叶昕；杜瑞林；孙兆丹；宋婧；黄鹤；高士锐；马玉杰；闫滨
目的 构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae)pbp1a基因重组的原核表达质粒,并进行鉴定.方法 化学合成S.pneumoniae含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后,与pUC19载体连接,构建重组表达质粒pUC19-pbp1a.转化耐青霉素的pbp1a基因突变的S.pneumoniae,测定青霉素对转化菌的低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),以鉴定PBP1a的活性；SDS-PAGE和Western blot分析重组PBP1a蛋白的表达.结果 pbp1a基因扩增产物可见约330 bp的特异条带,大小与预期一致,测序表明重组质粒全长360 bp,无碱基的缺失、插入等突变；青霉素对转化菌的MIC从8μg/ml下降为2μg/ml;表达的重组PBP1a蛋白相对分子质量约为11 000,可与抗S.pneumoniae青霉素敏感株兔血清特异性结合.结论 成功构建了S.pneumoniae pbp1a基因重组原核表达质粒,其能在S.pneumoniae中表达有活性的PBP1a蛋白,为进一步研究PBPs在细菌耐药变异中的作用提供了实验材料,也为进一步探讨消除细菌耐药性变异的措施奠定了基础.
作者：周侠；唐紫薇；杨致邦；蒋仁举；熊玉霞；于拽拽 刊期： 2012年第10期
目的 研究姜黄素对转化生长因子-β1 (Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase-9,MMP-9)表达及其侵袭能力的影响,探讨姜黄素在防治TGF-β1诱导的乳腺癌侵袭转移中可能的作用机制.方法 采用CCK-8法检测姜黄素对MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用.将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组(无血清RPMI1640培养基/DMSO)、TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基/DMSO+10 ng/ml TGF-β1),姜黄素+ TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基+5、7.5、10μmol/L姜黄素+10ng/ml TGF-β1).处理24 h后,采用侵袭小室试验观察细胞的侵袭能力；处理不同时间后,采用Western blot法检测细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2以及p-p38的表达,明胶酶谱法检测各组细胞上清液中MMP-9的活性变化；以ERK特异性抑制剂PD98059、p38特异性抑制剂SB202580、姜黄素和/或TGF-β1处理细胞48 h,采用Western blot和明胶酶谱法检测MMP-9的表达.结果 低浓度姜黄素(≤10 μmol/L)对MDA-MB-231细胞无明显的细胞毒性作用；姜黄素呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量(P＜0.001)；姜黄素可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2及p-p38蛋白的表达,且呈浓度、时间依赖性(P＜0.05)；姜黄素随浓度的增加,对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9活性的抑制作用明显增强(P＜0.05)；PD98059抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素相似,而SB202580对MMP-9无明显影响.结论 姜黄素可能通过TGF-β/Smad、TGF-β/ERK信号通路下调TGF-β1诱导的MMP-9的表达及其活性,从而抑制肿瘤的侵袭能力.
作者：磨娜；曹友德；蒋金；李静 刊期： 2012年第10期
目的 建立巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)IgG定量ELISA检测方法,并进行初步应用.方法 用CMVIgG(50 U/ml)标准品建立CMV IgG ELISA定量检测方法,确定该方法的佳线性范围；制备室内质控血清并进行标定.对该方法进行重复性、中间精密性、准确性、特异性验证,并与Dia.Pro CMV IgG ELISA试剂盒进行比较.用建立的ELISA法检测689人份健康献浆员血浆的CMV IgG抗体效价.结果 建立的CMV IgG定量ELISA检测方法的佳线性范围为0.000 78～0.05U/ml;制备的室内质控血清的抗体效价为(5.67±0.55)U/ml;重复性试验检测结果的变异系数为4.6％～9.8％,中间精密性试验检测结果的变异系数为9.7％～10.6％;该方法检测3个浓度标准品的回收率为107.01％～112.97％；样品稀释液和血清中的其他一些干扰因素对检测结果影响较小；该方法与Dia.Pro CMV IgG ELISA试剂盒检测血浆样品的相关系数r=0.81.该方法检测689人份健康献浆员血浆样品的CMV IgG抗体效价≥10U/ml的占30.8％.结论 建立的CMV IgG定量ELISA检测方法操作简便,精密性良好,特异性强,可用于人血浆中CMV IgG的定量检测.
作者：张佩；吴恩应；陈玉琴；黄倩云；郭采平 刊期： 2012年第10期
目的 建立新型重组人促红细胞生成素(Novel recombinant human erythropoietin,HuEPO)抗体中和活性的检测方法,并应用于毒理研究中样品的分析.方法 通过考察新型rHuEPO对人UT7/EPO细胞增殖的促进作用及抗新型rHuEPO抗体(兔抗阳性血清)对该细胞增殖的抑制作用,建立抗新型rHuEPO抗体中和活性检测方法,并应用于毒理实验中对相关抗体血清中和活性的检测.结果 新型rHuEPO对人UT7/EPO细胞的增殖具有促进作用,在0.125～128 ng/ml浓度范围内作用显著；抗新型rHuEPO抗体在10-1～10-4范围内对人UT7/EPO细胞的增殖具有明显的抑制作用,抑制曲线呈中和抗体性质.毒理实验中,抗新型rHuEPO抗体(SD大鼠血清)显著抑制人UT7/EPO细胞的增殖,且具有特异性；抗新型rHuEPO抗体(Beagle犬血清)对人UT7/EPO细胞的增殖无影响.结论 成功建立了一种新型rHuEPO抗体中和活性检测方法,并成功应用于毒理实验样品分析,为新型rHuEPO在长期毒性实验中的免疫原性评价提供了一种有效的检测手段.
作者：侯绪凤；靳征；姜非 刊期： 2012年第10期
近年来手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)在我国持续流行,已经成为危害儿童健康的严重疾病.肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染是引起HFMD病例和婴儿重症死亡的主要病因.为控制EV71感染的流行,国内外均在开展不同种类EV71疫苗的研发,其中以灭活疫苗的进展快,目前国内3家EV71全病毒灭活疫苗即将进入Ⅲ期临床试验阶段.本文就全病毒灭活疫苗的研发进展及质量控制和评价要点作一综述.
作者：姚昕；毛群颖 刊期： 2012年第10期
1.概述伤寒是由伤寒沙门菌感染引起的急性全身性传染病,通过粪-口途径传播,其临床特征为持续发热、神经系统中毒症状、肝脾肿大及白细胞减少等,少数可并发肠出血及肠穿孔.人群对伤寒沙门菌普遍易感,但儿童和青壮年发病率高.伤寒是发展中国家常见的肠道传染病,我国的伤寒发病率约在(10～100)/10万之间,南部沿海及西南省份发病率较高[1].
作者：王斌；梁昊宇；计国欣；曾明 刊期： 2012年第10期
目的 利用毕赤酵母表达系统高效分泌表达人松弛素H2类似物(Human relaxin-2 analogue,HR2),并检测其生物活性.方法 通过密码子优化合成HR2基因,构建重组表达质粒pPICZαA-HR2,转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析.表达产物经超滤和柱层析纯化后,切除人工C肽,检测其生物活性.结果 经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pPICZαA-HR2构建正确；Tricine-SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白相对分子质量约6 500,表达量占菌体总蛋白的47.6％,为451μg/ml,且为分泌表达；Western blot分析显示,重组蛋白具有良好的反应原性；纯化的重组蛋白纯度达96％；经检测C肽切除的重组HR2对THP-1细胞具有刺激活性.结论 成功在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了重组松弛素H2类似物,并具有一定的生物活性.
作者：韩佳汕；郭德军；徐云明；厉保秋；柳增善；郑国君 刊期： 2012年第10期
目的 观察不同年龄人群接种人用狂犬病疫苗的接种反应及免疫应答.方法 选择身体健康、无犬伤史及狂犬病疫苗接种史的627名观察对象进行免疫原性检测,按生理发育状态分为5组:1～3岁组、4～6岁组、7～16岁组、17～40岁组和≥41岁组,分别于免疫前、首针免疫后14和45 d,抽取静脉血,分离血清,采用快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescence focus inhibition test,RFFIT)检测血清中抗狂犬病病毒抗体效价,并计算抗体几何平均滴度(GMT).在所有免疫原性受试者中随机抽取225名,进行接种反应观察.结果 225名观察对象接种人用狂犬病疫苗后的局部总反应率为5.15％,全身总反应率为4.42％,反应程度均为弱、中反应,无高强度及严重不良反应的病例报告.免疫前所有样本血清抗体GMT均≤0.2 IU/ml,抗体均为阴性；首针接种人用狂犬病疫苗后14d,各年龄组人群抗体阳转率均达100％,但抗体GMT各组间差异有统计学意义(P＜0.05),其中4～6岁组和7～16岁组较高,分别为9.42和9.01 IU/ml,1～3岁组和≥41组较低,分别为6.11和6.35 IU/ml,而4～6岁组与7～16岁组及1～3岁组与≥41岁比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)；首针接种人用狂犬病疫苗后45 d,各年龄组人群的抗体阳转率仍为100％,各年龄组平均GMT在14.8 ～ 16.40 IU/ml之间,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 不同年龄组人群接种人用狂犬病疫苗后临床反应轻微,免疫应答良好.但3岁以下婴幼儿及老年人抗体产生的时间有延迟的趋势,建议老年人及婴幼儿在接种人用狂犬病疫苗第1、2针时,应适当增加剂量,以提高血清抗体阳转率及免疫成功率.
作者：赵珍谊；余刚；郑艳微；陶航 刊期： 2012年第10期
目的 原代培养人乳腺癌相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF),并检测其生物学特性.方法 采用胶原酶消化培养法对26份乳腺癌患者标本进行原代细胞分离培养,倒置显微镜下观察人乳腺癌CAF的形态学特性,免疫荧光染色法鉴定所分离培养的人乳腺癌CAF纤维连结蛋白(Fibronectin,FN)和成纤维细胞活化蛋白(Fibroblast activated protein,FAP)的表达,并通过MTT法和细胞计数法绘制细胞生长曲线.结果 胶原酶消化法的适酶浓度为0.12％,适消化时间为10h.原代培养23份成功,3份失败.培养成功的细胞贴壁生长,形态完整,生长状态良好,背景清晰,有明显的对数生长期,并可传代培养.培养的细胞FN和FAP表达阳性,表明原代培养的CAF为乳腺癌CAF.结论 胶原酶消化培养法适合人乳腺癌CAF的原代培养,通过该方法可建立理想的人乳腺癌CAF体外实验模型.
作者：彭琼乐；孙艳；赵浏阳；王黎阳；柳满然；彭惠民 刊期： 2012年第10期
目的 优化毕赤酵母工程菌GS115/xynlIA产重组木聚糖酶的发酵条件,并检测其酶学性质.方法 采用单因素试验和L9(34)正交试验考察摇瓶发酵条件下培养基起始pH值、诱导剂甲醇添加量、诱导温度及诱导时间对产酶活性的影响；并分析重组木聚糖酶的酶学性质.结果 影响重组毕赤酵母产酶的因素重要性依次为:培养基起始pH值＞诱导时间＞诱导温度＞甲醇添加量,重组酵母产酶佳条件为:起始pH值7.5,甲醇添加量1.5％,32℃诱导96 h,在此条件下进行诱导表达重组木聚糖酶的酶活性可达228.35IU/ml;酶的适反应温度为50℃,适反应pH值为5.5,在低于40℃和pH4.5～7.5的范围内较稳定.结论 优化了毕赤酵母产重组木聚糖酶的发酵条件,为木聚糖酶的工业化生产及应用提供了依据.
作者：史红玲；汪俊卿；邬敏辰；高树娟 刊期： 2012年第10期
目的 探讨人参皂苷Rg1 (Ginsenoside Rg1,Rg1)对白消胺(Busulfan,BU)诱导的人胚肺成纤维细胞衰老的延缓作用.方法 将人胚肺成纤维细胞(＜24代)随机分为空白对照组(常规培养)、BU组(以120 μmol/L BU处理复制细胞衰老模型)、BU+ Rg1组(120 μmol/L BU+10 μmol/L Rg1)、Rg1预+BU组(10 μmol/L Rg1预处理后加入120 μmol/L BU)和Rg1预+BU+ Rg1组(10 μmol/L Rg1预处理后加入120 μmol/L BU,再加入10 μmol/L Rg1),通过倒置显微镜观察细胞形态的变化,细胞增殖试验检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期的分布；半乳糖苷酶(SA-β-ga1)染色法观察细胞衰老情况.结果 BU组细胞胞体扁平、宽大、不规则,出现空泡,而Rg1处理各组细胞的衰老表型出现一定程度的改善,以Rg1预+BU+Rg1组效果佳,但未完全恢复；BU组细胞增殖能力较空白对照组明显降低,Rg1处理组细胞增殖能力有所恢复,且随着时间的延长效果越明显,其中以Rg1预+BU+Rg1组佳；Rg1预+BU组和Rg1预+BU+Rg1组G2/M期比例较BU组显著降低(P＜0.05),其中以Rg1预+BU+ Rg1组降低明显；Rg1预+BU组和Rg1预+BU+ Rg1组衰老细胞数较BU组显著降低(P＜0.05).结论 Rg1能有效对抗BU诱导的细胞早衰,其具体作用机制有待进一步深入研究.
作者：王红宁；闫玲玲；李春莉；官涛；姜蓉；左国伟；陈地龙；龙轩；王建伟 刊期： 2012年第10期
目的 探讨易洛魁家族同源盒基因IRX1(Iroquois homebox gene)在肝癌中的表达及其临床意义.方法 收集82份肝癌组织(高分化26份,Edmondson分级Ⅰ级；中分化25份,Edmondson分级Ⅰ-Ⅱ和Ⅱ级；低分化31份,Edmondson分级Ⅱ-Ⅲ和Ⅲ级)和11份正常或良性疾病非癌组织标本,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot检测各组肝脏组织中IRX1的表达,免疫组织化学法检测IRX1在肝脏组织中的定位及临床特征.结果 肝癌组织中IRX1基因和蛋白的表达均明显高于非癌对照组(P＜0.05),且其表达量与肿瘤的分化程度相关,肿瘤分化程度越低,其表达量越高(P＜0.05).IRX1在肝癌组织中的阳性表达率明显高于非癌对照组(P＜0.05),且伴随着肿瘤分期增加和分化程度的降低,IRX1阳性率越高,但IRX1阳性率与HBV感染以及伴随肝硬化情况无明显相关性(P＞0.05).IRX1染色阳性的高分化肝癌组织中,68.2％定位于细胞质,18.2％定位于细胞核,13.6％胞质和胞核均阳性；IRX1染色阳性的低分化肝癌组织中,胞质胞核均阳性的增加至65.5％.结论 IRX1可能参与调控肝癌的发生发展过程,IRX1的表达与肝癌的分化程度有关,提示IRX1可作为判断肝癌预后、分化程度以及肿瘤靶向分子治疗的指标.
作者：杨惠洁；余爽；王静；陈楚；顾颖；鲍依稀 刊期： 2012年第10期
目的 克隆狂犬病病毒(Rabies virus,RV)4aG株G蛋白基因,并与其他疫苗毒株G蛋白基因序列进行比较,为我国狂犬病疫苗的研制提供理论依据.方法 从RV 4aG株中扩增G蛋白基因,并进行序列测定,利用生物信息学软件绘制系统进化树,预测G蛋白功能位点、二级结构和B细胞抗原表位,并与其他疫苗毒株进行比较.结果 克隆的4aG株G蛋白基因序列与GenBank中登录的序列一致.进化树分析显示,4aG株与CVS株的进化关系较远；4aG、4aGV18、CVS、PV及RC-HL毒株跨膜区域在第460 ～ 479氨基酸之间,其他毒株在459 ～ 478氨基酸之间；PV株有5个糖基化位点,RV-97株有3个糖基化位点,其他毒株均有4个糖基化位点；G蛋白抗原表位位于氨基酸100 ～ 300及480 ～ 520之间；不同毒株G蛋白抗原位点区域有所不同,与CVS株比较,PV株抗原表位与其为接近,4aG、4aGV18、CTN-1-31及Flury-HEP株与其抗原表位较为接近.结论 4aG株G蛋白功能位点和抗原表位与CVS株相差较大,但其在Vero细胞上传代稳定,可用于制备Vero细胞纯化疫苗.
作者：李建强；孙燕；孙振鹏；范秀娟；陈军；李薇 刊期： 2012年第10期
目的 建立重组人干扰素β1a(Recomhimant human interferon beta1a,rhIFNβ1a)生物学活性MTS/PMS检测方法.方法 将MTS和PMS偶联作为染色液,建立IFNβ1a生物学活性检测方法,对细胞浓度、细胞病变时间、MTS工作浓度和染色时间进行优化,并绘制效应曲线.对建立的方法进行重复性、准确性验证,并与结晶紫染色法进行比较.结果 优化后的MTS/PMS法的佳反应条件为:细胞浓度1×105个/ml,细胞病变时间24～36h,MTS工作浓度2mg/ml,染色时间40 min；A570/630值与IFNβ1a保护Wish细胞S型效应曲线的相关系数(R2)均达0.99以上.不同检测板、相同加样位置的变异系数在6％～20％之间；相同检测板、不同加样位置的变异系数在13％～17％之间；检测IFNβ1a细胞收集液的回收率在86％～ 121％之间.该法检测rhIFNβ1a生物学活性效应曲线呈反“S”型,线型较好,R2值均在0.99以上,均比结晶紫染色法的R2值高,且比结晶紫染色法更稳定.结论 已建立了rhIFNβ1a生物学活性MTS/PMS检测方法,适用于常规定量测定rhIFNβ1a的生物学活性.
作者：张慧娟；王军；慕彩梅；王妍 刊期： 2012年第10期
目的 采用双抗体夹心ELISA法检测鼠疫组分疫苗中F1和rV的抗原含量.方法 利用F1、rV抗原单克隆抗体,对鼠疫组分疫苗原液进行抗原鉴别试验；分别应用F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法对疫苗原液进行抗原定量检测；验证Al(OH)3佐剂吸附抗原的完全性；将疫苗成品于4℃放置18个月,分别于1和18个月时取样,用建立的双抗体夹心ELISA法检测F1和rV抗原含量,分析抗原的稳定性；对3批鼠疫菌rV抗原原液3步纯化工艺进行验证.结果 鼠疫组分疫苗原液中的F1和rV抗原具有良好的反应原性；用建立的双抗体夹心ELISA法检测4批F1和rV抗原原液中F1和rV抗原的含量与Lowry 法检测结果的误差均在±20％以内；4批鼠疫组分疫苗离心后的上清液中均未检测到F1和rV抗原,表明Al(OH)3佐剂吸附抗原完全；4℃保存18个月,疫苗中的F1和rV抗原含量稳定；3批鼠疫菌rV抗原原液经阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析3步纯化,rV抗原在纯度增加的同时,抗原含量也增加.结论 已建立的F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法可用于鼠疫组分疫苗中F1和rV抗原的定量检测.
作者：常娅莉；吴智远；魏东；韩少波；胡丽娜；焦磊；卜培英；王国治；王秉翔 刊期： 2012年第10期
肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)感染是引起神经系统紊乱、肺水肿、肺出血等严重疾病的主要原因.非结构蛋白2A、3C、3D是EV71在宿主细胞内完成复制和存活的基础,具有不同于肠道病毒其他成员的结构和作用机制.2A和3C蛋白可抑制宿主细胞蛋白的表达,从而促进细胞凋亡,3C蛋白还可抑制天然免疫,3D蛋白与病毒的耐高温和高度变异适应性有关.一些小分子物质可在病毒入侵的不同阶段抑制EV71感染.本文就2A、3C、3D蛋白在EV71复制过程中的结构与功能特点以及一些小分子物质在病毒复制中的抑制作用作一综述.
作者：罗永彬 刊期： 2012年第10期
目的 构建携带FLAG-3NLS-FRB*融合基因的嵌合腺病毒,并检测其在AD-293细胞中的表达.方法 将FLAG标记的3段核定位信号(FLAG-3NLS)与突变修饰的雷帕霉素靶FRB结构域(FRB*)基因通过重叠PCR技术拼接成FLAG-3NLS-FRB*,定向克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,测序鉴定后,与腺病毒骨架质粒pAd5F35在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得嵌合腺病毒Ad5F35-FLAG-3NLS-FRB*,感染AD-293细胞进行包装、扩增.采用基因转移单位(Gene transfer unit,GTU)法测定病毒滴度；RT-PCR及Western blot检测FLAG-3NLS-FRB*在AD-293细胞中的转录及表达.结果 腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-FLAG-3NLS-FRB*经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确；FLAG-3NLS-FRB*正确克隆至腺病毒骨架质粒中；在AD-293细胞中包装、扩增获得了高滴度的嵌合腺病毒Ad5F35-FLAG-3NLS-FRB*,病毒滴度为2.0×1013 GTU/ml；嵌合腺病毒感染AD-293细胞后36 h,在细胞中可检测到FLAG-3NLS-FRB*基因的转录和蛋白的表达.结论 成功构建了高滴度的嵌合腺病毒Ad5F35-FLAG-3NLS-FRB*,并在AD-293细胞中成功表达了FLAG-3NLS-FRB*融合蛋白.
作者：高淼；黄峥兰；李千音；钟梁；冯文莉 刊期： 2012年第10期
目的 了解黑龙江省流行性腮腺炎(简称流腮)的发病水平,并分析其流行病学特征,为制定流腮防治策略、加速控制流腮流行提供科学依据.方法 对黑龙江省2004～2011年中国疾病预防控制信息系统报告资料进行流行病学特征分析.结果 2004～2011年黑龙江省共报告流腮病例39 236例,年平均发病率为16.10/10万；全年均有发病,但存在两个发病高峰期,分别为4～7月和11月～次年1月,12月和6月是发病多的月份；13个地市均有流腮病例发生；该省流腮病例主要集中在20岁以下人群,2岁以下儿童发病较少,5～9岁组发病多,且主要集中在中小学生和托幼儿童.结论 进一步了解了黑龙江省流行性腮腺炎的流行特征,并提出了加强流行性腮腺炎疫情的防控措施.
作者：叶昕；杜瑞林；孙兆丹；宋婧；黄鹤；高士锐；马玉杰；闫滨 刊期： 2012年第10期
目的 探讨靶向卡氏肺孢子菌(Pncumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白基因(Major surface glycoprotein gene,MSG)上游保守序列(Upstream conserved sequence,UCS)的microRNA重组质粒对大鼠卡氏肺孢子菌肺炎(Pneumocystis carinii pneumonia,PCP)的治疗作用.方法 将SD大鼠经腹股沟皮下注射地塞米松磷酸钠7周,制备大鼠PCP感染模型.将模型大鼠随机分为5组:microRNA重组质粒治疗组(M组)、磺胺药物治疗组(H组)、生理盐水对照组(C1组)、空载体质粒对照组(C2组)和模型对照组(C3组),其中M组和C1、C2组经尾静脉分别注射含microRNA重组质粒pPC-UCS、生理盐水和空载体,H组用磺胺药物灌胃治疗,C3组不做处理,每日1次,疗程为7d.1周后吉姆萨染色,油镜下计数大鼠肺组织液印片中PC包囊数；HE染色,光镜观察肺组织病理改变；ELISA法检测大鼠血清中IL-10和IFNγ的表达水平；RT-PCR法检测肺组织中PC MSG-UCSmRNA的表达水平；电镜观察PC的超微结构.结果 与C1、C2和C3组相比、M组和H组大鼠肺组织PC包囊数均明显减少(P＜0.05),肺组织炎症较轻,大鼠血清IL-10的表达水平均显著降低(P＜0.05),面IFNγ的表达水平显著升高(P＜0.05),大鼠肺组织PC MSG-UCS mRNA的表达水平均显著降低(P＜0.05)；电镜观察显示,M组和H组PC包囊表面均出现破损,C1、C2、C3组未发现破损.结论 microRNA重组质粒pPC-UCS对大鼠PCP有明显的治疗作用,为治疗PCP提供了新的思路.
作者：龚锐；姚云清；梅林；骆晓练；谭燕；李文桂；陈雅棠 刊期： 2012年第10期
目的 探讨人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制.方法 取对数生长期的KG1α细胞,分为两组:空白对照组(常规培养)和人参皂苷单体Rh2(S)组,采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态及数量,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪检测细胞周期的分布,Real-time PCR检测细胞中β-catenin基因mRNA水平,免疫细胞化学法检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的定位及表达,Western blot检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平.结果 人参皂苷单体Rh2(S)对KG1α细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.与空白对照组比较,Rh2(S)作用48 h后,可见KG1α细胞分散生长,数量明显减少；可见数量不等,程度不同的凋亡细胞；G0/G1期细胞比例明显上升(P＜0.05),G2+M和S期细胞比例明显下降(P＜0.05)；细胞中β-catenin基因mRNA水平明显降低(P＜0.01).β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 人参皂苷单体Rh2(S亚型)对KG1α细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制可能抑制Wnt/β-catenin/TCF4/CyclinD1信号通路,使细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡.
作者：刘艺；李静；刘晓岩；姜蓉；王建伟；魏强；赵亮；陈地龙 刊期： 2012年第10期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
