学术投稿

MMP-26基因siRNA真核表达载体的构建及鉴定

张扬;王建伟;蔺勇;房学迅;李才

关键词:MMP-26, RNA干扰, 质粒
摘要:目的 构建基质金属蛋白酶-26(MMP-26)小干扰RNA(siRNA)表达质粒,以研究其对人肿瘤细胞MMP-26基因表达的沉默效果,探索肿瘤基因治疗的新途径.方法 根据MMP-26基因mRNA序列,设计有小发夹结构的3条寡核苷酸序列,克隆到空载体pSUPERIOR.puro中,构建重组质粒,同时设计构建分别针对GFP和β-actin的干扰质粒作为阴性对照和阳性对照,并进行酶切鉴定和测序分析.结果 酶切及测序证实重组质粒构建成功.结论 利用RNA干扰(RNAi)技术可成功构建siRNA表达载体.
中国实验诊断学杂志相关文献
  • 血清结合PSA与总PSA及比值在前列腺癌诊断中的应用研究

    近年来,前列腺癌(PCa)的发病率在我国呈上升趋势,检测血清总前列腺特异性抗原(TPSA)已成为公认的临床上筛查、诊断和检测前列腺癌发生、发展的重要手段.常见的良性前列腺增生(BPH)血清TPSA亦可升高,尤其在诊断灰色区域(TPSA处于4.0-10.0μg/L)时,PCa检出率仅为25.4%,TPSA为10.0-20.0 μg/L时检出率为37.7%[1].研究表明,血清中TPSA70%-90%以较稳定的结合PSA(CPSA)形式存在,10%-30%的游离PSA(fPSA)稳定性差,半衰期短,且受多种因素影响,CPSA以其优势已渐成为具有较高临床价值的诊断PCa的重要指标.本文检测214例PCa和BPH患者血清TPSA、CPSA,并计算C/T值,以探讨分析TPSA、CPSA、C/T在诊断PCa尤其是PCa与BPH的鉴别诊断中的价值作用.结果报告如下:

    作者:吕世华;王培麟;黎毓光;王莉 刊期: 2006年第10期

  • 小肠Dabska瘤1例并文献复习

    小肠Dabska瘤是极罕见的低度恶性肿瘤,现报告1例并作文献复习.1临床资料1.1患者男性,47岁.因无明显诱因出现黑便3个月伴下腹疼痛1周,于2004年8月10日门诊以盆腔肿物收入院.

    作者:陈立平;王玉欣;高洪文;姚敏 刊期: 2006年第10期

  • 胆红素在老年冠心病患者诊断中的参考价值

    近年来,大量临床观察,血清胆红素的轻度升高是一种健康指标,这与多年来血红素分解代谢中有关胆红素只是一种毒性废物的传统看法有所区别.本文从对2002-2004年我院对老年冠心病人群、健康人群进行了观察,现将结果分析如下.

    作者:孙阳;赵喜斌;侯毅锐 刊期: 2006年第10期

  • 慢性肾炎患者外周血CD146的表达

    目的 探讨慢性肾炎患者外周血CD146表达的意义.方法 用ELISA方法(酶联免疫吸附实验)检测11例慢性肾炎患者与10例正常人外周血CD146的表达.结果 慢性肾炎患者外周血CD146表达(425.68±87.84ng/ml)明显高于正常对照组(268.85%±70.90ng/ml),P<0.01;CD146表达与尿蛋白定量的相关系数为0.08,P>0.05.结论 慢性肾炎患者存在CD146的高表达,但与尿蛋白定量并无相关性.

    作者:王锋;汪年松;晏春根;倪培华 刊期: 2006年第10期

  • 巨幼细胞性贫血及骨髓增生异常综合征病态巨核细胞和多小核巨核细胞核象的观察

    巨幼细胞性贫血(简称MA)及骨髓增生异常综合征(简称MDS)病人骨髓象均可见病态造血现象,如多小核巨核细胞作为分化较好的病态巨核细胞均可在这两病中出现,但我们发现在病态巨核细胞的类型和多小核巨核细胞核象的变化上,各有特征和不同.现将我们观察的结果作一报告.

    作者:范贤斌;徐志;卢兴国 刊期: 2006年第10期

  • 丙戊酸联合HA14-1诱导Bcl-2高表达的白血病细胞株BALL-1凋亡

    目的 观察体内外丙戊酸(VPA)和HA14-1联合应用对Bcl-2高表达的白血病细胞的杀伤效能及对外周血象的影响.方法 (1)将BALL-1分为空白对照组、1 mmol/L VPA组、5 mmol/L VPA组、15 mmol/L VPA组,作用72 h,流式细胞仪检测各组细胞凋亡结果;(2)将BALL-1分为对照组、VPA组、HA14-1组、VPA+HA14-1组,作用后流式细胞法检测各组凋亡率;(3)每组6只NOD/SCID鼠在每只鼠接种1×107/0.2mlBALL-1后24h按如下分组进行实验:①对照组;②HA14-1组,经尾静脉注射灭菌HA14-125 mg·kg-1·d-1,共7天;③VPA组,注射灭菌VPA 250 mg·kg-1·d-1,共7天;④HA14-1+VPA组,注射灭菌HA14-125mg·kg-1·d-1,4小时后再注射灭菌VPA250mg·kg-1·d-1,共7天.记录各组小鼠的存活时间.(4)将普通小白鼠共24只按(3)方法进行分组,比较几组普通小鼠的生存率、存活时间,及外周血细胞计数.结果 (1)VPA15 mmol/L作用72 h BALL-1凋亡率为(24.8±2.8)%,与其它3组比较P<0.01;另3组之间比较P>0.05.(2)HA14-1组、VPA组凋亡率分别为(4.6±0.1)%、(4.8±0.5)%,与对照组比较,P>0.05.HA14-1+VPA组凋亡率高达(76.5±6.9)%,与另3组比较P<0.01.(3)HA14-1+VPA组小鼠生存天数为(87.5±4.5)天,显著长于其他3组,而其他3组之间无差异.(4)HA14-1单独作用组和HA14-1与VPA联合作用组表现为白细胞与血小板轻微而短期下降,而小鼠的生存率、存活时间无显著性差异.结论 HA14-1与VPA联合用药,可克服Bcl-2高表达造成的对VPA的抗性.

    作者:薛红漫;李文益;孟哲;李晓圆;张金华 刊期: 2006年第10期

  • MMP-26基因siRNA真核表达载体的构建及鉴定

    目的 构建基质金属蛋白酶-26(MMP-26)小干扰RNA(siRNA)表达质粒,以研究其对人肿瘤细胞MMP-26基因表达的沉默效果,探索肿瘤基因治疗的新途径.方法 根据MMP-26基因mRNA序列,设计有小发夹结构的3条寡核苷酸序列,克隆到空载体pSUPERIOR.puro中,构建重组质粒,同时设计构建分别针对GFP和β-actin的干扰质粒作为阴性对照和阳性对照,并进行酶切鉴定和测序分析.结果 酶切及测序证实重组质粒构建成功.结论 利用RNA干扰(RNAi)技术可成功构建siRNA表达载体.

    作者:张扬;王建伟;蔺勇;房学迅;李才 刊期: 2006年第10期

  • γ-干扰素含量测定对结核性胸膜炎的诊断价值

    目的 检测结核性胸膜炎及恶性胸膜炎患者血清与胸水中γ-干扰素(IFN-γ)水平,探讨IFN-γ对结核性胸膜炎诊断及鉴别诊断的临床价值.方法 采用双抗体夹心酶链免疫吸附法检测40例结核性胸膜炎、40例恶性胸膜炎患者血清及胸水和40例健康对照组血清的IFN-γ水平;应用受试者工作特征曲线评价IFN-γ在结核性胸膜炎诊断中的价值.结果 ①结核性胸膜炎组与恶性胸膜炎组胸水中IFN-γ浓度分别为(448.96±191.97)pg/ml和(47.77±27.67)pg/ml,结核性胸膜炎组的IFN-γ浓度水平显著高于恶性胸膜炎组(P<0.01);结核性胸膜炎组与恶性胸膜炎组血清中IFN-γ浓度分别为(42.63±18.35)pg/ml和(38.43±18.80)pg/ml,与健康对照组血清中IFN-γ浓度(39.19±17.96)pg/ml比较无显著差异(P>0.05).②受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析结果,IFN-γ在结核性胸腔积液诊断中的佳临界值是145.9 pg/ml,敏感性、特异性、准确性分别为92.5%、100%和93%.结论 IFN-γ在结核性胸膜炎诊断中有重要的作用,可为临床鉴别结核性和恶性胸腔积液提供有效的参考指标.

    作者:赵云虹;冯丽娜;王琦;庞玉林 刊期: 2006年第10期

  • 定量感觉检查概述

    过去,临床医生和科研人员依靠临床神经查体和传统的神经传导速度等来评估、研究感觉神经的功能.然而,临床神经查体难以对感觉神经的功能定量化,神经传导速度只能用于评估粗大有髓神经纤维的功能.因此,需要有不同的检查工具来定量化的评估感觉神经,尤其是细小有髓和无髓神经纤维的功能.

    作者:王百辰;丁美萍 刊期: 2006年第10期

  • 大鼠小体积原位肝移植模型的建立

    目的 探讨建立大鼠小体积肝移植模型的方法.方法 根据SD大鼠各肝叶/全肝重比例设计大鼠不同比例小体积供肝.用原位肝叶切除法获得小体积供肝移植给相同或相近体重的大鼠.供肝植入用双袖套法.共行大鼠50%小体积肝移植150例.结果 本组大鼠3 d和7 d存活率分别为88%(132/150)和81.3%(122/150).并发症包括:下腔静脉血栓6例,门静脉血栓3例,门静脉扭曲3例,肝上下腔静脉吻合口狭窄3例,肝上下腔静脉吻合口渗血6例,胆漏5例,腹腔感染2例.结论 基于SD大鼠各肝叶/全肝重比例的原位肝叶切除法是获取大鼠不同比例小体积供肝的理想方法.熟练的显微外科技术和细致的操作是成功制作大鼠小体积肝移植模型的关键.

    作者:汪根树;陈规划;朱晓峰 刊期: 2006年第10期

  • 64例心肌桥病变的临床分析

    冠状动脉及其分支正常情况下主要走行于心外膜下脂肪组织或心外膜的深面,有时可被心肌部分覆盖,走行于心肌内的冠状动脉于心肌收缩期受挤压,造成管腔不同程度的一时性狭窄甚至完全闭塞,该部分冠状动脉即为壁冠状动脉,该部分心肌纤维称心肌桥.近年来,随着医学界对心肌桥认识的不断加深,心肌桥的临床检出率不断增多.本文分析了首都医科大学附属北京友谊医院2000-2005年通过选择性冠状动脉造影检出的心肌桥病例64例的临床特点.

    作者:王萍;王宇朋 刊期: 2006年第10期

  • 儿童网织红细胞参数参考范围调查及临床应用

    近几年来许多高端血液分析仪都配置了自动检测网织红细胞参数的功能,但这些新参数的临床的应用价值有待进一步的研究.我国目前对成年人网织红细胞各参考范围调查研究已有报道[1,2],而对正常儿童网织红细胞参数参考范围的研究尚未见报道.为此,我们检测了264例儿童的外周血,对其网织红细胞各参数进行了统计分析,现将结果报告如下.

    作者:戈建军;王晓卫;戈萱 刊期: 2006年第10期

  • 糖尿病肾病发病的相关因素和早期诊断指标分析

    目的 分析糖尿病肾病(DN)发病的相关因素和早期诊断指标.方法 应用多因素logistic回归,分析412例糖尿病肾病患者的血浆凝血酶原激活物抑制剂1(PAI-1)与24小时的尿白蛋白(uAlb),α1-微球蛋白(α1-MG),β2-微球蛋白(β2-MG),TH糖蛋白(THP)的相关性.结果 T2DM患者血浆PAI-1与UAE、α1-MG呈显著正相关(r=0.62和r=0.52,P均<0.01),与THP呈显著负相关(r=0.30,P<0.01).结论 血浆PAI-1与UAE、α1-MG、β2-MG、THP等反映肾脏不同病变部位的指标联合应用,可更准确诊断早期DN,监测其发展.

    作者:周文华;罗从娟;卞淑芬 刊期: 2006年第10期

  • 大鼠胚胎肝干细胞的分离方法比较

    目的 比较两种体外分离培养原代大鼠胚胎肝干细胞(EHSCs)方法,并对其进行鉴定.方法 用胶原酶灌注法及剪碎消化法分离不同年龄的大鼠胚胎肝干细胞,用含10%优等胎牛血清的H-DMEM培养液培养.利用免疫细胞化学方法在激光共聚焦扫描显微镜下观察该细胞表面抗原的表达情况,进行鉴定.结果 两种方法分离的大鼠胚·胎肝干细胞体外培养24 h贴壁,5 d左右可长成单层,光镜下为致密圆形细胞,边缘清楚.8 d后细胞铺展,呈上皮样.表达甲胎蛋白(AFP)抗原、细胞角蛋白(CK)18、19.结论 所分离的细胞经鉴定为大鼠胚胎肝干细胞,可在体外培养条件下迅速扩增,两种方法所分离培养的肝细胞形态基本一致.

    作者:胡小波;曲丽梅;李玉林 刊期: 2006年第10期

  • 骨关节炎中软骨细胞CD80/CD86的表达

    目的 骨关节炎(osteoarthritis,OA)是常见的一种慢性退行性骨关节疾病.近年的研究显示骨关节炎不但是一种退行性疾病,而且是一种关节内的炎症反应.通过检测OA软骨细胞CD80/CD86的表达情况,探讨软骨细胞在OA发病中的作用.方法 收集10例膝关节骨关节炎患者软骨标本为病例组,同时收集8例股骨颈骨折患者软骨标本为正常对照组.进行软骨细胞培养和流式细胞技术,检测软骨细胞CD80/CD86的表达情况.进行统计学分析.结果 病例组软骨细胞表达CD80的阳性细胞百分率(2.47%±0.59%)比正常对照组软骨细胞(0.94%±0.25%)高(P<0.01).病例组软骨细胞表达CD86的阳性细胞百分率(1.71%±0.71%)比正常对照组软骨细胞(0.93%±0.47%)高(P<0.01).结论 CD80/CD86在骨关节炎患者软骨细胞中表达增加,做为抗原提呈细胞的标志分子,提示软骨细胞在骨关节炎中发挥抗原提呈作用.

    作者:许晓东;刘爱华;常乃柏;黄慈波 刊期: 2006年第10期

  • 白血病基因诊断及其信息系统建立

    目的 用基因诊断技术对白血病分型诊断及微小残留病(MRD)监控,同时对所检测数据建立信息系统.方法 巢式RT-PCR扩增急髓性白血病融合基因,PCR扩增急性淋巴细胞白血病基因重排,用Delphi程序设计信息系统.结果 M2b型白血病能扩增出AML1/ETO融合基因;M3型白血病能检测出L型和S型融合基因;慢粒白血病可检测出b3a2和b3a2融合基因;急淋白血病可检测出IgH、TCRγ、TCRδ基因重排.结论 基因诊断能有效进行白血病分型及MRD监控,信息系统的建立方便了检测信息的管理及查询.

    作者:孙新六 刊期: 2006年第10期

  • CD7阳性急性髓细胞白血病免疫表型及临床特点分析

    随着系列单克隆抗体的应用,白血病细胞免疫分型的广泛开展及其研究的深入,伴CD7抗原表达的急性髓细胞白血病不断被发现.有学者认为CD7阳性急性髓细胞白血病(CD7+AML)是一类独特的急性髓细胞白血病亚型,具有不伴有CD7抗原表达的急性髓细胞白血病不同的临床特点、生物学特征与预后[1,2].本文对56例AML进行免疫表型及临床特点进行分析,旨在探讨CD7+AML免疫表型及临床特点.

    作者:林慧君;吴建国;吴茅;吴育佳 刊期: 2006年第10期

  • 基质金属蛋白酶及其抑制剂与角膜病变

    细胞外基质(ECM)是细胞的支架结构,在细胞生长、分化、迁移、粘附、增殖等过程中发挥重要作用.机体的生长发育和许多病理过程与细胞外基质的破坏和重塑密切相关.基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一组结构功能同源的内肽酶家族,能降解细胞外基质多种蛋白成分.基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)为MMPs特异抑制物.两者的调节失衡可导致眼部组织一系列病理生理改变.本文就MMPs与TIMPs在角膜病变中的作用和意义加以综述.

    作者:毛永侠;谷树严 刊期: 2006年第10期

  • 荧光定量PCR检测大肠癌患者外周血CK19mRNA、CK20mRNA和CEAmRNA的意义

    目的 探讨荧光定量PCR技术检测大肠癌患者外周血CK19mRNA、CK20mRNA和CEAmRNA的临床意义.方法 采用荧光定量PCR技术,检测大肠癌患者76例,健康志愿者30例外周血CK19mRNA、CK20mRNA和CEAmRNA水平.结果 76例大肠癌患者外周血CK19mRNA的水平为5 962.5±19926.1 copies/ml,其中38例阳性,阳性率为50.0%;CK20mRNA的水平为6 244.3±15 113.1 copies/ml,其中28例阳性,阳性率为36.8%;CEAmRNA的水平为7 377.0± 26 281.5 copies/ml,其中36例阳性,阳性率为47.4%.对照组30例未见表达.单项检测阳性率较低,联合其中二项检测阳性率较高,联合三项阳性率可达68.4%.结论 外周血CK19mRNA、CK20mRNA和CEAmRNA可作为大肠癌微转移辅助诊断指标,联合二至三项指标有较高的检出率,定量检测有助于大肠癌微转移的监测.

    作者:李招云;戴岳楚;张黎明;吴晓宇 刊期: 2006年第10期

  • 表达降钙素基因相关肽的单纯疱疹病毒I型扩增子载体免疫效果观察

    目的 探讨重组pUPO-△γ134.5-CGRP扩增子对免疫系统的作用.方法 用重组扩增子感染BALB/C小鼠,分离血清及淋巴细胞,流式细胞仪法、免疫组化法、LDH法、分别检测外周血CD4、CD8分类、TCR、NK细胞、CTL细胞以及LAK细胞活性杀伤活性.结果 重组扩增子明显增强了机体的免疫力.结论 该重组扩增子具有增强机体免疫力的作用.

    作者:吴军;张海鸥;陈玉丙;周芬莉;李珂静 刊期: 2006年第10期

中国实验诊断学杂志

中国实验诊断学杂志

主管:中华人民共和国教育部

主办:吉林大学中日联谊医院 上海交通大学医学院附属瑞金医院