王舟；纪祥瑞；李继锋；高继发；梁桂华
目的: 研制可识别天然CD100分子的单克隆抗体(mAb).方法: 采用真核表达的CD100分子免疫BALB/c小鼠, 以间接ELISA法筛选阳性杂交瘤, 并分别用人急性T淋巴细胞性白血病细胞系MOLT-4、猿T淋巴细胞系MLA-144及猴EB病毒转化的B淋巴细胞系(BLCL), 进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性.结果: 共获得7株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株.所有mAb均可识别人和猴细胞系的膜表面天然CD100分子, 其中6株可识别猿细胞系膜表面的天然CD100分子.结论: 成功地制备了7株抗CD100分子的特异性mAb, 为研究人和猿、猴CD100分子的结构与功能提供了新的手段.
作者：许晓光；朱勇；刘雪松；田莹；曹云新；刘莹；户义；金伯泉 刊期： 2003年第01期
目的: 观察Th1、Th2样细胞因子对外周血CD158+细胞比率的调节作用, 为寻找干细胞移植免疫耐受的方法提供论理依据.方法: 将Th1样细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2样细胞因子(IL-4、IL-6), 单独或联合与人外周血单个核细胞(PBMC)培养72 h, 用流式细胞法分析总CD158a+、CD158b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+CD56+细胞亚群中CD158a+、CD158b+细胞的比率.结果: ①细胞因子对CD3+、CD4+、CD8+细胞及CD16+CD56+细胞的影响: IL-2和IFN- γ均可增加上述细胞的百分率(P＜0.05), 但IL-2的作用大于IFN- γ (P＜0.05). IL-2+IFN-γ联合处理的效应高于IFN-γ单独处理(P＜0.05). IL-4+IL-6可降低上述细胞的百分率(P＜0.05). IL-2+IL-4对上述细胞百分率的影响, 高于IL-4(P＜0.05)但低于IL-2(P＜0.05). ②细胞因子对CD158a+/b+细胞的影响: IL-2可增加总的CD158a+/b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+CD56+细胞中的CD158a+/b+细胞的百分比率(P＜0.05); IL-2+IFN-γ可增加CD158a+/b+细胞的百分率(P＜0.05), 但与IL-2单独处理无明显区别, IL-4+IL-6可降低CD158a+/b+细胞的百分率(P＜0.05).IL-2+IL-4可增加总的CD158a+/b+细胞及各亚群中CD158a+/b+细胞的百分率(P＜0.05), 但低于IL-2单独处理(P＜0.05) .结论: IL-2有促进CD158基因表达或使CD158a+、CD158b+细胞增殖的作用, 而IL-4、IL-6则对CD158a+、CD158b+细胞的增值起下调作用, IL-4对IL-2调节CD158a+、CD158b+细胞调节起拮抗作用.
作者：潘兴华；郭坤元；宋久刚；李江琪；庞荣清 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨基因工程疫苗Hp重组尿素酶B亚单位(rUreB)鼻腔接种的免疫效果.方法: 以rUreB不同剂量或加不同佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠.末次免疫7 d后, 收集血清及胃黏膜、小肠黏膜、鼻黏膜及气管黏膜冲洗液, 用ELISA法检测抗rUreB特异性抗体.结果: rUreB鼻腔免疫后各实验组血清特异性IgG及各黏膜冲洗液中特异性IgA的水平均明显增高, 与对照组相比较差异显著(P<0.01).20 μg剂量组与10 μg剂量组相比较, 仅血清特异性IgG水平增高, 其它黏膜特异性IgA的水平未见增高.大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的佐剂效果较霍乱毒素B亚单位(CTB)强, 卡泊波可增强鼻腔接种疫苗在胃黏膜洗液中的抗体应答水平.结论: CTB、LTB、卡泊波均可作为rUreB鼻腔黏膜接种的佐剂.Hp rUreB鼻黏膜接种, 不仅可诱导血清特异性抗体反应, 而且能引起多个黏膜部位的免疫应答, 是一种方便、有效、廉价的免疫途径.
作者：高志刚；邹全明；郭刚；郭桐生；曾韦锟；解庆华 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨子宫内膜癌组织中热休克蛋白(HSP)70、90的表达及意义. 方法: 用免疫组化Envision法及图象分析仪, 检测30例正常子宫内膜、30例增生过长子宫内膜和53例子宫内膜癌中HSP70、HSP90的表达. 结果: 子宫内膜癌中HSP70表达的灰度值为(209.06±5.36), 明显高于正常内膜[(145.21±4.09), P<0.01]和增生过长内膜[(148.59±4.23), P<0.01]; 子宫内膜癌中HSP90表达的灰度值为(166.98±5.71), 明显低于正常子宫内膜[(208.57±31.14), P<0.05]和增生过长子宫内膜[(249.73±4.94), P<0.01].子宫内膜癌中HSP70的表达随肿瘤病理分级的增加而增强(P<0.01), 非内膜样癌(229.90±3.77)较内膜样癌表达强[(198.37±3.15), P<0.01]; 子宫内膜癌中HSP90表达随肿瘤病理分级的升高而表达减弱, 非内膜样癌(140.21±3.22)较内膜样癌表达减弱[(176.59±2.79), P<0.01].子宫内膜癌中HSP70、90的表达与肌层浸润深度、临床分期及淋巴结转移未见显著相关性(P>0.05).结论: HSP70、 90可能与子宫内膜癌的发生及预后有关.
作者：白晓霞；陈亚琼；辛晓燕；王文栋 刊期： 2003年第01期
目的: 纯化可刺激人γδ+ T细胞增殖的结核杆菌耐热多肽抗原.方法: 采用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)S-100分子筛层析柱, 对结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag)初步分离.将获得的结核杆菌耐热Mr低的多肽抗原(Mtb-LW-Ag)洗脱峰, 分别再经FPLC Mono Q离子交换层析柱进一步纯化, 并且采用流式细胞仪对获得的Mtb-LW-Ag进行刺激γδ+ T细胞增殖活性的测定.结果: Mtb-Ag经FPLC S-100柱可分离出1个大分子蛋白峰A和3个Mr低的多肽峰(B, C, D).Mr低的多肽峰分别经Mono Q柱层析, 鉴定出B峰含有6个主峰, C峰含有1个主峰, D峰含有8个主峰. 对Mtb-LW-Ag及其纯化多肽进行活性检测, 发现多肽峰B和C以及纯化多肽B-Ⅲ和C-主肽均可显著刺激γδ+ T细胞扩增.结论: 利用FPLC法可快速高效地从Mtb-Ag中纯化出多种Mr低的多肽, 而且其中的B-Ⅲ多肽和C-主肽可能是促进γδ+ T细胞活化增殖的主要多肽.
作者：陈勇；吕合作；胡建国；候彦强；何海辉；张海峰；李柏青 刊期： 2003年第01期
人白细胞分化抗原(human leukocyte differentiation antigen, HLDA)及其单克隆抗体在免疫学研究中发挥着日益重要的作用.随着人类基因组计划的完成和细胞膜表面分子功能研究的深入, 不断有新的功能重要的白细胞分化抗原被发现.
作者：金伯泉；刘飞 刊期： 2003年第01期
目的: 分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的抗原表位.方法: 制备Protein A亲和层析柱, 从丙肝患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体; 并以此为筛选配基, 对噬菌体表面展示的随机15肽库进行亲和筛选.结果: 三轮筛选的投入产出比逐轮升高至3.3×10-3, 假阳性率逐轮降低至0.2%, 提示具有良好的富集效果.对从第3轮挑选出的16个克隆进行结合试验, 发现9个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清起反应.测序表明, 8个克隆的外源肽含有核心序列WPWS.用阳性噬菌体克隆检测20例丙肝患者血清, 有程度不等的阳性反应.结论: 用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中, 筛选到有一定功能的模拟表位.
作者：柯屾；朱继萍；温新宇；赵平；施明；贺永怀；姚志建；沈倍奋 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导的耐受性是否参与免疫赦免部位的应答反应.方法: 以LEW大鼠作为受体, F344大鼠作为供体, 进行角膜移植.将受体鼠随机分成5组, 即在手术前7 d及移植后7 d, 以球旁途径分别注射30 μg/kg、60 μg/kg、90 μg/kg和120 μg/kg的SEB组和注射生理盐水的阴性对照组.阳性对照组分别为移植后注射糖皮质激素(GC)、FK506、环孢素A(CsA)和白介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)组.镜下观察移植后30 d内角膜的浑浊、水肿和新生血管, 用抗排斥反应指数记录移植片存活天数.采用NK1.1-PE荧光抗体进行组织染色, 观察移植后不同时间受体鼠角膜片的炎症细胞浸润和受体鼠眼局部NK细胞的变化.结果: 注射120 μg/kg SEB的大鼠移植片比生理盐水对照组的存活天数延长了22 d.与FK506、CsA、IL-1ra和GC组相比也明显延长.120 μg SEB/kg受体鼠的移植片排斥反应指数为3.42±2.18, 明显低于对照组6.58±3.15(P＜0.01).其中水肿指数和新生血管指数明显降低.组织染色结果显示, SEB注射后NK细胞数量增加.结论: 注射SEB能降低大鼠角膜移植的排斥反应, 提示SEB诱导的耐受性参与了免疫赦免部位的应答反应.
作者：何庆华；潘志强；张文华；接英；武宇影；彭虹；徐亮；陈钰 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨钙离子载体(calcium ionophore, CI)对外周血单核细胞来源的树突状细胞(DC)的影响.方法: 分离健康献血者外周血单核细胞, 分别加入重组人粒/单集落刺激因子(rhGM-CSF) 100 μg/L、rhGM-CSF 100 μg/L+CI 10 μg/L及rhGM-CSF+CI 各100 μg/L.体外培养40 h后, 于光镜及电镜下观察细胞的形态、流式细胞仪检测细胞的表面标志, MTT比色法检测上述分子对自体T细胞的刺激增殖作用.结果: 外周血单核细胞在GM-CSF+CI 各100 μg/L的条件下培养40 h, 就可看到典型的DC形态, 其表面CD14分子表达减少, HLA-DR、CD40、CD83及CD86分子的表达明显增高, 且具有明显刺激自体T细胞增殖的能力.结论: CI有显著加速GM-CSF诱导的外周血单核细胞向DC转化的作用.
作者：吴军；王晓怀；王捷；杨太成；赖晃文；郑文岭 刊期： 2003年第01期
目的: 用生物工程技术制备人源性抗-HBs Fab.方法: 将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBs Fab基因克隆入pBAD/g ⅢA载体, 进而转化Top10大肠杆菌.对重组质粒菌发酵表达后, 利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab蛋白.对所得包涵体依次变性、溶解、纯化后, 利用透析进行复性.用Western blot检测Fab蛋白的特异性, Dot blot测定其生物学活性.结果: 经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白, 有较好的生物学活性, 并且总量达到80 mg/L.对所获包涵体进行透析复性后, 也可得到少量有活性的蛋白, 但比例很小.结论: 用pBAD/g ⅢA-Top10表达系统表达人源抗-HBs Fab片段, 发酵培养后, 经有效纯化可得到生物学活性较好的可溶性蛋白, 为人源抗-HBs Fab片段的大量制备提供了有效手段.
作者：安峰；陈玉川；陆慧琦；韩焕兴 刊期： 2003年第01期
目的: 降低鼠源性抗血小板单克隆抗体SZ-2的免疫原性, 为其进一步研究、应用奠定基础.方法: 用Trizol试剂从SZ-2杂交瘤细胞抽提RNA, 应用RT-PCR技术, 扩增出SZ-2重链、轻链可变区基因, 克隆入载体pUCm-T, 测序分析.应用基因重组技术, 将SZ-2轻、重链可变区基因与人免疫球蛋白γ1重链CH1和κ轻链恒区基因进行拼接, 构建人-鼠嵌合Fab片段基因表达质粒pSW1-2 Fab/Hu, 并导入大肠杆菌XL1-blue诱导表达.以ELISA、Western blot和瑞斯托霉素诱导血小板聚集抑制试验, 对表达产物进行检测、验证.结果: 克隆的基因序列符合小鼠轻、重链可变区基因的特征; 表达质粒pSW1-2 Fab/Hu拼接正确; 在大肠肝菌中的表达量约为180 μg/L; 表达产物具有与血小板GPIb结合的特性并可抑制瑞斯托霉素诱导血小板聚集.结论: 成功地克隆了SZ-2可变区基因; 并表达了可溶性人-鼠嵌合Fab基因工程抗体.
作者：戴克胜；祝怀平；江淼；阮长耿 刊期： 2003年第01期
鼠源性单克隆抗体(mAb)应用于人体治疗首先需对其进行基因工程化改造.目前, 常用的克隆mAb可变区基因的方法, 是利用抗体可变区内骨架区(FR)序列的保守性, 设计一组通用引物, 采用RT-PCR法扩增可变区基因[1,2].但由于引物的简并性, 克隆过程中将不可避免地改变抗体可变区两侧(FR1、FR4)的氨基酸序列, 这些改变可能导致基因工程抗体亲和力降低[3].我们对传统方法进行了改进, 采用5′-RACE(rapid amplification of cDNA end, RACE)克隆的策略, 获得了抗人CD16 mAb轻链可变区(VL)基因的真实序列.
作者：解志刚；郭宁；冯健男；施明；孙瑛勋；于鸣；沈倍奋 刊期： 2003年第01期
目的: 克隆小鼠的p27Kip1基因, 并以此为探针分析p27Kip1在外周血B细胞中的表达, 以及其在抗原受体和CD40介导的抑制和促进增殖信号中的作用.方法: 从培养的B细胞中提取总RNA, 用RT-PCR扩增并克隆p27Kip1基因.用流式细胞仪检测B细胞凋亡.用Northern blot观察p27Kip1mRNA的表达水平.结果: 成功地克隆了小鼠的p27Kip1基因.发现抗原受体交联在引起外周血B细胞凋亡之前, 出现p27Kip1表达上调, 若同时激活CD40则使p27Kip1表达降低, B细胞也免于凋亡.用针对p27Kip1的反义寡核苷酸处理, 可阻断抗原受体交联引起的外周血B细胞凋亡.结论: p27Kip1可能在抗原受体信号介导的B细胞凋亡和CD40信号介导的B细胞生存中发挥一定的作用.
作者：王骊丽；韩骅 刊期： 2003年第01期
目的: 构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)的真核表达载体, 并在大鼠骨髓基质细胞中进行表达.方法: 利用基因克隆技术, 将原核克隆载体pSP73中的目的基因VEGF165用BamH I和Xho I双酶切后, 再克隆到真核表达载体pcDNA3.1中, 构建重组质粒pcDNA3.1-VEGF165.对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定.通过脂质体介导, 用重组质粒转染SD大鼠骨髓基质细胞, 然后以G418筛选阳性克隆, 用免疫细胞化学鉴定. 结果: 经酶切鉴定及基因测序证实, 重组体中已插入目的基因片段VEGF165.免疫细胞化学证实, 重组质粒转染的骨髓基质细胞中有VEGF165基因的表达.结论: 成功地构建真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165, 并在骨髓基质细胞中得到表达, 为将表达VEGF基因的骨髓基质细胞作为骨组织工程的种子细胞的可能性提供了实验依据.
作者：高全文；董绍忠；陈希哲；陈琰；杨连甲 刊期： 2003年第01期
目的: 探索利用DNA改组(DNA shuffling)技术, 获得更高活性tPA的可能性.方法: 以人、恒河猴及大白鼠tPA cDNA为一组基因, 进行tPA的DNA改组 (DNA family shuffling).以改组后构建的tPA多样性文库转染CHO细胞并进行克隆和筛选.结果: 得到了两株有意义的克隆:t9和t17, 其中t9克隆表达的tPA活性略高于人tPA, 初步的比活性测定结果表明, 活性约提高4倍.t17克隆表达的tPA虽然有88个氨基酸的缺失, 但仍表现出与人tPA相同的活性.两株克隆经测序证明, 为改组后的基因, 其序列以人和恒河猴的tPA cDNA序列为主, 少数序列来源于大白鼠tPA cDNA.结论: 这一探索性结果将为后续几轮的tPA DNA改组探明道路, 为终从改组后tPA多样性基因库中筛选到比较理想的重组体打下基础.
作者：黄庆生；徐静；徐俊杰；童贻刚；王海涛 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨人卵巢癌细胞中HLA分子及其相关基因的表达与IFN-γ诱导HLA分子表达的相互关系. 方法: 采用Western blot、免疫组化和流式细胞术, 检测卵巢癌细胞中HLA分子表达, 以RT-PCR技术, 分析卵巢癌细胞TAP、LMP和MHC II类分子反式激活蛋白(CIITA)基因表达. 结果: 被检测的11株卵巢癌细胞中, HLA-I 类分子异常的表达率达为45%.而HLA-I类分子表达的异常与TAP1、TAP2、LMP2和LMP7 4种基因表达的异常有关.卵巢癌细胞或其他肿瘤细胞HLA-II类分子的表达与CIITA基因的表达一致.组成性或诱导性表达CIITA基因的肿瘤细胞, 经IFN-γ作用后, 其HLA-I、-II类分子的表达增强; 而诱导后仍不表达CIITA基因的肿瘤细胞, 其HLA分子的表达无增强作用. 结论: 卵巢癌细胞中TAP和LMP基因表达的缺陷, 是引起HLA-I类分子表达异常的重要因素, 提示CIITA基因参与了调控肿瘤细胞HLA-I、-II类分子的表达.
作者：葛海良；张笑人；王颖；马安伦；张惠珍；王树军；周光炎 刊期： 2003年第01期
目的: 观察人截短型AIF基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用.方法: 用RT-PCR法分段克隆全长人AIF基因.经改造截去其N-端线粒体定位信号及部分Spacer区域(1～120位氨基酸)的编码序列, 从而获得人截短型AIF(AIF△1-120)基因.将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体, 用脂质体法转染HeLa细胞, 通过荧光显微镜观察、免疫组织化学检测、间接免疫荧光检测、电镜观察等方法, 检测目的基因在转染细胞中的表达, 以及对转染细胞的形态及生长状况的影响.结果: 成功地构建了人截短型AIF(AIF△1-120)基因的真核表达载体.转染HeLa细胞后, 可检测到人截短型AIF分子的表达.随着转染后时间的延长, 可观察到表达人截短型AIF分子的HeLa细胞呈现典型的凋亡特征.结论: 人截短型AIF基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡.
作者：于翠娟；孟艳玲；赵晶；王智；王成济；杨安钢 刊期： 2003年第01期
目的: 提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR )中表达的产量.方法: 对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后, 构建不同的嵌合抗体表达载体.用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选, 用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平.结果: 通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变, 使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化.转染CHO细胞后, 可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果, 抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关.从弱化程度高的pWS2-BDI组中, 我们筛选得到表达量达55 μg/(106细胞*24 h)的高表达细胞株, 经锌离子进一步诱导后, 表达量可达100 μg/(106细胞*24 h)以上.结论: 弱化表达载体中DHFR的表达, 可提高MTX对工程抗体表达的增加效果.
作者：白银；王琰；张海荣；周丽君；吕英谦；俞莉章 刊期： 2003年第01期
目的: 分析anti-TCRαβ mAb、anti-TCRαβ mAb+anti-CD28 mAb诱导小鼠胸腺淋巴细胞不同亚群的凋亡及凋亡程度, 分析CD28协同刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响.方法: 新鲜分离胸腺细胞, 加入anti-TCRαβ mAb、 anti-TCRαβ mAb+anti-CD28 mAb等培养20 h, 进行多重染色, 流式细胞仪分析.结果: 与胸腺细胞自发凋亡的结果相比较: ①双信号刺激可明显增加胸腺细胞凋亡的数目, 尤其是CD4+CD8+胸腺细胞的凋亡数目.②凋亡的CD4+CD8+亚群、CD4+CD8 亚群细胞表面CD28的表达均增多.结论: CD28共刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响与细胞的成熟程度有关.CD28共刺激分子能明显增强不成熟皮质胸腺细胞的凋亡.
作者：李红梅；张华刚；王宏程；钱晓萍；孔宪涛；陈慰峰 刊期： 2003年第01期
目的: 在大肠杆菌中融合表达人Fas配体蛋白. 方法: 应用RT-PCR技术, 从激活的人外周血淋巴细胞中提取总RNA, 扩增Fas配体 cDNA, 克隆入PCR2.1载体.测序验证后, 克隆入带有组氨酸盒的表达载体pQE-31, 在大肠杆菌中表达, 经亲和层析柱纯化后, 用SDS-PAGE和Western blot 鉴定表达产物.结果: 表达的融合蛋白为人Fas配体, 其相对分子质量(Mr)为40 000.经透析复性后, 具有诱导Jurkat细胞凋亡的作用.用该蛋白分子免疫BALB/c小鼠制备抗血清, 以间接ELISA检测了部分自身免疫病与肿瘤患者血清中可溶性FasL的含量, 结果与进口试剂盒的灵敏性相似.结论: 获得人Fas配体蛋白, 并制备出抗FasL抗血清, 为进一步研制抗FasL单克隆抗体, 深入研究FasL的应用提供了材料.
作者：李宁丽；聂红；余奇文；柏峻；马安伦；张继英；沈佰华；王利；张冬青 刊期： 2003年第01期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
