高全文；董绍忠；陈希哲；陈琰；杨连甲
目的: 研究口腔颌面部恶性肿瘤细胞系内源性PTEN蛋白的表达, 比较高转移性癌细胞系与亲本细胞PTEN蛋白表达的差异.方法: 应用ABC免疫组化染色法, 检测8例癌细胞系PTEN蛋白的表达, 包括舌癌细胞系Tca8113和HSC-3、口底癌细胞系 HSC-2、颊癌细胞系BcaCD885、粘液表皮样癌细胞系MEC-1、腺样囊性癌细胞系SACC83以及高转移性舌癌细胞系Tb-TLP和高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2.结果: 5/8例癌细胞系PTEN蛋白的表达呈阳性, PTEN蛋白定位于靠近细胞核周围的细胞质中.3/8例癌细胞系PTEN蛋白的表达呈阴性, 即BcaCD885细胞及高转移性Tb-TLP和M3SP2细胞.结论: PTEN蛋白表达缺失与癌细胞转移可能有一定的关系.
作者：刘斌；吴军正；段小红；李洁；李焰 刊期： 2003年第01期
目的: 研究编码结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的基因疫苗pTB30m和pTB30s对免疫动物的保护作用.方法: 以基因疫苗pTB30m和pTB30s肌注免疫BALB/c小鼠. 免疫完成6 wk后, 用5×105 CFU的MTB H37Rv毒株经小鼠尾静脉攻击感染. 同时用尼龙毛柱分离基因免疫BALB/c小鼠的T细胞, 并以5×106 T细胞/只小鼠过继免疫正常BALB/c小鼠, 立即用105 CFU 的MTB 毒株经小鼠尾静脉攻击感染.4 wk后分别计数脾脏中的细菌负荷.结果: 与生理盐水对照组相比较, pTB30m及pTB30s质粒免疫组BALB/c小鼠脾脏中的细菌负荷均减少, 分别为0.645(log10CFU, P<0.01)和0.839(log10CFU, P<0.001); 而空质粒对照组小鼠脾脏中的细菌负荷减少较少.经质粒pTB30m和pTB30s免疫的BALB/c小鼠的T细胞, 过继免疫的正常BALB/c小鼠, 对攻击感染的MTB H37Rv毒株在脾脏中的增殖具有部分抑制作用.结论: pTB30s免疫的BALB/c小鼠, 对MTB H37Rv毒株攻击的保护作用优于pTB30m质粒免疫, 有望进一步用于结核病的防治研究.
作者：范雄林；徐志凯；李元；李别虎；薛莹；柏银兰；白光春；贾向志 刊期： 2003年第01期
目的: 克隆小鼠的p27Kip1基因, 并以此为探针分析p27Kip1在外周血B细胞中的表达, 以及其在抗原受体和CD40介导的抑制和促进增殖信号中的作用.方法: 从培养的B细胞中提取总RNA, 用RT-PCR扩增并克隆p27Kip1基因.用流式细胞仪检测B细胞凋亡.用Northern blot观察p27Kip1mRNA的表达水平.结果: 成功地克隆了小鼠的p27Kip1基因.发现抗原受体交联在引起外周血B细胞凋亡之前, 出现p27Kip1表达上调, 若同时激活CD40则使p27Kip1表达降低, B细胞也免于凋亡.用针对p27Kip1的反义寡核苷酸处理, 可阻断抗原受体交联引起的外周血B细胞凋亡.结论: p27Kip1可能在抗原受体信号介导的B细胞凋亡和CD40信号介导的B细胞生存中发挥一定的作用.
作者：王骊丽；韩骅 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨人卵巢癌细胞中HLA分子及其相关基因的表达与IFN-γ诱导HLA分子表达的相互关系. 方法: 采用Western blot、免疫组化和流式细胞术, 检测卵巢癌细胞中HLA分子表达, 以RT-PCR技术, 分析卵巢癌细胞TAP、LMP和MHC II类分子反式激活蛋白(CIITA)基因表达. 结果: 被检测的11株卵巢癌细胞中, HLA-I 类分子异常的表达率达为45%.而HLA-I类分子表达的异常与TAP1、TAP2、LMP2和LMP7 4种基因表达的异常有关.卵巢癌细胞或其他肿瘤细胞HLA-II类分子的表达与CIITA基因的表达一致.组成性或诱导性表达CIITA基因的肿瘤细胞, 经IFN-γ作用后, 其HLA-I、-II类分子的表达增强; 而诱导后仍不表达CIITA基因的肿瘤细胞, 其HLA分子的表达无增强作用. 结论: 卵巢癌细胞中TAP和LMP基因表达的缺陷, 是引起HLA-I类分子表达异常的重要因素, 提示CIITA基因参与了调控肿瘤细胞HLA-I、-II类分子的表达.
作者：葛海良；张笑人；王颖；马安伦；张惠珍；王树军；周光炎 刊期： 2003年第01期
目的: 分析anti-TCRαβ mAb、anti-TCRαβ mAb+anti-CD28 mAb诱导小鼠胸腺淋巴细胞不同亚群的凋亡及凋亡程度, 分析CD28协同刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响.方法: 新鲜分离胸腺细胞, 加入anti-TCRαβ mAb、 anti-TCRαβ mAb+anti-CD28 mAb等培养20 h, 进行多重染色, 流式细胞仪分析.结果: 与胸腺细胞自发凋亡的结果相比较: ①双信号刺激可明显增加胸腺细胞凋亡的数目, 尤其是CD4+CD8+胸腺细胞的凋亡数目.②凋亡的CD4+CD8+亚群、CD4+CD8 亚群细胞表面CD28的表达均增多.结论: CD28共刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响与细胞的成熟程度有关.CD28共刺激分子能明显增强不成熟皮质胸腺细胞的凋亡.
作者：李红梅；张华刚；王宏程；钱晓萍；孔宪涛；陈慰峰 刊期： 2003年第01期
目的: 研究新型的特异性类胰蛋白酶抑制剂双苯甲脒, 对肥大细胞稳定性的影响.方法: 扁桃体组织经酶消化后, 将细胞成分用全HEPES缓冲盐溶液(HBSS)重新悬浮.肥大细胞激发和抑制剂作用的试验在试管中37℃条件下完成.类胰蛋白酶水平用ELISA法测定.结果: 同时加入扁桃体细胞悬液中的双苯甲脒, 可以剂量依赖的方式抑制抗IgE诱导的类胰蛋白酶释放.仅1 mg/L(1.54 μmol/L)的双苯甲脒, 即可抑制肥大细胞释放类胰蛋白酶达52%, 10 mg/L则能抑制76%的释放.将预培养时间延长30 min, 对双苯甲脒的抑制作用无明显影响.在培养到45 min时, 双苯甲脒可抑制高达47%的基础类胰蛋白酶释放.与细胞培养15 min后, 抗IgE抗体(1 g/L)或钙离子导入剂(CI, 1 μmol/L)引起的类胰蛋白酶释放的量, 分别为基础分泌量的3.2和2.6倍.但是, 当细胞与全HBSS预培养超过10 min后, 肥大细胞对抗IgE抗体或CI的反应性明显降低.结论: 双苯甲脒能够抑制人类扁桃体肥大细胞的IgE依赖性类胰蛋白酶释放.因此, 有望开发成为一种新型的肥大细胞稳定剂.
作者：谢华；何韶衡 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用及其作用机制.方法: 将PD98059加入慢性髓细胞白血病细胞系K562细胞中, 通过细胞活力、DNA合成、集落形成和MAPK活性的变化, 观察PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用.结果: PD98059可明显抑制K562细胞活力、DNA合成、集落形成和MAPK活性(与对照组比较, P<0.05), 其抑制作用具有浓度依赖性.结论: PD98059可通过阻断Ras-MAPK信号通路而发挥其抑制作用.Ras-MAPK通路极有可能成为 CML治疗的新靶点.
作者：尚振川；孙秉中；陈志南；王晶；冯琦；王玮；王莎；张涛 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨肺泡巨噬细胞(AM)中STAT1(signal transducers and activators of transcription 1)的活化在大鼠肺间质纤维化中的作用.方法: 50只健康雌性Wistar大鼠随机分成博莱霉素(BLM)组和生理盐水(NS)组各25只, 气管内分别灌注BLM和NS.用Western-blot法测定AM中STAT1活化的动态变化; 用免疫组化染色法测定AM的ICAM-1(intercellular adhesion molecule-1)的表达.结果: NS组中的AM内只有少许STAT1活化, 气管内灌注BLM后1 d, AM中STAT1的活化即开始显著增高, 于第7 天达高峰, 以后逐渐下降, 但28 d后仍高于NS组(P<0.05).NS与BLM组的AM中表达ICAM-1的细胞数增高的模式, 与AM中STAT1活化的模式相同.AM中STAT1活化的程度与AM中ICAM-1的表达呈正相关(r=0.913, P<0.01), 而后者又与肺组织炎症的积分呈正相关(r=0.947, P<0.01).结论: 实验性肺间质纤维化大鼠AM中存在STAT1的异常活化, 并参与了肺泡炎和肺纤维化的形成.
作者：范贤明；王曾礼；李振华 刊期： 2003年第01期
目的: 纯化可刺激人γδ+ T细胞增殖的结核杆菌耐热多肽抗原.方法: 采用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)S-100分子筛层析柱, 对结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag)初步分离.将获得的结核杆菌耐热Mr低的多肽抗原(Mtb-LW-Ag)洗脱峰, 分别再经FPLC Mono Q离子交换层析柱进一步纯化, 并且采用流式细胞仪对获得的Mtb-LW-Ag进行刺激γδ+ T细胞增殖活性的测定.结果: Mtb-Ag经FPLC S-100柱可分离出1个大分子蛋白峰A和3个Mr低的多肽峰(B, C, D).Mr低的多肽峰分别经Mono Q柱层析, 鉴定出B峰含有6个主峰, C峰含有1个主峰, D峰含有8个主峰. 对Mtb-LW-Ag及其纯化多肽进行活性检测, 发现多肽峰B和C以及纯化多肽B-Ⅲ和C-主肽均可显著刺激γδ+ T细胞扩增.结论: 利用FPLC法可快速高效地从Mtb-Ag中纯化出多种Mr低的多肽, 而且其中的B-Ⅲ多肽和C-主肽可能是促进γδ+ T细胞活化增殖的主要多肽.
作者：陈勇；吕合作；胡建国；候彦强；何海辉；张海峰；李柏青 刊期： 2003年第01期
目的: 探索利用DNA改组(DNA shuffling)技术, 获得更高活性tPA的可能性.方法: 以人、恒河猴及大白鼠tPA cDNA为一组基因, 进行tPA的DNA改组 (DNA family shuffling).以改组后构建的tPA多样性文库转染CHO细胞并进行克隆和筛选.结果: 得到了两株有意义的克隆:t9和t17, 其中t9克隆表达的tPA活性略高于人tPA, 初步的比活性测定结果表明, 活性约提高4倍.t17克隆表达的tPA虽然有88个氨基酸的缺失, 但仍表现出与人tPA相同的活性.两株克隆经测序证明, 为改组后的基因, 其序列以人和恒河猴的tPA cDNA序列为主, 少数序列来源于大白鼠tPA cDNA.结论: 这一探索性结果将为后续几轮的tPA DNA改组探明道路, 为终从改组后tPA多样性基因库中筛选到比较理想的重组体打下基础.
作者：黄庆生；徐静；徐俊杰；童贻刚；王海涛 刊期： 2003年第01期
目的: 分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的抗原表位.方法: 制备Protein A亲和层析柱, 从丙肝患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体; 并以此为筛选配基, 对噬菌体表面展示的随机15肽库进行亲和筛选.结果: 三轮筛选的投入产出比逐轮升高至3.3×10-3, 假阳性率逐轮降低至0.2%, 提示具有良好的富集效果.对从第3轮挑选出的16个克隆进行结合试验, 发现9个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清起反应.测序表明, 8个克隆的外源肽含有核心序列WPWS.用阳性噬菌体克隆检测20例丙肝患者血清, 有程度不等的阳性反应.结论: 用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中, 筛选到有一定功能的模拟表位.
作者：柯屾；朱继萍；温新宇；赵平；施明；贺永怀；姚志建；沈倍奋 刊期： 2003年第01期
目的: 通过同源重组构建CTLA4Ig腺病毒载体, 研究其生物学活性, 并用于基因治疗诱导心脏移植耐受.方法: 通过基因重组技术, 将CTLA4Ig基因克隆至腺病毒穿梭质粒pCA13中. 然后将该质粒与腺病毒辅助质粒同源重组, 经过293细胞包装, 构建CTLA4Ig腺病毒载体.用RT-PCR、SDS-PAGE及Western blot等技术, 检测包装的病毒感染293细胞后CTLA4Ig蛋白的表达及分泌, 通过体外实验, 观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应( MLR)的抑制作用.通过大鼠体内实验, 检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后, CTLA4Ig在体内的表达.结果: CTLA4Ig腺病毒载体构建成功.体外实验证实, CTLA4Ig腺病毒感染的293细胞上清液, 能够抑制异基因脾细胞的单向MLR.体内实验表明, 经过静脉途径给予受体大鼠CTLA4Ig腺病毒载体, 能够诱导移植耐受, 延长心脏移植物的存活.结论: 构建的CTLA4Ig腺病毒载体, 体外感染293细胞能够分泌CTLA4Ig蛋白.该蛋白可抑制T细胞的活化, CTLA4Ig腺病毒载体可用于体内基因治疗诱导移植耐受.
作者：张庆殷；金永柱；张海滨；谢蜀生 刊期： 2003年第01期
目的: 检测降钙素基因相关肽(CGRP) 、促肾上腺皮质激素 (ACTH)、 5-羟色胺(5-HT) 在正常人淋巴结中的表达, 并探讨它们对免疫系统的影响. 方法: 采用免疫组织化学SABC染色法, 检测35例正常人淋巴结(包括反应性增生淋巴结)中CGRP、ACTH、5-HT的表达. 结果: 35例正常人淋巴结中, CGRP、 ACTH及5-HT表达阳性率依次为: 88.5%(31/35)、85.4%(30/35)及94.2%(33/35).3种标记物在淋巴结中的分布大致相同, 主要分布在副皮质区的T细胞、淋巴滤泡生发中心B细胞及巨噬细胞等部位. 结论: 人外周淋巴结中CGRP、ACTH、5-HT的表达率很高, 且其分布与免疫细胞的分布基本一致.
作者：王舟；纪祥瑞；李继锋；高继发；梁桂华 刊期： 2003年第01期
目的: 研制可识别天然CD100分子的单克隆抗体(mAb).方法: 采用真核表达的CD100分子免疫BALB/c小鼠, 以间接ELISA法筛选阳性杂交瘤, 并分别用人急性T淋巴细胞性白血病细胞系MOLT-4、猿T淋巴细胞系MLA-144及猴EB病毒转化的B淋巴细胞系(BLCL), 进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性.结果: 共获得7株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株.所有mAb均可识别人和猴细胞系的膜表面天然CD100分子, 其中6株可识别猿细胞系膜表面的天然CD100分子.结论: 成功地制备了7株抗CD100分子的特异性mAb, 为研究人和猿、猴CD100分子的结构与功能提供了新的手段.
作者：许晓光；朱勇；刘雪松；田莹；曹云新；刘莹；户义；金伯泉 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨钙离子载体(calcium ionophore, CI)对外周血单核细胞来源的树突状细胞(DC)的影响.方法: 分离健康献血者外周血单核细胞, 分别加入重组人粒/单集落刺激因子(rhGM-CSF) 100 μg/L、rhGM-CSF 100 μg/L+CI 10 μg/L及rhGM-CSF+CI 各100 μg/L.体外培养40 h后, 于光镜及电镜下观察细胞的形态、流式细胞仪检测细胞的表面标志, MTT比色法检测上述分子对自体T细胞的刺激增殖作用.结果: 外周血单核细胞在GM-CSF+CI 各100 μg/L的条件下培养40 h, 就可看到典型的DC形态, 其表面CD14分子表达减少, HLA-DR、CD40、CD83及CD86分子的表达明显增高, 且具有明显刺激自体T细胞增殖的能力.结论: CI有显著加速GM-CSF诱导的外周血单核细胞向DC转化的作用.
作者：吴军；王晓怀；王捷；杨太成；赖晃文；郑文岭 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEB)体外诱导外周T细胞免疫耐受的作用机制.方法: 采用SEB体外刺激C57BL/6J(B6)小鼠的脾细胞后, 以MTT比色法检测脾细胞的增殖, 并用PI染色后以流式细胞术(FCM)分析不同时间段处于S期、G0～G1期的细胞及无能T细胞的凋亡, 测定T细胞亚群及MHC-I(H-2Kb)表达的变化.用琼脂糖凝胶电泳, 观察不同时间段凋亡T细胞的DNA特征.结果: 部分去除CD8+ T细胞后, SEB可刺激B6小鼠脾细胞中CD4+ T细胞大量增殖.在SEB刺激后第3天, CD4+ T细胞中处于S期的比率大, 此后开始下降; 而处于G0～G1期的CD4+ T细胞变化则相反.在初次刺激后第3天, 增殖的CD4+ T细胞出现无能.FCM检测及用琼脂糖凝胶电泳检查DNA ladder证实, 在第7天, 无能CD4+ T细胞出现凋亡, 且凋亡细胞的比率逐渐增多, 不因加入抗CD3抗体或ConA而逆转.在SEB刺激后, CD4+ T细胞表面MHC-I类分子(H-2Kb)的表达, 随细胞无能的出现而明显下调.结论: SEB诱导的T细胞免疫耐受, 可能与CD4+ T细胞的无能、凋亡及细胞表面分子MHC-I的表达下调有关.
作者：梁峰；尉承泽；陈钰；彭虹 刊期： 2003年第01期
目的: 在大肠杆菌中融合表达人Fas配体蛋白. 方法: 应用RT-PCR技术, 从激活的人外周血淋巴细胞中提取总RNA, 扩增Fas配体 cDNA, 克隆入PCR2.1载体.测序验证后, 克隆入带有组氨酸盒的表达载体pQE-31, 在大肠杆菌中表达, 经亲和层析柱纯化后, 用SDS-PAGE和Western blot 鉴定表达产物.结果: 表达的融合蛋白为人Fas配体, 其相对分子质量(Mr)为40 000.经透析复性后, 具有诱导Jurkat细胞凋亡的作用.用该蛋白分子免疫BALB/c小鼠制备抗血清, 以间接ELISA检测了部分自身免疫病与肿瘤患者血清中可溶性FasL的含量, 结果与进口试剂盒的灵敏性相似.结论: 获得人Fas配体蛋白, 并制备出抗FasL抗血清, 为进一步研制抗FasL单克隆抗体, 深入研究FasL的应用提供了材料.
作者：李宁丽；聂红；余奇文；柏峻；马安伦；张继英；沈佰华；王利；张冬青 刊期： 2003年第01期
目的: 构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)的真核表达载体, 并在大鼠骨髓基质细胞中进行表达.方法: 利用基因克隆技术, 将原核克隆载体pSP73中的目的基因VEGF165用BamH I和Xho I双酶切后, 再克隆到真核表达载体pcDNA3.1中, 构建重组质粒pcDNA3.1-VEGF165.对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定.通过脂质体介导, 用重组质粒转染SD大鼠骨髓基质细胞, 然后以G418筛选阳性克隆, 用免疫细胞化学鉴定. 结果: 经酶切鉴定及基因测序证实, 重组体中已插入目的基因片段VEGF165.免疫细胞化学证实, 重组质粒转染的骨髓基质细胞中有VEGF165基因的表达.结论: 成功地构建真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165, 并在骨髓基质细胞中得到表达, 为将表达VEGF基因的骨髓基质细胞作为骨组织工程的种子细胞的可能性提供了实验依据.
作者：高全文；董绍忠；陈希哲；陈琰；杨连甲 刊期： 2003年第01期
目的: 降低鼠源性抗血小板单克隆抗体SZ-2的免疫原性, 为其进一步研究、应用奠定基础.方法: 用Trizol试剂从SZ-2杂交瘤细胞抽提RNA, 应用RT-PCR技术, 扩增出SZ-2重链、轻链可变区基因, 克隆入载体pUCm-T, 测序分析.应用基因重组技术, 将SZ-2轻、重链可变区基因与人免疫球蛋白γ1重链CH1和κ轻链恒区基因进行拼接, 构建人-鼠嵌合Fab片段基因表达质粒pSW1-2 Fab/Hu, 并导入大肠杆菌XL1-blue诱导表达.以ELISA、Western blot和瑞斯托霉素诱导血小板聚集抑制试验, 对表达产物进行检测、验证.结果: 克隆的基因序列符合小鼠轻、重链可变区基因的特征; 表达质粒pSW1-2 Fab/Hu拼接正确; 在大肠肝菌中的表达量约为180 μg/L; 表达产物具有与血小板GPIb结合的特性并可抑制瑞斯托霉素诱导血小板聚集.结论: 成功地克隆了SZ-2可变区基因; 并表达了可溶性人-鼠嵌合Fab基因工程抗体.
作者：戴克胜；祝怀平；江淼；阮长耿 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨一氧化氮(NO)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核因子κB(NF-κB)活化的影响及机制. 方法: 将大鼠AM与不同浓度的NO前体左旋精氨酸(L-Arg)或iNOS特异性抑制剂N6-(1-亚氨乙基)赖氨酸(L-NIL)及CSE共同培养, 用免疫细胞化学染色法检测NF-κB, 用Western blot检测I-κB蛋白含量, 用Griess法测定培养上清液中NO的水平.结果: CSE可使NF-κB活化细胞的百分率增加, I-κB的水平下降.加入CSE和低浓度L-Arg培养的AM, NF-κB活化细胞的百分率显著高于只加入CSE的AM; 而I-κB的水平显著低于只加入CSE的AM.加入CSE和高浓度L-Arg培养的AM, NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM, 而I-κB的水平无显著变化.加入CSE和不同浓度的L-NIL培养的AM, NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM; 而I-κB的水平则显著高于只加入CSE的AM, 并呈浓度依赖(P<0.01).结论: 内源性NO对香烟烟雾所致NF-κB的活化具有双向调控作用.
作者：杨丹蕾；徐永健；张珍祥；李超乾 刊期： 2003年第01期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
