杨凤；刘阳；孙建军；宋任东；李进让
内耳离体培养在研究内耳细胞功能、内耳组织发育再生、细胞损伤退化等方面具有重要价值。但由于内耳的组织结构微小复杂，其取材和培养具有较大难度，使该技术的普及和应用受到一定限制。本文在简要点评不同内耳离体培养方法优劣的基础上，结合本实验室多年来积累的实践经验，详细介绍了新生大鼠各个内耳终器取材及培养的具体步骤。从解剖迷路到分离终器，从凝胶制备到标本铺放，都有详细的操作指南，本文还针对各环节中的技术动作和关键事项进行了具体探讨并配以指导图例，希望这些内容能够弥补以往文献中抽象简略的条款式步骤所造成的实验困难，为开展内耳器官培养研究的初学者提供一定的帮助。
作者：于进涛；丁大连；李鹏；高可雷；蒋海燕；孙虹；Richard J. Salvi 刊期： 2015年第01期
本文主要介绍了Neurod1在内耳感觉神经元及毛细胞发育中的相关研究。Neurod1是bHLH转录因子家族中的重要一员，它能促进感觉神经元前体细胞分化为成熟感觉神经元细胞。在内耳中，Neurod1主要表达于感觉神经元细胞，部分感觉上皮也有表达。Neurod1基因条件性敲除小鼠可出现听力及平衡障碍，其内耳感觉神经元细胞大量缺失，同时内耳中的传入及传出神经也存在缺陷。Neurod1基因敲除小鼠螺旋神经节中还可出现异位毛细胞的生长。在内耳发育过程中，Neurod1基因与多种基因相互调控，协同促进内耳发育成熟。如Neurog1、Atoh1、Sox2、Nhlh1等。
作者：王春梅；卿洁；谢鼎华 刊期： 2015年第01期
突发性聋是耳鼻喉科常见的急症，目前临床上全身使用糖皮质激素治疗突发性聋获得较为肯定的疗效，但全身使用糖皮质激素的禁忌症及可能引起严重的不良反应，使得糖皮质激素鼓室给药治疗突发性聋逐渐得到应用并成为广泛关注的热点。本文将对糖皮质激素鼓室给药的疗效进行评估，以及对其临床运用的现况进行阐述。
作者：刘璐；钟时勋 刊期： 2015年第01期
目的：本研究采用对大鼠急性及慢性水杨酸盐腹腔注射建立耳鸣动物模型，通过检测大鼠耳蜗核中肿瘤坏死因子α(TNF-α)，白介素-1β（IL-1β），白介素6(IL-6)以及NMDA受体亚基（NR2B）mRNA及其蛋白的表达，了解慢性水杨酸盐诱导的耳鸣动物耳蜗核中是否出现炎症因子表达的改变，以探讨炎症因子在耳鸣中的作用。方法实验动物随机分为4组，按给药时间分别为：正常对照组、急性注射2小时组、慢性注射14天组、停药后恢复14天组。各组大鼠断头处死后迅速分离出耳蜗核；采用SYBR Green实时荧光定量PCR（real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction, real-time RT-PCR）及Western blot（蛋白质印迹）方法，检测各组大鼠耳蜗核TNF-α，IL-1β，IL-6及NR2B基因mRNA及其蛋白的表达，观察各组间的差异。结果（1）在慢性注射14天组，TNF-α和NR2B mRNA及其蛋白表达水平较正常对照组、急性注射2小时组、停药后恢复14天组高，且差异有统计学意义（p＜0.05）；急性注射2小时组、慢性注射14天组、停药后恢复14天组IL-1βmRNA水平较正常组高，慢性注射14天组、停药后恢复14天组IL-1β蛋白水平较正常组高，差异有统计学意义（p＜0.05）；IL-6 mRNA及其蛋白表达水平在四组之间无明显差异；（2）TNF-α和NR2B mRNA表达具有明显的正相关（p＜0.01）；IL-1β和NR2B mRNA表达无明显正相关（p>0.05）。结论（1）长期注射水杨酸盐可能通过上调耳蜗核中TNF-α， IL-1β和NR2B基因表达导致大鼠耳鸣；（2）TNF-α和NR2B可能在水杨酸盐诱发耳鸣的过程中起协同作用。
作者：胡守森；梅玲；陈建勇；吕静荣；黄治物；吴皓 刊期： 2015年第01期
目的：老年性耳聋已成为影响老年人生活质量的重要因素，通过本篇综述可以更好地了解老年性耳聋防治进展。方法在Pubmed，Science，Medline，CINAHL数据库搜索老年性耳聋预防、治疗的相关文献并进行系统分析、归纳总结。结果本文共引用了48篇文献资料，发现老年性耳聋在传统防治方法上近10年并无太大进展；而听觉辅助装置，如助听器、人工耳蜗、人工中耳等近10年发展很快并且已广泛应用于临床；干细胞移植技术及基因治疗技术对老年性耳聋的防治的基础研究也取得很大进步。结论虽然目前在老年性耳聋的防治方面已取得很多成就，但仍任重道远；基因治疗及干细胞移植技术在老年性耳聋防治上拥有广阔前景。
作者：刘宸箐；侯晓丰；翟所强；于宁 刊期： 2015年第01期
目的：通过观察3-硝基酪氨酸（3-nitrotyrosine，3-NT）在分泌性中耳炎（Otitis Media with Effusion，OME）大鼠内耳的定位、分布及内耳组织形态学特征，确定OME大鼠耳蜗中的酪氨酸硝基化情况，探寻OME导致内耳损伤的酪氨酸硝基化机制。方法将40只健康成年雄性SD大鼠一侧耳通过阻塞咽鼓管的方法构建分泌性中耳炎模型。造模成功后分组行耳蜗石蜡切片HE染色和免疫组织化学，Tunel凋亡检测和神经节细胞的透射电镜观察。采用SPSS16.0软件包进行统计学分析，以p<0.05作为有显著性差异。结果造模后大鼠的耳蜗毛细胞没有明显的缺失， HE染色发现中耳及内耳慢性炎症改变，免疫组化检测3-NT在耳蜗毛细胞、血管纹、神经纤维细胞、神经节细胞均有阳性表达，而对照组在相应部位均阴性表达。Tunel凋亡检测见耳蜗的神经纤维细胞、神经节细胞出现凋亡。透射电镜观察示神经节细胞线粒体肿胀、出现空泡化，并有神经节细胞间质的淋巴细胞浸润。结论通过构建OME模型初步发现OME能够导致耳蜗损伤，OME可能通过酪氨酸硝基化作用导致耳蜗毛细胞的凋亡、螺旋神经节细胞及神经纤维的变性，即酪氨酸硝基化是OME导致耳蜗损伤的可能机制之一。
作者：佘万东；乔振花；戴艳红；陆玲；后婕 刊期： 2015年第01期
目的：探讨内窥镜下耳道途径改良夹层法修补鼓膜穿孔的临床效果，并介绍临床手术要点及技巧。方法回顾性分析笔者所在医院应用内窥镜下耳道途径改良夹层法修补鼓膜穿孔的61例（64耳）患者的病历资料。结果61例（64耳）患者随访6～24个月，术后无耳闷、耳鸣加重、眩晕、气骨导听力下降等。术后1-3个月内复查3耳再度穿孔，61耳穿孔修补成功，穿孔愈合率95.3%，修补成功病例术后6个月以上复查未见再穿孔、鼓膜内陷、粘连及前部钝角愈合情况，患者诉无听力下降等。术后3-6个月纯音测听示患者听力改善率达95.3%。结论适应证选取得当，内窥镜下耳道途径改良夹层法鼓膜穿孔修补术操作简单，损伤小，鼓膜愈合率高，听力改善较明显，值得临床推广。
作者：牟珊；张勤修；梁方琪 刊期： 2015年第01期
哺乳动物内耳细胞发育的分子调控是近期的研究热点。多项研究表明，多种细胞周期蛋白参与了听觉上皮的发育调控，其中包括内耳细胞发育中的增殖、分化等过程。在哺乳动物耳蜗发育的相关研究中，深入认识有关细胞周期调控因子及其作用，以及相关基因的调控机制，均显得极为必要。为此，本文简要综述近年来的国内外相关研究进展。
作者：钟翠萍；韩宇；黄小段；严星 刊期： 2015年第01期
近年来，全外显子组测序技术迅猛发展，为遗传疾病的基因研究带来了新的机遇，受到遗传学多个领域的重视与应用，其在遗传性耳聋的应用也日益受到关注。该技术先应用靶向富集技术捕获基因组的外显子区域，再通过高通量测序获得编码区序列遗传信息。本文主要介绍全外显子组测序的技术路线及在遗传性耳聋中的应用与研究成果。
作者：姜海鸥；全庆丽；胡祥上；王义旺 刊期： 2015年第01期
目的：为50个无家族遗传史的聋儿家庭寻找可能的致聋基因突变，为这些家庭的再生育计划予以指导并进行风险评估。方法通过受检者静脉血提取基因组DNA，应用直接测序技术对GJB2、SLC26A4、线粒体DNA 12SrRNA的1494和1555等3个基因进行分析。结果50个家庭中明确遗传倾向的有22家，其中GJB2基因突变者12家，突变方式有235delC、176del16bp、299_300delAT、257C>G、427C>T、189del14bp、605ins46bp等；SLC26A4基因突变者10家，突变的方式有IVS7-2A>G、2168A>G、317C>A、413-414delT、589G>A、IVS15+5G>A、1229C>T、1594A>C、1975G>C、2027T>A。结论即使没有家族史，聋儿家庭再生育前也须行基因诊断，以降低再生育聋儿的风险。
作者：王淑娟；梁鹏飞；王剑；陈阳；邱建华 刊期： 2015年第01期
目的：研究PPARγ激动剂15D-PGJ2对H2O2诱导的离体小鼠耳蜗螺旋神经节氧化损伤的防护作用。方法分离生后3-5 d的小鼠耳蜗基底膜,培养24 h后不同浓度PPARγ激动剂15D-PGJ2(10μM,30μM)预处理24h,再分别加入含有不同浓度H2O2(3mM,6mM)的培养基培养24小时。采用NF200免疫荧光染色方法行离体耳蜗基底膜螺旋神经纤维免疫荧光染色，在免疫荧光显微镜下观察各组螺旋神经纤维形态以及密度改变。结果3mM H202单独作用于原代培养的基底膜螺旋神经节24h时，螺旋神经纤维呈节断状损失改变,神经纤维逐渐变细局部断裂,染色变淡,神经纤维数量明显降低。随着H202浓度的增加，受损伤的螺旋神经微丝数目呈明显增加趋势。10μM 15D-PGJ2预处理24小时能提高H202损伤后基底膜螺旋神经纤维的数量。30μM 15D-PGJ2预处理组螺旋神经纤维数量明显增加。随着15D-PGJ2浓度提高,其保护作用加强。结论 PPARγ激动剂15D-PGJ2可减轻H2O2诱导的离体小鼠耳蜗基底膜螺旋神经节氧化损伤。
作者：罗颜；曹忠胜；朱政文；袁辉 刊期： 2015年第01期
目的：运用不同测试技术对白噪声暴露前后豚鼠的听觉功能进行检测，分析120 dB SPL白噪声暴露对豚鼠听觉功能的影响，为豚鼠的听力学研究提供模型及方法参考。方法以120 dB SPL白噪声为噪声暴露条件，比较噪声暴露组、对照组各20只豚鼠听性脑干反应（ABR）、畸变产物耳声发射（DPOAE）、电诱发听性脑干反应（eABR），总结分析120 dB SPL白噪声暴露对豚鼠听觉功能的影响。结果对照组与噪声暴露组之间的ABR阈值、DPOAE幅度值、eABR阈值差异均具有统计学意义（p<0.05）。结论120 dB SPL白噪声建立豚鼠噪声性聋动物模型稳定，听性脑干反应（ABR）、畸变产物耳声发射（DPOAE）、电诱发听性脑干反应（eABR）可以很好地检测白噪声暴露前后豚鼠听觉功能的变化。
作者：张纪帅；陈星睿；吴军；韩维举 刊期： 2015年第01期
本文综述了哺乳类动物耳蜗血管纹细胞的离子转运、内淋巴液生成以及耳蜗内淋巴电位产生的主要机制。详细阐述了每一种离子转运蛋白的作用，讨论了耳蜗血管纹中钾离子循环、氯离子循环和盐的平衡，以及这些平衡得以维持的机制。
作者：许庆庆；郭维维；翟所强；杨仕明 刊期： 2015年第01期
内耳毛细胞的损伤是引起感音神经性聋的常见原因，而寻找刺激毛细胞再生的可能条件，是治疗感音神经性聋的重要方向；斑马鱼作为新兴模式生物，其胚胎及早期幼鱼通体透明，侧线毛细胞位于体表，以及生殖周期短、繁殖能力强且基因与人类基因约87%相似。鉴于斑马鱼以上生物学特性，耳科学研究者亦采用斑马鱼模型探讨毛细胞损伤及再生机制。本文拟对斑马鱼毛细胞损伤及再生的相关研究进展进行综述。
作者：翁宇航；龙孝斌 刊期： 2015年第01期
CRISPR( Clustered regularly interspaced short palindromicrepeats)/Cas( CRISPR-associated)系统是新一代的靶向基因组编辑技术系统，其突出特征是Cas蛋白，其通过gRNA( guide RNA)的引导下对外源性的DNA进行靶向切割，从而为细菌入侵核酸提供了免疫力。由CRISPR/Cas系统介导的基因靶向修饰技术成功地应用于多种细菌及多种生物的基因组靶向修饰，对人类基因组DNA的靶向修饰也已经得到了证实，并且CRISPR/Cas系统与以往技术相比在很多方面显示出了的优点。CRISPR/Cas系统在遗传缺陷疾病动物模型的建立技术中已经占有重要地位，而各种类型基因修饰动物模型是目前内耳基因功能、聋病分子机制研究的理想方法和必备条件。随着耳聋的遗传学研究不断深入，诊断水平的不断提高，对遗传性耳聋动物模型的需求也不断增多，CRISPR/Cas系统介导的基因组靶向修饰技术也会不断完善，该技术将在耳聋的遗传学研究和诊断治疗等多领域发挥更大作用。
作者：段宏；袁慧军 刊期： 2015年第01期
目的：采用分子生物学技术方法探讨胆红素诱导神经母瘤细胞（SH-SY5Y）凋亡和茵陈水提物（Yincheng extract, YCE）的保护机制。方法噻唑蓝（MTT）观察茵陈提取物对SH-S5Y5细胞增殖影响，Western blotting观察NF-KB蛋白核质分布，免疫荧光显微镜观察JC-1探针标记线粒体电位变化，流式细胞仪Annexin-FITC/PI观察细胞凋亡，荧光定量PCR观察IL-1β、TNF-α变化。结果茵陈提取物浓度的时间依赖性提高胆红素对细胞增殖的抑制作用（p<0.05）。胆红素促进NF-KB核转移，茵陈提取物抑制NF-KB核转移。免疫荧光显微镜观察到胆红素处理组与正常组对比线粒体膜电位明显降低（p<0.05）表现早期凋亡特性。茵陈提取物抑制线粒体膜电位降低（p<0.05）。流式细胞Annexin-FITC/PI结果显示，胆红素诱导细胞凋亡，YCE保护胆红素诱导的凋亡。荧光定量PCR结果显示茵陈提取物抑制NF-KB转录因子调控的炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α基因的表达（p<0.05）。结论胆红素明显诱导SH-S5Y5细胞凋亡，YCE能有效抑制NK-KB激活和抑制线粒体膜电位变化，呈现多靶点抑制胆红素诱导的细胞凋亡。
作者：张奕；梁勇；李鹏；符秋养；刘钊；李琦；张威；杨衬 刊期： 2015年第01期
目的：探讨扩张法外耳再造术常见并发症的原因分析及有效的护理对策。方法对我科室2010年1月到2012年1月723例扩张法外耳再造术患者的护理情况进行回顾性分析，探讨并发症的原因及护理对策。结果723例患者（754例扩张器）完成扩张法外耳再造术，术后42例发生并发症：扩张器血肿、扩张皮瓣破溃、感染、切口裂开、扩张器渗漏、软骨支架外露等。经积极治疗，精心护理，并发症治愈完成了外耳再造40例。经过1个月~3年的随访，再造耳形态良好结论扩张法外耳再造术周期长、步骤多，容易出现并发症，经规范操作、及时发现并发症及时处，能有效提高扩张法外耳再造术成功率。
作者：牟莉；吴启侠；姜海霞；袁凤华；王雪如；商月；刘佳；阮晶晶；张滨；孙梦瑾；王佳丽 刊期： 2015年第01期
目的：我们设计了一种新颖的治疗眩晕低频旋转乳突振动设备，本研究是为了评估该设备对听觉系统的安全性。方法选12名无眩晕主诉的志愿者，男性10例，女性2例，年龄23-25岁。将低频振动投放于右侧乳突，分别于振动前、振动后0.5小时、7天、和1年行纯音听阈检测，分析比较双耳的不同频率气、骨导阈值的变化。结果受试者双耳在低频振动后0.5小时的，右耳（暴露耳）在0.25、0.5、1.0 kHz骨导听阈分别降低了3、5、3 dB，有显著性差异（p＜0.05），气导阈移无显著性差异；振动后7天，左耳（对照耳）在0.25、0.5 kHz气导听阈分别提高了3、2 dB，有显著性差异（p＜0.05）；振动后1年右耳在0.25、0.5、8kHz气导听阈分别降低了6、6、9 dB，在0.25、0.5、1 kHz骨导听阈分别升高了7、3、4 dB，均有显著性差异（p＜0.05），左耳在2、4、8 kHz气导听阈分别提高了6、6、10 dB，在0.25、0.5、1、2、4kHz骨导听阈分别升高了7、6、6、8、8 dB，均有显著性差异（p＜0.05）。结论振动后0.5小时及7天的听阈变化无规律，且数值小，无临床意义；1年后的左耳听阈升高6-10 dB，右耳低频气导听阈降低，低频骨导听阈提高，不符合振动引起的特异性改变，因此，该治疗眩晕的低频乳突振动设备对听觉系统是安全的。
作者：彭日顺子；郑贵亮；张青；郑宏良；邹静 刊期： 2015年第01期
目的：探讨水杨酸钠对大鼠耳蜗螺旋神经节神经元（SGN）GABAa受体的作用。方法采用全细胞膜片钳记录技术，观察离体培养大鼠SGN的GABAa受体激活电流的特性及水杨酸钠对其作用特点。结果在SGN上可记录到GABAa受体激动剂GABA诱发的内向电流，该电流呈浓度依赖性且可被荷包牡丹碱所阻断；水杨酸钠作用在SGN上未诱出电流，100μM、500μM的GABA与不同浓度的水杨酸钠(500μM、1000μM、5000μM)分别联合作用时，GABA诱发的电流可被不同程度地抑制，且该抑制作用呈可逆性。结论大鼠SGN上可记录到GABAa受体电流，且水杨酸钠以浓度依赖的方式可逆性抑制GABAa受体电流，抑制作用与GABA浓度有关。
作者：蔡正；姚晨；陈慧英；黄志辉；覃继新；苏纪平 刊期： 2015年第01期
氨基糖苷类药物（AmAn）是一类经典的治疗革兰阴性菌感染的抗生素，但具有耳毒性和肾毒性。以往的研究认为AmAn的耳毒性仅仅针对内耳毛细胞并可引起继发的延迟性螺旋神经节细胞（SGNs）死亡。但是随着关于AmAn耳毒性和对耳蜗其他细胞的研究进展，人们逐渐意识到耳蜗内支持细胞的损害也是引起SGNs延迟死亡的重要原因之一。我们发现，不同的AmAn对内耳的损害方式不同，以硫酸链霉素为代表的少数AmAn可以不受血-迷路屏障阻碍直接进入内耳并首先损害内耳的周边神经元；而以往认为只能间接损害SGNs的其他那些难以跨越血-迷路屏障的AmAn，比如卡那霉素，对出生后三天大鼠处于发育阶段的SGNs也具有直接的损害作用。因此我们提出一个根据不同内耳损害方式来区分AmAn的分类建议，并希望本文介绍的新内容能够为更深入理解不同种类AmAn的不同耳毒性机制以及听觉系统各个重要组织成分之间的相互作用关系提供新的参考信息。
作者：高可雷；丁大连；李鹏；孙虹；Richard Salvi 刊期： 2015年第01期
中华耳科学杂志
主管:解放军总医院
主办：解放军总医院耳鼻咽喉科研究所
