刘璐；钟时勋
目的：通过观察3-硝基酪氨酸（3-nitrotyrosine，3-NT）在分泌性中耳炎（Otitis Media with Effusion，OME）大鼠内耳的定位、分布及内耳组织形态学特征，确定OME大鼠耳蜗中的酪氨酸硝基化情况，探寻OME导致内耳损伤的酪氨酸硝基化机制。方法将40只健康成年雄性SD大鼠一侧耳通过阻塞咽鼓管的方法构建分泌性中耳炎模型。造模成功后分组行耳蜗石蜡切片HE染色和免疫组织化学，Tunel凋亡检测和神经节细胞的透射电镜观察。采用SPSS16.0软件包进行统计学分析，以p<0.05作为有显著性差异。结果造模后大鼠的耳蜗毛细胞没有明显的缺失， HE染色发现中耳及内耳慢性炎症改变，免疫组化检测3-NT在耳蜗毛细胞、血管纹、神经纤维细胞、神经节细胞均有阳性表达，而对照组在相应部位均阴性表达。Tunel凋亡检测见耳蜗的神经纤维细胞、神经节细胞出现凋亡。透射电镜观察示神经节细胞线粒体肿胀、出现空泡化，并有神经节细胞间质的淋巴细胞浸润。结论通过构建OME模型初步发现OME能够导致耳蜗损伤，OME可能通过酪氨酸硝基化作用导致耳蜗毛细胞的凋亡、螺旋神经节细胞及神经纤维的变性，即酪氨酸硝基化是OME导致耳蜗损伤的可能机制之一。
作者：佘万东；乔振花；戴艳红；陆玲；后婕 刊期： 2015年第01期
硫胺素即维生素B1，在机体中会被转化为辅酶参与能量、脂类及核酸代谢等生理过程。机体缺乏硫胺素可以导致韦尼克脑病（WE），其患者由于双侧对称的间脑和脑干损害，常常出现ABR的波间期延长并时有听力下降的症状。SLC19A2基因变异会导致硫胺响应性巨幼细胞贫血综合征（TRMA），其患者由于缺乏该基因编码的硫胺转运体THTR-1，使得内耳组织无法转运硫氨素，造成源于内耳的逐渐加重的感音神经性听力损失。由于听力下降不是WE中典型的症状，TRMA也是不常见的遗传疾病，使得听力学研究者们对它们不甚熟悉，但其实两者的听力损失恰好是由于听觉通路的不同环节对硫胺素的依赖程度不同而造成的。本文首次系统地将缺乏硫胺素所造成的听力损失串联起来。通过介绍其中听力损失的发生机制以及相关的研究模型，我们希望能将这些理论应用于听力学研究，帮助研究者们加深对中枢性听力损失的发病机制以及内耳不同组织间的相互作用的理解。
作者：高可雷；丁大连；李鹏；孙虹；Richard Salvi 刊期： 2015年第01期
钴是参与维生素B12合成和许多生命活动中必不可少的微量元素，然而一旦机体细胞内的钴离子含量因职业暴露或因饮食摄取钴过量或因钴合金人工假体内源性释放超过安全标准，则可导致严重的金属沉着疾病，这种金属沉着病的症状主要包括感音神经性耳聋、神经性耳鸣、视觉缺陷、认知缺陷、心肌病、心衰、甲状腺疾病、皮肤感觉异常等，在上述病症中，感音神经性耳聋和视神经萎缩是明显的钴中毒症状。钴中毒引起的细胞损害机制主要涉及细胞的氧化应激和缺氧性损害以及线粒体损害引起的细胞凋亡。因此，钴中毒引起的细胞损害模型尤其适用于听觉系统和视觉系统以及神经系统中因细胞内氧化/抗氧化失衡和细胞缺氧以及线粒体凋亡通路等方面的医学实验研究。
作者：李鹏；丁大连；曾祥丽；Richard Salvi；Jerome A. Roth 刊期： 2015年第01期
近年来，全外显子组测序技术迅猛发展，为遗传疾病的基因研究带来了新的机遇，受到遗传学多个领域的重视与应用，其在遗传性耳聋的应用也日益受到关注。该技术先应用靶向富集技术捕获基因组的外显子区域，再通过高通量测序获得编码区序列遗传信息。本文主要介绍全外显子组测序的技术路线及在遗传性耳聋中的应用与研究成果。
作者：姜海鸥；全庆丽；胡祥上；王义旺 刊期： 2015年第01期
突发性聋是耳鼻喉科常见的急症，目前临床上全身使用糖皮质激素治疗突发性聋获得较为肯定的疗效，但全身使用糖皮质激素的禁忌症及可能引起严重的不良反应，使得糖皮质激素鼓室给药治疗突发性聋逐渐得到应用并成为广泛关注的热点。本文将对糖皮质激素鼓室给药的疗效进行评估，以及对其临床运用的现况进行阐述。
作者：刘璐；钟时勋 刊期： 2015年第01期
内耳毛细胞的损伤是引起感音神经性聋的常见原因，而寻找刺激毛细胞再生的可能条件，是治疗感音神经性聋的重要方向；斑马鱼作为新兴模式生物，其胚胎及早期幼鱼通体透明，侧线毛细胞位于体表，以及生殖周期短、繁殖能力强且基因与人类基因约87%相似。鉴于斑马鱼以上生物学特性，耳科学研究者亦采用斑马鱼模型探讨毛细胞损伤及再生机制。本文拟对斑马鱼毛细胞损伤及再生的相关研究进展进行综述。
作者：翁宇航；龙孝斌 刊期： 2015年第01期
目的：探讨一种适宜耳蜗组织贴壁培养的方法。方法 PET滤膜预先置入层粘连蛋白、鸟氨酸、胎牛血清按2：2：1比例混合均匀的液体中在4℃预孵过夜，选取出生四天的C57BL/6J小鼠作为研究对象。剥取基底膜以PET滤膜作为承载介质培养在加入含青霉素的培液中，48小时后收取样本，进行免疫荧光（一抗goat anti-otoancorin、mouse anti-beta tubu?linⅢ及对应二抗采用cy3 donkey anti goat，647 donkey anti mouse，染核试剂DAPI，phalloidin)观察不同部位细胞，扫描电镜及制备原位超薄切片透射电镜观察体外培养新生小鼠基底膜内外毛细胞、螺旋缘内细胞、螺旋神经元细胞显微结构的改变。结果耳蜗基底膜在PET膜上贴附生长良好。各种细胞的微小结构和超微结构保持正常状态。结论PET滤膜能作为一种新颖的承载基底膜培养的介质。
作者：刘永泽；周函；麻晓峰；马登滨；高下 刊期： 2015年第01期
耳蜗内的细胞连接具有高度复杂性和有序性，它们是维持耳蜗结构和听觉功能的必要条件。本文将对耳蜗内的细胞连接蛋白进行分类，并简要综述连接蛋白在耳蜗中的功能和作用。
作者：王博；胡博华；杨仕明 刊期： 2015年第01期
CRISPR( Clustered regularly interspaced short palindromicrepeats)/Cas( CRISPR-associated)系统是新一代的靶向基因组编辑技术系统，其突出特征是Cas蛋白，其通过gRNA( guide RNA)的引导下对外源性的DNA进行靶向切割，从而为细菌入侵核酸提供了免疫力。由CRISPR/Cas系统介导的基因靶向修饰技术成功地应用于多种细菌及多种生物的基因组靶向修饰，对人类基因组DNA的靶向修饰也已经得到了证实，并且CRISPR/Cas系统与以往技术相比在很多方面显示出了的优点。CRISPR/Cas系统在遗传缺陷疾病动物模型的建立技术中已经占有重要地位，而各种类型基因修饰动物模型是目前内耳基因功能、聋病分子机制研究的理想方法和必备条件。随着耳聋的遗传学研究不断深入，诊断水平的不断提高，对遗传性耳聋动物模型的需求也不断增多，CRISPR/Cas系统介导的基因组靶向修饰技术也会不断完善，该技术将在耳聋的遗传学研究和诊断治疗等多领域发挥更大作用。
作者：段宏；袁慧军 刊期： 2015年第01期
目的：探讨水杨酸钠对大鼠耳蜗螺旋神经节神经元（SGN）GABAa受体的作用。方法采用全细胞膜片钳记录技术，观察离体培养大鼠SGN的GABAa受体激活电流的特性及水杨酸钠对其作用特点。结果在SGN上可记录到GABAa受体激动剂GABA诱发的内向电流，该电流呈浓度依赖性且可被荷包牡丹碱所阻断；水杨酸钠作用在SGN上未诱出电流，100μM、500μM的GABA与不同浓度的水杨酸钠(500μM、1000μM、5000μM)分别联合作用时，GABA诱发的电流可被不同程度地抑制，且该抑制作用呈可逆性。结论大鼠SGN上可记录到GABAa受体电流，且水杨酸钠以浓度依赖的方式可逆性抑制GABAa受体电流，抑制作用与GABA浓度有关。
作者：蔡正；姚晨；陈慧英；黄志辉；覃继新；苏纪平 刊期： 2015年第01期
谈到眩晕症状的国际分类，先要介绍国内常用的眩晕分类[1]。首先是根据解剖部位或病变器官分类：1、DeWeese分类法，分为前庭系统性眩晕（或称系统性眩晕）；非前庭系统性眩晕（或非系统性眩晕）。2、Edward分类法，将眩晕分为颅内和颅外两大类。3、根据病变器官分类，可分为耳源性、血管性、中枢性、颈性和视性等。其次，根据眩晕性质分类，如Hojt-Thomas将眩晕分为真性眩晕和假性眩晕。前者是由眼、本体觉或前庭疾病引起，有明显的外物或自身旋转感；后者多由全身系统性疾病引起，如心脑血管、贫血、内分泌疾病及精神-心理因素所致。目前，国内较多采用既有解剖部位又有疾病性质的分类：1、前庭系统性眩晕（前庭外周性眩晕、前庭中枢性眩晕）；2非前庭性眩晕（眼源性、本体感觉性、全身疾病性和颈源性眩晕）。所有这些分类，都不完美，需要结合目前的学科进展加以改进和完善。完善的基本前提是把眩晕症诊治的核心前庭症状进行明晰的分类和解释。
作者：吴子明；张素珍 刊期： 2015年第01期
目的：分析讨论先天性前庭窗缺如或闭锁的影像学诊断技术及个性化手术方法。方法采用高分辨率CT(High resolution CT, HRCT)、后期多平面重组（Multi-plane reformation, MPR)技术对2010.7-2014.8临床上表现为自幼传导性耳聋、外耳道鼓膜正常、鼓室压图为“A”型曲线、盖莱试验阴性的患者进行筛选诊断，并进行外科听力重建手术。结果术前HRCT及MPR影像诊断为先天性前庭窗畸形6例（耳）、先天性镫骨底板固定2例（耳），经术中探查证实为前庭窗、镫骨及面神经畸形，其中6例以TORP或Piston进行个性化听力重建。结论 HRCT冠状位及MPR可较好的显示前庭窗、镫骨及面神经的畸形，尤其是对固定的镫骨底板及前庭窗闭锁骨板的区分；对于前庭窗闭锁且被面神经完全覆盖的病例，鼓岬开窗不失为一种有效的方法，目前国内外文献尚未见此技术的报告。
作者：杨凤；刘阳；孙建军；宋任东；李进让 刊期： 2015年第01期
《耳组织学》由孙建和、杨仕明教授等撰写，汇集了国内外几十年来的耳科科研成果，共30章，以耳组织学研究为中心，详细阐述了耳各部分组织结构、形态、成分及相应的生理功能，重点介绍了外耳、中耳的鼓室、咽鼓管及耳蜗的组织结构、血管分布和神经支配，耳蜗迷路、螺旋器，耳蜗骨架结构和生物化学成分，外毛细胞动力蛋白、神经递质、膜性结构、液体腔隙及听觉感受机制，前庭迷路、位觉斑、位觉砂、壶腹嵴及前庭血管分布、神经支配、内淋巴管和内淋巴囊的组织结构；并介绍了近年来国内外在耳发育方面的新研究成果及耳组织相关研究技术。《耳组织学》因其精准的描述和丰富的图片，令人耳目一新。本书从细胞、亚微、超微和分子水平阐述耳的各部分结构，使我们在认识和了解耳的组织结构和功能方面积累了丰富的知识，对医学生，研究生，解剖学、组织学和耳鼻咽喉科专业人员具有重要的参考价值。
作者： 刊期： 2015年第01期
内耳离体培养在研究内耳细胞功能、内耳组织发育再生、细胞损伤退化等方面具有重要价值。但由于内耳的组织结构微小复杂，其取材和培养具有较大难度，使该技术的普及和应用受到一定限制。本文在简要点评不同内耳离体培养方法优劣的基础上，结合本实验室多年来积累的实践经验，详细介绍了新生大鼠各个内耳终器取材及培养的具体步骤。从解剖迷路到分离终器，从凝胶制备到标本铺放，都有详细的操作指南，本文还针对各环节中的技术动作和关键事项进行了具体探讨并配以指导图例，希望这些内容能够弥补以往文献中抽象简略的条款式步骤所造成的实验困难，为开展内耳器官培养研究的初学者提供一定的帮助。
作者：于进涛；丁大连；李鹏；高可雷；蒋海燕；孙虹；Richard J. Salvi 刊期： 2015年第01期
目的：探讨内窥镜下耳道途径改良夹层法修补鼓膜穿孔的临床效果，并介绍临床手术要点及技巧。方法回顾性分析笔者所在医院应用内窥镜下耳道途径改良夹层法修补鼓膜穿孔的61例（64耳）患者的病历资料。结果61例（64耳）患者随访6～24个月，术后无耳闷、耳鸣加重、眩晕、气骨导听力下降等。术后1-3个月内复查3耳再度穿孔，61耳穿孔修补成功，穿孔愈合率95.3%，修补成功病例术后6个月以上复查未见再穿孔、鼓膜内陷、粘连及前部钝角愈合情况，患者诉无听力下降等。术后3-6个月纯音测听示患者听力改善率达95.3%。结论适应证选取得当，内窥镜下耳道途径改良夹层法鼓膜穿孔修补术操作简单，损伤小，鼓膜愈合率高，听力改善较明显，值得临床推广。
作者：牟珊；张勤修；梁方琪 刊期： 2015年第01期
目的：我们设计了一种新颖的治疗眩晕低频旋转乳突振动设备，本研究是为了评估该设备对听觉系统的安全性。方法选12名无眩晕主诉的志愿者，男性10例，女性2例，年龄23-25岁。将低频振动投放于右侧乳突，分别于振动前、振动后0.5小时、7天、和1年行纯音听阈检测，分析比较双耳的不同频率气、骨导阈值的变化。结果受试者双耳在低频振动后0.5小时的，右耳（暴露耳）在0.25、0.5、1.0 kHz骨导听阈分别降低了3、5、3 dB，有显著性差异（p＜0.05），气导阈移无显著性差异；振动后7天，左耳（对照耳）在0.25、0.5 kHz气导听阈分别提高了3、2 dB，有显著性差异（p＜0.05）；振动后1年右耳在0.25、0.5、8kHz气导听阈分别降低了6、6、9 dB，在0.25、0.5、1 kHz骨导听阈分别升高了7、3、4 dB，均有显著性差异（p＜0.05），左耳在2、4、8 kHz气导听阈分别提高了6、6、10 dB，在0.25、0.5、1、2、4kHz骨导听阈分别升高了7、6、6、8、8 dB，均有显著性差异（p＜0.05）。结论振动后0.5小时及7天的听阈变化无规律，且数值小，无临床意义；1年后的左耳听阈升高6-10 dB，右耳低频气导听阈降低，低频骨导听阈提高，不符合振动引起的特异性改变，因此，该治疗眩晕的低频乳突振动设备对听觉系统是安全的。
作者：彭日顺子；郑贵亮；张青；郑宏良；邹静 刊期： 2015年第01期
听神经病的临床听力学特征主要表现在具有正常的耳蜗感受器电位和异常的听性脑干反应波形以及对语言的理解障碍，其病理学改变部位被确定是在周边听觉系统，主要表现在内毛细胞缺损、听神经末梢破坏、听神经纤维脱髓鞘病变、螺旋神经节细胞缺损，或上述一个或几个部位同时发生病变。本文介绍了模拟听神经病的各种实验动物模型，其中包括模拟单纯内毛细胞缺损的Slc19a2基因缺陷小鼠和Ggt1基因缺陷小鼠实验模型；模拟单纯Ⅰ型传入神经末梢损害的谷氨酸盐实验模型；模拟单纯脱髓鞘病变的甘油实验模型；模拟Ⅰ型螺旋神经节及其神经纤维损害的乌苯酐实验模型和免疫性疾病损害模型；模拟单纯神经纤维脱髓鞘病变的胆红素实验模型和髓鞘缺陷仓鼠模型；模拟单纯听神经近端脱髓鞘病变的阿霉素模型和压力夹伤听神经实验模型；以及模拟整个周边听觉系统全程病变的卡铂南美栗鼠实验模型。这些实验模型可以分别用于模拟听神经病的一种或几种临床表现及病变特征的实验研究。
作者：李鹏；丁大连；曾祥丽；Richard Salvi 刊期： 2015年第01期
目的：介绍几种在大鼠耳科实验研究中常用的手术方法。方法将大鼠麻醉后，根据不同的实验需求，分别演示经耳后切口的后鼓室径路、经耳上切口的上鼓室径路、经颈部腹侧切口的下鼓室径路、经颈部背侧切口的枕后径路等手术方法。结果通过不同的手术径路可从不同的角度暴露大鼠的中耳和内耳，为引导耳蜗生物电反应的各种耳蜗电极置放、经圆窗膜转染或置药、药物经耳蜗外淋巴腔灌流、耳蜗内淋巴腔灌注、听骨链中断、以及内淋巴囊手术破坏等各种不同实验目的提供佳手术方案。结论根据大鼠颞骨解剖特点，选择不同的中耳内耳手术径路，可以为实现不同的实验目的服务，对实验成功提供技术保障。
作者：李鹏；丁大连；高可雷；Richard Salvi 刊期： 2015年第01期
目的：探讨一个鳃-耳综合征家系的表型特征，进行候选致病基因的突变筛查。方法经知情同意，对调查对象进行全身检查以及听力学和颞骨CT评估，获得血样标本；整理分析家系资料并绘制系谱图；用基因组DNA提取试剂盒提取外周血DNA，进行鳃-耳-肾综合征相关基因EYA1、SIX1和SIX5全编码外显子的序列分析。结果该家系共4代31人，7人具有鳃-耳-肾综合征相关症状，系谱分析符合常染色体显性遗传特征。6名患者主诉听力下降，为常见临床表现，其它症状有耳前瘘管2人次、鳃裂瘘3人次和耳廓畸形4人次，均无肾脏畸形表现。2名患者纯音听力图示双耳混合性聋，颞骨CT检查见中耳和内耳发育异常，候选致病基因筛查均检测到EYA1 c.922C>T突变。结论该家系表型特征符合鳃-耳综合征诊断，但家系内患病个体间临床表现具有异质性。EYA1 c.922C>T突变是本家系致病的主要分子基础。
作者：邹明臻；朱红美；魏钦俊；陈智斌；曹新；邢光前 刊期： 2015年第01期
目的：采用分子生物学技术方法探讨胆红素诱导神经母瘤细胞（SH-SY5Y）凋亡和茵陈水提物（Yincheng extract, YCE）的保护机制。方法噻唑蓝（MTT）观察茵陈提取物对SH-S5Y5细胞增殖影响，Western blotting观察NF-KB蛋白核质分布，免疫荧光显微镜观察JC-1探针标记线粒体电位变化，流式细胞仪Annexin-FITC/PI观察细胞凋亡，荧光定量PCR观察IL-1β、TNF-α变化。结果茵陈提取物浓度的时间依赖性提高胆红素对细胞增殖的抑制作用（p<0.05）。胆红素促进NF-KB核转移，茵陈提取物抑制NF-KB核转移。免疫荧光显微镜观察到胆红素处理组与正常组对比线粒体膜电位明显降低（p<0.05）表现早期凋亡特性。茵陈提取物抑制线粒体膜电位降低（p<0.05）。流式细胞Annexin-FITC/PI结果显示，胆红素诱导细胞凋亡，YCE保护胆红素诱导的凋亡。荧光定量PCR结果显示茵陈提取物抑制NF-KB转录因子调控的炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α基因的表达（p<0.05）。结论胆红素明显诱导SH-S5Y5细胞凋亡，YCE能有效抑制NK-KB激活和抑制线粒体膜电位变化，呈现多靶点抑制胆红素诱导的细胞凋亡。
作者：张奕；梁勇；李鹏；符秋养；刘钊；李琦；张威；杨衬 刊期： 2015年第01期
中华耳科学杂志
主管:解放军总医院
主办：解放军总医院耳鼻咽喉科研究所
