学术投稿

PET滤膜用于承载耳蜗基底膜培养的实验研究

刘永泽;周函;麻晓峰;马登滨;高下

关键词:聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)滤膜, 耳蜗器官培养, 毛细胞, 齿间细胞, 免疫荧光, 透射电镜, 扫描电镜
摘要:目的:探讨一种适宜耳蜗组织贴壁培养的方法。方法 PET滤膜预先置入层粘连蛋白、鸟氨酸、胎牛血清按2:2:1比例混合均匀的液体中在4℃预孵过夜,选取出生四天的C57BL/6J小鼠作为研究对象。剥取基底膜以PET滤膜作为承载介质培养在加入含青霉素的培液中,48小时后收取样本,进行免疫荧光(一抗goat anti-otoancorin、mouse anti-beta tubu?linⅢ及对应二抗采用cy3 donkey anti goat,647 donkey anti mouse,染核试剂DAPI,phalloidin)观察不同部位细胞,扫描电镜及制备原位超薄切片透射电镜观察体外培养新生小鼠基底膜内外毛细胞、螺旋缘内细胞、螺旋神经元细胞显微结构的改变。结果耳蜗基底膜在PET膜上贴附生长良好。各种细胞的微小结构和超微结构保持正常状态。结论PET滤膜能作为一种新颖的承载基底膜培养的介质。
中华耳科学杂志相关文献
  • 水杨酸钠可逆性抑制耳蜗螺旋神经节神经元GABAa受体电流

    目的:探讨水杨酸钠对大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)GABAa受体的作用。方法采用全细胞膜片钳记录技术,观察离体培养大鼠SGN的GABAa受体激活电流的特性及水杨酸钠对其作用特点。结果在SGN上可记录到GABAa受体激动剂GABA诱发的内向电流,该电流呈浓度依赖性且可被荷包牡丹碱所阻断;水杨酸钠作用在SGN上未诱出电流,100μM、500μM的GABA与不同浓度的水杨酸钠(500μM、1000μM、5000μM)分别联合作用时,GABA诱发的电流可被不同程度地抑制,且该抑制作用呈可逆性。结论大鼠SGN上可记录到GABAa受体电流,且水杨酸钠以浓度依赖的方式可逆性抑制GABAa受体电流,抑制作用与GABA浓度有关。

    作者:蔡正;姚晨;陈慧英;黄志辉;覃继新;苏纪平 刊期: 2015年第01期

  • 《中华耳科学杂志》投稿须知

    《中华耳科学杂志》是中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科技核心期刊、中国科学引文数据库来源期刊(CSCD)。本刊诚约涉及耳科学领域的论文,请作者遵守以下投稿要求。

    作者: 刊期: 2015年第01期

  • 低频旋转乳突振动对正常志愿者听力的影响

    目的:我们设计了一种新颖的治疗眩晕低频旋转乳突振动设备,本研究是为了评估该设备对听觉系统的安全性。方法选12名无眩晕主诉的志愿者,男性10例,女性2例,年龄23-25岁。将低频振动投放于右侧乳突,分别于振动前、振动后0.5小时、7天、和1年行纯音听阈检测,分析比较双耳的不同频率气、骨导阈值的变化。结果受试者双耳在低频振动后0.5小时的,右耳(暴露耳)在0.25、0.5、1.0 kHz骨导听阈分别降低了3、5、3 dB,有显著性差异(p<0.05),气导阈移无显著性差异;振动后7天,左耳(对照耳)在0.25、0.5 kHz气导听阈分别提高了3、2 dB,有显著性差异(p<0.05);振动后1年右耳在0.25、0.5、8kHz气导听阈分别降低了6、6、9 dB,在0.25、0.5、1 kHz骨导听阈分别升高了7、3、4 dB,均有显著性差异(p<0.05),左耳在2、4、8 kHz气导听阈分别提高了6、6、10 dB,在0.25、0.5、1、2、4kHz骨导听阈分别升高了7、6、6、8、8 dB,均有显著性差异(p<0.05)。结论振动后0.5小时及7天的听阈变化无规律,且数值小,无临床意义;1年后的左耳听阈升高6-10 dB,右耳低频气导听阈降低,低频骨导听阈提高,不符合振动引起的特异性改变,因此,该治疗眩晕的低频乳突振动设备对听觉系统是安全的。

    作者:彭日顺子;郑贵亮;张青;郑宏良;邹静 刊期: 2015年第01期

  • PET滤膜用于承载耳蜗基底膜培养的实验研究

    目的:探讨一种适宜耳蜗组织贴壁培养的方法。方法 PET滤膜预先置入层粘连蛋白、鸟氨酸、胎牛血清按2:2:1比例混合均匀的液体中在4℃预孵过夜,选取出生四天的C57BL/6J小鼠作为研究对象。剥取基底膜以PET滤膜作为承载介质培养在加入含青霉素的培液中,48小时后收取样本,进行免疫荧光(一抗goat anti-otoancorin、mouse anti-beta tubu?linⅢ及对应二抗采用cy3 donkey anti goat,647 donkey anti mouse,染核试剂DAPI,phalloidin)观察不同部位细胞,扫描电镜及制备原位超薄切片透射电镜观察体外培养新生小鼠基底膜内外毛细胞、螺旋缘内细胞、螺旋神经元细胞显微结构的改变。结果耳蜗基底膜在PET膜上贴附生长良好。各种细胞的微小结构和超微结构保持正常状态。结论PET滤膜能作为一种新颖的承载基底膜培养的介质。

    作者:刘永泽;周函;麻晓峰;马登滨;高下 刊期: 2015年第01期

  • 大鼠耳科常规手术径路

    目的:介绍几种在大鼠耳科实验研究中常用的手术方法。方法将大鼠麻醉后,根据不同的实验需求,分别演示经耳后切口的后鼓室径路、经耳上切口的上鼓室径路、经颈部腹侧切口的下鼓室径路、经颈部背侧切口的枕后径路等手术方法。结果通过不同的手术径路可从不同的角度暴露大鼠的中耳和内耳,为引导耳蜗生物电反应的各种耳蜗电极置放、经圆窗膜转染或置药、药物经耳蜗外淋巴腔灌流、耳蜗内淋巴腔灌注、听骨链中断、以及内淋巴囊手术破坏等各种不同实验目的提供佳手术方案。结论根据大鼠颞骨解剖特点,选择不同的中耳内耳手术径路,可以为实现不同的实验目的服务,对实验成功提供技术保障。

    作者:李鹏;丁大连;高可雷;Richard Salvi 刊期: 2015年第01期

  • 阳离子聚合物纳米基因载体在内耳的应用进展

    由于耳蜗特殊的解剖和生理结构,使全身给药和基因治疗很难在局部达到有效的浓度。因此关于内耳局部给药的研究目前已成为耳科研究的热点。选择合适的载体是内耳局部给药的关键问题。阳离子聚合物纳米载体是具有低毒、无免疫原性、可修饰、携带力强、易获得等优点,为内耳给药载体的选择提供了新的可能。本文总结了阳离子聚合物的特性,介绍了其在携带基因/药物方面的优越性,回顾其作为载体在内耳的应用情况,为内耳疾病局部药物/基因治疗的临床应用提供指导。

    作者:王方园;吴南;陈正一;杨仕明 刊期: 2015年第01期

  • 先天性前庭窗及相关结构畸形的影像诊断及个性化手术

    目的:分析讨论先天性前庭窗缺如或闭锁的影像学诊断技术及个性化手术方法。方法采用高分辨率CT(High resolution CT, HRCT)、后期多平面重组(Multi-plane reformation, MPR)技术对2010.7-2014.8临床上表现为自幼传导性耳聋、外耳道鼓膜正常、鼓室压图为“A”型曲线、盖莱试验阴性的患者进行筛选诊断,并进行外科听力重建手术。结果术前HRCT及MPR影像诊断为先天性前庭窗畸形6例(耳)、先天性镫骨底板固定2例(耳),经术中探查证实为前庭窗、镫骨及面神经畸形,其中6例以TORP或Piston进行个性化听力重建。结论 HRCT冠状位及MPR可较好的显示前庭窗、镫骨及面神经的畸形,尤其是对固定的镫骨底板及前庭窗闭锁骨板的区分;对于前庭窗闭锁且被面神经完全覆盖的病例,鼓岬开窗不失为一种有效的方法,目前国内外文献尚未见此技术的报告。

    作者:杨凤;刘阳;孙建军;宋任东;李进让 刊期: 2015年第01期

  • 耳蜗血管纹细胞离子转运的研究进展

    本文综述了哺乳类动物耳蜗血管纹细胞的离子转运、内淋巴液生成以及耳蜗内淋巴电位产生的主要机制。详细阐述了每一种离子转运蛋白的作用,讨论了耳蜗血管纹中钾离子循环、氯离子循环和盐的平衡,以及这些平衡得以维持的机制。

    作者:许庆庆;郭维维;翟所强;杨仕明 刊期: 2015年第01期

  • 茵陈水提物对胆红素诱导神经母瘤细胞凋亡实验研究

    目的:采用分子生物学技术方法探讨胆红素诱导神经母瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡和茵陈水提物(Yincheng extract, YCE)的保护机制。方法噻唑蓝(MTT)观察茵陈提取物对SH-S5Y5细胞增殖影响,Western blotting观察NF-KB蛋白核质分布,免疫荧光显微镜观察JC-1探针标记线粒体电位变化,流式细胞仪Annexin-FITC/PI观察细胞凋亡,荧光定量PCR观察IL-1β、TNF-α变化。结果茵陈提取物浓度的时间依赖性提高胆红素对细胞增殖的抑制作用(p<0.05)。胆红素促进NF-KB核转移,茵陈提取物抑制NF-KB核转移。免疫荧光显微镜观察到胆红素处理组与正常组对比线粒体膜电位明显降低(p<0.05)表现早期凋亡特性。茵陈提取物抑制线粒体膜电位降低(p<0.05)。流式细胞Annexin-FITC/PI结果显示,胆红素诱导细胞凋亡,YCE保护胆红素诱导的凋亡。荧光定量PCR结果显示茵陈提取物抑制NF-KB转录因子调控的炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α基因的表达(p<0.05)。结论胆红素明显诱导SH-S5Y5细胞凋亡,YCE能有效抑制NK-KB激活和抑制线粒体膜电位变化,呈现多靶点抑制胆红素诱导的细胞凋亡。

    作者:张奕;梁勇;李鹏;符秋养;刘钊;李琦;张威;杨衬 刊期: 2015年第01期

  • 眼性前庭诱发肌源电位对迷路积水定位诊断的价值探讨

    目的:探讨膜迷路积水患者眼肌前庭诱发肌源性电位(oVEMP)的临床特征。方法对40例膜迷路积水患者患者及38例(76耳)年龄、性别与之匹配的健康人进行眼肌前庭诱发肌源性电位(oVEMP)测试,分析对比oVEMPs的引出率及各参数指标。结果(1)病例组患耳和健耳的oVEMP引出率和振幅均低于对照组;(2)病例组患耳和健耳的oVEMP与对照组oVEMP引出率、峰-峰波幅差异有显著性意义;(3)病例组与对照组振幅比、不对称性比较差异具有著性意义结论 oVEMP可以作为迷路积水异常变化的客观量化评估指标,并迷路积水的确诊提供一定帮助。

    作者:林少莲;林有辉;舒博;胡婕;林丁丁;叶胜难 刊期: 2015年第01期

  • CRISPR/Cas靶向编辑技术系统与耳聋动物模型的建立

    CRISPR( Clustered regularly interspaced short palindromicrepeats)/Cas( CRISPR-associated)系统是新一代的靶向基因组编辑技术系统,其突出特征是Cas蛋白,其通过gRNA( guide RNA)的引导下对外源性的DNA进行靶向切割,从而为细菌入侵核酸提供了免疫力。由CRISPR/Cas系统介导的基因靶向修饰技术成功地应用于多种细菌及多种生物的基因组靶向修饰,对人类基因组DNA的靶向修饰也已经得到了证实,并且CRISPR/Cas系统与以往技术相比在很多方面显示出了的优点。CRISPR/Cas系统在遗传缺陷疾病动物模型的建立技术中已经占有重要地位,而各种类型基因修饰动物模型是目前内耳基因功能、聋病分子机制研究的理想方法和必备条件。随着耳聋的遗传学研究不断深入,诊断水平的不断提高,对遗传性耳聋动物模型的需求也不断增多,CRISPR/Cas系统介导的基因组靶向修饰技术也会不断完善,该技术将在耳聋的遗传学研究和诊断治疗等多领域发挥更大作用。

    作者:段宏;袁慧军 刊期: 2015年第01期

  • 水杨酸盐毒性与大鼠耳蜗核炎症因子表达

    目的:本研究采用对大鼠急性及慢性水杨酸盐腹腔注射建立耳鸣动物模型,通过检测大鼠耳蜗核中肿瘤坏死因子α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β),白介素6(IL-6)以及NMDA受体亚基(NR2B)mRNA及其蛋白的表达,了解慢性水杨酸盐诱导的耳鸣动物耳蜗核中是否出现炎症因子表达的改变,以探讨炎症因子在耳鸣中的作用。方法实验动物随机分为4组,按给药时间分别为:正常对照组、急性注射2小时组、慢性注射14天组、停药后恢复14天组。各组大鼠断头处死后迅速分离出耳蜗核;采用SYBR Green实时荧光定量PCR(real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction, real-time RT-PCR)及Western blot(蛋白质印迹)方法,检测各组大鼠耳蜗核TNF-α,IL-1β,IL-6及NR2B基因mRNA及其蛋白的表达,观察各组间的差异。结果(1)在慢性注射14天组,TNF-α和NR2B mRNA及其蛋白表达水平较正常对照组、急性注射2小时组、停药后恢复14天组高,且差异有统计学意义(p<0.05);急性注射2小时组、慢性注射14天组、停药后恢复14天组IL-1βmRNA水平较正常组高,慢性注射14天组、停药后恢复14天组IL-1β蛋白水平较正常组高,差异有统计学意义(p<0.05);IL-6 mRNA及其蛋白表达水平在四组之间无明显差异;(2)TNF-α和NR2B mRNA表达具有明显的正相关(p<0.01);IL-1β和NR2B mRNA表达无明显正相关(p>0.05)。结论(1)长期注射水杨酸盐可能通过上调耳蜗核中TNF-α, IL-1β和NR2B基因表达导致大鼠耳鸣;(2)TNF-α和NR2B可能在水杨酸盐诱发耳鸣的过程中起协同作用。

    作者:胡守森;梅玲;陈建勇;吕静荣;黄治物;吴皓 刊期: 2015年第01期

  • 听神经病实验动物模型

    听神经病的临床听力学特征主要表现在具有正常的耳蜗感受器电位和异常的听性脑干反应波形以及对语言的理解障碍,其病理学改变部位被确定是在周边听觉系统,主要表现在内毛细胞缺损、听神经末梢破坏、听神经纤维脱髓鞘病变、螺旋神经节细胞缺损,或上述一个或几个部位同时发生病变。本文介绍了模拟听神经病的各种实验动物模型,其中包括模拟单纯内毛细胞缺损的Slc19a2基因缺陷小鼠和Ggt1基因缺陷小鼠实验模型;模拟单纯Ⅰ型传入神经末梢损害的谷氨酸盐实验模型;模拟单纯脱髓鞘病变的甘油实验模型;模拟Ⅰ型螺旋神经节及其神经纤维损害的乌苯酐实验模型和免疫性疾病损害模型;模拟单纯神经纤维脱髓鞘病变的胆红素实验模型和髓鞘缺陷仓鼠模型;模拟单纯听神经近端脱髓鞘病变的阿霉素模型和压力夹伤听神经实验模型;以及模拟整个周边听觉系统全程病变的卡铂南美栗鼠实验模型。这些实验模型可以分别用于模拟听神经病的一种或几种临床表现及病变特征的实验研究。

    作者:李鹏;丁大连;曾祥丽;Richard Salvi 刊期: 2015年第01期

  • HO-1在顺铂诱导豚鼠螺旋神经元损伤中的作用

    目的:检测血红素加氧酶-1在豚鼠耳蜗螺旋神经节顺铂损伤后的表达变化。方法通过免疫组织化学及Western Blot技术,观察耳蜗螺旋神经元损伤后HO-1在不同组间的表达变化。将32只健康豚鼠随机分为4组,每组8只。A组对照组:按体重以0.9%生理盐水12ml/kg腹腔注射,早晚各一次,持续3天。B组顺铂组:按体重12mg/kg顺铂腹腔注射(IP),早晚各一次,持续3天。C组阿魏酸(FA)+顺铂组:先150mg/kgFA腹腔注射预处理1h,再以12mg/kg顺铂IP,早晚各一次,持续三天。D组FA+锌原卟啉Ⅸ(ZnppⅨ)+顺铂组:同时给予150mg/kgFA+ZnppⅨ15umol/kg IP预处理1h,再以12mg/kg顺铂IP,早晚各一次,持续三天。采用免疫组织化学及Wstern Blot技术检测不同组间螺旋神经元HO-1蛋白表达变化。结果在不同的分组中,HO-1在耳蜗螺旋神经节中表达量不同。空白组中,螺旋神经节组织存在微弱的HO-1表达,其蛋白表达量为0.48±0.07;A组蛋白表达量为0.81±0.07,B组蛋白表达量为0.9±0.05,C组蛋白表达量为0.61±0.07。4个组两两间差异均有统计学意义(p<0.0001)。结论 HO-1在C组中表达量多,B组次之,D组少,表明HO-1可能参与顺铂损伤螺旋神经元后的修复过程。

    作者:邓丹;骆文龙 刊期: 2015年第01期

  • 酪氨酸硝基化在分泌性中耳炎所致耳蜗损伤作用实验观察

    目的:通过观察3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)在分泌性中耳炎(Otitis Media with Effusion,OME)大鼠内耳的定位、分布及内耳组织形态学特征,确定OME大鼠耳蜗中的酪氨酸硝基化情况,探寻OME导致内耳损伤的酪氨酸硝基化机制。方法将40只健康成年雄性SD大鼠一侧耳通过阻塞咽鼓管的方法构建分泌性中耳炎模型。造模成功后分组行耳蜗石蜡切片HE染色和免疫组织化学,Tunel凋亡检测和神经节细胞的透射电镜观察。采用SPSS16.0软件包进行统计学分析,以p<0.05作为有显著性差异。结果造模后大鼠的耳蜗毛细胞没有明显的缺失, HE染色发现中耳及内耳慢性炎症改变,免疫组化检测3-NT在耳蜗毛细胞、血管纹、神经纤维细胞、神经节细胞均有阳性表达,而对照组在相应部位均阴性表达。Tunel凋亡检测见耳蜗的神经纤维细胞、神经节细胞出现凋亡。透射电镜观察示神经节细胞线粒体肿胀、出现空泡化,并有神经节细胞间质的淋巴细胞浸润。结论通过构建OME模型初步发现OME能够导致耳蜗损伤,OME可能通过酪氨酸硝基化作用导致耳蜗毛细胞的凋亡、螺旋神经节细胞及神经纤维的变性,即酪氨酸硝基化是OME导致耳蜗损伤的可能机制之一。

    作者:佘万东;乔振花;戴艳红;陆玲;后婕 刊期: 2015年第01期

  • 老年性耳聋的防治进展

    目的:老年性耳聋已成为影响老年人生活质量的重要因素,通过本篇综述可以更好地了解老年性耳聋防治进展。方法在Pubmed,Science,Medline,CINAHL数据库搜索老年性耳聋预防、治疗的相关文献并进行系统分析、归纳总结。结果本文共引用了48篇文献资料,发现老年性耳聋在传统防治方法上近10年并无太大进展;而听觉辅助装置,如助听器、人工耳蜗、人工中耳等近10年发展很快并且已广泛应用于临床;干细胞移植技术及基因治疗技术对老年性耳聋的防治的基础研究也取得很大进步。结论虽然目前在老年性耳聋的防治方面已取得很多成就,但仍任重道远;基因治疗及干细胞移植技术在老年性耳聋防治上拥有广阔前景。

    作者:刘宸箐;侯晓丰;翟所强;于宁 刊期: 2015年第01期

  • 鳃-耳综合征一家系临床表型及遗传学特征分析

    目的:探讨一个鳃-耳综合征家系的表型特征,进行候选致病基因的突变筛查。方法经知情同意,对调查对象进行全身检查以及听力学和颞骨CT评估,获得血样标本;整理分析家系资料并绘制系谱图;用基因组DNA提取试剂盒提取外周血DNA,进行鳃-耳-肾综合征相关基因EYA1、SIX1和SIX5全编码外显子的序列分析。结果该家系共4代31人,7人具有鳃-耳-肾综合征相关症状,系谱分析符合常染色体显性遗传特征。6名患者主诉听力下降,为常见临床表现,其它症状有耳前瘘管2人次、鳃裂瘘3人次和耳廓畸形4人次,均无肾脏畸形表现。2名患者纯音听力图示双耳混合性聋,颞骨CT检查见中耳和内耳发育异常,候选致病基因筛查均检测到EYA1 c.922C>T突变。结论该家系表型特征符合鳃-耳综合征诊断,但家系内患病个体间临床表现具有异质性。EYA1 c.922C>T突变是本家系致病的主要分子基础。

    作者:邹明臻;朱红美;魏钦俊;陈智斌;曹新;邢光前 刊期: 2015年第01期

  • 耳蜗内细胞连接蛋白研究进展

    耳蜗内的细胞连接具有高度复杂性和有序性,它们是维持耳蜗结构和听觉功能的必要条件。本文将对耳蜗内的细胞连接蛋白进行分类,并简要综述连接蛋白在耳蜗中的功能和作用。

    作者:王博;胡博华;杨仕明 刊期: 2015年第01期

  • 儿童先天性综合征型耳聋听器及相关听力学表现特征暨2015年北京市听力诊断中心第一季度学术研讨会会议纪要

    2015年3月28日由北京协和医院、北京大学第三医院、中国聋儿康复中心、北京同仁医院、解放军总医院和北京儿童医院六家北京市听力诊断中心第一季度学术研讨会在北京儿童医院举行。80人参加了此次会议,在会议中,各位专家、讲者及与会人员就相关内容进行了认真的交流和学习,现将会议主要情况向大家介绍如下。

    作者:杨扬;张杰 刊期: 2015年第01期

  • 全外显子组测序技术及其在遗传性耳聋研究中的应用

    近年来,全外显子组测序技术迅猛发展,为遗传疾病的基因研究带来了新的机遇,受到遗传学多个领域的重视与应用,其在遗传性耳聋的应用也日益受到关注。该技术先应用靶向富集技术捕获基因组的外显子区域,再通过高通量测序获得编码区序列遗传信息。本文主要介绍全外显子组测序的技术路线及在遗传性耳聋中的应用与研究成果。

    作者:姜海鸥;全庆丽;胡祥上;王义旺 刊期: 2015年第01期

中华耳科学杂志

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主管:解放军总医院

主办:解放军总医院耳鼻咽喉科研究所