学术投稿

大鼠STAT3特异性shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

张五星;周伟;赵学伟;丁晓然;周喆;张智敏;周焕芝;石炳毅

关键词:信号转导子及转录激活子3( STAT3), 短发夹RNA(shRNA), 慢病毒载体, RNA干扰(RNAi)
摘要:目的 在已经成功构建4个针对STAT3的shRNA质粒表达载体的基础上,筛选出干扰效果佳者进行慢病毒包装并鉴定.方法 将STAT3的干扰质粒shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4及Control1(空载体对照),Control2(无效shRNA对照)分别转染目的细胞(大鼠肾小球系膜细胞),48h后收集细胞提取mRNA,以RT-PCR检测各组分STAT3表达量.对于筛选所得干扰效果佳的质粒,采用pPACKH1 TM慢病毒载体系统进行病毒包装.利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对感染效率及病毒滴度进行检测.结果 RT-PCR检测结果显示,shRNA3样品受干扰的效果佳.成功构建了慢病毒载体Lenti-shRNA3,共转染293T细胞24h、48h,荧光显微镜下可见强绿色荧光,细胞生长状态良好,表明病毒包装成功.转染HT1080细胞,收集慢病毒液,测定病毒滴度为3.34×108ifu/ml,适合感染目的细胞.结论 成功构建了STAT3基因的shRNA慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础.
四川医学杂志相关文献
  • 阿昔莫司联合复方二氯醋酸二异丙氨治疗高三酰甘油血症合并酒精性脂肪肝60例

    目的 探讨高三酰甘油血症合并酒精性脂肪肝的药物治疗.方法 对60例酒精性脂肪肝合并高三酰甘油血症的患者使用阿昔莫司和复方二氯醋酸二异丙氨治疗,观察治疗前后效果.结果 肝功能及血脂变化在治疗前后比较,统计学处理,P<0.01.结论 阿昔莫司联合复方二氯醋酸二异丙氨治疗高三酰甘油血症合并酒精性脂肪肝疗效确切.

    作者:周骥;何元清;任永会;张晗;何丽 刊期: 2012年第02期

  • CA125升高在肝硬化患者中的临床价值

    目的 研究癌胚抗原125(CA125)与肝硬化、腹水、肝功能的关系,以及是否可以作为腹水发生的预测和疾病预后判断的指标.方法 用放射免疫法检测106例肝硬化患者及35例健康对照者血清中CA125含量.结果 肝硬化患者血清CA125水平显著高于正常对照组(196.90±127.12)vs(9.63±4.73),P<0.05,并随着肝硬化患者肝功能child-pugh逐级升高;肝硬化有腹水组血清CA125含量明显高于无腹水组,P<0.05,并随腹水量的增加而升高.结论 血清CA125升高对预测肝硬化患者腹水发生以及病情严重程度、预后判断均有一定的临床意义.

    作者:王英 刊期: 2012年第02期

  • 甘精胰岛素联合二甲双胍和优泌林70/30治疗2型糖尿病的比较

    目的 探讨甘精胰岛素联合二甲双胍治疗2型糖尿病的疗效.方法 选2型糖尿病患者50例,随机分为两组.治疗组,甘精胰岛素(n=25);对照组,(优泌林70/30胰岛素)(n=25).分别采用每晚22:00注射甘精胰岛素加二甲双胍(早晚餐前半小时口服)和优泌林70/30胰岛素早晚餐前半小时皮下注射.根据血糖调整胰岛素剂量,12周后对观察两组糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPBG)、低血糖发生率.结果 甘精胰岛素联合二甲双胍和优泌林70/30治疗2型糖尿病均可有效降低血糖,两组HbA1c、FPG、2hPBG差异无统计学意义(P>0.05),但甘精胰岛素组低血糖发生率明显低于优泌林70/30组(P<0.05)而且体重无明显增加(P>0.05).结论 甘精胰岛素联合二甲双胍治疗2型糖尿病,不仅能使血糖达标,而且能使体重有所减轻,并且减少了低血糖的发生风险,是治疗2型糖尿病尤其是体重指数较大患者较理想的选择.

    作者:应纪祥 刊期: 2012年第02期

  • 大鼠STAT3特异性shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

    目的 在已经成功构建4个针对STAT3的shRNA质粒表达载体的基础上,筛选出干扰效果佳者进行慢病毒包装并鉴定.方法 将STAT3的干扰质粒shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4及Control1(空载体对照),Control2(无效shRNA对照)分别转染目的细胞(大鼠肾小球系膜细胞),48h后收集细胞提取mRNA,以RT-PCR检测各组分STAT3表达量.对于筛选所得干扰效果佳的质粒,采用pPACKH1 TM慢病毒载体系统进行病毒包装.利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对感染效率及病毒滴度进行检测.结果 RT-PCR检测结果显示,shRNA3样品受干扰的效果佳.成功构建了慢病毒载体Lenti-shRNA3,共转染293T细胞24h、48h,荧光显微镜下可见强绿色荧光,细胞生长状态良好,表明病毒包装成功.转染HT1080细胞,收集慢病毒液,测定病毒滴度为3.34×108ifu/ml,适合感染目的细胞.结论 成功构建了STAT3基因的shRNA慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础.

    作者:张五星;周伟;赵学伟;丁晓然;周喆;张智敏;周焕芝;石炳毅 刊期: 2012年第02期

  • 外痔开窗结合PPH治疗环状混合痔临床研究

    目的 为比较传统外剥内扎术、痔上粘膜环形切除钉合术(PPH)与外痔开窗结合PPH术治疗环状混合痔的临床疗效.方法 将450例患者随机分为传统外剥内扎术组、痔上粘膜环形切除钉合术(PPH)组和外痔开窗结合PPH组,各组150例.通过对手术时间、住院时间、术后并发症、患者满意度、住院费用的比较研究.结果 外痔开窗结合PPH术与PPH术在手术时间、住院时间、住院费用、并发症上差异无统计学意义,但在患者满意度上差异有统计学意义;外痔开窗结合PPH术与单纯外剥内扎术相比较在手术时间、住院时间、并发症、患者满意度差异具有统计学意义.结论 外痔开窗结合PPH术治疗环状混合痔有明显优势,是治疗环状混合痔改进后的好方法,值得临床推广使用.

    作者:王留珍;袁勋佇;刘浏荣;陈海燕;王静 刊期: 2012年第02期

  • 防旋股骨近端髓内钉治疗股骨转子间骨折

    目的 探讨防旋股骨近端髓内钉(proximal femoral nail anti-rotation,PFNA)治疗股骨转子间骨折的临床疗效.方法 2009年3月~2011年3月,采用防旋股骨近端髓内钉治疗股骨转子间骨折患者22例受伤至手术时间平均4.5d(2~17d),术后定期摄片随访,评估髋关节功能.结果 22例患者获得平均9.5个月(6~13个月)随访.平均部分负重时间7周(6~8周).骨折平均5.2个月(4~8个月)愈合.按Harris功能评分:优8例,良10例,一般4例,优良率81.8% (18/22).1例主钉入点偏外导致13°内翻.结论 防旋股骨近端髓内钉可以有效地固定股骨转子间骨折,具有微创,手术时间短,出血少,防旋转能力强,可早期功能锻炼,并发症少,是治疗股骨转子间不稳定性骨折的良好方法.

    作者:李越;杨光毅;王宏;李志荣 刊期: 2012年第02期

  • 血清铁蛋白与冠状动脉粥样硬化的相关性

    目的 探讨血清铁蛋白与冠状动脉粥样硬化(CAD)的相关性.方法 选择我院2009年1月~2010月12月我院接受冠状动脉造影的CAD患者100例,和100例来医院体检的健康人群对照.测定两组血清学指标和铁蛋白情况.采用SPSS 11.0进行分析.结果 CAD组的CRP、TG、UA和血清铁蛋白的含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).CAD组TC、LDL的含量显著性的低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).另外,Spearman相关分析结果表明,血清铁蛋白与CAD的相关系数r值为0.63,P<0.05.结论 CAD患者血清铁蛋白水平升高,它可以作为冠状动脉病变程度参考指标之一,适当的增加血清铁的消耗可以避免冠状动脉的病变.

    作者:陶桃 刊期: 2012年第02期

  • 麝香保心丸治疗冠心病稳定性心绞痛120例临床疗效观察

    目的 探讨在常规西药治疗冠心病稳定性心绞痛基础上加用麝香保心丸的临床疗效和患者依从性.方法 120例冠心病稳定性心绞痛患者在常规方案治疗基础上加用麝香保心丸治疗,3次/d,每次2粒,同期选择冠心病稳定性心绞痛120例患者行常规方案治疗作为对照组,两组疗程为8周.结果 治疗组冠心病症状及心电图改善的总有效率为86.7%和78.3%,均高于对照组(75.0%和71.6%,P<0.05),治疗组在减少硝酸甘油用量,改善心肌缺血方面均优于对照组(P<0.05),治疗组中没有因不良反应停药,全部完成疗程,依从性高.结论 麝香保心丸是治疗冠心病稳定性心绞痛安全、有效、不良反应少的药物,患者服药依从性高,值得临床推广应用.

    作者:郭锋;章朝晖;林爱民;刘林;蹇波;柯桦 刊期: 2012年第02期

  • 227株肠球菌细菌耐药性分析

    目的 了解肠球菌在临床标本中的分布及对常用的抗菌药物的耐药现状,指导临床合理用药.方法 对临床标本中分离出的细菌进行系统检验,采用纸片法对分离鉴定后的肠球菌进行药物敏感性试验.结果 肠球菌可在临床常见的多种标本中检出,粪肠球菌(44.1%)与屎肠球菌(37.9%)常见,其他肠球菌(18%)少见.对常用抗菌药物的耐药性,粪肠球菌和屎肠球菌之间的差异无统计学意义.万古霉素是敏感性高的抗生素.青霉素、氨苄西林和呋喃妥因对粪肠球菌具有较好的抗菌活性.屎肠球菌对除糖肽类抗生素以外的所有临床常用抗菌药物显示高水平耐药.结论 临床医生应关注临床常见病原菌的耐药性研究,动态监测肠球菌的耐药状况对指导临床治疗具有重要意义.

    作者:李怀先;黄素荣 刊期: 2012年第02期

  • 精神科男护士人格特征、应对方式及心理健康状况的相关性研究

    目的 研究成都市精神卫生机构精神科男护士的人格特征、应对方式及其心理健康状况,并探讨三者的相关性.方法 采用艾森克人格问卷(EPQ)、应对方式问卷及症状自评量表(SCL-90)对46名精神科男护士进行评定,并进行相关性分析.结果 精神科男护士人格特征在EPQ问卷评定中显示,内外向维度低于常模具有统计学意义,神经质得分高于常模且具有统计学意义;与常模比较,精神科男护士的抑郁、焦虑及人际关系三项因子得分均高于常模且具有统计学意义;精神科男护士的应对方式中自责及退避高于正常对照,求助低于正常对照,均具有统计学意义.精神科男护士EPQ人格中神经质维度与不成熟的应对方式及SCL-90阳性因子项目存在不同程度的正相关;SCL-90阳性因子项目与不成熟的应对方式呈正相关.结论 精神科男护士人格特征、应对方式及心理健康水平三个方面互呈相关性,在其人格特征的基础上调整应对方式能有效地改善心理健康水平.

    作者:周晓敏;卢莲;周游 刊期: 2012年第02期

  • 经皮自体骨髓注射治疗长骨骨不连术后局灶性骨缺损疗效分析

    目的 分析经皮自体骨髓注射治疗长骨骨不连术后局灶性骨缺损的临床疗效.方法 用骨穿针穿入骨不连骨缺损部位,同时于髂前上棘处行骨穿抽取红骨髓,注入骨不连骨缺损部位,术后局部加压包扎,应用夹板或石膏外固定.常规应用抗生素,预防感染.每半月摄X线片1次,观察治疗情况.每10d 1次,3次为1个疗程.随访观察至患者临床愈合.结果 37例患者通过1个疗程治疗,均得到随访,随访时间为4~12个月,平均随访时间为6个月.愈合时间在2.5 ~6.5个月,平均4.5个月.结论 经皮自体骨髓注射治疗长骨骨不连术后局灶性骨缺损能取得较好的临床疗效,值得临床进一步推广和研究,以进一步完善和提高本法的疗效和安全性.

    作者:贾全忠 刊期: 2012年第02期

  • Rh(D)阴性献血者不规则抗体检测的结果分析

    目的 分析Rh(D)阴性献血者不规则抗体检测的结果,探讨在献血者血液Rh(D)阴性确认试验时,进行不规则抗体检测的必要性.方法 用间接抗人球蛋白法进行Rh(D)阴性确认试验及抗体筛选试验、抗体鉴定试验,盐水法进行Rh表现型的检测.结果 1205份Rh(D)阴性献血员标本中,抗体筛选试验阳性的标本有20份,经过抗体鉴定,其中抗-D 10份,抗-M 6份,非特异性抗体2份,抗-Lea 1份,冷自身抗体1份.结论 Rh(D)阴性献血者抗体筛选阳性率高达1.66%,较以往报道的正常人群抗体筛选阳性率高.在临床供血上,其高检出率对临床用血安全有较为重要的意义,对Rh(D)阴性献血者更应该进行不规则抗体检测.

    作者:李健;周英;吕文彬;陈雪;迭敏;龚希 刊期: 2012年第02期

  • 来氟米特与环磷酰胺治疗难治性肾病综合征的对比性研究

    目的 对比分析来氟米特与环磷酰胺治疗难治性肾病综合征的临床疗效及安全性.方法 选择2008年1月~2009年1月来本院进行治疗的难治性肾病综合征患者112例作为研究对象,随机分为观察组和对照组,每组各56例,对照组采用环磷酰胺加标准激素静脉冲击疗法,观察组给予口服来氟米特加激素疗法.对比分析两组患者治疗后临床疗效及实验室指标.结果 治疗后6个月,观察组总缓解率(83.9%)高于对照组(73.2%),差异无统计学意义(P=0.17);观察组尿蛋白定量、CRE、UA、AST和ALT均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),观察组Alb高于对照组(P<0.05);观察组不良反应发生率(12.5%)低于对照组(28.6%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 来氟米特联合激素治疗难治性肾病综合征的效果优于环磷酰胺,不良反应小,值得在临床上进一步研究和推广.

    作者:金希萍;杨明芝;杨锋 刊期: 2012年第02期

  • 胆胰肠结合部医源性损伤的诊治体会(附7例临床报告)

    目的 探讨胆胰肠结合部医源性损伤的诊断和治疗体会方法.方法 回顾分析2002~2009年我院收治7例胆胰肠结合部医源性损伤病例,其中开腹手术4例,EST术3例.结果 7例患者均痊愈出院,开腹手术4例患者均于术中发现胆胰肠结合部损伤,2例行术中胆管破口修补,3例EST术后所致胆胰肠结合部损伤患者,均于术后出现腹痛,腰背部疼痛及发热后,经CT及B超检查发现,2例保守治疗痊愈,1例经腰背部脓肿切开引流及坏死组织清除后痊愈.结论 胆胰肠结合部医源性损伤在思想上应高度重视,术中及时发现,合理处理是提高治疗效果的关键,术后严密观察,及时CT及B超检查是提高诊断率的关键,个体化的处理是合理的选择.

    作者:李春来;毛颖;黄志刚;王浪 刊期: 2012年第02期

  • 组织化医疗模式治疗重型颅脑损伤的临床效果研究

    目的 探讨研究采用组织化医疗模式治疗重型颅脑损伤(SCCI)的临床效果.方法 整合神经内科、神经外科、神经监护、神经康复及神经护理等医疗资源为一个一级临床科室——脑系科,建立完善的多学科一体化治疗的组织化医疗网络体系.共入选重型颅脑损伤患者68例,根据入院先后随机分为治疗组(采用组织化医疗模式治疗)32例和对照组(采用以往常规模式治疗)36例.观察指标是神经功能缺损评分(NIHSS)、日常生活活动能力评分(ADL)、意识障碍评分(GCS)、格拉斯哥预后评分(GOS)、住院时间、病死率及并发症.结果 治疗组NIHSS(6.87±5.35)、ADL( 90.42±15.35)、GCS(13.92±1.05);对照组NIHSS(19.67±9.78)、ADL(63.33±10.45)、GCS(10.86±1.47).两组比较差异均有统计学意义(P<0.01);临床治愈率提高40.28%,病死率降低20.83%,并发症降低26.31%,致残率降低25.69%,治疗组患者平均住院天数也较对照组明显缩短(P<0.01).结论 组织化医疗模式治疗SCCI能提高治愈率、减少并发症、降低病死率和致残率、减少住院时间,提高患者的生活质量.

    作者:吴志武;李次发;温德树;马莉琴;罗日向;李丽萍 刊期: 2012年第02期

  • 七氟醚复合骶管阻滞在小儿疝囊高位结扎术中的应用

    目的 探讨七氟醚复合骶管阻滞用于小儿疝囊高住结扎术麻醉的有效性和安生性.方法 将40例择期行疝囊高住结扎术的患儿随机分为A组和B组,每组20例.A组采用七氟醚吸入诱导,0.25%罗哌卡因骶管阻滞.B组采用氯胺酮诱导,丙泊酚维持麻醉.观察两组患儿的ECG、NIBP、HR、SpO2、PetCO2,以及麻醉效果、苏醒时间和不良反应.结果 两组患儿麻醉效果均满意,术中生命体征平稳,苏醒时间A组短于B组(P<0.01),不良反应发生率差异无统计学意义.结论 七氟醚复合骶管阻滞用于小儿疝囊高位结扎术麻醉是安全、有效的.

    作者:蔡琳;巩固;刘英海;胡玲 刊期: 2012年第02期

  • 隗睾精原细胞瘤1例的超声表现

    1 临床资料患者,男,35岁.反复便秘半年,下腹痛7h,血压下降入院.查体:面色苍白,下腹压痛,以下腹中部为重,无反跳痛,下腹中部扪及大小约10cm×10cm的包块,不活动,有压痛.B超检查提示:膀胱上方至脐下缘见9.5cm×9.8cm的杂乱回声团,边界清,内可见无回声暗区,未见血流信号,腹腔见2.3cm暗区.

    作者:胡曼玲 刊期: 2012年第02期

  • 42例感染性心内膜炎的外科治疗

    目的 探讨感染性心内膜炎(infective endocarditis,IE)的诊断及外科治疗时机,提高近远期疗效.方法 回顾分析2001年1月~2010年1月手术治疗感染性心内膜炎患者42例,均在体外循环下行毁损瓣膜置换、畸形矫正和赘生物清除术.结果 42例患者术后早期成功39例,死亡3例,近远期效果良好.结论 外科治疗感染性心内膜炎效果良好,能明显降低病死率.而正确把握手术时机、手术方式以及围术期的正确处理是提高感染性心内膜炎治愈率的关键.

    作者:张林;罗昭全;赵雄飞;张伟 刊期: 2012年第02期

  • 小儿药物性血尿45例临床分析

    目的 探讨导致小儿药物性血尿的主要病因,尽早明确诊断与鉴别诊断,及时采取治疗及预防措施.方法 45例均行尿常规离心镜检等检测.结合患儿用药史,临床资料及相关实验室检查,治疗情况进行分析.结果 引起血尿的前3位药物为解热镇痛类23例(51.1%),抗感染类12(26.7%),中草药类5例(11.1%),患者均有离心镜下血尿,肉眼血尿22例(48.7%),肾功不全或急性间质性肾炎临床表现10例,急性肾衰竭1例,肉眼血尿24h消失8例,其余在7d内全部消失;镜下血尿3d内消失25例,3~7d消失12例,其余患者在6个月内消失.门诊随访6个月~1年无复发.结论 小儿药物性血尿若早期发现,及时停药及正确处理并发症,预后多良好.对药物所致肾损害的后果不能忽视,预防是关键.

    作者:张颖;贺建军 刊期: 2012年第02期

  • 盐酸戊乙奎醚在合并COPD患者腹部手术中对肺功能的保护作用的临床研究

    目的 探讨盐酸戊乙奎醚能否改善合并COPD患者腹部手术中肺功能.方法 60例合并COPD行腹部手术患者随机分为两组,治疗组(n=30)和对照组(n=30).治疗组麻醉前10min静脉注射长托宁0.03mg/kg;对照组术前30min肌肉注射东莨菪碱0.006mg/kg.分别记录麻醉前和麻醉30、60、90min及术毕血气指标变化;分别于各时间点采血监测患者血管内皮生长因子(VEGF)和血管性假血友病因子(von willebrand factor,VWF)的变化;观察平均气道压(PeaK).结果 治疗组术中、术毕各时间点动脉血氧分压(PaO2)均高于对照组(P<0.01);而对照组各时间点PaCO 、PeaK明显增高,差异有统计学意义.盐酸戊乙奎醚组患者手术期间VEGF和VWF水平均低于东莨菪碱组.结论 长托宁可以减少合并COPD患者腹部手术时的肺损伤.

    作者:陈春;龚园;杨鹏;冯雪刚;汤和清;侯俊;方为 刊期: 2012年第02期

四川医学杂志

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主管:四川省卫生厅

主办:四川省医学会