学术投稿

人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测

黄滔;曹玉祥;张志坚;周兴路;魏慧君;吴志浩

关键词:DNMT1, 启动子, 荧光素酶报告基因
摘要:目的:利用PCR扩增人源DNA甲基转移酶1 (DNMT1) 基因启动子, 构建其荧光素酶报告基因载体并对其活性进行检测. 方法:运用PCR技术以人非小细胞肺癌细胞A549基因组DNA为模版扩增出目的片段, 将PCR产物用KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic上, 然后进行转化、菌落PCR及测序验证等. 将构建成功的pGL3-proDNMT1luc重组质粒和内参质粒pRL-CMV-luc共转入H1299细胞中检测DNMT1启动子活性.结果:成功扩增出长度为1634 bp的目的片段, 并成功构建出DNMT1启动子荧光素酶报告基因载体, 启动子具有活性. 结论: DNMT1启动子的成功克隆为进一步研究其分子调控机制和生物学意义奠定了基础.
皖南医学院学报杂志相关文献
  • 儿童失血性休克后缺血缺氧性脑病综合康复治疗1例

    目的:探讨儿童失血性休克后缺血缺氧性脑病的康复治疗方法.方法:分析患儿病史、体格检查、影像学表现及康复评定结果, 采取综合康复治疗, 治疗前后评估其肌力、转移与平衡能力、认知与言语功能、日常生活能力等. 结果: 患儿肌力、 MMSE评分、Berg评分、ADL评分均提高. 结论:综合康复治疗可改善患儿认知、言语、运动能力, 促进功能全面恢复, 提高日常生活能力.

    作者:张雪;柳军;许业松 刊期: 2018年第01期

  • 螺旋CT在胃癌术前T分期中的价值

    目的:研究胃癌多层螺旋CT (MSCT) 平扫及增强三期扫描的影像特点, 并结合多平面重建 (MPR) 探讨其对胃癌T分期的应用价值. 方法:回顾性分析我院经病理或手术证实63例胃癌患者的CT资料, 分析MSCT三期扫描的影像特点, 对其进行术前T分期, 并与临床术后病理分期进行对比. 结果:横轴位图像T1a期准确率为20% (1 /5); T1b期准确率为40% (2 /5); T2期准确率为57.1% (4 /7); T3期准确率为58.3% (7 /12); T4a期准确率为66.7% (18 /27); T4b期准确率为71.4% (5 /7);总准确率为58.7% (37 /63). 横轴位结合MPR T1a期准确率为60% (3 /5); T1b期准确率60% (3 /5); T2期准确率为71.4% (5 /7); T3期准确率为75.0% (9 /12); T4a期准确率为81.5% (22 /27); T4b期准确率为100% (7 /7); 总准确率为77.8% (49 / 63); 比较两者对胃癌术前分期的准确率可以发现横轴位结合MPR对T分期的准确率高于横轴位T分期准确率 (P < 0.05), 差异有统计学意义.结论: MSCT横轴位结合MPR图像能提高胃癌患者术前T分期的准确性.

    作者:孙启飞;张敏;诸晓艳 刊期: 2018年第01期

  • 右美托咪定对2型糖尿病患者全麻诱导期QTc及Tp-e间期的影响

    目的:观察右美托咪定对2型糖尿病患者全麻诱导期QTc及Tp-e间期的影响.方法: 60例拟行择期手术的2型糖尿病全麻患者, 随机分为对照组 (C组, n = 30) 和右美托咪定组 (D组, n = 30). D组在麻醉诱导前10 min静脉泵注右美托咪定负荷量0.5 μg /kg, 之后以0.4 μg / (kg·h) 持续泵注至插管后3 min, C组用等剂量生理盐水以同样方法泵注. 记录2组入室静息后 (T0 ) 、插管前 (T1 ) 、插管后1 min (T2 ) 、2 min (T3 ) 及3 min (T4 ) 时HR、MAP、QTc及Tp-e间期的变化.结果: 与C组相比, D组QTc及Tp-e间期缩短, HR及MAP在T2时降低 (P < 0.05). 与T0比较, D组HR在T1、T3、T4时及MAP在T1 ~ T4时降低 (P < 0.05); C组HR在T1、T2、T4时及MAP在T1、T3、T4时降低 (P < 0.05). 与T1比较, D组HR在T2、T3时及MAP在插管后均升高 (P <0.05); C组中HR在插管后及MAP在T2及T3时差异有统计学意义 (P <0.05). 结论:糖尿病患者全麻诱导期给予右美托咪定能够有效抑制患者插管反应, 维持血流动力学稳定;抑制QTc及Tp-e间期延长, 降低严重心律失常的发生风险.

    作者:陈金萍;杨余;郭玲;王斌;柳兆芳 刊期: 2018年第01期

  • 内镜检查为胃高级别上皮内瘤变的诊治策略

    目的:研究胃高级别上皮内瘤变的临床及病理特征, 探讨外科治疗原则和策略. 方法: 回顾性分析37例术前经内镜活检诊断为高级别上皮内瘤变者临床资料, 其中姑息手术2例, 内镜下黏膜剥离术4例, 根治性手术30例 (全胃切除21例, 远端胃切除9例), 腹腔镜下探查1例, 并将术后病理与术前病理作比较. 结果:术后病理提示只有3例仍为高级别上皮内瘤变, 1例为异性增生, 余33例均为腺癌 (淋巴结转移26例, 7例无淋巴结转移). 结论: 术前病理活检为胃高级别上皮内瘤变的病例与术后病理结果一致性较差, 我们需结合病灶的部位﹑大小﹑内镜下的大体形态及临床分期, 做出个体化﹑精准化﹑规范化的治疗.

    作者:陶俊;王贵和 刊期: 2018年第01期

  • 芜湖地区饮用水中四环素类抗生素含量检测分析

    目的:对芜湖地区饮用水中残留的四环素类抗生素进行检测, 以评估抗生素残留现状. 方法: 从芜湖7个地区采集自来水末梢水水样21份, 采用固相萃取联合高效液相色谱法检测自来水末梢水水样中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素的含量. 结果:四种抗生素的线性范围为0.05 ~ 10 mL/L, r > 0.999, 方法检出限为0.0272 ~ 0.2241 μg /L, 方法的平均加标回收率为81.82% ~ 151.11%, 相对标准偏差为0.73% ~ 8.40%, 末梢水中目标抗生素含量低于检测限. 结论: 芜湖地区饮用水中四环素类抗生素残留量较低.

    作者:丁苗苗;金晨;胡春媛;于荣;刘飞;文育锋 刊期: 2018年第01期

  • 胸椎管内血管脂肪瘤1例

    目的:探讨椎管内血管脂肪瘤的临床、病理特点和诊治情况, 提高对该病的诊治水平. 方法: 回顾性分析我院1例经病理确诊为椎管内血管脂肪瘤患者资料, 结合相关文献进行分析总结. 结果:椎管内血管脂肪瘤是一种少见的良性肿瘤, MRI是该病有效的检查方法, 但无特异性, 确诊需依赖病理检查. 结论: 手术切除是椎管内血管脂肪瘤的有效治疗方法, 术后复发少.

    作者:唐尚文;王弘;王凌挺;赵泉来 刊期: 2018年第01期

  • 积极心理学视角下护士长性格优势及其与幸福感的关系研究

    目的:调查护士长性格优势的总体分布状况; 探讨性格优势与护士长主观幸福感及生活满意度的关系.方法: 采用便利抽样对安徽省21所综合医院179名护士长进行问卷调查.结果: 发现护士长的五大显著优势依次为感恩感激、公民责任、善良慷慨、美的领悟和爱与被爱. 通过单因素方差分析发现, 洞察悟性、勇敢无畏、坚持勤奋等性格优势在年龄层次上存在统计学差异 (P < 0.05). 护士长性格优势中的兴趣好奇、洞察悟性、谨慎审慎、生机活力四种性格优势与主观幸福感存在高度相关 (P < 0.05或P < 0.01). 护士长性格优势中的兴趣好奇、洞察悟性、正直诚实、谨慎审慎、生机活力五种性格优势与生活满意度存在高度相关 (P < 0.05或P < 0.01). 结论:医院管理者应重视护士长的选拔和培训工作, 激发个体性格优势与积极潜能, 为护理的未来做出应有的贡献.

    作者:杨柳;王雪琴;李远珍;李海波;汪苗;周全 刊期: 2018年第01期

  • 罗哌卡因局部浸润复合右美托咪定对腹腔镜胆囊切除术后镇痛的影响

    目的:观察穿刺孔罗哌卡因局部浸润复合右美托咪定静注对腹腔镜胆囊切除 (LC) 术后芬太尼镇痛及舒适度的影响. 方法:择期行LC术患者60例, 随机分成2组 (n = 30): 观察组 (A组) 和对照组 (B组). A组于诱导前15 min静注右美托咪啶负荷量0.6 μg /kg后, 以0.3 μg / (kg·h) 的速率输注维持量至术毕. 4个穿刺孔打孔前均给予0.6%罗哌卡因局部浸润 (每个穿刺孔5 mL, 共20 mL); B组未给予右美托咪啶和罗哌卡因. 2组患者术毕均使用芬太尼静脉镇痛24 h. 观察术后3 h、 6 h、12 h和24 h不同时点VAS疼痛评分、BCS舒适评分及术后恶心呕吐 (PONV) 发生情况. 结果:与B组比较, A组患者术后各时点BCS舒适度评分提高 (P < 0.05), PONV发生率降低 (P < 0.05). 2组术后VAS疼痛评分差异无统计学意义 (P > 0.05). 结论:穿刺孔罗哌卡因局部浸润复合右美托咪定静注可改善LC术后芬太尼镇痛的舒适度, 降低恶心呕吐发生率.

    作者:刘学文;何志强;唐世美;胡强;洪小鹏;周玉兰 刊期: 2018年第01期

  • MSCTA在腹部占位性病变定位诊断中的价值探讨

    目的:探讨多层螺旋CT血管造影 (MSCTA) 在腹部占位性病变中的定位诊断价值.方法: 26例腹部占位性病变行多期增强扫描, 重建动脉期数据获得CT血管成像 (CTA) 图像、静脉期数据获得多平面重组 (MPR) 图像. 研究分两种方法, A方法轴位图像结合MPR图像做出定位诊断, B方法在A方法基础上再结合CTA图像做出定位诊断, 采用配对卡方检验比较2组定位诊断的准确性. 结果: 26例病例A方法准确定位18例, 准确率69.2%; B方法准确定位25例, 准确率96.2%. B方法准确率高于A方法, 两者差异具有统计学意义 (P < 0.05). 结论: CTA作为腹部增强扫描的补充, 有助于显示腹部占位性病变的供血动脉及与周边血管的关系, 结合MPR图像能够有效提高病变定位诊断的准确性.

    作者:张敏;余翔;修智;李洋 刊期: 2018年第01期

  • 皖南地区中青年与老年冠心病患者危险因素的研究

    目的:研究皖南地区中青年与老年冠心病患者危险因素的差异.方法:选择在弋矶山医院住院经冠状动脉造影确诊的冠心病患者337例, 按年龄分为中青年组 (< 60岁) 和老年组 (≥60岁). 分析2组之间男性比例、高血压、糖尿病、吸烟史、冠心病家族史、血脂水平等危险因素的差异.结果:老年组冠心病患者的吸烟比例及有高血压病史的比例均高于中青年组 (P< 0.05), 但中青年冠心病组则具有更高的BMI、TC、TG、LDL-C 水平 (P < 0.05). 按性别区分后, 男性中青年冠心病组具有更高的BMI、TG 水平以及更低的HDL-C 水平 (P < 0.05), 而男性老年冠心病组有高血压病史和吸烟史的比例更高. 女性中青年冠心病组的LDL-C 水平高于女性老年冠心病组 (P < 0.05), 女性老年冠心病组有高血压病史的比例更高 (P < 0.05). 结论:皖南地区中青年冠心病患者可能应注重体质量指数和血脂的控制, 而老年患者则可能更应关注控制吸烟及高血压.

    作者:谢向荣;汪和贵;汪茗;查林涛;潘大彬;朱正才;曹蘅;柯永胜;汤圣兴 刊期: 2018年第01期

  • 腰椎椎体压缩性骨折不同固定节段的临床疗效分析

    目的:探讨腰椎椎体压缩性骨折不同固定节段对疗效的影响. 方法: 回顾性分析2012年7月~ 2016年7月我科采用后路经椎弓根钉棒系统固定治疗的腰椎椎体压缩性骨折患者36例, 其中男20例, 女16例, 年龄32 ~ 65岁, 平均 (40.5 ± 4.5) 岁, 经影像学检查为新鲜椎体压缩性骨折, 所有患者均单纯行椎弓根内固定不行后路椎管减压, 固定节段为单节段、双节段、三节段固定; 对比3组患者手术切口长度、术中出血量、手术时间、术后伤口引流量等指标及手术前后椎体前缘压缩率、矢状位Cobb角、内固定失败率、术后并发症, 评估临床效果. 结果: 所有患者均顺利完成手术, 无死亡、大血管损伤和截瘫等严重并发症发生. 32例获随访, 随访时间10 ~ 12个月, 平均 (11.6 ± 2.4) 个月. 单节段固定组手术切口长度较短、术后伤口引流量较少, 与其他2组比较差异有统计学意义 (P < 0.05), 三节段固定组手术时间较长, 术中出血量较多, 与其他2组比较差异有统计学意义 (P < 0.05). 三节段固定组矢状位Cobb角、术后及拆钉前椎体前缘压缩率均优于其他2组, 差异有统计学意义 (P < 0.05). 双节段固定组有1例发生断钉. 结论:腰椎椎体压缩性骨折不同固定节段对疗效有一定影响, 需根据患者实际情况选择.

    作者:黄爱军;靳松;陈丽萍;林昆;李亚杰;项炜 刊期: 2018年第01期

  • 脂多糖对部分神经胶质细胞NgR表达的实验研究

    目的:观察脂多糖诱导早产鼠小胶质细胞和少突胶质前体细胞NgR的表达及变化, 了解NgR表达在TLR-4介导的神经胶质细胞释放炎性细胞因子中的作用. 方法: 采用振荡和差速贴壁法体外纯化培养MG和OPCs, 分别用特异性抗体CD11b和O4做细胞鉴定; 用实时荧光定量PCR检测各组MG、OPCs的NgR和MG的TLR-4基因表达情况, 并用ELISA测各组TNF-α 的含量. 结果: LPS诱导后较其他对照组及处理组MG的TLR-4表达水平和MG、OPCs的NgR表达水平均增高, 差异具有统计学意义 (P < 0.05), 各组MG经LPS诱导后较其对照组及处理组的TNF-α 的含量增高, 差异具有统计学意义 (P < 0.05). 结论:细菌感染使MG和OPCs的NgR表达增高; 脂多糖诱导小胶质细胞表达大量TLR-4需要NgR的介导; TLR-4可能存在上调NgR基因表达的作用.

    作者:王清萍;张士发 刊期: 2018年第01期

  • 晚发型强直性脊柱炎合并老年类风湿关节炎1例

    晚发型强直性脊柱炎 (late-onset ankylosing spondylitis, LAS) 是指45 岁之后发病, 以骶髂关节和脊柱慢性炎症为主的全身性疾病, 临床上少见. 老年类风湿关节炎 (elderly onset rheumatoid arthritis, EORA) 是指60 岁之后发病的类风湿关节炎.两种疾病合并存在, 临床上罕见, 现报道如下.

    作者:毛桐俊;盛君;宣丹 刊期: 2018年第01期

  • 腹腔镜下自制单凹槽疝针与雪橇钩针治疗小儿腹股沟斜疝临床比较

    目的:讨论使用自制单凹槽单疝气针行腹腔镜下小儿疝囊高位结扎术的可行性以及与传统雪橇疝气钩针相比的优越性. 方法:回顾性分析我院2015年8月~ 2016年8月收治的253例小儿腹股沟斜疝患儿资料, 其中采用自制改良的单凹槽单疝气针实施手术124例 (A组), 采用传统雪橇疝气钩针实施手术129例 (B组), 比较2组患儿在手术操作方便性、术中腹膜破损、两次穿刺是否同一隧道、术后疼痛反应、术后穿刺点硬结、术后复发率等方面的差异.结果: 2组均顺利完成腹腔镜下疝囊高位结扎术, 术后随访6个月. 在操作方便性、手术时间、术后疼痛反应等方面比较, 2组差异无统计学意义 (P > 0.05). 在术中发生腹膜破损方面, A组4例, B组27例; 在两次穿刺同一隧道方面, A组均顺利完成, B组完成73例; 在术后穿刺点硬结方面, A组有1例明显触及皮下硬结, B组有16例明显触及皮下硬结; 在术后复发率方面, A组无复发, B组4例复发. 上述4个方面比较, 差异均有统计学意义 (P < 0.05). 结论: 采用自制改良单凹槽单疝气针治疗小儿腹股沟斜疝, 可减少穿刺点硬结, 降低术后伤口局部不适感及复发率.

    作者:浦征宇;罗玲;许琴芳;林锦辉;张咏康;赵振军 刊期: 2018年第01期

  • Castleman病的CT特征性表现与病理对照

    目的:提高对Castleman病 (CD) CT表现的认识. 方法:回顾性分析弋矶山医院2014年11月~ 2016年12月经手术、病理证实为CD的12例CT表现特征. 结果:面颈部5例、胸部3例、腹部3例、多发1例. 临床分型: 11例局限型, 1例多中心型. 病理分型: 10例透明血管型, 2例浆细胞型. 12例CT平扫为较均匀软组织密度影, 其内伴有分支状钙化者3例 (病理均为透明血管型); 12例中有10例行增强扫描, 且增强后净增CT值增加40 HU者8例 (透明血管型7例、浆细胞型1例), 20 ~ 40 HU者2例 (透明血管型1例、浆细胞型1例), 且10例延迟期强化程度均减退不明显; 增强扫描周围可有点条状强化血管影者5例 (透明血管型4例、浆细胞型1例); 病灶内见条状或裂隙样低密度、且低密度延迟期强化2例 (透明血管型1例、浆细胞型1例). 结论: CD具有典型CT表现时, 术前能够明确诊断及病理分型.

    作者:徐静雅;翟建;马培旗;张虎 刊期: 2018年第01期

  • 人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测

    目的:利用PCR扩增人源DNA甲基转移酶1 (DNMT1) 基因启动子, 构建其荧光素酶报告基因载体并对其活性进行检测. 方法:运用PCR技术以人非小细胞肺癌细胞A549基因组DNA为模版扩增出目的片段, 将PCR产物用KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic上, 然后进行转化、菌落PCR及测序验证等. 将构建成功的pGL3-proDNMT1luc重组质粒和内参质粒pRL-CMV-luc共转入H1299细胞中检测DNMT1启动子活性.结果:成功扩增出长度为1634 bp的目的片段, 并成功构建出DNMT1启动子荧光素酶报告基因载体, 启动子具有活性. 结论: DNMT1启动子的成功克隆为进一步研究其分子调控机制和生物学意义奠定了基础.

    作者:黄滔;曹玉祥;张志坚;周兴路;魏慧君;吴志浩 刊期: 2018年第01期

  • 腹腔镜直、乙状结肠癌根治术中保留雷替曲塞腹腔化疗的耐受性及安全性

    目的:评估腹腔镜直、乙状结肠癌根治术中保留雷替曲塞腹腔化疗的耐受性及安全性.方法: 回顾性分析我院2012年1月~ 2016年12月68例行腹腔镜直、乙状结肠癌根治术 (Dixon术) 病例资料, 所有病例分为2组: A组 (术中保留雷替曲塞腹腔化疗组) 31例行腹腔镜直、乙状结肠癌根治术+术中保留雷替曲塞腹腔化疗; B组 (对照组) 37例行腹腔镜直、乙状结肠癌根治术+术中热蒸馏水灌洗.观察2组术后消化道症状、腹腔及切口感染、包裹性积液、肠梗阻、吻合口瘘发生率.比较术后拔除骶前引流管时间、自主排尿时间及肠道功能恢复时间.术前1周内及术后第7天检测2组患者的肝肾功能、白细胞计数及免疫细胞活性. 结果: 2组围手术期不良反应及并发症中恶心呕吐、腹胀、腹泻发生率比较差异有统计学意义 (P < 0.05); 2组腹痛发生率、术后切口感染、包裹性积液、肠梗阻、吻合口瘘等并发症发生率比较差异无统计学意义 (P > 0.05); 2组术前与术后肝肾功能、白细胞计数及细胞免疫功能指标的差值、术后骶前引流管拔除时间、自主排尿时间、肠蠕动恢复时间比较差异无统计学意义 (P > 0.05). 结论: 腹腔镜直、乙状结肠癌TME术中保留雷替曲塞腹腔化疗具有较好的耐受性和安全性, 未明显增加术后并发症.

    作者:朱群山;王昊;郑广万;陈平;王霏宇;吴正 刊期: 2018年第01期

  • 蝮蛇毒抑制心肌缺血再灌注损伤中血小板活化机制的探讨

    目的:探讨蝮蛇毒血小板抑制因子 (AHV-PI) 减弱大鼠心肌缺血/再灌注 (I /R) 损伤作用及其可能作用机制.方法:雄性SD大鼠随机分为6组 (n = 6): 正常对照组、I /R模型组、阳性对照组 (银杏内酯BN52021, 4 mg /kg) 、AHV-PI低、中、高剂量组 (0.05、0.1、0.2 mg /kg). 行大鼠心脏冠状动脉左前降支结扎30 min, 再灌注120 min制备I /R模型, 颈动脉取血并分离血小板, 比浊法测定血小板聚集率; TTC染色检测心肌梗死程度; ELISA法测定血小板中血小板活化因子 (PAF) 含量. 结果: 与正常对照组相比, I /R组血小板聚集率上升 (P < 0.05), PAF含量增加 (P < 0.05), TTC染色梗死面积增加 (P < 0.01); AHV-PI中、高剂量组血小板聚集率降低, PAF释放减少, 心肌缺血面积减少 (P < 0.05). 结论: AHV-PI可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤, 其机制可能是通过抑制PAF的释放, 进而抑制血小板聚集等实现的.

    作者:高恬媛;张根葆;靳文;季娜 刊期: 2018年第01期

  • 组织细胞坏死性淋巴结炎25例临床及病理特征分析

    目的:探讨组织细胞坏死性淋巴结炎患者的临床及病理特征. 方法: 回顾性分析2012年6月~ 2016年5月在皖南医学院弋矶山医院住院的25名组织细胞坏死性淋巴结炎患者的病历资料. 结果: 25例患者中女性17例 (68%), 平均年龄为 (28.2 ± 11.3) 岁. 发热者16例 (64%); 24例 (96%) 为颈部淋巴结受累及, 淋巴结触痛者16例 (64%). 白细胞为 (3.6 ± 1.7) × 109 /L; 血沉为 (34.4 ± 12.3) mm/h. 病理示组织细胞反应性增生, 凝固性坏死, 但不伴有中性粒细胞浸润. 免疫组化示泡沫样组织细胞CD68 (+ ) 以及残存生发中心B淋巴细胞CD20 (+ ).结论:组织细胞坏死性淋巴炎以青年女性更为多见; 多伴发热; 颈部淋巴结肿大常见, 多伴触痛; 可见白细胞降低及血沉增快; 特征性的病理学改变有助于明确诊断.

    作者:杨进孙;王文节;杨江华 刊期: 2018年第01期

  • 腹腔镜联合胆道镜治疗胆总管结石的疗效观察

    目的:探讨腹腔镜联合胆道镜治疗胆总管结石的疗效. 方法: 回顾分析我科2014年3月~ 2017年6月行腹腔镜联合胆道镜治疗的40例胆总管结石患者的临床资料.结果: 40例全部行腹腔镜联合胆道镜胆总管探查取石.取石成功率100%, 全部T管引流, 中转2例, 术后残留结石5例, 平均手术时间 (150 ± 20) min, 平均出血量 (60 ± 5) mL, 术后腹腔引流时间为4 ~ 6 d; 术后平均 (24 ± 2) h即可进食, 平均 (2 ± 0.5) d可下床活动, 平均 (8 ± 2) d即可出院. 结论: 腹腔镜联合胆道镜治疗胆总管结石是一种微创、安全高效、价格相对低廉的治疗方法, 尤其适合伴有胆囊结石的病例.

    作者:叶晨东;黄勇;伍先久;郭盖章 刊期: 2018年第01期

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