管国芳；金春顺；金宁一；张静敏；米志强；李霄；连海；孙丽丽；文连姬；崔葳
目的观察人巨细胞病毒(HCMV)gB基因真核表达载体在小鼠中的免疫效果.方法大量提取目的质粒,分3个剂量组进行多点肌肉注射免疫小鼠,利用MTT法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性,ELISA法检测小鼠血清中HCMV特异性抗体,中和试验检测小鼠血清中和抗体.结果 ELISA检测结果表明,与空白对照、空载体对照组相比,3个剂量组pcDNA3.1/gB质粒免疫后小鼠血浆中抗HCMV IgG抗体水平均明显增高(P＜0.05),中和抗体水平为1:20～1:40,而对照组血清中无中和抗体存在.淋巴细胞增殖指数免疫小鼠与正常小鼠差异无显著意义.结论已构建的HCMVgB基因真核表达载体可以诱导小鼠产生明显的体液免疫,为核酸疫苗研究奠定了基础.
作者：张中洋；李秀玲；何薇薇 刊期： 2005年第06期
目的观察重组中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因型外膜蛋白A(rOspA)的动物免疫效果.方法采用纯化的rOspA作抗原,以新西兰家兔、绵羊和犬为试验动物,分不同剂量组和对照组进行免疫,用间接免疫荧光法(IFA)检测其血清特异性抗体(IgG),并进行体外中和试验.结果用rOspA免疫新西兰家兔、绵羊和犬后,其血清抗体(IgG)效价较免疫前均显著升高,其几何平均滴度为1:169,体外中和试验表明,每毫升兔抗rOspA血清可杀灭1.0×105个莱姆病螺旋体;绵羊和犬的抗rOspA血清杀菌能力因免疫剂量的不同而不同,每毫升绵羊和犬抗rOspA血清高可杀灭1.0×106个莱姆病螺旋体.结论rOspA有较好的免疫原性,可作为中国莱姆病rOspA亚单位疫苗的一种有效成分.
作者：郝琴；何召庆；郭振梅；侯学霞；耿震；胡桂兰；万康林 刊期： 2005年第06期
目的通过对国产人血白蛋白制品的铝含量分析,使该制品适应即将执行的<中国药典>相关标准的要求.方法以<欧洲药典>的铝含量(200μg/L)为标准,采用原子吸收分光光度法检测制品中的铝含量.结果国内压滤生产的人血白蛋白制品合格率为54%,离心法为28%,生产工艺改进后,铝含量下降幅度平均为62%,且基本达到了欧洲药典的合格标准.结论国内人血白蛋白生产厂家通过对生产工艺的改进,铝含量完全可以控制在欧洲药典的合格标准内.
作者：肖林；程雅琴 刊期： 2005年第06期
目的在毕赤酵母中表达HBsAg/GM-CSF融合蛋白.方法利用PCR扩增HBsAg和GM-CSF基因,通过15个氨基酸的连接肽将两个片段连接,获得融合基因S-GM,克隆入酵母穿梭质粒pPIC9K中.将重组质粒9K-S-GM电转化毕赤酵母后,G418筛选,甲醇诱导,HBsAg/GM-CSF融合蛋白表达.经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测表达产物特异性.结果 PCR扩增的片段与预期大小一致,HBsAg/GM-CSF融合蛋白在毕赤酵母中获得了表达.Western blot检测,该融合蛋白同时具有HBsAg和GM-CSF的特异性.结论该融合蛋白的获得为提高乙肝疫苗的免疫原性奠定了科学基础.
作者：席晓蓉；李鼎锋；孙强明；杨芳；易山；孙茂盛 刊期： 2005年第06期
目的研制敏感、特异的人类免疫缺陷病毒Ⅰ+Ⅱ型(HIV Ⅰ+Ⅱ)化学发光免疫试剂盒.方法采用碱性磷酶标记重组gp120、gp41和合成肽gp6抗原,金刚烷胺增敏化学发光体系作为酶底物,采用ELISA双抗原夹心法检测.结果敏感度为0.1 ncu;检测范围为0.1～100 ncu;HIV浓度为0.5、1.2、5.1、19.8 ncu时,批内变异系数3%～8%(n=20),批间变异系数5%～9%(n=20);与anti-HAV、anti-HBV、anti-HCV、anti-HEV无交叉反应;具有良好的稳定性,在1年的效期内(4℃保存)其整体变化幅度＜10%.结论该试剂盒灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性.
作者：买制刚；杨青；李振勇；李建军；屈凌波 刊期： 2005年第06期
治疗性疫苗的用途主要是诱导抗原特异性T细胞反应,增强保护性细胞免疫应答.本文就各类治疗性疫苗的特点、应用情况、存在问题及研究趋势等做了全面综述.
作者：闫东梅；朱迅 刊期： 2005年第06期
目的进行治疗性肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的质量控制研究.方法用细胞计数、ELISA和FCM分别检测细胞生长、抗体生成速度和抗原结合活性;冻存细胞复苏后及体外传代3个月,检测抗体分泌稳定性和克隆阳性率;进行无菌检查、细胞核型和同工酶谱分析,了解细胞遗传稳定性、外源因子污染和细胞间交叉污染情况.结果肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速度分别为0.047～0.052/h和1.1～1.4 pg/cell·h,与靶细胞FHCC98结合的阳性率达99%,平均荧光强度在200以上.冻存细胞复苏后及体外连续传代3个月后,其特异性抗体生成速度维持在1.0 pg/cell·h以上,培养上清抗体效价仍为1:1000.不同批次的生成细胞核型均符合杂交瘤细胞特征,外源因子检查阴性,无细胞间交叉污染.结论HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速率、抗体稳定性和特异性均符合已建立的规模化放大培养的种子细胞质控标准.
作者：李玲；米力；刘蓉；汪莉；徐力青；冯强；田蓉；陈志南 刊期： 2005年第06期
目的检测RFP(Ret finger protein)蛋白在人正常组织及人癌组织中的分布.方法采用实时荧光定量PCR方法,以18SrRNA为内对照,检测RFP在人正常组织及人癌组织中的表达水平.结果 RFP表达水平子宫颈鳞状细胞癌组织高于正常子宫颈组织,子宫内膜腺癌组织高于正常子宫内膜组织,胃腺癌组织高于正常胃组织,食管鳞状细胞癌组织高于正常食管组织,而子宫内膜腺癌组织高于子宫颈鳞状细胞癌组织,胃腺癌组织高于食管鳞状细胞癌组织,脑癌组织高于正常脑组织.结论RFP可能成为治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点.
作者：张静敏；金宁一；连海；管国芳；李宵；安汝国；高桥雅英 刊期： 2005年第06期
1.临床资料患者,罗××,男,56岁.2004年3月27日消化道出血.查体:体温36.1℃,脉搏60次/min,呼吸18次/min,血压10.74/4.86 kPa.化验检查:RBC 1.82×1012 cells/L,Hb54g/L,WBC 4.5×109cells/L,总胆红素40.2 μmol/L,直接胆红素25.3μmol/L.临床诊断:消化道出血,伴有自身免疫溶血性贫血(AIHA).为纠正贫血需输血治疗,医院与数名献血者交叉配血,主次侧均出现凝集,送本站鉴定及交叉配血.
作者：胡继征 刊期： 2005年第06期
目的建立乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞表达系统.方法构建含有HBsAg基因的植物细胞表达载体质粒pBIBSb.采用农杆菌感染人参细胞的方法,经农杆菌培养、农杆菌与受体细胞共培养、受体细胞的脱菌培养以及转化体细胞的选择培养后,筛选在G418抗生素培养基上正常生长的细胞株.应用ELISA方法检测抗性细胞株的HBsAg表达;提取基因组DNA进行PCR扩增反应.结果质粒pBIBSb的酶切结果正确.经G418抗生素筛选得到8株正常生长的细胞株,其中5株能够表达HBsAg,提取基因组DNA进行PCR扩增反应,得到大小约700bp的扩增片段.结论获得了整合HBsAg基因,并能够稳定表达HBsAg的人参细胞表达系统.
作者：刘丹；盛军；刘晓宇；于海鹏；王志武；李娟；姚为民；杨贵贞 刊期： 2005年第06期
目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growthfactor,bFGF)体外作用于骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)后,诱导其向神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞定向分化的情况.方法从鼠骨髓中获得MSCs,培养传代,用MTT法检测bFGF对骨髓MSCs生长的影响.10ng/ml bFGF作用2 d后,通过IBMX、细胞因子bFGF、GDNF、IL-1β、中脑神经胶质细胞条件培养基和中脑神经细胞膜碎片等分组联合诱导骨髓MSCs向神经元样细胞、多巴胺能神经元样细胞分化,免疫细胞化学方法鉴定特异标志NSE、MAP-2a,b和TH的表达.结果在一定范围内,bFGF对骨髓MSCs具有明显的促增殖作用.分化的神经元样细胞表达NSE、MAP-2a,b和TH,联合应用GDNF、IL-1β、中脑条件培养基和中脑神经细胞膜碎片诱导7 d后,NSE阳性率为(27.774±2.747)%,MAP-2a,b为(28.006±3.080)%,TH为(3.098±0.352)%.结论体外骨髓MSCs被诱导分化成神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞,为帕金森等中枢神经系统疾病的细胞移植治疗奠定了基础.
作者：郭丽；尹飞；王欣；凌翎；呼和塔娜；李鹏；段德生；范洪学 刊期： 2005年第06期
目的观察丙酮处理的短棒状杆菌制剂的毒性和免疫激活功能.方法用丙酮脱脂方法去掉短棒状菌的部分外膜蛋白及附着在菌体上的杂蛋白,制成制剂,与现用短棒制剂同时进行异常毒性试验、毒性试验、脾激活试验、抑瘤试验.结果丙酮处理后短棒状制剂比原短棒状制剂的毒性反应明显降低,免疫激活功能明显提高.结论丙酮处理后的短棒状制剂质量明显提高.
作者：曹瑞堂；程晓耕；王桂荣；朱燕；杨林 刊期： 2005年第06期
目的制备重组水蛭素(Hirudin)生物学活性检测参考品,并标定其生物学活性.方法按照WHO相关规定制备、分装和冻干参考品,经全面检测合格,用TH生色底物法进行体外生物学活性检测.结果外观、无菌试验合格,水分含量为0.8%.经过10次标定,平均生物学活性为12 701 ATU/支,标准差为2 226 ATU/支,变异系数为17.5%.在-20℃、4℃和25℃条件下,生物学活性可以稳定保持9个月.结论该批重组水蛭素各项指标均符合要求,性质稳定,可作为国家参考品,用于重组水蛭素的生物学活性检测.
作者：丁有学；张翊；郭莹；韩春梅；刘兰；饶春明；王军志 刊期： 2005年第06期
目的研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗.方法用含目的基因的质粒pcDNA3-GPI-B7-1转染CHO/DHFR+细胞,提取膜蛋白GPI-B7-1,经Western blot鉴定后,用蛋白转化法锚定在肿瘤细胞膜上,免疫C57BL/6小鼠后,取小鼠脾细胞进行T细胞扩增和CTL功能检测,并检测细胞培养液和小鼠血清中IL-2、TNF-α和IFN-γ水平.结果用GPI-B7-1修饰的肿瘤细胞膜免疫小鼠后可诱发肿瘤特异性T细胞扩增和CTL活性增强,细胞培养液中细胞因子检测为阳性.结论该疫苗能激发小鼠的免疫功能,具有一定的保护小鼠免受肿瘤细胞侵袭的作用.
作者：张淑敏；畅继武；马富玲；王海涛；王馨；张新；刘凤勇 刊期： 2005年第06期
目的制备重组人干扰素-βSer17(rhIFN-βSer17),并检测其对SARS病毒的抑制作用.方法通过发酵收集菌体,经高压匀浆破碎收集包涵体、有机溶剂抽提、酸沉淀、柱层析纯化重组蛋白,通过细胞病变抑制法检测其对SARS病毒的抑制作用.结果研制的rhIFN-βSer17的纯度超过95%,比活性超过2.0×107 IU/mg蛋白,在体外对SARS病毒具有明显的抑制作用.结论已成功制备rhIFN-β Ser17,并在体外对SARS病毒具有抑制作用.
作者：张振龙；刘建源；杨云凯；邓宛明；崔春青；王淑芳；汤燕文；赵建英 刊期： 2005年第06期
目的观察不同诱导剂对工程菌发酵及HSP-MUC1重组蛋白表达的影响,从而选取佳诱导表达条件.方法分别用IPTG和乳糖作为诱导剂,发酵表达HSP-MUCI重组蛋白质,并对重组蛋白质表达量和性状进行分析.结果用IPTG诱导发酵的菌体经普通匀浆法即可将细菌破碎;而用乳糖发酵的菌体经普通匀浆法不能破菌,通过延长发酵时间也能达到与IPTG诱导相同的表达量.结论乳糖可以作为基因工程重组蛋白的理想诱导剂.
作者：卫红飞；万敏；杨世杰；王燕媚；李大鹏；王爱丽；于永利；王丽颖 刊期： 2005年第06期
目的获得序列正确的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因,并进行表达.方法用PCR法从SENV阳性血清中获得SENV-D ORF1 C-端基因,测序验证后,构建pQE30-SD重组表达质粒,并转化E.coli M15,进行IPTG诱导表达及Western blot分析.结果获得的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因序列正确,表达蛋白相对分子质量约为38000.经Western blot证实能与阳性血清发生抗原抗体反应.结论已成功获得了SENV-D ORF1 C-端蛋白,为今后进一步研究奠定了基础.
作者：陈蕤；穆士杰；杜娟；王全立 刊期： 2005年第06期
目的观察森林脑炎纯化疫苗接种反应和免疫效果.方法选择目标人群,并用原制疫苗作对照,观测疫苗注射后的反应,并采集疫苗免疫前后血清,用蚀斑减少法检测中和抗体,评价疫苗的免疫效果.结果森林脑炎纯化疫苗接种后无全身副反应,局部反应率仅为0.82%.血清中和抗体阳转率高于85%.结论森林脑炎纯化疫苗较原制同类疫苗反应轻微,而中和抗体阳转率明显高于原制疫苗,是现用原制灭活疫苗理想的替代产品.
作者：董关木；宋宗明；刘文雪；安祺；王晓理；王显军；韩亮；涛波；孔艳；杨立宏 刊期： 2005年第06期
目的探讨生物可降解材料聚乳酸-聚乙醇酸-聚乙二醇(PLGA-PEG)与血管平滑肌的细胞相容性,为可降解血管支架材料的研究提供依据.方法采用体外培养的兔血管平滑肌细胞种植在PLGA-PEG膜片上,用相差显微镜观察细胞的生长情况,每天计数,绘制细胞生长曲线,用MTT法测定细胞增殖指数,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果兔血管平滑肌细胞在PLGA-PEG膜片上生长良好,与对照组差异无显著意义;MTT法检测细胞增殖指数,与对照组差异无显著意义;流式细胞仪检测细胞周期显示对细胞增殖活性无明显影响.结论 PLGA-PEG与兔血管平滑肌细胞具有良好的细胞相容性,可以用于可降解血管支架的制备.
作者：邢玥；李淑梅；张基昌；景瑕斌；迟宝荣；徐效义 刊期： 2005年第06期
目的研究新城疫病毒弱毒株致Hep-2肿瘤细胞死亡方式及其作用机制.方法应用AO/EB染色、电子显微镜观察、DCFA染色测定细胞内活性氧水平及罗丹明123染色法测定细胞线粒体膜电位等方法分析新城疫病毒弱毒株致Hep-2肿瘤细胞的死亡方式及途径.结果新城疫病毒弱毒株感染能够导致Hep-2肿瘤细胞浓缩,被AO/EB浓染,细胞核缩小,染色质边集.FACS细胞周期分析显示,感染后的Hep-2肿瘤细胞72 h出现二倍体亚峰,G1期细胞凋亡率为8.59%,电子显微镜观察显示,肿瘤细胞核染色质边集、浓缩,细胞核呈固缩状,呈现典型的凋亡形态.另外,细胞内活性氧水平上升,线粒体膜电位下降.结论新城疫病毒弱毒株主要通过细胞内线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡,从而发挥其抑瘤作用.
作者：管国芳；金春顺；金宁一；张静敏；米志强；李霄；连海；孙丽丽；文连姬；崔葳 刊期： 2005年第06期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
