学术投稿

直接贴壁法体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞

方晓;王康康;高维陆;张辉;尹宗生

关键词:内皮祖细胞, 骨髓, 直接贴壁法, 密度梯度离心法
摘要:取90 g SPF级SD大鼠的双后肢骨髓,分别使用直接贴壁法和密度梯度离心法获得大鼠骨髓单个核细胞,用内皮培养体系EGM-2培养基进行定向诱导分化7~14 d获得大鼠内皮祖细胞。免疫荧光染色和细胞功能学鉴定内皮祖细胞,观察内皮祖细胞出现的时间和数量, CCK-8法鉴定细胞的增殖能力。与密度梯度离心法相比,直接贴壁法在内皮祖细胞出现的时间、数量和增殖能力差异有统计学意义(P<0.01)。因此,相对于密度梯度离心法,直接贴壁法培养出的内皮祖细胞分化时间更短、数量更多且增殖能力更强。
安徽医科大学学报杂志相关文献
  • 氯化锂抑制丙泊酚诱导原代培养神经元凋亡

    目的:探讨氯化锂对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法体外原代培养7d的大鼠皮层神经元,用 MTT 法检测不同浓度氯化锂(0.1、1、5、10μmol/L)单独作用皮层神经元12 h后神经元存活率的变化。神经元随机分为6组:溶剂对照组(给予等容积的20%脂肪乳),丙泊酚组(终浓度为500μmol/L),氯化锂+丙泊酚组(氯化锂终浓度分别为0.1、1、5、10μmol/L,丙泊酚终浓度为500μmol/L),药物处理12 h后,MTT法检测神经元存活率的变化,Hoechst33258核染色法和流式细胞仪检测神经元调亡,Western blot 法测定神经元磷酸化糖原合成酶激酶-3β( pGSK-3β)和裂解半胱天冬酶-3( cleaved-Caspase-3)蛋白水平。结果与溶剂对照组比较,不同浓度氯化锂单独作用神经元12 h后,神经元存活率未见显著变化。与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元存活率显著下降(P<0.01),神经元凋亡率显著增加(P<0.01),pGSK-3β蛋白水平显著下降(P<0.01), cleaved-Caspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01)。与丙泊酚组比较,氯化锂可剂量依赖性增加神经元存活率(P <0.01),神经元凋亡率显著下降(P <0.01),pGSK-3β蛋白水平显著增加(P <0.01), cleaved-Caspase-3蛋白水平显著下降(P <0.01)。结论氯化锂可抑制丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与提高神经元pGSK-3β蛋白水平和降低cleaved-Caspase-3蛋白水平有关。

    作者:李建立;朱喜春;崔红赏;刘锐 刊期: 2016年第11期

  • 尸体与活体供肾移植术前微量淋巴细胞毒交叉配型结果及与肾移植效果的关系

    回顾性分析同期完成的尸体与活体供肾移植术前微量淋巴细胞毒( CDC)交叉配型实验检测结果与术后临床效果的内在关系。尸体供肾移植组术前CDC检测结果相对于活体供肾移植组显著增高(P<0.05),术后受者死亡/肾丢失、排斥反应/延迟恢复发生率,尸体供肾移植组显著高于活体供肾移植组( P <0.05)。移植后在出现受者死亡/肾丢失、排斥反应/延迟恢复以及肺部感染这些不良事件时,尸体供肾移植组CDC检测结果在9%以上或者活体供肾移植组在4%以上的占比均显著高于未发生临床不良事件,两种不同来源的肾脏移植都应尽可能的选择术前CDC检测结果偏低的受者进行移植。

    作者:钟涛;廖贵益;许伟;程越;胡海亮;张循善;卞茂红 刊期: 2016年第11期

  • 直接贴壁法体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞

    取90 g SPF级SD大鼠的双后肢骨髓,分别使用直接贴壁法和密度梯度离心法获得大鼠骨髓单个核细胞,用内皮培养体系EGM-2培养基进行定向诱导分化7~14 d获得大鼠内皮祖细胞。免疫荧光染色和细胞功能学鉴定内皮祖细胞,观察内皮祖细胞出现的时间和数量, CCK-8法鉴定细胞的增殖能力。与密度梯度离心法相比,直接贴壁法在内皮祖细胞出现的时间、数量和增殖能力差异有统计学意义(P<0.01)。因此,相对于密度梯度离心法,直接贴壁法培养出的内皮祖细胞分化时间更短、数量更多且增殖能力更强。

    作者:方晓;王康康;高维陆;张辉;尹宗生 刊期: 2016年第11期

  • 重组抗人表皮生长因子受体人源化单克隆抗体注射液对Bcap37人乳腺癌细胞生长的抑制作用

    目的:观察重组抗人表皮生长因子受体人源化单克隆抗体注射液(MIL41)对Her2高表达人乳腺癌细胞体内外的抑制作用。方法通过流式细胞仪分析人乳腺癌细胞Bcap37中Her2受体的表达量, CCK8法测定MIL41在体外对乳腺癌细胞Bcap37生长的抑制作用;在体内研究中采用人乳腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立评价MIL41对肿瘤生长的抑制作用。结果体外实验表明 Bcap37为 Her2受体过表达的人乳腺癌细胞, CCK8法检测结果显示MIL41对受试细胞Bcap37的生长有较强抑制作用。体内实验表明受试药MIL41对受试的人乳腺癌细胞Bcap37的裸鼠皮下移植瘤的生长有明显的抑制效应,同时呈现出良好的浓度依赖关系。分别给予3、6、12 mg/kg不同浓度的受试药,其瘤体积抑制率分别为33.7%、47.8%、59.0%,瘤重抑制率分别为29.6%、44.7%、55.6%。结论 MIL41对Bcap37人乳腺癌细胞在体内外的生长有较强的抑制作用。

    作者:曹玉婷;王珊珊;杨德宣;李琳娜;袁守军 刊期: 2016年第11期

  • 人参皂苷Rk3对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

    目的:研究人参皂苷Rk3对肝癌HepG2细胞凋亡影响。方法体内实验采用HepG2细胞裸鼠腋部皮下接种,制备荷瘤鼠肝癌模型,分为生理盐水组、人参皂苷Rk3(25、50、100 mg/kg)组和5-氟尿嘧啶(5-Fu,20 mg/kg)组;体外实验分为正常组、人参皂苷Rk3(20、40、80μmol/L)组和5-Fu (50μg/ml)组;MTT法检测HepG2细胞增殖;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡;RT-PCR法检测HepG2细胞中Bax、Bcl-2,cleaved-Caspase-3、DR4和 DR5 mRNA 表达;Western blot法检测HepG2细胞中 Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3、DR4和DR5蛋白表达。结果人参皂苷Rk3(100 mg/kg)够明显抑制瘤体重量( P<0.05);人参皂苷Rk3(20、40、80μmol/L )能明显抑制HepG2细胞增殖,诱导HepG2细胞凋亡;人参皂苷Rk3(20、40、80μmol/L)能显著增加Bax、cleved-Caspase-3、DR4和DR5蛋白和mRNA的表达,降低Bcl-2蛋白和mR-NA 的表达( P <0.05)。结论人参皂苷 Rk3可能通过DR4、DR5诱导HepG2细胞凋亡。

    作者:范洁;张磊;王啸 刊期: 2016年第11期

  • 子宫颈扩张双球囊在足月双胎妊娠引产中的应用

    将64例用子宫颈扩张双球囊引产的足月双胎妊娠初产妇作为研究组,将同时期随机抽取的64例以同样方法引产的足月单胎妊娠初产妇作为对照组,比较两组的引产结局。用Logistic回归分析对引产后剖宫产分娩的影响因素进行分析。两组产妇的促宫颈成熟情况、引产时间、阴道分娩率比较,差异无统计学意义;两组母儿结局比较,差异无统计学意义。 Logistic回归分析结果显示双胎妊娠不是引产后剖宫产分娩的危险因素。与单胎妊娠相比,子宫颈扩张双球囊在双胎妊娠引产中达到了相同的引产效果,且没有增加母儿不良结局,值得临床上进一步推广。

    作者:彭芳林;郑剑兰;王丽娜;汪文雁;田秀秀;张小琼;马钦玲;余水兰 刊期: 2016年第11期

  • 窄带成像技术联合放大内镜靶向活检在早期胃癌诊断中的价值

    回顾性分析67例行窄带成像技术联合放大内镜( NBI-ME)进行胃部病变检查的患者内镜资料。患者均经白光内镜检查疑为恶性病变者,后进一步行NBI-ME并靶向活检。终患者接受内镜下切除或手术切除,以术后病理结果为金标准,分析比较两次活检结果在早期胃癌诊断中的诊断准确率。终诊断胃炎1例,低级别上皮瘤变8例,高级别上皮瘤变24例,早期胃癌34例。白光内镜活检及NBI-ME靶向活检的敏感性、特异性及准确率分别为48.28%、88.89%、53.73%及72.41%、77.78%、73.13%。 NBI-ME靶向活检诊断早期胃癌的敏感性及准确率明显高于白光内镜活检(P<0.05),两者特异性差异无统计学意义(P>0.05)。诊断阳性率与性别、年龄、病变位置、肉眼分型无关。故对于白光内镜下疑似恶性病变,需结合NBI-ME进行靶向活检病理检查,有助于提高早期胃癌的检出率。

    作者:江婷婷;王亚雷 刊期: 2016年第11期

  • 经皮穴位电刺激预防开颅手术术后恶心呕吐的随机对照研究

    目的:观察内关穴联合足三里穴经皮穴位电刺激(TAES)对神经外科开颅手术患者术后恶心呕吐(PONV)发生率的影响。方法择期行开颅手术患者100例,随机分为对照组(50例)、TAES组(50例)。所有患者手术结束前静脉推注阿扎司琼10 mg,TAES组在术后电刺激双侧内关穴及足三里穴30 min。记录患者术后0~2、2~6、6~24及24 h内 PONV发生情况。结果100例患者中有92例患者完成并纳入实验。对照组和TAES组分别有24例(55.3%)和15例(33.3%)发生恶心呕吐。与对照组比较,TAES组术后0~2 h PONV的发生率差异无统计学意义,术后2~6、6~24及24 h内 PONV 的发生率降低,差异有统计学意义( P <0.05)。结论在常规治疗的基础上,内关穴联合足三里穴经皮穴位电刺激能进一步降低开颅手术患者PONV的发生率。

    作者:殷国兵;李娟;康芳;黄祥;王瑞婷 刊期: 2016年第11期

  • ILK介导Akt信号通路诱导人晶状体上皮细胞转分化的研究

    目的:研究ILK抑制剂QLT0267对转分化人晶状体上皮细胞( HLECs) E-钙黏蛋白( E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化Akt( p-Akt)和磷酸化糖原合酶激酶-3β( p-GSK3β)的影响,探讨ILK介导Akt信号通路在HLECs转分化的作用。方法选择传3代HLECs进行实验,实验分三组:TGF-β2组加入含有浓度为100 ng/L的TGF-β2培养基,ILK抑制剂组加入10 nmol/L QLT0267预处理1 h后,再加入浓度为100 ng/L TGF-β2培养基培养48 h,对照组加入无血清培养基。 Western blot法检测HLECs E-cadherin、α-SMA、p-Akt和 p-GSK3β的变化。采用免疫荧光技术检测HLECs E-cadherin、α-SMA、p-Akt、p-GSK3β的表达。结果与对照组比较,TGF-β组E-cadherin表达减弱,α-SMA、p-Akt和p-GSK3β的表达增强,差异有统计学意义。与TGF-β组比较,ILK抑制剂组α-SMA、p-Akt 和 p-GSK3β表达明显减弱,E-cadherin的表达明显增强,差异有统计学意义( F =12.325、17.686、8.547、6.812,P <0.001),QLT0267部分逆转TGF-β诱导的 HLECs α-SMA、p-Akt、p-GSK3β和 E-cad-herin的表达。结论 ILK介导Akt信号通路参与TGF-β2诱导的HLECs转分化过程,QLT0267通过特异性结合ILK,影响下游信号的传导,降低了HLECs的转分化。 ILK介导Akt信号通路可能在后囊膜混浊过程中发挥重要作用。

    作者:朱玉广;朱艳;孙宝琪;陈晨;李珺;李霞 刊期: 2016年第11期

  • 大鼠脂肪间充质干细胞体外分离培养及CM-DiI标记后的传代示踪

    目的:建立大鼠脂肪间充质干细胞( ADSCs )体外分离培养和细胞标记的方法,探讨CM-DiI标记ADSCs在体外传代示踪的可行性。方法无菌切取SD大鼠腹股沟脂肪组织,运用酶原消化并差速贴壁的方法获取原代细胞并进行传代培养。观察细胞形态,对第3代ADSCs进行细胞表型鉴定和成骨成脂分化能力鉴定。采用 CM-DiI标记第3代ADSCs并进行传代培养,荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察荧光标记情况,流式细胞仪检测标记率。结果 AD-SCs呈长梭形、漩涡样生长,传代后细胞生长增殖速度加快。流式细胞仪检测结果显示 CD29、CD90阳性表达, CD34、CD45、CD31阴性表达。茜素红和油红O染色显示ADSCs具有成骨成脂分化潜能。 CM-DiI标记的红色荧光存在于细胞膜和细胞质,不存在于细胞核,传代培养后荧光有所衰减,第3、6、9代的荧光标记率分别为97.09%、66.21%和37.86%。结论大鼠ADSCs的生长增殖能力强,具有多向分化潜能,采用CM-DiI标记ADSCs简单易行且示踪效果良好,可为后期体内实验提供依据。

    作者:周虹;郭杏;李丹;高小春;熊爱兵;谭美云 刊期: 2016年第11期

  • 金丝桃苷对大鼠脑基底动脉的舒张作用及其作用机制

    目的:研究金丝桃苷( Hyp)对大鼠脑基底动脉舒张作用及可能的作用机制。方法采用微血管张力测定仪检测Hyp对血栓素A2受体激动剂( U46619)和KCl预收缩的大鼠脑基底动脉环的舒张作用;研究去内皮、大电导钙激活钾通道( BKCa )阻断剂、蛋白激酶C( PKC)激动剂或抑制剂对其血管舒张作用的影响。结果 Hyp(10-5~10-3 mol/L)浓度依赖性地舒张U46619(10-7 mol/L)和KCl(60 mmol/L)预收缩的大鼠脑基底动脉(P<0.001);去除内皮后,Hyp的舒张血管作用减弱(P<0.01);BKCa阻断剂(IBTX,10-7 mol/L)、PKC激动剂( PMA,3×10-7 mol/L)均能抑制Hyp的舒血管作用(P <0.01,P <0.001);而 PKC 阻断剂(Bis-1,3×10-6 mol/L)能促进Hyp的血管舒张作用(P<0.05)。结论Hyp对大鼠脑基底动脉有舒张作用,其作用机制可能与激活BKCa通道、抑制PKC有关。

    作者:丁兰;陈志武;郭岩 刊期: 2016年第11期

  • 肝硬化腹水并自发性细菌性腹膜炎的危险因素分析

    目的:研究肝硬化腹水患者并发自发性细菌性腹膜炎( SBP)的多种危险因素,为临床早期诊断和预防提供依据。方法回顾性分析肝硬化腹水患者184例,其中78例并发SBP(SBP组),106例未并发SBP(非SBP组),收集相关临床资料,对可能影响SBP发生的因素进行单因素分析及多因素Logistic回归模型分析。结果单因素分析结果显示SBP病史、血清总胆红素水平、Child-pugh评分、凝血酶原时间、血钠水平、合并肝性脑病6个因素在两组患者间比较差异均有统计学意义( P<0.05)。将有意义的单因素进一步行Logistic回归分析,结果表明SBP病史、血清总胆红素水平、血钠水平是肝硬化腹水并发SBP的独立高危因素。结论 SBP病史、血清总胆红素水平、血钠水平是肝硬化腹水患者并发SBP的独立危险因素,对有这些高危因素的肝硬化腹水患者,应高度警惕SBP的发生。

    作者:张毅;孔德润 刊期: 2016年第11期

  • 安徽省汉族人氨基糖苷类抗生素致耳聋患者基因突变的研究

    目的:研究安徽省汉族人氨基糖苷类抗生素致耳聋( AAID)患者基因突变与其非综合征性耳聋( NSHL)的关系,建立口腔黏膜细胞基因组DNA新一代基因测序法( NGS)。方法由122例NSHL患儿及120例健康儿童,取得口腔黏膜基因组DNA,应用NGS对GJB2、12S rRNA 基因测序。结果口腔黏膜细胞的基因组DNA质量较好,能满足NGS 研究需要;在122例NSHL患者中,28例GJB2基因突变,占耳聋患者的22.95%;10例12S rRNA基因突变,占耳聋患者的8.20%。120例健康儿童中,未发现基因突变( P <0.01)。结论口腔黏膜细胞基因组DNA 的NGS检测法能用于检出安徽省汉族人 AAID 基因突变;在安徽 NSHL 患者中GJB2、12S rRNA基因突变有其一定的特点,能对安徽省汉族人AAID基因突变研究提供帮助。

    作者:徐彬;余元勋;王迎新;李建平;刘萍;张立 刊期: 2016年第11期

  • Tim 3对poly(I∶C)介导的小鼠Kupffer细胞分泌细胞因子的影响

    目的:探讨T细胞免疫球蛋白及黏蛋白家族-3( Tim 3)对poly( I ∶ C)活化的小鼠肝Kupffer细胞调节作用并探讨其相关机制。方法将真核表达质粒pcDNA3.1-Tim 3转染小鼠肝Kupffer细胞,以Realtime PCR和Western blot法验证Tim 3在小鼠肝Kupffer细胞的表达。通过ELISA法检测质粒pcDNA3.1-Tim 3,并使用Tim 3阻断型抗体和核转录因子kappa B(NF-κB)抑制性配体对 poly(I ∶ C)活化的小鼠肝Kupffer细胞因子[肿瘤坏死因子-α( TNF-α)、白介素-1β( IL-1β)、白介素-6(IL-6)]产生影响,Western blot法检测NF-κB p65、IκBα蛋白表达。结果 Tim 3抑制小鼠肝Kupffer细胞分泌炎性因子 TNF-α、IL-6、IL-1β, Western blot 结果显示其降低小鼠肝Kupffer细胞NF-κB p65蛋白和提高IκBα蛋白表达。结论 Tim 3通过NF-κB通路参与了poly( I:C)诱导小鼠肝Kupffer细胞活化的调节。

    作者:牛坚;王月;王人颢;刘斌 刊期: 2016年第11期

  • 糖尿病足溃疡愈合及截肢的相关因素分析

    目的:分析糖尿病足溃疡愈合及截肢的相关影响因素。方法收集308例糖尿病足病患者的资料,其中回访成功143例,按照足溃疡是否愈合分为愈合组(93例)和未愈合组(50例),按照足溃疡是否截肢分为截肢组(50例)和未截肢组(258例),分别以愈合和截肢为因变量,回顾性分析308例患者的临床资料,研究影响足病患者愈合和截肢的相关因素。结果年龄、血红蛋白( Hb)、瓦格纳分级、受教育程度、极低密度脂蛋白( VLDL)、前白蛋白( PA)、肾小球滤过率( eGFR)、高血压( HBP)、大溃疡面积、足背动脉搏动情况在愈合组与非愈合组之间存在显著差异( P<0.05);而血小板、尿酸( UA)、降钙素原、高密度脂蛋白( HDL)、载脂蛋白( apoA)、足背动脉搏动情况、足溃疡的性质、足溃疡的特征、瓦格纳分级及负压吸引治疗在截肢组与非截肢组间均有显著差异( P<0.05)。结论足溃疡愈合的保护因素有Hb、PA、eGFR、受教育程度、足背动脉搏动情况;足溃疡愈合的危险因素有HBP、年龄、瓦格纳分级、VLDL、大溃疡面积、糖尿病肾病;其中PA、足背动脉搏动是足溃疡愈合独立的保护因素,而VLDL、糖尿病肾病是糖尿病足溃疡愈合独立的危险因素。截肢的保护因素有溃疡的性质、负压吸引治疗、足背动脉搏动、HDL、apoA;截肢的危险因素有溃疡的特征、瓦格纳分级、血小板、降钙素原、UA;其中溃疡特征、瓦格纳分级、降钙素原是截肢独立的危险因素,而负压吸引治疗是截肢独立的保护因素。

    作者:胡慧萍;陈明卫 刊期: 2016年第11期

  • 鼻阻塞与多导睡眠监测的相关性分析

    目的:探讨合并慢性鼻塞的阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者鼻阻塞与多导睡眠监测(PSG)的相关性。方法纳入经PSG诊断为OSAHS且合并慢性鼻塞的患者60例,对患者进行鼻阻力( RM)计和鼻声反射( AR)仪检查,获得150 Pa双侧鼻腔吸气总阻力( ITR)、双侧鼻腔呼气总阻力( ETR)、0~5 cm鼻腔容积( NCV)、鼻腔小横截面积( NMCA)参数数据,用Spearman法分析RM、AR各参数与PSG参数之间的相关性。结果 ETR与觉醒总次数( rs=0.353,P=0.006)、觉醒指数(AI)(rs =0.374,P=0.003)呈正相关性,与非动眼睡眠Ⅲ期和Ⅳ期时间百分比( N3+N4,%)(rs =-0.316,P=0.014)呈负相关性。 ETR值越大,觉醒总次数越多, AI值越高, N3+N4(%)值越低。纳入的RM、AR各参数与呼吸暂停低通气指数( AHI )、低血氧饱和度( LSaO2)、平均血氧饱和度( ASaO2)均未见明显相关性。结论在合并慢性鼻塞的OSAHS患者中,呼气鼻阻力增加可能是睡眠觉醒增加和睡眠结构紊乱的危险因素,鼻阻塞对呼吸暂停指数无明显影响作用。

    作者:席晨琛;汪银凤;许为青 刊期: 2016年第11期

  • ApoE基因敲除小鼠海马CA3区神经元形态学和微管相关蛋白2表达变化

    目的:观察载脂蛋白E基因敲除( ApoE KO)对小鼠海马CA3区神经元形态结构改变以及微管相关蛋白2(MAP-2)表达的影响。方法10只野生型C57BL/6J小鼠为对照组,10只ApoE基因敲除小鼠为KO组,普通饲料喂养3个月。采用分光光度计检测血脂变化;取两组小鼠脑组织,HE染色和电镜技术观察海马CA3区结构改变,免疫组织化学技术观察两组小鼠海马CA3区MAP-2表达变化,采用计算机图像分析系统检测其平均光密度( MOD)值。结果与对照组比较,KO 组小鼠血浆总胆固醇、血浆三酰甘油、低密度脂蛋白含量明显升高(P <0.05,P <0.01)。光镜下, KO 组小鼠海马CA3区锥体细胞较小,排列稀疏松散。电镜下,KO 组海马神经元内线粒体肿胀变性,嵴消失;神经纤维髓鞘松懈;突触小泡数量减少,突触间隙模糊等。免疫组织化学结果显示,对照组小鼠海马神经元内MAP-2高表达, KO 组含量明显减少;图像分析显示KO 组CA3区MAP-2 MOD 值明显降低(P <0.05)。结论 ApoE KO 小鼠海马神经元结构出现病理改变,MAP-2表达下降,提示ApoE KO 与神经退行性病变有一定联系。

    作者:季丹;黄大可;桂丽;贾雪梅 刊期: 2016年第11期

  • 足底压力中心不对称性适宜计算方式的探讨

    探讨脑卒中患者步行时不同足底压力中心( COP)时空参数对称性比的适宜计算方式。选取33例脑卒中患者进行步态测试,使用3种方法计算COP时空参数的对称性比,并分析对称性比与步速的相关性。计算方式影响对称性比与步速的相关性,为了更加客观地反映步速与不对称性的相关性,对于单、双支撑期COP时空参数,可分别选用患侧除以健侧相应参数、两者中的较小值除以较大值计算对称性比,必要时根据散点图选择适宜计算方式或进行亚组分析。

    作者:刘丽玲;倪朝民;岳童;刘孟;刘郑;陈进;王丽;许凤娟;曾林芳 刊期: 2016年第11期

  • 人胃癌SGC-7901/TCF7 L2细胞株的建立及其生物学特性观察

    目的:建立人胃癌 SGC-7901/TCF7L2细胞株,观察其生物学特性。方法使用质粒稳定转染技术,获得高表达TCF7L2蛋白的胃癌细胞株 SGC-7901/TCF7L2及其空转对照组SGC-7901细胞株( SGC-7901/CON)。采用qRT-PCR和Western blot 法分别检测 SGC-7901/TCF7L2和 SGC-7901/CON两细胞株中的TCF7L2 mRNA和蛋白表达水平;光学显微镜下观察并比较两种细胞株的细胞形态;划痕实验比较两者的迁移能力;用细胞计数法分别检测两者对顺铂和卡铂的耐药情况;裸鼠体内荷瘤实验比较两者在体内成瘤的能力。结果经稳定转染技术成功建立稳定的SGC-7901/TCF7L2细胞株,其TCF7L2的mRNA和蛋白表达量均较SGC-7901/CON细胞株明显升高;光镜下SGC-7901/TCF7L2细胞形态较对照细胞形态多样,伪足增多,体积增大,胞质内颗粒物质增多;迁移能力和对铂类的耐受性较对照细胞明显增强;SGC-7901/TCF7L2细胞在小鼠体内的成瘤能力也明显增强。结论 TCF7L2可以增强人胃癌细胞株SGC-7901的恶性生物学特性,SGC-7901/TCF7L2细胞株的建立为胃癌发生发展机制研究及其靶向药物开发提供基础。

    作者:付翠群;沈国栋;沈干;胡世莲 刊期: 2016年第11期

  • 线粒体未折叠蛋白反应在Sir2抑制帕金森转基因果蝇中的作用

    目的:探讨Sir2对帕金森病( PD)转基因果蝇是否有神经保护作用及与线粒体未折叠蛋白反应( UPRmt )的相关性。方法选用Mhc-GAL4启动子,利用经典的GAL4-UAS系统构建Mhc-GAL4/UAS系统Pink1 B9 PD转基因果蝇模型,通过遗传干预使Sir2在Mhc-GAL4/UAS系统PD转基因果蝇运动神经元内过表达,观察Sir2过表达对果蝇运动神经元变性是否具有神经保护作用,然后通过 RNAi 技术抑制UPRmt相关基因热休克蛋白60(Hsp60)、GCN-2的表达,观察Sir2过表达对抑制果蝇运动神经元变性的作用,以及验证这种作用是否与UPRmt相关。结果 Sir2过表达明显抑制了PD转基因果蝇运动神经元变性,显著改善了果蝇运动能力,而在 UPRmt被抑制后, Sir2的保护作用明显减弱。结论Sir2对PD转基因果蝇具有神经保护作用,而这种神经保护作用与UPRmt相关。

    作者:戚欣欣;肖志超;范晓丽;孙莉;李清华 刊期: 2016年第11期

安徽医科大学学报杂志

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