目的 通过观察大鼠脊髓穿刺致不同损伤程度后病理生理、运动及电生理改变,寻找对脊髓损伤程度小的方法,为进一步研究局麻药脊髓毒性提供新的途径.方法 健康SD大鼠144只随机分为对照组和实验组,实验组又分为A组(29G)、B组(25G)和C组(21G).实验动物暴露L4-5节段间硬脊膜,直视下分别用21G、25G、29G刺伤L4-5节段脊髓,缝合切口.各组分别在术前进行双后肢运动功能评分,术后各时点记录运动功能评分(BBB评分)、电生理检测及脊髓病理观察.结果 对照组麻醉恢复后能站立行走,脊髓结构正常.实验组29G组行为学评分高,脊髓损伤区域无明显病理改变；21G组运动、脊髓电生理和组织病理的改变明显,2周时明显恢复.结论 应用29G穿刺针对脊髓进行针刺对大鼠脊髓功能影响小,具有穿刺损伤小、重复性好的优点,可为研究局麻药脊髓毒性提供新途径.
作者：谭永红；徐世元；范凤飞 刊期： 2012年第03期
目的 探讨牛蒡子苷对晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导小鼠足细胞转分化的影响.方法 用200 μg/ml AOPP刺激小鼠足细胞24h,同时加入牛蒡子苷(浓度分别为50、100、200、400 μmol/L)进行干预,采用Western blotting检测内质网应激标志性蛋白Grp78、CHOP及平滑肌激动蛋白(α-SMA)表达水平.结果 牛蒡子苷干预后可抑制小鼠足细胞Grp78、CHOP、α-SMA蛋白表达水平,且在一定范围内呈剂量依赖性.结论 AOPP可通过引起小鼠足细胞内质网应激(ERS)从而导致上皮-间充质转分化(EMT),而牛蒡子苷则可通过减轻ERS从而逆转EMT,为治疗肾脏纤维化提供新的研究方向.
作者：章俊；郭婷婷；杨蕾；杜庆生；华洁；刘蓉芝；汤珣 刊期： 2012年第03期
目的 构建含有全长肠癌转移相关基因(MACC1)的表达载体,建立稳定表达MACC1的胃癌BGC-823/pBaBb-puro-MACC1细胞系,通过基因芯片技术筛选出转染MACC1后胃癌细胞株的差异表达基因,探讨MACC1基因与差异基因之间可能的调节机制或信号通路.方法 以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获全长MACC1 cDNA序列,将目的基因序列克隆入带有绿色荧光蛋白报告基因的pBaBb-puro表达载体,建立pBaBb-puro-MACC1表达载体.经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293FT细胞观察报告基因表达情况判断是否构建成功.构建成功后的pBaBb-puro-MACC1表达载体转染人胃癌BGC-823细胞,建立稳定表达MACC1的BGC-823/pBaBb-puro-MACC1细胞.qRT-PCR及western blot检测转染细胞的MACC1基因表达,应用基因芯片技术筛选出转染MACC1基因后胃癌细胞株的差异表达基因并对其探讨研究.结果 成功扩增全长MACC1cDNA,经测序鉴定序列完全正确；转染293FT细胞可见清晰的绿色荧光表达.BGC-823/pBaBb-puro-MACC1细胞能够稳定表达MACC1.基因芯片筛选出差异基因发现上调基因33个,下调基因24个,这些差异表达基因的功能涉及多个方面.结论成功构建了含有全长MACC1cDNA的表达载体系统,建立了稳定表达MACC1的BGC-823/pBaBb-puro-MACC1细胞,通过对差异基因的分析发现MACC1可能引起胃癌细胞株BGC-823基因表达谱中一些非常重要的分子的改变,为MACC1基因进一步研究奠定了良好基础.
作者：王妮娜；谢剑明；郑大勇；左强；廖旺军 刊期： 2012年第03期
目的 观察乙醛脱氢酶2(ALDH2)在糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注凋亡发生中的作用.方法 大鼠分为正常组、糖尿病组和ALDH2激动剂乙醇+糖尿病组.4周后行离体心肌缺血/再灌注(I/R).测定复灌期间冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量.检测心肌组织细胞ALDH2、caspase-3的活性；RT-PCR测定左心室前壁心尖组织Bcl-2、Bax mRNA的表达.结果 与正常大鼠I/R相比,糖尿病大鼠复灌期冠脉流出液中LDH释放增加,心肌组织caspase-3活性增加,ALDH2活性降低,Bcl-2/Bax mRNA比值降低；与糖尿病大鼠心肌I/R相比,ALDH2激动剂乙醇使得心肌复灌期间冠脉流出液中LDH释放减少,心肌caspase,-3活性降低,ALDH2活性增高,Bcl-2/Bax mRNA比值增高.结论 增强ALDH2在糖尿病大鼠心肌中的表达对缺血/再灌注损伤有明显的保护作用；其机制可能与抑制细胞凋亡的发生有关.
作者：王洪巨；康品方；叶红伟；于影；王晓梅；高琴 刊期： 2012年第03期
目的 构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因.方法 扩增包含hsa-miR-335前体序列在内的基因片段,并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体；扩增包含RASA1 3’UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-RASA1-Mut;检测萤火虫荧光素值(F)和海肾荧光素值(R),以R/F表示相对荧光素酶活性.流式细胞仪筛选建立稳定表达miR-335的细胞株,利用荧光定量PCR检测miR-335及其靶基因RASA1的表达,Western Blot检测RASA1蛋白水平的表达.结果 质粒双酶切以及测序鉴定PLVTHM-miR335、psiCHECK-2-RASA1、psiCHECK-2-RASA1-Mut重组质粒构建成功.荧光定量PCR显示结直肠癌细胞中miR-335与RASA1表达趋势成负相关.双荧光素酶报告基因分析证实hsa-miR-335能够作用于RASA1的31UTR.稳定过表达miR-335的细胞中,miR-335的表达明显高于对照组和未处理组,蛋白质水平有所下降.结论 成功构建了PLVTHM-miR-335慢病毒重组质粒,构建过表达miR-335的细胞株SW620,初步证实RASA1是miR-335的靶基因.
作者：杨慧；张超；陆滟霞；吴小金；袁理；周畅；周春平；刘国炳；李学农 刊期： 2012年第03期
目的 探讨背长肌与腹外斜肌间隙入路纤维环穿刺法构建兔腰椎间盘退变模型的可行性.方法 新西兰大白兔6只,从兔子背长肌与腹外斜肌间隙入路暴露椎体和椎间盘,L2/3为对照组,不暴露也不穿刺椎间盘；L3/4为假手术组,剪断L4右侧横突后暴露椎间盘,但不进行穿刺；L4/5、L5/6为穿刺组,剪断L5、L6右侧横突后暴露椎间盘并用18G针穿刺构建模型.分别在术前及术后4周对实验动物进行X线和磁共振(MRI)检查,4周后处死实验动物,取材后行组织学及免疫组织化学检查.结果 术后4周,X线检查显示模型组L4/5、L5/6椎间盘高度明显降低、骨赘形成、终板硬化,MRI T2加权像亦见椎间盘高度下降,其椎间盘髓核信号明显减弱；大体观察见该组椎间盘髓核组织较少并组织松脆,呈淡黄色改变；组织学观察髓核脊索细胞数量减少,免疫组织化学观察到髓核Ⅱ型胶原表达比对照组和假手术组明显减少.结论 本研究为椎间盘退变的研究提供了一种较为理想的、相对可靠的动物模型.
作者：崔运能；周荣平；麦奇光；陆明；徐颂；王亮；李绍林；金大地 刊期： 2012年第03期
目的 探讨蟾酥注射液(CHS)对人类白细胞多药耐药细胞系HL60/阿霉素细胞的逆转作用机制.方法 MTT法测定CHS预作用后HL60/阿霉素细胞对阿霉素的敏感性；流式细胞术考察CHS对HL60/阿霉素细胞周期的影响；免疫组化考察CHS对HL60/阿霉素细胞NF-κB、MRP、GST-π、iNOS蛋白表达的调节作用.结果 CHS可将阿霉素对HL60/阿霉素细胞的IC50值由34.1971 μmol/L降至17.4393 μmol/L,逆转倍数为1.9609倍；FCM显示CHS作用后HL60/阿霉素阻滞于G0/G1期、G2/M期,降低进入S期比例,并出现凋亡峰；免疫组化结果显示,CHS能下调HL60/阿霉素细胞中MRP、GST-π表达,上调NF-κ3、iNOS的表达.结论 蟾蜍注射液逆转HL60/阿霉素细胞的多药耐药性可能是通过下调MRP、GST-π的表达,上调NF-κB、iNOS的表达,促进HL60/阿霉素细胞凋亡,从而增加HL60/阿霉素细胞对药物的敏感性.
作者：熊新；周远大 刊期： 2012年第03期
目的 明确萎缩性骨不连组织水平表达上调的hsa-miR-654-5p在人骨髓基质干细胞(hBMSCs)中对其预测靶基因骨形态发生蛋白2(BMP2)mRNA和蛋白的抑制作用,探索其在成骨分化过程中的生物学调控功能.方法 分离培养hBMSCs,将第4代hBMSCs培养16 h后分别按相应体系转染细胞,再培养48 h后取六孔板内细胞提取总RNA和总蛋白,进行实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting,取24孔板内细胞进行双荧光素酶报告基因检测.结果 当hBMSCs中hsa-miR-654-5p过表达时,BMP2的mRNA和蛋白表达水平均发生明显下调；双荧光素酶报告基因检测提示,BMP2的预测靶位点直接受hsa-miR-654-5p的抑制调控,该靶位点被突变后hsa-miR-654-5p对BMP2的抑制作用消失.结论 hsa-miR-654-5p可通过作用于BMP2的特定靶位点而直接抑制BMP2的mRNA和蛋白表达.hsa-miR-654-5p的变化在成骨分化调控过程中具有重要作用.
作者：魏均强；陈华；郑晓飞；张伯勋；王岩；唐佩福；余飞；宋青；黎檀实 刊期： 2012年第03期
目的 构建携带Rheb和Rheb'D60K突变基因的重组慢病毒载体,并鉴定其在MCF-7细胞中的表达效果,观察其对肝癌细胞凋亡的影响.方法 PCR法扩增Rheb和Rheb'D60K突变基因,构建重组质粒LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K,脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物共转染HEK-293 FT细胞,包装产生慢病毒颗粒.将病毒感染MCF-7细胞后Western blotting检测Rheb及PS6蛋白的表达；将病毒感染SK-HEP-1细胞饥饿处理后观察其凋亡情况.结果 PCR及测序表明成功构建了LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K重组慢病毒载体.Western blotting结果显示慢病毒LV31-Rheb-WT感染的MCF-7细胞内Rheb下游的PS6蛋白表达多于慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的MCF-7细胞.显微镜下慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的SK-HEP-1细胞饥饿后凋亡数目多于慢病毒LV31-Rheb-WT感染的SK-HEP-1细胞.结论 本研究成功构建了Rheb和Rheb'D60K突变基因重组慢病毒载体,初步观察到该突变基因重组慢病毒载体可诱导肝癌细胞凋亡,为进一步研究Rheb基因在肝癌发生发展中的作用,进而开展肝癌的临床靶向治疗研究奠定了基础.
作者：陈可和；梁博；邹镇洪；韩泽龙；潘金飞；刘安玲 刊期： 2012年第03期
目的 建立大鼠植骨气囊模型,观察在不同浓度重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)缓释体干预下气囊内组织的破骨细胞分化因子(RANKL)、骨破坏素(OPG)表达情况.方法 在大鼠背部注入空气形成气囊,取同源大鼠的颅骨植入气囊内.将已制成的植骨气囊模型大鼠分成5组:空白组、铬颗粒组、50 μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组、100 μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组和200 μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组.各组分别用药处理,2周后取出囊腔内组织进行RANKL、OPG的Wester-blot、Rt-PCR检测,并对囊腔内骨片行TRAP染色,用计算机图像分析技术测定骨片破骨细胞染色面积,进行药效评价.结果 RANKL、OPG在各组囊腔组织中均有表达.骨片破骨细胞染色面积、RANKL、OPG的Wester-blot和RT-PCR结果及RANKL/OPG值,在铬颗粒组中明显高于其他4组(P＜0.05)；在3个rhBMP-2缓释体干预组内,随着rhBMP-2缓释体浓度增高呈递减趋势,组间差异均有统计学意义(P＜0.05)；在空白组和200 μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组间未见明显差异(P＞0.05).结论 大鼠植骨气囊模型成功的模拟了人工关节无菌性松动的生物学和组织学特征.铬颗粒可以引起RANKL/OPG值升高,促进溶骨；rhBMP-2缓释体通过降低RANKL/OPG值,从而促进成骨、抑制骨吸收效益.
作者：李干；李奇；林荔军；段鑫；张西旗 刊期： 2012年第03期
目的 制作家兔长时间腹腔内高压所致的腹腔筋膜室综合征(ACS)模型,研究较长时间的腹腔内高压征(IAH)对家兔循环功能、肝肾功能、抗氧化能力及血液电解质水平的影响,并观察生长抑素是否对ACS有防治作用.方法 将12只新西兰兔平均分为2组,分别为生理盐水对照组、生长抑素干预组.通过模拟兔腹部失血和注入氮气建立动物IAH/ACS模型.并在IAH15 mmHg后1～6h观察兔各项指标变化,包括动脉收缩压、心率、中心静脉压(CVP)、血液酸碱及电解质指标,同时测定代表肝肾功能的谷丙转氨酶和尿素氮(BUN),以及反映组织过氧化反应的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的变化情况.结果 长时间的IAH可使机体血压下降、CVP上升,且有严重酸中毒、高血钾和低血钙等不良影响(P均＜0.05).生长抑素处理组与生理盐水组的结果没有明显差异.结论 较长时间的IAH可使家兔心血管功能发生损害,并可能与组织缺血缺氧导致酸中毒、电解质紊乱和组织过氧化损伤有关.生长抑素的干预对ACS的发生发展没有明显的防治作用.
作者：陈煜；薛翔；王丽；金春华；邹衍泰 刊期： 2012年第03期
目的 观察阿托伐他汀对老年大鼠心肌缺血再灌注过程中心脏的影响,并进一步关注此过程中肝、肾功能的变化.方法 10月龄Wistar大鼠饲养至20月龄,阿托伐他汀灌胃至24月龄,分为大剂量他汀组、小剂量他汀组、老年对照组,并设立青年对照组.采用结扎冠状动脉方法建立心肌缺血再灌注模型,纪录缺血再灌注过程中大鼠死亡率、血流动力学变化、心肌梗塞面积变化,及肝肾功能指标.结果 与老年对照组相比,青年对照组及大剂量他汀组在缺血再灌注过程中死亡率明显降低(P＜0.05)、血流动力学紊乱减少、心梗面积减小(P＜0.05)；青年对照组及大剂量他汀组在缺血再灌注后,肝肾功能无明显恶化,小剂量他汀组肝脏功能显著恶化(P＜0.05),老年对照组肝肾功能均出现显著恶化(P＜0.05).结论 阿托伐他汀对老年大鼠心肌缺血再灌注过程中的心、肝、肾多器官产生保护作用.
作者：张今尧；王浩；叶平 刊期： 2012年第03期
目的 观察脑摄取动态平衡时不同麻醉深度丙泊酚对犬脑不同区域γ-氨基丁酸(GABA)的影响.方法 12只12～18月健康杂种犬,随机分为浅麻醉组和深麻醉组,每组6只.浅麻醉组:静脉注入丙泊酚5.5 mg/kg(时间15s),续以55 mg/kg/h恒速静脉输注.深麻醉组:静脉注入丙泊酚7.0 mg/kg(时间15 s),续以70 mg/kg/h恒速静脉输注.2组丙泊酚恒速输注50 min时取颈内动、静脉血各2 ml,同时断头处死,解剖犬脑取背侧丘脑、上丘脑、后丘脑、下丘脑、底丘脑、额叶、顶叶、颞叶、枕叶、海马、扣带回、小脑、中脑、脑桥、延髓、颈髓组织,采用高效液相色谱法(HPLC)检测颈内动、静脉血浆丙泊酚浓度和各区域脑组织GABA含量.结果 浅麻醉组:颈内动、静脉血浆丙泊酚浓度分别为3.00±0.31和3.10±0.51μg/ml,差异无统计学意义(P＞0.05)；深麻醉组:颈内动、静脉血浆丙泊酚浓度分别为6.41±0.05和6.40±0.11 μg/ml,差异无统计学意义(P＞0.05).深麻醉组各脑区GABA浓度均明显高于浅麻醉组(P＜0.05)；在两种麻醉深度下背侧丘脑和下丘脑GABA变化率分别为(83.83±2.23)％,(85.83±1.72)％,明显高于其它脑区(P＜0.05).结论 丙泊酚恒速静脉输注50 min时,两组犬脑颈内动、静脉血药浓度均达到平衡；深麻醉组各脑区GABA浓度均明显高于浅麻醉组,背侧丘脑和下丘脑GABA变化率高于其他脑组织,提示丙泊酚麻醉深度与GABA含量相关,背侧丘脑和下丘脑GABA的变化在丙泊酚麻醉中发挥重要的作用.
作者：汪燕；林春水；古妙宁；郭高锋；周枝凤；陈莺 刊期： 2012年第03期
目的 研究不同胰腺癌细胞株对神经生长因子(NGF)刺激的反应性,以及各细胞株中Trk-A的表达情况,探讨NGF对胰腺癌细胞株作用的分子机制.方法 选取MIA-PaCa-2、PANC-1、SW-1990、AsPC-1、BxPC-3等5种不同转移性能及分化程度的胰腺癌细胞株,给予外源性NGF刺激,运用MTT方法观察各种细胞株的增殖情况；通过Matrigel实验观察NGF对细胞侵袭性的影响.运用PCR及Western blotting检测各种细胞株中Trk-A的表达情况,并观察NGF刺激作用与细胞TrK-A表达之间的关系.结果 用含有不同浓度NGF的培养液(0、4、20、100、500 ng/ml)对5种细胞进行培养及MTT检测,发现NGF浓度为100 ng/ml对细胞的刺激作用强.选用含100 ng/ml NGF的培养液对各组胰腺癌细胞进行培养及MTT检测,结果显示NGF对PANC-1细胞的刺激作用大,增殖快,对AsPC-1的刺激作用小.Matrigel实验显示NGF可明显增加PANC-1及MIA-PaCa-2细胞的侵袭能力,对AsPC-1细胞影响小.TrK-A抑制剂CEP701可抑制NGF对细胞侵袭的刺激功能.对细胞中TrK-A基因表达及蛋白水平检测显示,PANC-1细胞Trk-A水平高,AsPC-1细胞水平低.细胞内TrK-A表达水平与NGF对细胞增殖及侵袭的影响成正相关.结论 外源性NGF促胰腺癌细胞增殖与侵袭作用和细胞中Trk-A基因及蛋白表达水平一致,说明NGF对胰腺癌的作用机制可能是通过与Trk-A蛋白结合而促进胰腺癌细胞的增殖及转移.
作者：刁冬梅；宋永春；侯妮；徐海飞；汪建光；党诚学 刊期： 2012年第03期
目的 观察宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响.方法 采用荧光示踪实验检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能,及药物(油酸酰胺,维甲酸)对其功能的影响；采用标准细胞集落形成分析法检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞生长抑制作用的影响；采用Hoechst33258荧光染色检测缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞诱导凋亡作用的影响.结果 荧光示踪实验结果显示油酸酰胺可显著降低缝隙连接通讯功能,而维甲酸则可增强该功能；标准细胞集落形成实验结果表明,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞生长的抑制作用,而维甲酸则增强依托泊苷的细胞生长抑制作用；Hoechst 33258荧光染色结果显示,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞的诱导凋亡作用,而维甲酸则增强依托泊苷的诱导凋亡作用.结论 宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能降低,依托泊苷的抗肿瘤作用下降；而当通讯功能增强时,其抗肿瘤作用则增加.
作者：童旭辉；董淑英；蒋国君；范高福 刊期： 2012年第03期
目的 探讨凋亡抑制因子-1-磷酸-神经鞘氨醇(S1P)对环磷酰胺(CTX)联合顺铂(DDP)诱导的S180荷瘤小鼠卵巢功能损害的干预作用及其对肿瘤化疗效果的影响.方法 将52只C57BL/6雌性小鼠随机选取10只作为空白对照组,余皮下接种S180肿瘤细胞后随机分为3组,即荷瘤对照组、单纯化疗组、S1P+化疗组,每组14只.用药期间动态观察动情周期及肿瘤体积变化,于用药前、用药第11天左右的动情间期分批处死小鼠,分别称取体质量、卵巢质量及肿瘤质量；采用酶联免疫吸附(ELISA)法动态检测用药前后各组小鼠血清的卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平的变化；卵巢组织连续病理切片,计算原始卵泡、生长卵泡数量的变化.每组剩余小鼠与成年雄性小鼠合笼,观察生育情况.结果(1)血清基础性激素水平:给药前,各组血清FSH、LH、E2水平无显著性差异(P＞0.05)；用药第11天左右,单纯化疗组血清FSH水平明显高于其余3组、E2水平明显低于其余3组,其差异均有显著性意义(P＜0.01),但血清LH水平各组间无显著性差异(P＞0.05);S1P+化疗组血清FSH、LH、E2水平与两对照组均无显著性差异(P＞0.05)；(2)卵泡数量及卵巢质量:用药第11天左右,单纯化疗组原始卵泡数和卵巢质量明显低于其余3组(P＜0.01),其生长卵泡数亦明显低于空白对照组、荷瘤对照组(P＜0.01),但与S1P+化疗组的差别无显著性意义(P＞0.05).S1P+化疗组原始卵泡数、生长卵泡数及卵巢质量与空白对照组、荷瘤对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；(3)肿瘤质量和抑瘤率:给药第11天左右,与荷瘤对照组比较,单纯化疗组、S1P+化疗组的皮下肿瘤体积增长速度均受到明显抑制,两组的肿瘤质量与荷瘤对照组相比均有显著性差异(P＜0.01),且两组的抑瘤率均高于60％.结论 S1P可以在不影响肿瘤化疗效果的同时,预防化疗对小鼠卵巢功能的损害.
作者：彭萍；吴璇；关婷；陈为；张艳玲；张伟；杨传红；叶长烂；王善林 刊期： 2012年第03期
目的 构建p38丝裂原激活蛋白激酶基因(MAPK)重组慢病毒载体并建立表达外源性p38基因的人前列腺癌稳定细胞株.方法 采用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接等方法,将EGFP/p38融合基因插入慢病毒载体pTYF-EF1α-IRES-EGFP中,构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38,经酶切鉴定后,利用慢病毒三质粒系统,通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞,收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株,经有限稀释法筛选重组EGFP/p38稳定细胞株,用Western blotting检测细胞总p38的表达,用计数法绘制细胞的生长曲线.结果 经酶切鉴定,成功构建EGFP/p38重组慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为4.7× 106 TU/ml,利用此病毒悬液感染DU145细胞,成功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株,Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白,这种过表达p38的细胞株的生长速度明显低于对照组.结论 成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定细胞株EGFP/p38-DU145,细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖.
作者：荆玉明；罗杰；张艳玲；陈三三；万沛；颜仁和；王宏昌；陈白虹；谭万龙；李红卫 刊期： 2012年第03期
目的 提取牛鼻HA软骨链蛋白(HA-CLP),确定其对化学致癌小鼠模型肿瘤边界的指示情况,为肺肿瘤影像学感兴趣区(ROI)边界的勾画提供实验依据.方法 建立化学致癌小鼠肺肿瘤模型,用亲和层析法从牛鼻软骨分离纯化HA-CLP,后以125I标记HA-CLP行放射性自显影显像研究,并对肺肿瘤行免疫组织化学分析及蛋白免疫印迹分析.结果 实验收获HA-CLP(241.8±63.4)mg(n=5),抽提蛋白率为2.42％；肺肿瘤放射性自显影在2h显像清晰；免疫组织化学在2h能清晰区分肿瘤边界,其HA-CLP免疫信号强；肿瘤HA-CLP蛋白免疫印迹均在2h条带显示清晰.结论 自提物HA-CLP具HABP家族免疫原性,通过应用自提物HA-CLP放射自显影实验以及组织免疫组织化学提示HA-CLP对肺肿瘤边界有良好的指示作用.
作者：梁智欣；强永刚；廖永华 刊期： 2012年第03期
目的 观察经尾静脉输注的骨髓间充质干细胞(MSCs)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠的早期治疗作用.方法 采用密度梯度单个核细胞分离培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,传至第4代时观察细胞形态、流式细胞仪检测细胞表面标志,定向诱导检测分化能力后备用.36只小鼠随机分为对照组,PBS治疗组,MSC治疗组.对照组气管内滴注生理盐水50 μl,PBS和MSC治疗组气管内滴注LPS制备急性肺损伤模型.造模后lh后经尾静脉输注MSC5× 106(MSCs治疗组)或PBS 100 μl(PBS治疗组或对照组).24h后处死小鼠,留取标本检测肺组织病理形态学、肺组织湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞数、蛋白含量、细胞因子水平和肺组织中的MPO表达量.结果 与对照组比较,PBS治疗组肺组织病理损伤严重,BALF中中性粒细胞数、蛋白含量、TNF-α、IL-6和IL-10水平、肺组织中的MPO含量及肺组织湿干重比均显著升高.与PBS治疗组比较,MSCs治疗组肺组织病理损伤程度减轻,BALF中中性粒细胞数、蛋白含量、TNF-α、IL-6水平、肺组织中的MPO含量及肺组织湿干重比均显著降低,但仍高于对照组水平,IL-10水平显著高于PBS治疗组和对照组.结论MSCs移植在LPS诱导的急性肺损伤早期阶段可有效改善肺组织病理损伤,减轻肺部炎症反应,降低肺水肿程度,这种治疗作用不依赖于MSCs移植后在肺内的定植数量.
作者：邰文琳；董昭兴；张丹丹；王殿华 刊期： 2012年第03期
目的 评价开窗术后负压引流治疗大型牙源性颌骨囊肿疗效.方法 2008～2011年,针对我科就诊的大型的牙源性颌骨囊肿24例,采用开窗术后负压引流对其进行治疗,观察术后1、6个月囊肿的变化情况.结果 术后随访1～3年,所有患者囊腔基本消失,无1例复发,病变区域骨质生长修复良好,临床症状消除.结论 开窗术后负压引流可以显著缩小甚至消除颌骨囊肿,改善患者面部膨隆畸形,是治疗大型牙源性颌骨囊肿切实可行的方法,值得临床推广应用.
作者：殷学民；任晓旭；吕晓智；张磊涛；张君伟 刊期： 2012年第03期
目的 通过监测未抗病毒治疗的处于免疫清除期的慢性乙型肝炎患者的HBV DNA载量,评价其HBVDNA短期自发波动情况及影响其波动的相关因素.方法 入选123例ALT＞2×ULN的未抗病毒治疗的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者,收集首次就诊的HBV DNA定量(罗氏COBAS)、HBsAg定量、ALT、AST结果,第二次就诊(间隔4周以内)的HBV DNA定量结果；对于首次就诊4周内行肝脏穿刺的受试者评价其肝组织学结果(Knodell坏死炎症评分和Ishak组织纤维化评分).结果 93例(75.6％)受试者HBV DNA波动≤0.5 Log IU/ml,30例(24.4％)受试者HBV DNA波动＞0.5 Log IU/ml.应用二元Logistic多因素回归分析提示,HBV DNA的波动程度与Knodell坏死炎症评分及HBV DNA载量相关.Knodell坏死炎症评分≥10的患者其发生HBV DNA显著波动的概率显著高于Knodell坏死炎症评分＜10的患者(50.0％vs 18.3％,P=0.042)；HBV DNA载量＜7 Log IU/ml的患者,其发生HBV DNA显著波动的概率显著高于HBV DNA载量≥7 Log IU/ml的患者(42.9％vs20.6％,P=0.030).结论 慢性乙型肝炎患者在免疫清除期,其HBV DNA在短期内存在波动,其中约25％的受试者的HBV DNA波动在0.5 LogIU/ml以上;HBV DNA波动的程度与肝脏炎症程度以及HBV DNA载量相关.
作者：樊蓉；尹军花；杨淑玲；李小溪；余高扬；孙剑；侯金林 刊期： 2012年第03期
目的 分析Ⅲ期不能手术非小细胞肺癌同步放化疗加巩固化疗与序贯放化疗的近、远期疗效及毒副反应.方法 回顾分析2007年2月～2010年6月收治的Ⅲ期不能手术的非小细胞肺癌患者93例,序贯组50例,同步加巩固组43例.序贯组:先行2～6周期(中位2周期)化疗后开始放疗,放疗后再行0～4周期(中位2周期)化疗.同步组:放疗同步2周期化疗(每隔3周),放疗后行2～4周期(中位2周期)同方案巩固化疗,均为第3代TP/NP/GP方案.放疗采用二维前后对穿野照射DT36～40 Gy/18～20f后三维适形放疗推量至DT56～70 Gy/28～35f(中位DT64Gy)或三维适形放疗DT50～74 Gy/25～37f(中位DT62 Gy).结果 同步加巩固与序贯组客观有效率分别为76.7％、54.0％(P＜0.05)；中位无进展时间、中位生存时间分别为16.0个月、18.0个月及10.0个月、12.5个月；1、2、3年生存率分别为83.7％、48.8％、20.9％及52.0％、20.0％、2.0％(P＜0.05).同步加巩固组远地转移率明显低于序贯组(P＜0.05),局部复发率两组无统计学差异.毒副反应主要为放射性肺炎、放射性食管炎、消化道反应及血液毒性,其中Ⅲ～Ⅳ级消化道反应及血液毒性同步加巩固组高于序贯组,有统计学差异.结论 对于Ⅲ期非手术NSCLC同步放化疗加巩固化疗与序贯放化疗相比,可以提高客观有效率、延长无进展生存及总生存时间、降低远地转移率,虽然消化道及血液学毒性增加,但患者可以耐受.
作者：孙文泽；宋丽萍；张莹冰；艾婷；卢金利；任娟；高莹 刊期： 2012年第03期
目的 应用血管回声跟踪(ET)技术评价血压对血管内皮功能的影响.方法 选择高血压组(HP)30例、正常高值血压组(HN)30例和正常血压对照组(NC)30例,常规二维超声测量颈动脉内膜中层厚度(IMT)和应用ET技术检测颈动脉弹性(Eρ、β、AC、AI、PWVβ),并进行统计学分析.结果 随着血压的升高,IMT、Eρ、β、AI、PWVβ升高而AC值降低,排除混杂因素之前,各硬化参数在HN和NC组、HP和NC组、HP和HN组间的差异均有统计学意义,排除混杂因素之后,HN和NC组间仅PWVβ有统计学意义,HP和NC组、HP和HN间各参数比较仍有显著性差异,其中收缩压对IMT、Eρ、AC、AI、PWVβ有显著影响,舒张压对AI有显著影响,脉压差对Eρ、β显著影响.结论 正常高值血压对血管并没有明显影响,高血压早期血压本身才是血管内皮功能损伤的独立危险因素；在动脉硬化早期,收缩压对血管内皮功能影响明显,其次为脉压差和舒张压.
作者：覃月秋；陈爱华；唐晓明 刊期： 2012年第03期
目的 应用彩超观察正常小儿肠系膜淋巴结.方法 随机选择14岁以下儿童730例(男410例,女298例)近期无患病的儿童,使用HDI 5000彩色多普勒超声诊断仪探察小儿腹部淋巴结.结果 发现男性儿童腹部淋巴结检出率多于女性,健康儿童阶段腹腔内淋巴结的年龄分布多出现在1～4岁,并随着年龄的增长淋巴结大小逐渐减小.结论 彩超对儿童腹部淋巴结的评价有重要的价值.
作者：王文刚；田晖；闫记英；李涛；张彤迪；赵雅培；张丽艳；邢恒国 刊期： 2012年第03期
目的 探讨NOB1在结直肠癌中的表达及其意义.方法 用免疫组织化学SP法对60例结直肠癌和癌旁正常组织(距癌组织大于3.0cm)中NOB1的表达进行检测；并分析其与结直肠癌临床病理因素的关系.结果 NOB1在结直肠癌组织中表达阳性的有32例(53.3％),NOB1在癌旁正常组织中表达阳性有10例(16.7％),差异有统计学意义(P＜0.05).在结直肠癌组织中NOB1的表达与患者性别、年龄、肿瘤组织的分级和淋巴结转移均无关(P＞0.05).结论 NOB1在结直肠癌中表达升高,可能在结直肠癌的发生发展过程中起重要作用.NOB1能否成为结直肠癌治疗的新靶点,有待进一步研究.
作者：吴东平；贺孝文 刊期： 2012年第03期
目的 探讨MN/CAⅨ在肾细胞癌组织和血液中的表达情况和诊断价值.方法 采用RT-PCR技术检测62例肾细胞癌患者肿瘤组织和外周血液中MN/CA IX mRNA的表达,以32例正常肾组织和非肾癌患者外周血作为对照.采用免疫组化技术检测36例肾透明细胞癌,17例其它肾肿瘤,16例正常肾组织标本.结果 RT-PCR结果显示62例肾细胞癌患者MN/CAⅨmRNA阳性率在癌组织中为82.3％(51/62),在外周血中为54.8％(34/62),显著高于对照组(P＜0.05),在肾透明细胞癌患者癌组织和外周血中MN/CAⅨmRNA阳性率分别为98％(49/50)和66％(33/50),显著高于其它类型肾癌结果(P＜0.05).免疫组化结果显示MN/CAⅨ在肾透明细胞癌中表达阳性率为97.2％(35/36),明显高于其它类型肾肿瘤和正常肾组织(P＜0.05).结论 MN/CAⅨ在肾细胞癌尤其是透明细胞癌中有特异性的高表达,可以用于肾癌的诊断,尤其在预后和个体化治疗判断上有潜在价值.
作者：姜耀东；任非；郑少斌 刊期： 2012年第03期
目的 探讨糖尿病足溃疡的超声造影灌注动态变化.方法 研究16例糖尿病足溃疡的常规及超声造影图像,分析其造影增强的图像特点,并对部分病例进行病理检查.结果 注射SonoVue后,16个病灶超声造影动脉期清晰显示随时间推移呈缓慢增强,平均开始增强时间为(30.02+2.35)s,达峰时间为(37.54-4.13)s.5例呈均匀增强区域,11例呈周边较均匀增强,内部可见片状无增强区域,即液化坏死区.造影提示病灶范围较常规超声范围大.结论 超声造影能有效地对糖尿病足溃疡进行范围评估和治疗随访.
作者：张瑕；刘宏伟；吕雅赐；黄君；钟兴；邵建立 刊期： 2012年第03期
目的 探讨基于1H-NMR的模式识别方法应用于慢性心力衰竭(CHF)血清代谢组学研究的可行性.方法 应用1H-NMR技术对9例CHF患者和6例健康人血清进行检测,对所得数据分别采用主成分分析法(PCA)和正交信号校正偏小二乘法(OPLS)进行模式识别分析,确定CHF患者与健康人血清差异代谢物,比较两种模式识别方法判别能力.结果 CHF患者与健康人血清1H-NMR图谱有明显差异.其中PCA模式识别法未能将CHF组和健康对照组区分开,而用OPLS模式识别方法两组可明显区分.结论 1H-NMR技术是研究CHF代谢组学的有效技术手段,CHF患者血清代谢组与健康人存在明显差异.OPLS模式识别法明显优于PCA法,能够去除非实验因素的影响,提高分类效果.
作者：杜智勇；沈安娜；苏亮；梁健球；许顶立 刊期： 2012年第03期
目的 对未经药物治疗的首次发病精神分裂症阳性型患者双侧额叶白质、海马头和扣带回前部的多体素氢质子波谱(1H-MRS)和扩散张量成像(DTI)研究.方法 应用1H-MRS和DTI成像技术,检测20例首发精神分裂症阳性型患者双侧额叶白质、海马头和扣带回前部的N-乙酰天冬氨酸复合物(NAA)、胆碱复合物(Cho)和肌酸-磷酸肌酸复合物(Cr)含量,对NAA/Cr、Cho/Cr、NAA/Cho比值进行计算,同时,检测双侧额叶白质,海马头和扣带束前部的部分各向异性(FA值).结果(1)首发精神分裂症阳性型患者,左侧额叶白质Cho/Cr( 1.18±0.21)低于右侧(1.44±0.34),差异有统计学意义(P.＜0.05)；(2)左侧海马头NAA/Cr(1.34±0.45)和Cho/Cr(1.41±0.39)低于右侧(1.75±0.15,1.76±0.36),差异有统计学意义(P＜0.05)；(3)双侧扣带回前部各代谢物无统计学差异(P＞0.05)；(4)额叶白质,海马头和扣带束前部的FA值左侧与右侧比较,差异无统计学意义(P＞.05).结论 首发精神分裂症阳性型患者早期即存在海马及额叶白质神经元细胞数目和/或功能显示不对称,左侧低于右侧；扣带回未见侧性差异.
作者：贾艳滨；王颖；凌雪英；钟舒明；黄力 刊期： 2012年第03期
目的 探讨异基因造血干细胞移植术治疗阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)合并地中海贫血的临床疗效.方法 给1例23岁女性诊断PNH合并α-地中海贫血的患者行非亲缘外周血造血干细胞移植术.预处理方案采用环磷酰胺、白消安、氟达拉滨、塞替派、抗人T-淋巴细胞兔免疫球蛋白.预防移植物抗宿主病采用环孢素A、骁悉、甲氨蝶呤.输注单个核细胞数8× 108/kg,CD34+细胞数1.45× 106/kg.结果 中性粒细胞绝对数＞0.5×109/L的天数为移植后25 d(+25 d),血小板＞20×109/L的天数移植后21 d(+21 d),+24 d采用短串重复序列聚合酶链反应查植人证据:供者独立植入.结论 非亲缘外周血干细胞移植可以有效治疗PNH合并地中海贫血.
作者：李春富；鲁灵龙；刘璇；李娜；吴学东 刊期： 2012年第03期
我们收治1例严重电击伤并广泛肌肉坏死并于伤后6d死亡的患者,其住院期间心肌酶谱明显增高,血钾及其它电解质基本正常,肾功能亦无特别改变,血细菌培养阴性.分析其死亡原因,基本排除肾衰和高钾血症,可能与坏死分解物吸收相关.
作者：李松泽；荣新洲；苏元明 刊期： 2012年第03期
目的 分析Gitelman综合征的临床特点和实验室特点,进一步提高诊疗水平.方法 对解放军总医院近5年来17例(男/女:11/6)患者进行回顾性研究,对其临床症状、实验室、影像学检查结果及诊治情况进行分析.结果 17例患者中15例均有不同程度的下肢乏力,其中软瘫8例；实验室检查表现为低血钾(17/17),低血镁(17/17)、低尿钙(17/17)；血肾素活性(17/17)、血管紧张素Ⅱ(14/17)及醛固酮(7/17)明显升高；单纯补钾或联合消炎痛、安体舒通和门冬氨酸钾镁片等药物治疗后症状缓解,但血钾、血镁未升至正常水平.结论 Gitelman综合征以双下肢乏力为主要临床表现,并伴有低血钾、低血镁等,治疗应以补钾、补镁、醛固酮拮抗剂等多种药物联合应用,预后良好.
作者：曲玲；张婷婷；母义明 刊期： 2012年第03期
膝关节类风湿性关节炎比较常见,但受累关节出现麻疹孪生球菌所致的化脓性感染很少见.我们报道1例由麻疹孪生球菌导致膝关节类风湿性关节炎合并化脓性感染的病例.由于感染症状不典型,容易出现延误诊断.延迟诊断和基础病直接影响了治疗效果,值得我们注意.
作者：唐芳根；袁芬连；刘家开；龙泉 刊期： 2012年第03期
目的 比较改良Schiff染液热配方与3种常见Schiff液配方对肾穿刺活检组织切片糖原染色(periodic Acid Schiff,PAS)染色的影响,以确定自制改良配方的应用效果.方法 笔者经历了5843例肾穿刺组织染色的摸索,改良了Schiff染液的热配方.将该配方与传统热配法、Lyon's欧洲标准冷配法、渡边恒彦冷配法的应用效果进行比较.分别将上述4种配方应用于50例肾穿刺病理常规的PAS染色法和微波快速PAS染色法中,使用IPP图像分析系统进行光密度分析.结果 Schiff染液改良热配方对肾脏组织阳性部位的着色鲜艳程度、清晰程度和重复使用率均优于其他3种配法(P,＜0.05).结论 改良的Schiff染液热配方,比传统热配法、Lyon's欧洲标准冷配法、渡边恒彦冷配法更适合肾穿刺活检组织切片的PAS染色.
作者：周展眉；杨芳；曹维 刊期： 2012年第03期
目的 从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养.方法 通过免疫磁珠法分选出人脐带血中的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞.采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通过细胞形态学、流式细胞术、免疫细胞化学和免疫荧光对细胞进行干性鉴定,探索佳干性维持培养方法.结果 通过免疫磁珠法可以从人脐带血中分选出80％以上的CD133+造血祖细胞.采用优化的无血清培养基培养8周之后,CD133+造血祖细胞可得到有效扩增.而其他的培养基会使CD133+造血祖细胞由半悬浮细胞分化为梭形贴壁细胞,并且细胞状态欠佳.结论 利用免疫磁珠法分选出的CD133+造血祖细胞,采用优化的无血清培养基能够有效扩增该细胞,并可长期有效的维持其干性.
作者：吴小金；陈芳；陆滟霞；杨慧；彭璠莉；袁理；刘国炳；李学农 刊期： 2012年第03期
目的 针对目前虚拟结肠镜导航观察方法中常见的观察视野窄、视区易形变等问题,开发新的导航观察模式.方法 本方法由结肠分段、结肠剖分和导航观察等3部分组成.首先将全结肠分割成连续的小段,再将每小段结肠进行剖分,剖成对称的两部分,后,放置虚拟摄像机于剖面上方进行俯瞰式观察.结果 本方法能实现结肠的正确分段,并具有大的观察视野,可有效观察结肠褶皱处的小病灶.结论 分段导航观察方法是一种宽视野、无形变、易调整的导航观察方法,适用于虚拟大肠镜诊断导航检查系统的开发.
作者：李云；江贵平；张煜 刊期： 2012年第03期
脂肪组织由于自身脂类含量丰富,采用常规扫描电镜生物样品制备法,很难达到预期效果.经过数次摸索,作者在常规制备样品基础上,增加了锇酸后固定,以使脂肪酸和磷脂蛋白得到稳定,即而稳定细胞膜结构；为使组织细胞内有机溶剂充分置换,又延长脱水时间.通过对这些具体操作细节进行改良,取得了较为满意的结果.
作者：崔芳；刘超；杨建民；王丽 刊期： 2012年第03期
目的 筛选和鉴定结直肠癌腹膜种植转移相关基因.方法 收集手术切除3例伴有腹膜种植转移的结直肠腺癌病人原发病灶和正常黏膜的新鲜组织标本,提取总RNA,经逆转录合成cDNA后经体外扩增合成aRNA,Cy3荧光分子标记后和人类全基因组表达谱芯片杂交,采用经验贝叶斯方法(P≤0.05)筛选出差异表达基因,并用RT-PCR实验对部分差异表达基因进行验证.结果 满足(P≤0.05)的基因共有105个.其中和正常组织相比,在肿瘤组织表达上调的基因有42个,表达下调的基因有63个.通过生物信息学分析,在表达上调基因中选择3条(S100P;PRDX1；SLPI)基因进RT-PCR行验证,结果与芯片结果完全相符.结论 基因芯片技术通过筛选结直肠癌腹膜转移过程中发挥关键作用的基因,为寻找结直肠癌腹膜转移的分子标志物提供依据和参考.
作者：刘峰；郭久冰；沈智勇；牟廷玉；智鹏柯；李国新 刊期： 2012年第03期
