杨惠洁；余爽；王静；陈楚；顾颖；鲍依稀
目的 优化毕赤酵母工程菌GS115/xynlIA产重组木聚糖酶的发酵条件,并检测其酶学性质.方法 采用单因素试验和L9(34)正交试验考察摇瓶发酵条件下培养基起始pH值、诱导剂甲醇添加量、诱导温度及诱导时间对产酶活性的影响；并分析重组木聚糖酶的酶学性质.结果 影响重组毕赤酵母产酶的因素重要性依次为:培养基起始pH值＞诱导时间＞诱导温度＞甲醇添加量,重组酵母产酶佳条件为:起始pH值7.5,甲醇添加量1.5％,32℃诱导96 h,在此条件下进行诱导表达重组木聚糖酶的酶活性可达228.35IU/ml;酶的适反应温度为50℃,适反应pH值为5.5,在低于40℃和pH4.5～7.5的范围内较稳定.结论 优化了毕赤酵母产重组木聚糖酶的发酵条件,为木聚糖酶的工业化生产及应用提供了依据.
作者：史红玲；汪俊卿；邬敏辰；高树娟 刊期： 2012年第10期
目的 构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae)pbp1a基因重组的原核表达质粒,并进行鉴定.方法 化学合成S.pneumoniae含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后,与pUC19载体连接,构建重组表达质粒pUC19-pbp1a.转化耐青霉素的pbp1a基因突变的S.pneumoniae,测定青霉素对转化菌的低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),以鉴定PBP1a的活性；SDS-PAGE和Western blot分析重组PBP1a蛋白的表达.结果 pbp1a基因扩增产物可见约330 bp的特异条带,大小与预期一致,测序表明重组质粒全长360 bp,无碱基的缺失、插入等突变；青霉素对转化菌的MIC从8μg/ml下降为2μg/ml;表达的重组PBP1a蛋白相对分子质量约为11 000,可与抗S.pneumoniae青霉素敏感株兔血清特异性结合.结论 成功构建了S.pneumoniae pbp1a基因重组原核表达质粒,其能在S.pneumoniae中表达有活性的PBP1a蛋白,为进一步研究PBPs在细菌耐药变异中的作用提供了实验材料,也为进一步探讨消除细菌耐药性变异的措施奠定了基础.
作者：周侠；唐紫薇；杨致邦；蒋仁举；熊玉霞；于拽拽 刊期： 2012年第10期
目的 构建人肺癌整合素连接激酶(Integrin-linked kinase,ILK)基因siRNA重组表达质粒,并检测其对人肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法 人工合成靶向ILK基因的siRNA干拢序列,克隆至载体pGenesil-1中,构建重组表达质粒pGenesil-1-ILK,利用脂质体转染A549细胞,经G418稳定筛选后,采用RT-PCR和Western blot检测细胞中ILK基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平,MTT法检测细胞的增殖活力.结果 重组表达质粒pGenesil-1-ILK经Sal Ⅰ单酶切及测序证明构建正确,其转染A549细胞后,细胞ILK基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显降低(P＜0.05),且细胞的增殖能力也显著降低(P＜0.05).结论 成功构建了人ILK基因siRNA重组表达质粒,ILK基因沉默可显著抑制A549细胞增殖,为肺癌靶向基因治疗的研究提供了新的思路.
作者：陈炎；胡海燕；刘革力；张璐渝；陈全 刊期： 2012年第10期
目的 研究姜黄素对转化生长因子-β1 (Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase-9,MMP-9)表达及其侵袭能力的影响,探讨姜黄素在防治TGF-β1诱导的乳腺癌侵袭转移中可能的作用机制.方法 采用CCK-8法检测姜黄素对MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用.将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组(无血清RPMI1640培养基/DMSO)、TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基/DMSO+10 ng/ml TGF-β1),姜黄素+ TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基+5、7.5、10μmol/L姜黄素+10ng/ml TGF-β1).处理24 h后,采用侵袭小室试验观察细胞的侵袭能力；处理不同时间后,采用Western blot法检测细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2以及p-p38的表达,明胶酶谱法检测各组细胞上清液中MMP-9的活性变化；以ERK特异性抑制剂PD98059、p38特异性抑制剂SB202580、姜黄素和/或TGF-β1处理细胞48 h,采用Western blot和明胶酶谱法检测MMP-9的表达.结果 低浓度姜黄素(≤10 μmol/L)对MDA-MB-231细胞无明显的细胞毒性作用；姜黄素呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量(P＜0.001)；姜黄素可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2及p-p38蛋白的表达,且呈浓度、时间依赖性(P＜0.05)；姜黄素随浓度的增加,对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9活性的抑制作用明显增强(P＜0.05)；PD98059抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素相似,而SB202580对MMP-9无明显影响.结论 姜黄素可能通过TGF-β/Smad、TGF-β/ERK信号通路下调TGF-β1诱导的MMP-9的表达及其活性,从而抑制肿瘤的侵袭能力.
作者：磨娜；曹友德；蒋金；李静 刊期： 2012年第10期
目的 探讨靶向卡氏肺孢子菌(Pncumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白基因(Major surface glycoprotein gene,MSG)上游保守序列(Upstream conserved sequence,UCS)的microRNA重组质粒对大鼠卡氏肺孢子菌肺炎(Pneumocystis carinii pneumonia,PCP)的治疗作用.方法 将SD大鼠经腹股沟皮下注射地塞米松磷酸钠7周,制备大鼠PCP感染模型.将模型大鼠随机分为5组:microRNA重组质粒治疗组(M组)、磺胺药物治疗组(H组)、生理盐水对照组(C1组)、空载体质粒对照组(C2组)和模型对照组(C3组),其中M组和C1、C2组经尾静脉分别注射含microRNA重组质粒pPC-UCS、生理盐水和空载体,H组用磺胺药物灌胃治疗,C3组不做处理,每日1次,疗程为7d.1周后吉姆萨染色,油镜下计数大鼠肺组织液印片中PC包囊数；HE染色,光镜观察肺组织病理改变；ELISA法检测大鼠血清中IL-10和IFNγ的表达水平；RT-PCR法检测肺组织中PC MSG-UCSmRNA的表达水平；电镜观察PC的超微结构.结果 与C1、C2和C3组相比、M组和H组大鼠肺组织PC包囊数均明显减少(P＜0.05),肺组织炎症较轻,大鼠血清IL-10的表达水平均显著降低(P＜0.05),面IFNγ的表达水平显著升高(P＜0.05),大鼠肺组织PC MSG-UCS mRNA的表达水平均显著降低(P＜0.05)；电镜观察显示,M组和H组PC包囊表面均出现破损,C1、C2、C3组未发现破损.结论 microRNA重组质粒pPC-UCS对大鼠PCP有明显的治疗作用,为治疗PCP提供了新的思路.
作者：龚锐；姚云清；梅林；骆晓练；谭燕；李文桂；陈雅棠 刊期： 2012年第10期
目的 建立中试制备重组人血清白蛋白-干扰素β(Recombinant human serum albumin-interferon β,rHSA-IFNβ)融合蛋白的纯化工艺及质控方法.方法 采用50L发酵罐诱导表达rHSA-IFNβ融合蛋白,发酵液经超滤浓缩及脱盐后,再经Rlue Sepharose FF亲和层析、G25凝胶过滤层析和SP Sepharose FF阳离子交换层析纯化.SDS-PAGE(银染法)和HPLC测定融合蛋白纯度,Western blot分析反应原性,质谱法测定相对分子质量,Edman降解法测定N-末端氨基酸序列,等电聚焦电泳法测定等电点,细胞病变抑制法测定rHSA-IFNβ融合蛋白的生物学活性,其余检测项目均按《中国药典》三部(2010版)要求进行.结果 纯化的3批融合蛋白纯度可达96％以上,具有人血清白蛋白和人干扰素β的双重反应原性,相对分子质量分别为89 070、89 035和88 669,N-末端氨基酸序列为:NH2-D-A-H-K-S,等电点为6.34,比活性分别为1.9× 106、1.5×106和1.1×106IU/mg,其余各项指标均符合要求.结论 已成功建立了中试制备rHSA-IFNβ融合蛋白的纯化工艺及质控方法.
作者：李芝芹；邱爽；雷楗勇；陈蕴；金坚 刊期： 2012年第10期
目的 构建Wistar大鼠热休克蛋白(Heat shock protein 70,HSP70)基因重组腺病毒质粒,并制备重组腺病毒.方法 利用RT-PCR技术从Wistar大鼠脾脏组织中扩增HSP70基因序列,并克隆至pMD18-T载体中,测序鉴定后,将克隆的HSP70基因编码阅读框亚克隆至穿梭载体pShuttle-CMV中,并利用Ⅰ-Ceu Ⅰ与Ⅰ-Sce Ⅰ将重组穿梭质粒上的HSP70基因的表达框切下,连接到携带腺病毒骨架载体pAdxsi上.重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切线性化后,转染至293(R)细胞进行病毒的包装,获得重组腺病毒pAd-CMV-HSP70,收集病毒上清,感染BRL细胞,Western blot检测BRL细胞中HSP70的表达.病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,检测重组腺病毒纯度、颗粒滴度及感染性滴度.结果 克隆质粒、穿梭质粒经PCR及酶切鉴定,均可见2 269 bp的目的基因条带,测序结果与GenBank登录的序列一致；XhoⅠ酶切结果显示,HSP70基因已正确克隆至腺病毒质粒中；重组腺病毒感染BRL细胞后,细胞中HSP70的表达量显著升高(P＜0.01)；重组腺病毒纯化后纯度为1.29,颗粒滴度为5.31×1012 VP/ml,感染性滴度达1×1011pfu/ml.结论 已成功构建Wistar大鼠HSP70基因重组腺病毒质粒,并制备出高滴度的重组腺病毒颗粒,为进一步研究HSP70的生物学活性及作用机制奠定了基础.
作者：郭景茹；臧琳；郭爽；王建发；计红；李士泽；薛琳琳；杨焕民 刊期： 2012年第10期
目的 制备A群膜炎球菌多糖(Group A meningococcal polysaccharide,GAMP)-白喉毒素无毒变异体CRM197(Cross-reactive material 197)结合物,并分析其理化性质及免疫学特性.方法 白喉棒状杆菌C7 M1菌株经发酵培养表达CRM197,表达产物经DEAE-4FF层析柱进行纯化,纯化产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定.用溴化氰(CNBr)活化GAMP,己二酰肼(ADH)为连接剂,在碳二亚胺(EDAC)催化下将GAMP与CRM197共价结合,制备GAMP-ADH-CRM197结合物,经Sepharose 4FF层析柱纯化后,进行各项生化检测,采用免疫双扩散检测结合物的抗原性,将结合物皮下注射ICR小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗GAMP的抗体滴度,分析其免疫原性.结果 发酵培养20 h时,菌液上清中的CRM197蛋白表达量高；CRM197以分泌形式表达,纯化后纯度达95％以上,可与白喉类毒素单抗发生特异性反应；GAMP-ADH-CRM 197结合物各项生化指标均符合《中国药典》三部(2010版)要求,与A群流脑诊断血清形成明显的沉淀线,结合物诱生的多糖特异性抗体滴度显著高于多糖组和混合物组.结论 成功制备了GAMP-ADH-CRM197结合物,其具有良好的抗原性和免疫原性,为以CRM197为蛋白载体制备脑膜炎球菌结合疫苗奠定了基础.
作者：张营营；蔡路奎；姜博；毕研伟；高丹丹；闫铃梅；姬秋彦；李智华；徐维明 刊期： 2012年第10期
目的 原核表达百日咳黏附素(Pertactin,Prn),并制备抗Prn单克隆抗体.方法 从无细胞百日咳疫苗生产菌株CS株基因组DNA中克隆Prn基因,插入表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-Prn,转化E.coli M15,IPTG诱导表达.表达的重组Prn蛋白经阳、阴离子交换层析纯化后,采用Western blot和ELISA法鉴定重组Prn蛋白的反应原性.以纯化的重组Prn蛋白为免疫原,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对制各的单抗进行鉴定.结果 重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确；表达的重组Prn蛋白相对分子质量约为69 000,主要以包涵体形式表达；纯化的重组Prn蛋白的纯度达95％以上,产量可达25 mg/L,能与不同来源的抗Prn-Ab血清特异性结合.获得2株分泌抗Prn单抗的杂交瘤细胞株,分泌的单抗均为IgG1类,轻链类型均为κ,效价均达1∶105以上,并能特异性识别Prn蛋白,而与百日咳杆菌其他抗原蛋白无交叉反应.结论 原核表达、纯化了重组Prn蛋白,并制备了2株效价高、特异性强的单抗,为无细胞百日咳疫苗的质量控制及百日咳杆菌致病机制的研究提供了材料.
作者：徐颖华；张华捷；谭亚军；吴丽洁；王丽婵；侯启明；张庶民 刊期： 2012年第10期
肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)感染是引起神经系统紊乱、肺水肿、肺出血等严重疾病的主要原因.非结构蛋白2A、3C、3D是EV71在宿主细胞内完成复制和存活的基础,具有不同于肠道病毒其他成员的结构和作用机制.2A和3C蛋白可抑制宿主细胞蛋白的表达,从而促进细胞凋亡,3C蛋白还可抑制天然免疫,3D蛋白与病毒的耐高温和高度变异适应性有关.一些小分子物质可在病毒入侵的不同阶段抑制EV71感染.本文就2A、3C、3D蛋白在EV71复制过程中的结构与功能特点以及一些小分子物质在病毒复制中的抑制作用作一综述.
作者：罗永彬 刊期： 2012年第10期
目的 观察不同年龄人群接种人用狂犬病疫苗的接种反应及免疫应答.方法 选择身体健康、无犬伤史及狂犬病疫苗接种史的627名观察对象进行免疫原性检测,按生理发育状态分为5组:1～3岁组、4～6岁组、7～16岁组、17～40岁组和≥41岁组,分别于免疫前、首针免疫后14和45 d,抽取静脉血,分离血清,采用快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescence focus inhibition test,RFFIT)检测血清中抗狂犬病病毒抗体效价,并计算抗体几何平均滴度(GMT).在所有免疫原性受试者中随机抽取225名,进行接种反应观察.结果 225名观察对象接种人用狂犬病疫苗后的局部总反应率为5.15％,全身总反应率为4.42％,反应程度均为弱、中反应,无高强度及严重不良反应的病例报告.免疫前所有样本血清抗体GMT均≤0.2 IU/ml,抗体均为阴性；首针接种人用狂犬病疫苗后14d,各年龄组人群抗体阳转率均达100％,但抗体GMT各组间差异有统计学意义(P＜0.05),其中4～6岁组和7～16岁组较高,分别为9.42和9.01 IU/ml,1～3岁组和≥41组较低,分别为6.11和6.35 IU/ml,而4～6岁组与7～16岁组及1～3岁组与≥41岁比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)；首针接种人用狂犬病疫苗后45 d,各年龄组人群的抗体阳转率仍为100％,各年龄组平均GMT在14.8 ～ 16.40 IU/ml之间,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 不同年龄组人群接种人用狂犬病疫苗后临床反应轻微,免疫应答良好.但3岁以下婴幼儿及老年人抗体产生的时间有延迟的趋势,建议老年人及婴幼儿在接种人用狂犬病疫苗第1、2针时,应适当增加剂量,以提高血清抗体阳转率及免疫成功率.
作者：赵珍谊；余刚；郑艳微；陶航 刊期： 2012年第10期
目的 探讨易洛魁家族同源盒基因IRX1(Iroquois homebox gene)在肝癌中的表达及其临床意义.方法 收集82份肝癌组织(高分化26份,Edmondson分级Ⅰ级；中分化25份,Edmondson分级Ⅰ-Ⅱ和Ⅱ级；低分化31份,Edmondson分级Ⅱ-Ⅲ和Ⅲ级)和11份正常或良性疾病非癌组织标本,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot检测各组肝脏组织中IRX1的表达,免疫组织化学法检测IRX1在肝脏组织中的定位及临床特征.结果 肝癌组织中IRX1基因和蛋白的表达均明显高于非癌对照组(P＜0.05),且其表达量与肿瘤的分化程度相关,肿瘤分化程度越低,其表达量越高(P＜0.05).IRX1在肝癌组织中的阳性表达率明显高于非癌对照组(P＜0.05),且伴随着肿瘤分期增加和分化程度的降低,IRX1阳性率越高,但IRX1阳性率与HBV感染以及伴随肝硬化情况无明显相关性(P＞0.05).IRX1染色阳性的高分化肝癌组织中,68.2％定位于细胞质,18.2％定位于细胞核,13.6％胞质和胞核均阳性；IRX1染色阳性的低分化肝癌组织中,胞质胞核均阳性的增加至65.5％.结论 IRX1可能参与调控肝癌的发生发展过程,IRX1的表达与肝癌的分化程度有关,提示IRX1可作为判断肝癌预后、分化程度以及肿瘤靶向分子治疗的指标.
作者：杨惠洁；余爽；王静；陈楚；顾颖；鲍依稀 刊期： 2012年第10期
1.概述伤寒是由伤寒沙门菌感染引起的急性全身性传染病,通过粪-口途径传播,其临床特征为持续发热、神经系统中毒症状、肝脾肿大及白细胞减少等,少数可并发肠出血及肠穿孔.人群对伤寒沙门菌普遍易感,但儿童和青壮年发病率高.伤寒是发展中国家常见的肠道传染病,我国的伤寒发病率约在(10～100)/10万之间,南部沿海及西南省份发病率较高[1].
作者：王斌；梁昊宇；计国欣；曾明 刊期： 2012年第10期
目的 探讨人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制.方法 取对数生长期的KG1α细胞,分为两组:空白对照组(常规培养)和人参皂苷单体Rh2(S)组,采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态及数量,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪检测细胞周期的分布,Real-time PCR检测细胞中β-catenin基因mRNA水平,免疫细胞化学法检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的定位及表达,Western blot检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平.结果 人参皂苷单体Rh2(S)对KG1α细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.与空白对照组比较,Rh2(S)作用48 h后,可见KG1α细胞分散生长,数量明显减少；可见数量不等,程度不同的凋亡细胞；G0/G1期细胞比例明显上升(P＜0.05),G2+M和S期细胞比例明显下降(P＜0.05)；细胞中β-catenin基因mRNA水平明显降低(P＜0.01).β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 人参皂苷单体Rh2(S亚型)对KG1α细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制可能抑制Wnt/β-catenin/TCF4/CyclinD1信号通路,使细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡.
作者：刘艺；李静；刘晓岩；姜蓉；王建伟；魏强；赵亮；陈地龙 刊期： 2012年第10期
目的 构建转化生长因子-β1 (Transforming growth factor-β1,TGF-β1)基因短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对结肠癌细胞SW480侵袭能力的影响.方法 设计并合成2对靶向TGF-β1基因的RNA干扰序列和1对阴性对照序列,并构建重组表达质粒pshRNA-TGF-β1a、pshRNA-TGF-β1b和pshRNA-TGF-β1c(阴性对照),以脂质体介导转染SW480细胞,荧光显微镜观察转染情况；RT-PCR和Western blot检测转染细胞中TGF-β1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平；Transwell侵袭试验检测沉默TGF-β1基因表达对细胞侵袭能力的影响.结果 TGF-β1基因shRNA重组表达质粒经酶切鉴定和测序分析证明构建正确.与空白对照组相比,3种质粒转染的细胞均有较强的荧光表达；pshRNA-TGF-β1a和pshRNA-TGF-β1b组细胞TGF-β1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显减低(P＜0.05)；SW480细胞的侵袭能力也明显降低(P＜0.05).结论 成功构建了TGF-β1基因shRNA重组表达质粒,其能有效抑制结肠癌细胞SW480中TGF-β1基因的表达,并可显著降低细胞的侵袭能力,为结肠癌的基因治疗提供了新的思路.
作者：于宏；姜政；仲琳；王丕龙 刊期： 2012年第10期
目的 探讨人参皂苷Rg1(以下简称Rg1)诱导人红白血病K562细胞株衰老与p16 Rb信号通路的相关性.方法 以不同浓度的Rg1(0、5、10、20、40和80 μmol/L)作用于K562细胞不同时间(24、48、72 h),MTT法筛选Rg1抑制K562细胞增殖的佳作用浓度及作用时间,以该浓度干预K562细胞不同时间,流式细胞术检测细胞的细胞周期；以佳浓度Rg1干预K562细胞佳时间,集落培养法检测细胞集落形成能力；衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率；透射电镜观察细胞的超微结构；Southern blot检测细胞的端粒长度；Western blot检测细胞中P16和RB蛋白的表达.结果 Rg1在体外可明显抑制K562细胞增殖,其佳作用浓度及作用时间分别为20μmol/L和48 h；经20μmol/LRg1诱导48 h的K562细胞与常规培养对照组相比,细胞出现G2/M期阻滞(P＜0.05),集落形成能力明显减弱(P＜0.05),SA-β-Gal染色阳性率增加(P＜0.01),细胞体积增大,且溶酶体,线粒体体积增大,数目增多,端粒缩短加速(P＜0.05),P16和RB蛋白表达上调(P＜0.05).结论 Rg1能诱导人红白血病K562细胞株衰老,可能与Rg1激活了p16-Rb信号通路有关.
作者：蔡世忠；刘俊；周玥；刘典锋；杨斌；姜蓉；王亚平 刊期： 2012年第10期
目的 研究乙脑风疹联合减毒活疫苗中乙脑病毒和风疹病毒的相容性.方法 将乙脑病毒SA14-14-2疫苗株制备的乙脑减毒活疫苗原液与风疹病毒RA27/3疫苗株制备的风疹减毒活疫苗原液按体积比1∶1比例混合,加入保护剂,冻干制成乙脑风疹联合减毒活疫苗.采用BHK21细胞蚀斑法测定联合疫苗中的乙脑病毒滴度,细胞病变法检测风疹病毒滴度；通过鉴别试验、热稳定性试验、乙脑疫苗免疫原性试验、安全性试验、异常毒性试验、无菌试验以及基因稳定性分析观察联合疫苗病毒间的相容性.结果 联合疫苗的乙脑和风疹病毒滴度与单价疫苗的病毒滴度变化在检测误差的允许范围内；联合疫苗于37℃放置7d,与放置前相比,风疹病毒和乙脑病毒的滴度值下降分别小于1.0LgCCID50/ml和1.0LgPFU/ml,符合《中国药典》三部(2010版)要求；联合疫苗中的风疹疫苗对乙脑疫苗的免疫原性无明显的干扰效应；鉴别试验、安全性试验、异常毒性试验、无菌试验结果均符合《中国药典》三部(2010版)要求；联合疫苗在BHK21细胞上传代5次后,乙脑和风疹病毒基因序列均未发生变化.结论 乙脑风疹联合减毒活疫苗中的乙脑和风疹病毒具有较好的相容性,本实验为乙脑风疹联合疫苗的进一步研制奠定了基础.
作者：吕文利；王凌；赵新华；俞娟；明平刚 刊期： 2012年第10期
目的 利用毕赤酵母表达系统高效分泌表达人松弛素H2类似物(Human relaxin-2 analogue,HR2),并检测其生物活性.方法 通过密码子优化合成HR2基因,构建重组表达质粒pPICZαA-HR2,转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析.表达产物经超滤和柱层析纯化后,切除人工C肽,检测其生物活性.结果 经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pPICZαA-HR2构建正确；Tricine-SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白相对分子质量约6 500,表达量占菌体总蛋白的47.6％,为451μg/ml,且为分泌表达；Western blot分析显示,重组蛋白具有良好的反应原性；纯化的重组蛋白纯度达96％；经检测C肽切除的重组HR2对THP-1细胞具有刺激活性.结论 成功在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了重组松弛素H2类似物,并具有一定的生物活性.
作者：韩佳汕；郭德军；徐云明；厉保秋；柳增善；郑国君 刊期： 2012年第10期
目的 原核表达并纯化鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)VP3蛋白.方法 将GPV VP3基因重组表达质粒pGEX-6P-VP3转化入大肠杆菌BL21 (DE3)plysS内,IPTG诱导表达；用Sepharose 4B(Prepacked Glutathion)亲合层析柱纯化可溶性和不溶性包涵体蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blot及Dot-ELISA鉴定.结果 表达的GST/VP3融合蛋白相对分子质量为85 000,主要以不溶性包涵体形式存在；纯化的可溶性蛋白和包涵体蛋白含量分别为2.20和3.30 mg/ml;纯化的GST/VP3融合蛋白能被鹅抗GPV多克隆抗体特异性识别.结论 原核表达并纯化了GPV VP3蛋白,为进一步研究其功能和免疫学特性及研制基因工程亚单位疫苗和新型抗原制剂奠定了基础.
作者：布日额；吴金花；马波；王君伟 刊期： 2012年第10期
目的 制备壳聚糖复合纳米基因载体,并探讨其理化性质、细胞毒性、稳定性及体外转染效率.方法 采用复凝聚法制备包封聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)/DNA复合物的壳聚糖复合纳米基因载体,用纳米粒度分析仪测定其粒径和Zeta电位；透射电镜观察其形态；MTT法检测其细胞毒性；在PBS溶液(pH7.4)及含10％小牛血清的RPMI1640培养基中,于37℃条件下放置0、1、3、5d,1％琼脂糖凝胶电泳检测其稳定性；体外转染CNE细胞,评价其转染活性.结果 当N(PEI的氨基)/P(DNA的磷酸根)≥6时,能够形成稳定的壳聚糖复合纳米粒,平均粒径约为300 nm,表面电荷约为30 mV；壳聚糖复合纳米基因载体呈球形,圆整且分散性好；复合纳米基因载体的细胞毒性较低；1％琼脂糖凝胶电泳分析显示,DNA被完全包裹在复合纳米载体中,且5d内无游离DNA释放；体外转染活性与壳聚糖/DNA复合物相比,提高了约1 000倍,且转染能力不受血清的干扰.结论 制备的壳聚糖复合纳米基因载体是一种高效、低毒的非病毒载体,具有作为体内基因治疗载体的应用潜力.
作者：马士淇；刘林霞；张勇；赵兴红；孟祥玉；查晓；陈妍；张喜珍 刊期： 2012年第10期
中国生物制品学杂志
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