关糸.方法:应用IFA诊断试剂做免疫荧光染色,检测2003-02-04～04-13期间,广东地区3所医院临床诊断为SARS的72例患者血清特异性抗体,以及直接参加救治SARS患者但末发生感染的109名医护人员的血清标本,并以疾病流行期间70例健康体检者作为正常对照组.结果:72例SARS患者中,62例血清特异性IgG呈阳性;而109例密切接触但末发生感染的医护人员及70例SARS流行期间健康体检者,血清特异性IgG和IgM均呈阴性.结论:SARS冠状病毒是引发广东地区SARS的病原体.
作者：石玉玲；李林海；徐德兴；祝庆余；司炳银；于曼 刊期： 2003年第05期
蓖麻毒素(Ricin)是一种毒素蛋白,由A、B两条多肽链组成,通过二硫键结合,毒素进入人体后,B链结合到细胞表面,A链内转化到细胞浆,使核糖体失活,从而抑制蛋白质的合成,造成人体中毒死亡,对成人的平均致死剂量为1.5 μg[1].
作者：郝兰群；郭胜清；郭振泉；宋凤卿；刘云 刊期： 2003年第05期
目的:构建含16个氨基酸的酵母双杂交随机环肽库.方法: 以PCR扩增人工合成的随机DNA模板, 经BamH I和EcoR I酶切后, 克隆入酵母表达质粒pGADT7 GH, 构建酵母双杂交随机环肽库并检验其库容及随机性, 扩增、抽提并纯化酵母双杂交环肽库质粒.结果: 构建了酵母双杂交随机环肽库, 库容为1.28×107, 氨基酸分布与理论频数无显著差异, 并扩增获得大量高纯度的环肽库质粒.结论: 成功地构建酵母双杂交随机环肽库, 并获得大量高纯度的环肽库质粒.
作者：徐祥；梁华平；王付龙；罗艳；王正国 刊期： 2003年第05期
有关多发性肌炎(PM)/皮肌炎(DM)外周血淋巴细胞亚群的研究仅见早期报道,且尚无统一结论.为探讨PM/DM外周血单个核细胞(PBMC)HLA-DR的表达及其意义,我们应用双荧光抗体标记、流式细胞仪(FACS)进行了检测.
作者：张士发；梁再赋；许静；赵丽萍；王良明；顾绍裘 刊期： 2003年第05期
宫颈癌是常见的女性生殖道恶性肿瘤,高危型人乳头瘤病毒16型(Human papillomavirus 16,HPV16)感染与其密切相关.该病毒的长控制区(long control region,LCR)内有细胞型特异性增强子(cell-type-specific enhancer,CTSE),是LCR的重要组成部分,参与诱导启动子P97的活性,从而调控转化基因E6/E7转录的水平.本研究旨在检测HPV16 CTSE变异株在宿主细胞内的物理状态和CTSE变异的关系,探讨两者在宫颈癌发生、发展中的地位和作用,为深入揭示HPV的致癌机制奠定基础.
作者：刘文康；楚雍烈；杨娥；刘湘；郑建武 刊期： 2003年第05期
目的:构建含人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因的重组腺病毒载体,探讨TR的抗氧化功能与神经退行性疾病的相关性.方法:从重组质粒pGEM-TR上用内切酶切下编码500个氨基酸的全长TR cDNA片段,并连接穿梭质粒pShuttle,再双酶切pShuttle-TR.将带有CMV启动子的目的片段,插入E1、E3缺失的Adeno-X病毒DNA中,以Adeno-TR DNA通过脂质体转染HEK293细胞,获得重组腺病毒Adeno-TR进行PCR鉴定及病毒滴度测定.用重组腺病毒感染CV1细胞,通过免疫荧光染色与Western blot分别检测重组腺病毒感染的细胞上和裂解液中TR蛋白的表达.结果:重组腺病毒Adeno-TR的病毒滴度为4.4×1011pfu/L.PCR、荧光显微镜证实,以及Western bolt分析,在相对分子质量(Mr)约55 000处均出现特异性条带.结论:成功地构建了重组腺病毒载体,并能介导外源基因TR表达,为进一步研究TR的功能及其与疾病的相关性奠定了基础.
作者：徐江英；许琳；彭光勇；丁传林；卢是月；姚堃 刊期： 2003年第05期
目的:制备兔抗小鼠脾酪氨酸激酶(Syk)抗体,分析其在乳腺癌诊断中的价值.方法:应用重组小鼠Syk蛋白,常规免疫雄性家兔制备抗Syk抗体.用免疫印迹法检测Syk抗体的纯度和特异性.应用免疫组化法,检测乳腺组织中Syk蛋白的表达.结果:用重组小鼠Syk蛋白免疫家兔6 wk后,静脉血中抗Syk抗体效价为1∶6 400(A450=1.03).将Syk经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为72 000的蛋白条带,与理论值相符.用抗Syk血清做免疫印迹证实,在Mr为72 000处有1条明显的带,证明是抗Syk特异性抗体.乳腺组织切片经抗Syk抗体免疫组化染色,在正常乳腺组织细胞胞浆中可见棕黄色颗粒,而浸润性乳腺导管癌组织的细胞浆不着色.结论:制备了高效价、特异性的兔抗Syk抗体.用该抗体检测证实,Syk在正常乳腺组织细胞中呈高表达,在乳腺癌组织细胞中表达缺失. 有可能用于乳腺癌的临床诊断.
作者：单保恩；董青；王晓玲；陈兴；董金琢；马洪 刊期： 2003年第05期
目的:探讨腹腔环境在子宫内膜异位症发病机制中的作用,以及腹腔液血管内皮细胞生长因子(VEGF)的来源和调节.方法:将14例子宫内膜异位症患者和10例正常妇女腹腔液中的巨噬细胞体外培养,并在培养的正常妇女腹腔液巨噬细胞中加入17-β雌二醇、孕酮和脂多糖(LPS)共培养.用ELISA法检测培养的巨噬细胞上清液中VEGF的水平.同时将二者无血清培养的上清液,加入到内皮细胞中培养,用MTT比色法检测其对内皮细胞增殖活性的影响.用免疫组化法检测两者的巨噬细胞表达受体flt-1和flt-4 的水平. 结果:子宫内膜异位症患者的巨噬细胞培养上清液中,VEGF的浓度明显高于正常对照组(P<0.05),且无周期性变化(P>0.05).子宫内膜异位症患者的巨噬细胞无血清培养上清液,在体外能显著提高内皮细胞的增殖活性(P<0.05).雌激素和孕激素能显著增加体外巨噬细胞分泌VEGF的水平(P<0.05),与LPS组相比较差异显著(P<0.05),即激素的调节作用大于LPS的作用.但雌激素和孕激素调节巨噬细胞分泌VEGF的程度无明显差别(P>0.05).LPS激活的巨噬细胞能增加雌激素、孕激素对巨噬细胞分泌VEGF的调节作用(P<0.05).巨噬细胞能表达受体flt-1和flt-4,无周期性变化(P>0.05).结论:子宫内膜异位症患者的腹腔液中的巨噬细胞可分泌VEGF,改变腹腔液的环境,可促使内皮细胞增殖,促进子宫内膜异位症的血管形成.
作者：吴献青；方小玲；林秋华；黄凤英；夏晓梦 刊期： 2003年第05期
目的:构建人抗戊型肝炎病毒 (HEV) 噬菌体抗体库,筛选人源中和性抗HEV的单克隆抗体(mAb) .方法:取抗HEV抗体阳性的6例HE患者静脉血,分离淋巴细胞,提取细胞总RNA后逆转录.用一组人IgG Fab基因特异性引物,分别扩增IgG κ0轻链与重链Fd 段基因.将κ轻链与Fd段基因先后克隆入噬菌体载体pComb3的相应位点,经电穿孔法转化大肠杆菌XL1-Blue,再以辅助噬菌体VCSM13超感染,构建人抗HEV噬菌体抗体库.采用独特的5轮筛选法(逐渐降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的4种含中和抗原表位的HEV 代表株ORF2重组混合抗原,筛选人噬菌体抗体库,并以 ELISA鉴定噬菌体抗体.结果:经数次电转化构建了容量为1.9×107重组率为80%的κ轻链基因库;容量为1.8×107重组率为20%的Fab基因库.以含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异淘筛5次,出现特异富集.ELISA鉴定第5轮筛选产物,得到4株与HEV ORF2重组混合抗原具有较高亲和力的Fab噬菌体抗体,可能为中和抗体.结论:成功地构建了人抗HEV噬菌体抗体库,并获得人源抗HEV特异性噬菌体抗体.
作者：魏华；张建琼；吕海芹；孟继鸿；鲁晓瑄；谢维 刊期： 2003年第05期
目的:构建能抑制MHC-Ⅱ类分子表达的MHC-Ⅱ类分子反式激活因子(MHC class Ⅱ transactivator, CⅡTA)基因的突变体, 并探讨其抑制MHC-Ⅱ类分子表达的机制.方法: 用PCR、酶切及连接技术, 构建不含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA2, 含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA3以及含起始密码子及NLS(nuclear localization signal)的pcDNA3mCⅡTA4突变体.用脂质体转染法, 将上述3种突变体及空载体pcDNA3转入Hela细胞和Raji细胞中.用流式细胞术和RT-PCR法, 观察他们对Hela/Raji细胞HLA-DR/DQ分子的诱导性和组成性表达的影响.将mCⅡTA4转移到对四环素浓度依赖的质粒pUHD10-3上, 通过改变培养环境中四环素的浓度, 调节外源CⅡ TA突变体的表达量, 观察突变体的表达量与MHC-Ⅱ类分子受抑率的关系.结果: 细胞和基因水平证实, pcDNA3mCⅡTA3和pcDNA3mCⅡTA4对Hela/Raji细胞HLA-DR/DQ的表达均有明显的抑制作用; 而pcDNA3mCⅡTA2和空载体pcDNA3无此作用.MHC-Ⅱ类分子被抑制的程度与外源转入CⅡTA突变体(pUHD10-3mCⅡTA4)的量明显相关.结论: 成功地构建pcDNA3mCⅡTA3和pcDNA3mCⅡTA4, 并能抑制HLA-Ⅱ类分子的表达.初步证实CⅡTA突变体是通过与胞内的野生型CⅡTA竞争性结合反式激活蛋白, 来抑制MHC-Ⅱ类分子的转录和表达.
作者：欧启水；林琳；黄立东；陆佩华；周光炎 刊期： 2003年第05期
目的:克隆结核杆菌热休克蛋白70(TBhsp70)基因,并在大肠杆菌中表达.方法:利用PCR技术从结核杆菌H37Rv中扩增Hsp70基因,并将其克隆到pUC19中,进行测序.将得到的Hsp70基因克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-TBhsp70,在大肠杆菌DH5α中进行表达.结果:成功地克隆了TBhsp70基因.DNA测序证实,与GenBank公布的序列一致.含pGEX-TBhsp70基因表达质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后,能够表达相对分子质量(Mr)约为96 000的融合蛋白.结论:获得了TBhsp70基因,成功地构建了原核表达质粒pGEX-TBhsp70,并在大肠杆菌得到表达,为其相关研究奠定了一定的基础.
作者：叶菁；隋延仿；陈广生；张秀敏 刊期： 2003年第05期
目的:探讨HSV-1在诱导Hela细胞凋亡中, 细胞内游离钙浓度的变化及钙离子螯合剂对HSV-1诱导Hela细胞凋亡的抑制作用.方法: HSV-1感染Hela细胞后, 用扫描电镜及透射电镜观察凋亡情况.用荧光探针标记细胞内游离Ca2+, 在不同时间观察细胞内游离Ca2+浓度的变化.结果: HSV-1感染Hela细胞后,出现了典型的凋亡形态学变化.细胞内游离Ca2+浓度在HSV-1感染Hela细胞后12 h达高峰; 典型的凋亡形态学变化出现在HSV-1感染Hela细胞后24 h.细胞内Ca2+螯合剂能显著抑制HSV-1诱导的Hela细胞凋亡.结论: 细胞内游离Ca2+在HSV-1诱导的Hela细胞凋亡过程中, 具有重要作用, 此实验结果为临床治疗相关疾病提供了有用的线索.
作者：杨秋霞；姜洪池；李斌；郗雪艳；刘玉；王兰；吕雪莹；谷金宇；李殿俊 刊期： 2003年第05期
目的:应用本室制备的抗单链DNA(ssDNA)单克隆抗体(mAb),检测多种化疗药物对不同肿瘤细胞株凋亡的诱导作用,并根据凋亡率判断肿瘤细胞对化疗药物的敏感性. 方法:用血浆峰值浓度(PPC)的9种化疗药物,分别诱导肿瘤细胞株K562和Hep-2的凋亡.用抗ssDNA mAb免疫组化染色法,检测肿瘤细胞株的凋亡并计算调亡率.结果:以抗ssDNA mAb建立的检测细胞凋亡的免疫组化法,能够区分凋亡细胞和非凋亡细胞.该法检测证明,化疗药物可诱导敏感肿瘤细胞株凋亡,但不同化疗药物诱导同一肿瘤细胞株或不同肿瘤细胞株凋亡的程度不同.结论:抗ssDNA mAb免疫组化法,可用于检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.
作者：吴晓燕；徐志伟；吴国庆；苗乃法；冯永堂 刊期： 2003年第05期
目的:构建携带截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因的真核表达载体, 并将其在HER2阳性SKBR-3肿瘤细胞及HER2阴性Hela肿瘤细胞中表达.方法: 用 PCR法获得截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因片段, 并克隆构建真核表达载体,以脂质体法转染SKBR-3细胞及Hela细胞, 用免疫细胞化学染色检测其在不同细胞中的表达及对细胞形态的影响.结果: 成功构建了编码截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因的真核表达载体pCMV-e23sFv-FSD-GrB, 用免疫细胞化学检测发现, 绝大多数Hela细胞可高表达e23sFv-FSD-GrB 蛋白, 且细胞形态正常, 而表达e23sFv-FSD-GrB 蛋白的SKBR-3细胞形态发生变化, 出现固缩细胞.结论: 截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因真核表达体系的建立, 为确定PE转位肽的小转位功能区段奠定了基础.
作者：张莉；赵晶；王智；温伟红；张盈华；王成济；杨安钢 刊期： 2003年第05期
目的:构建编码抗人精浆蛋白抗体Fab基因的表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法:从克隆载体pUC19-К和pBluescript KS(M13-)-Fd中,酶切获得抗人精浆蛋白单克隆抗体(mAb)Fd基因和К链基因.然后将Fd和К链基因重组到Fab表达载体pComb3中,构建抗人精浆蛋白Fab基因的重组表达载体pComb3-Fab,并在XL1-Blue菌中表达.结果:经重组表达载体转化的XL1-Blue菌株可表达Fab基因.Western blot和免疫细胞化学分析表明,表达产物Fab具有特异性结合精浆蛋白的活性.结论:抗人精浆蛋白Fab基因成功地获得,为进一步将其与抗肿瘤药物偶联用于前列腺癌的导向治疗创造了条件.表达为构建其它基因工程抗体提供了基础.
作者：孙脊峰；杨洁；郝晓柯；赵晶；温伟红；金明；王成济；杨安钢 刊期： 2003年第05期
目的:探讨瞬时表达的反义CD40 RNA,对EB病毒转化的健康人B细胞膜表面CD40分子表达和增殖能力的影响. 方法:应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建人反义CD40 RNA的真核表达载体pcDNA3/CD40,并以其转染本室建立的EB病毒转化的健康人B细胞.应用流式细胞仪(FACS),检测B细胞膜上CD40分子表达的变化.应用MTT比色法检测反义CD40 RNA对B细胞增殖能力的影响.结果:与转染空载体pcDNA3组相比,转染pcDNA3/CD40细胞上CD40分子的表达降低(P<0.01),其增殖能力明显降低(P<0.01).结论:反义CD40 RNA技术,可作为有效的免疫调控手段.CD40基因本身在细胞的生长代谢中也起着重要作用.
作者：郑祥雄；李和军；李频；周小玲 刊期： 2003年第05期
目的:探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制. 方法:将培养的妊娠早期滋养层细胞,分为正常对照组(细胞+培养液)、H2O2组(细胞+培养液+H2O2)和胰岛素+H2O2组(细胞+H2O2+胰岛素).采用透射电镜观察及流式细胞术,观察H2O2诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2O2诱导的细胞凋亡的抑制作用.并检测胰岛素对滋养细胞caspase-3的活性及Bcl-2蛋白表达的影响.结果:H2O2可诱导培养的滋养细胞凋亡,透射电镜下可见特征性的细胞核改变.胰岛素可显著抑制H2O2诱导的细胞凋亡,流式细胞仪检测其凋亡率较H2O2组显著下降(P<0.01).H2O2组滋养细胞中caspase-3的活性较对照组显著增高(P<0.01),而Bcl-2蛋白的表达则较对照组显著下降(P<0.01).结论:胰岛素可明显抑制H2O2诱导的滋养细胞凋亡,其机制可能与降低caspase-3的活性和促进Bcl-2蛋白的表达有关.
作者：于月成；辛晓燕；张峰；马向东；王德堂；郭惠玲 刊期： 2003年第05期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
