潘春华；罗荣城；菜红兵
目的:阐明重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内早期感染抗原呈递细胞(APC)的动态变化规律.方法: 用一定剂量的表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550(Pyagfp)口服接种BALB/c小鼠.3 d后, 取腹腔巨噬细胞培养24 h, 用荧光显微镜观察.另以该细菌静脉注射小鼠, 于感染后3、6和12 h, 制备脾脏、肝脏低浮密度细胞.用流式细胞术检测巨噬细胞和树突状细胞的感染率.结果: 巨噬细胞感染X4550(Pyagfp)的百分率, 腹腔中约为50%, 肝脏和脾脏中约为20%～40%. 树突状细胞感染X4550(Pyagfp)的百分率, 脾脏中约为4%～10%, 肝脏中约为10%～20%.巨噬细胞的吞噬能力明显高于树突状细胞.结论: 感染早期, 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内已被APC所摄取, 为诱导有效的免疫应答提供了先决条件.
作者：王芳；焦新安；顾健；马莉；Richard Lo-Man；Claude Leclere；刘秀梵 刊期： 2003年第05期
有关多发性肌炎(PM)/皮肌炎(DM)外周血淋巴细胞亚群的研究仅见早期报道,且尚无统一结论.为探讨PM/DM外周血单个核细胞(PBMC)HLA-DR的表达及其意义,我们应用双荧光抗体标记、流式细胞仪(FACS)进行了检测.
作者：张士发；梁再赋；许静；赵丽萍；王良明；顾绍裘 刊期： 2003年第05期
目的:构建钇-十二烷四乙酸(Y-DOTA)免疫噬菌体Fab抗体库.方法:将牛血清白蛋白(BSA)与DOTA交联,并与金属Y鳌合制备成BSA-Y-DOTA,用其免疫BALB/c小鼠.检测抗血清的滴度后,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞,提取总RNA.利用RT-PCR扩增全套重链Fd和轻链基因,依次插入经改造的噬菌体载体pComb3M的相应酶切位点,构建成Fab噬菌体抗体库.用酶切、序列测定及ELISA等方法,对重组率、多样性及Fab的展示情况进行鉴定.结果:成功得制备了BSA-Y-DOTA交联物,并获得较好的免疫效果.免疫小鼠的全套重链Fd片段和轻链均得到正确扩增;d片断和轻链基因均插入到载体pComb3M中;ab抗体库的库容量达8×107;重组率约为90%,且具有良好的抗体基因多样性.另外,Fab片段也被展示于噬菌体表面.结论:成功地构建了半抗原Y-DOTA的Fab噬菌体抗体库,为筛选Y-DOTA特异性抗体奠定了基础.
作者：宋斐；邢金良；张思河；杨向民；陈志南 刊期： 2003年第05期
目的:构建人抗戊型肝炎病毒 (HEV) 噬菌体抗体库,筛选人源中和性抗HEV的单克隆抗体(mAb) .方法:取抗HEV抗体阳性的6例HE患者静脉血,分离淋巴细胞,提取细胞总RNA后逆转录.用一组人IgG Fab基因特异性引物,分别扩增IgG κ0轻链与重链Fd 段基因.将κ轻链与Fd段基因先后克隆入噬菌体载体pComb3的相应位点,经电穿孔法转化大肠杆菌XL1-Blue,再以辅助噬菌体VCSM13超感染,构建人抗HEV噬菌体抗体库.采用独特的5轮筛选法(逐渐降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的4种含中和抗原表位的HEV 代表株ORF2重组混合抗原,筛选人噬菌体抗体库,并以 ELISA鉴定噬菌体抗体.结果:经数次电转化构建了容量为1.9×107重组率为80%的κ轻链基因库;容量为1.8×107重组率为20%的Fab基因库.以含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异淘筛5次,出现特异富集.ELISA鉴定第5轮筛选产物,得到4株与HEV ORF2重组混合抗原具有较高亲和力的Fab噬菌体抗体,可能为中和抗体.结论:成功地构建了人抗HEV噬菌体抗体库,并获得人源抗HEV特异性噬菌体抗体.
作者：魏华；张建琼；吕海芹；孟继鸿；鲁晓瑄；谢维 刊期： 2003年第05期
目的:了解小鼠淋巴细胞体外抗御弓形虫速殖子的效果.方法:采用大鼠脾细胞培养技术,以乙酰螺旋霉素作为阳性对照,观察淋巴细胞本身以及加入扁桃酸(MA)后,对虫体侵入淋巴细胞及在淋巴细胞内增殖的影响.结果:与其他体细胞相比较,淋巴细胞在受到弓形虫侵害时,仍可抑制和杀灭弓形虫.当存在免疫作用的情况下,安全剂量的MA抑制弓形虫侵入的作用不显著,但抑制细胞内弓形虫增殖的作用显著.结论:以细胞介导的免疫作用是宿主抗弓形虫感染的重要因素,因此,应注重提高机体的细胞免疫,同时加用药物,以增强机体抗虫的效果.
作者：石琦；郝炳华；周玉玲；石兴民；杨安宁；张瑾；程彦斌；李哲 刊期： 2003年第05期
目的:构建编码抗人精浆蛋白抗体Fab基因的表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法:从克隆载体pUC19-К和pBluescript KS(M13-)-Fd中,酶切获得抗人精浆蛋白单克隆抗体(mAb)Fd基因和К链基因.然后将Fd和К链基因重组到Fab表达载体pComb3中,构建抗人精浆蛋白Fab基因的重组表达载体pComb3-Fab,并在XL1-Blue菌中表达.结果:经重组表达载体转化的XL1-Blue菌株可表达Fab基因.Western blot和免疫细胞化学分析表明,表达产物Fab具有特异性结合精浆蛋白的活性.结论:抗人精浆蛋白Fab基因成功地获得,为进一步将其与抗肿瘤药物偶联用于前列腺癌的导向治疗创造了条件.表达为构建其它基因工程抗体提供了基础.
作者：孙脊峰；杨洁；郝晓柯；赵晶；温伟红；金明；王成济；杨安钢 刊期： 2003年第05期
目的:观察不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF),对大鼠胚胎脊髓运动神经元生长活性的作用.方法:取大鼠胚胎脊髓腹侧组织体外分离,进行原代细胞培养,应用抗神经微丝单克隆抗体(mAb) SMI32进行运动神经元的免疫细胞化学染色,从细胞形态学及应用MTT比色法,研究GDNF对大鼠脊髓运动神经元的影响.结果:GDNF能明显促进体外培养的大鼠脊髓运动神经元存活及突起的生长(P<0.05),且具有剂量依赖的趋势.结论:不同浓度的GDNF对体外培养的大鼠胚胎脊髓运动神经元,有不同程度的促生长作用.
作者：宋学琴；吴淑玉；李春岩；王丽琴；王晓娟 刊期： 2003年第05期
目的:构建含人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因的重组腺病毒载体,探讨TR的抗氧化功能与神经退行性疾病的相关性.方法:从重组质粒pGEM-TR上用内切酶切下编码500个氨基酸的全长TR cDNA片段,并连接穿梭质粒pShuttle,再双酶切pShuttle-TR.将带有CMV启动子的目的片段,插入E1、E3缺失的Adeno-X病毒DNA中,以Adeno-TR DNA通过脂质体转染HEK293细胞,获得重组腺病毒Adeno-TR进行PCR鉴定及病毒滴度测定.用重组腺病毒感染CV1细胞,通过免疫荧光染色与Western blot分别检测重组腺病毒感染的细胞上和裂解液中TR蛋白的表达.结果:重组腺病毒Adeno-TR的病毒滴度为4.4×1011pfu/L.PCR、荧光显微镜证实,以及Western bolt分析,在相对分子质量(Mr)约55 000处均出现特异性条带.结论:成功地构建了重组腺病毒载体,并能介导外源基因TR表达,为进一步研究TR的功能及其与疾病的相关性奠定了基础.
作者：徐江英；许琳；彭光勇；丁传林；卢是月；姚堃 刊期： 2003年第05期
目的:探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制. 方法:将培养的妊娠早期滋养层细胞,分为正常对照组(细胞+培养液)、H2O2组(细胞+培养液+H2O2)和胰岛素+H2O2组(细胞+H2O2+胰岛素).采用透射电镜观察及流式细胞术,观察H2O2诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2O2诱导的细胞凋亡的抑制作用.并检测胰岛素对滋养细胞caspase-3的活性及Bcl-2蛋白表达的影响.结果:H2O2可诱导培养的滋养细胞凋亡,透射电镜下可见特征性的细胞核改变.胰岛素可显著抑制H2O2诱导的细胞凋亡,流式细胞仪检测其凋亡率较H2O2组显著下降(P<0.01).H2O2组滋养细胞中caspase-3的活性较对照组显著增高(P<0.01),而Bcl-2蛋白的表达则较对照组显著下降(P<0.01).结论:胰岛素可明显抑制H2O2诱导的滋养细胞凋亡,其机制可能与降低caspase-3的活性和促进Bcl-2蛋白的表达有关.
作者：于月成；辛晓燕；张峰；马向东；王德堂；郭惠玲 刊期： 2003年第05期
目的:克隆结核杆菌热休克蛋白70(TBhsp70)基因,并在大肠杆菌中表达.方法:利用PCR技术从结核杆菌H37Rv中扩增Hsp70基因,并将其克隆到pUC19中,进行测序.将得到的Hsp70基因克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-TBhsp70,在大肠杆菌DH5α中进行表达.结果:成功地克隆了TBhsp70基因.DNA测序证实,与GenBank公布的序列一致.含pGEX-TBhsp70基因表达质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后,能够表达相对分子质量(Mr)约为96 000的融合蛋白.结论:获得了TBhsp70基因,成功地构建了原核表达质粒pGEX-TBhsp70,并在大肠杆菌得到表达,为其相关研究奠定了一定的基础.
作者：叶菁；隋延仿；陈广生；张秀敏 刊期： 2003年第05期
碘是人体必需的微量元素之一,是机体合成甲状腺激素T3、T4的主要原料,而且又是重要的甲状腺功能调节因子,在自身免疫性甲状腺疾病(autoimmune thyroid disease,AITD)的发病机制中起着非常重要的作用,但其具体的发病机制尚未阐明.
作者：余霄龙；闫胜利；王颜刚；綦玉芹；王娈 刊期： 2003年第05期
目的:探讨海马5-HT3受体神经免疫调节的神经功能通路及可能的途径.方法:采用SABC免疫组化染色法,测定不同脑区c-fos的表达.结果:给海马核团内注射5-HT3受体激动l-phenylbiguanide(1-PBG)后1 h,海马及大脑皮层中有大量的c-fos表达,随时间的推移表达量渐减少.下丘脑在注射1-PBG后8 h,中脑导水管周围灰质在16 h出现有意义的表达.1-PBG诱导的c-fos的表达可被其相应受体拮抗剂tropisetron(TROP)所阻断.结论:海马-大脑皮层-下丘脑-中脑导水管周围灰质形成一个神经网络,这个神经网络可能与免疫调节有关.
作者：刘社兰；张小玉；许德义 刊期： 2003年第05期
目的:利用噬菌体随机肽库,体内筛选可与胃癌移植瘤血管内皮细胞特异结合的多肽片段,为肿瘤的血管抑制治疗提供有效的方法和手段.方法:采用肾包膜下移植法(SRCA),建立免疫抑制小鼠肾包膜下人胃癌移植瘤模型.在小鼠体内对噬菌体十二肽库进行4轮淘筛,回收移植瘤和对照组织(脑)中的噬菌体并滴定计数.同时,用免疫组织化学染色法,检测噬菌体在移植瘤组织中的分布情况.结果:与胃癌移植瘤血管特异结合的噬菌体得到富集,为对照组织(脑)的3.4倍.随机挑取单个克隆测序鉴定,发现十二肽YESIRIGVAPSQ的出现次数多,免疫组化染色显示,噬菌体注入小鼠尾静脉5 min 后,定位于移植瘤血管的内皮细胞.向小鼠体内单独注入呈现十二肽YESIRIGVAPSQ的噬菌体,从胃癌移植瘤组织回收的噬菌体数量为对照组织(脑)的4.2倍,肺的4.9倍,心脏的5.4倍.结论:筛选到的模拟短肽YESIRIGVAPSQ,有可能成为肿瘤血管靶向治疗的有效工具.体内淘筛噬菌体随机肽库,筛选与靶器官血管内皮细胞特异结合的短肽是可行的,具有推广和应用价值.
作者：王瑜；吴开春；聂勇战；韩者艺；韩全利；乔泰东；樊代明 刊期： 2003年第05期
目的:探讨核因子-κB(NF-κB)p65在口服耐受发生中的活性改变及其意义.方法: 雌性Wistar大鼠30只随机分成两组: ①口服耐受组, 用小剂量(每次8 mg/2 mL PBS)的Fx1A抗原灌胃.②对照组, 用PBS 2 mL/次灌胃.观察大鼠迟发型超敏反应(DTH), 进行脾淋巴细胞增殖试验, 了解大鼠免疫功能的改变.以免疫组化和ELISA法, 检测大鼠淋巴组织中NF-κB p65的活性及TGF-β1的表达.结果: 与对照组相比较, 口服耐受组大鼠DTH和抗原特异性淋巴细胞增殖反应明显受抑制; 肠黏膜Peyer's淋巴结(PP结)中NF-κB p65的活性及TGF-β1的表达明显增加.脾淋巴组织中NF-κB p65的活性降低, 但TGF-β1的表达明显增加.结论: 低剂量Fx1A抗原诱导的口服耐受的发生, 可能与不同部位免疫细胞内NF-κB p65的活性改变有关.
作者：杜晓刚；甘华；陈雪梅 刊期： 2003年第05期
目的:探讨HSV-1在诱导Hela细胞凋亡中, 细胞内游离钙浓度的变化及钙离子螯合剂对HSV-1诱导Hela细胞凋亡的抑制作用.方法: HSV-1感染Hela细胞后, 用扫描电镜及透射电镜观察凋亡情况.用荧光探针标记细胞内游离Ca2+, 在不同时间观察细胞内游离Ca2+浓度的变化.结果: HSV-1感染Hela细胞后,出现了典型的凋亡形态学变化.细胞内游离Ca2+浓度在HSV-1感染Hela细胞后12 h达高峰; 典型的凋亡形态学变化出现在HSV-1感染Hela细胞后24 h.细胞内Ca2+螯合剂能显著抑制HSV-1诱导的Hela细胞凋亡.结论: 细胞内游离Ca2+在HSV-1诱导的Hela细胞凋亡过程中, 具有重要作用, 此实验结果为临床治疗相关疾病提供了有用的线索.
作者：杨秋霞；姜洪池；李斌；郗雪艳；刘玉；王兰；吕雪莹；谷金宇；李殿俊 刊期： 2003年第05期
目的:探讨131I标记的美罗华用于CD20表达阳性的晚期难治非何杰金淋巴瘤(NHL)患者治疗的疗效.方法:15例晚期NHL患者,年龄46～68岁,以剂量为50～100 Bq的131I作为标记物标记100 mg的Rituxan,按剂量的1/3直接注射于局部病灶,2/3静脉滴注.每2～3个月1次,2～3次为1疗程.结果:完全缓解(CR)者5例,部分缓解(PR)者7例,病情稳定(SD)者2例,病情进展(PD)者1例,总有效率(ORR)80%.定期检查患者血清HAMA,未发现阳性者.结论:131I标记的美罗华是NHL极有前景的治疗方法.
作者：潘春华；罗荣城；菜红兵 刊期： 2003年第05期
蓖麻毒素(Ricin)是一种毒素蛋白,由A、B两条多肽链组成,通过二硫键结合,毒素进入人体后,B链结合到细胞表面,A链内转化到细胞浆,使核糖体失活,从而抑制蛋白质的合成,造成人体中毒死亡,对成人的平均致死剂量为1.5 μg[1].
作者：郝兰群；郭胜清；郭振泉；宋凤卿；刘云 刊期： 2003年第05期
目的:证实新分离出的冠状病毒与SARS患者的关糸.方法:应用IFA诊断试剂做免疫荧光染色,检测2003-02-04～04-13期间,广东地区3所医院临床诊断为SARS的72例患者血清特异性抗体,以及直接参加救治SARS患者但末发生感染的109名医护人员的血清标本,并以疾病流行期间70例健康体检者作为正常对照组.结果:72例SARS患者中,62例血清特异性IgG呈阳性;而109例密切接触但末发生感染的医护人员及70例SARS流行期间健康体检者,血清特异性IgG和IgM均呈阴性.结论:SARS冠状病毒是引发广东地区SARS的病原体.
作者：石玉玲；李林海；徐德兴；祝庆余；司炳银；于曼 刊期： 2003年第05期
目的:构建携带截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因的真核表达载体, 并将其在HER2阳性SKBR-3肿瘤细胞及HER2阴性Hela肿瘤细胞中表达.方法: 用 PCR法获得截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因片段, 并克隆构建真核表达载体,以脂质体法转染SKBR-3细胞及Hela细胞, 用免疫细胞化学染色检测其在不同细胞中的表达及对细胞形态的影响.结果: 成功构建了编码截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因的真核表达载体pCMV-e23sFv-FSD-GrB, 用免疫细胞化学检测发现, 绝大多数Hela细胞可高表达e23sFv-FSD-GrB 蛋白, 且细胞形态正常, 而表达e23sFv-FSD-GrB 蛋白的SKBR-3细胞形态发生变化, 出现固缩细胞.结论: 截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因真核表达体系的建立, 为确定PE转位肽的小转位功能区段奠定了基础.
作者：张莉；赵晶；王智；温伟红；张盈华；王成济；杨安钢 刊期： 2003年第05期
目的:原核表达神经生长相关蛋白-43(GAP-43),并制备抗GAP-43的单克隆抗体(mAb).方法:从含有GAP-43 cDNA的质粒中,用PCR扩增GAP-43 cDNA的全长编码序列,克隆入表达载体pGEX-4T-1中,构建GAP-43的高表达工程菌,并以IPTG诱导表达目的蛋白.通过亲和层析法纯化表达的GST-GAP-43融合蛋白,并以此为抗原制备mAb.结果:酶切鉴定证明,获得含有目的基因片段的重组质粒.表达的GST-GAP-43融合蛋白以可溶性的形式存在.ELISA检测表明,获得的抗GAP-43 mAb效价为1∶108,其IgG的亚类为IgG2a,亚型问型. 用Western blot 检测大鼠脑匀浆蛋白,在相对分子质量(Mr)为50 000处有一条特异性带.用此mAb进行荧光免疫法检测表明,在致敏豚鼠的肺切片中,有GAP-43阳性的神经纤维.结论:所获抗GAP-43 mAb的特异性强、效价高,对进一步研究GAP-43在神经系统中的作用提供了有用的试剂.
作者：段小莉；黄文晋；王百忍；宋俊峰；金卫林；郭翔；鞠躬 刊期： 2003年第05期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
