张淑敏；畅继武；马富玲；王海涛；王馨；张新；刘凤勇
为分析甲肝病毒疫苗株(L-A-1株)在连续传代过程中的稳定性,选择了第11代(P11)和23代疫苗病毒进行部分核苷酸测序,通过对核苷酸序列和其氨基酸序列比较,来考察病毒的变异性.
作者：姜春来；王鹏富；刘景晔；刘大维 刊期： 2005年第06期
目的研制A+C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗.方法 A群和C群脑膜炎球菌多糖在溴化氰(CNBr)的活化下,以1,6己二酰肼(ADH)作为连接子,与精制破伤风类毒素(TT)在碳二亚胺(EDAC)作用下结合,再按一定的比例将两者混合,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液,加保护剂冻干后,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗.结果经检定,A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗各项指标均达到了质控标准.该疫苗安全性及免疫原性良好.结论已成功研制出冻干A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗,该制备工艺是可行的.
作者：黄镇；钱雯；袁琳；施競；陈燕；陈南萍；周红军；李文春；杨美峰；刘红岩 刊期： 2005年第06期
目的研制敏感、特异的人类免疫缺陷病毒Ⅰ+Ⅱ型(HIV Ⅰ+Ⅱ)化学发光免疫试剂盒.方法采用碱性磷酶标记重组gp120、gp41和合成肽gp6抗原,金刚烷胺增敏化学发光体系作为酶底物,采用ELISA双抗原夹心法检测.结果敏感度为0.1 ncu;检测范围为0.1～100 ncu;HIV浓度为0.5、1.2、5.1、19.8 ncu时,批内变异系数3%～8%(n=20),批间变异系数5%～9%(n=20);与anti-HAV、anti-HBV、anti-HCV、anti-HEV无交叉反应;具有良好的稳定性,在1年的效期内(4℃保存)其整体变化幅度＜10%.结论该试剂盒灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性.
作者：买制刚；杨青；李振勇；李建军；屈凌波 刊期： 2005年第06期
目的探讨生物可降解材料聚乳酸-聚乙醇酸-聚乙二醇(PLGA-PEG)与血管平滑肌的细胞相容性,为可降解血管支架材料的研究提供依据.方法采用体外培养的兔血管平滑肌细胞种植在PLGA-PEG膜片上,用相差显微镜观察细胞的生长情况,每天计数,绘制细胞生长曲线,用MTT法测定细胞增殖指数,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果兔血管平滑肌细胞在PLGA-PEG膜片上生长良好,与对照组差异无显著意义;MTT法检测细胞增殖指数,与对照组差异无显著意义;流式细胞仪检测细胞周期显示对细胞增殖活性无明显影响.结论 PLGA-PEG与兔血管平滑肌细胞具有良好的细胞相容性,可以用于可降解血管支架的制备.
作者：邢玥；李淑梅；张基昌；景瑕斌；迟宝荣；徐效义 刊期： 2005年第06期
目的研究聚乙二醇(PEG)修饰重组人干扰素-β(rhIFN-β)的免疫原性和药物代谢动力学性质.方法按照rhIFN-β的临床治疗程序免疫家兔,分别用ELISA方法和中和实验法检测家兔血清中的抗体水平;给家兔单剂量注射rhIFN-β及其3种修饰物,建立ELISA双抗体夹心法,检测血清中样品浓度.结果 3种修饰物在家兔体内诱导产生的抗体水平均明显低于rhIFN-β诱导产生的抗体水平,半衰期分别较原来提高5.927倍、14.204倍和14.708倍.结论 PEG修饰rhIFN-β可明显降低其免疫原性,改善了rhIFN-β的药物代谢动力学性质.
作者：徐静；倪道明；张振龙 刊期： 2005年第06期
治疗性疫苗的用途主要是诱导抗原特异性T细胞反应,增强保护性细胞免疫应答.本文就各类治疗性疫苗的特点、应用情况、存在问题及研究趋势等做了全面综述.
作者：闫东梅；朱迅 刊期： 2005年第06期
目的制备抗百日咳丝状血凝素(FHA)的单克隆抗体,并建立特异、准确的FHA定量检测方法.方法采用杂交瘤技术制备McAb,以ELISA间接法筛选稳定分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,并进行系统的鉴定和纯化,建立定量检测FHA的ELISA 方法.结果获得6株分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,抗体类别均为IgG1(κ),效价达1:105～1:1:106,并能特异性识别FHA,与流感病毒血凝素及百日咳毒素无交叉反应,应用ELISA检测FHA的灵敏度为1.04μg/L,批内变异系数为5.49%,批间变异系数为9.31%,平均回收率为94.18%.结论已成功制备了抗FHA-McA,建立了一种特异、准确地定量检测FHA的ELISA方法,可用于无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量的检测,为该疫苗的质量控制提供了有力的手段.
作者：徐颖华；孟淑芳；张庶民；侯启明；雷殿良 刊期： 2005年第06期
目的检测RFP(Ret finger protein)蛋白在人正常组织及人癌组织中的分布.方法采用实时荧光定量PCR方法,以18SrRNA为内对照,检测RFP在人正常组织及人癌组织中的表达水平.结果 RFP表达水平子宫颈鳞状细胞癌组织高于正常子宫颈组织,子宫内膜腺癌组织高于正常子宫内膜组织,胃腺癌组织高于正常胃组织,食管鳞状细胞癌组织高于正常食管组织,而子宫内膜腺癌组织高于子宫颈鳞状细胞癌组织,胃腺癌组织高于食管鳞状细胞癌组织,脑癌组织高于正常脑组织.结论RFP可能成为治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点.
作者：张静敏；金宁一；连海；管国芳；李宵；安汝国；高桥雅英 刊期： 2005年第06期
目的制备重组水蛭素(Hirudin)生物学活性检测参考品,并标定其生物学活性.方法按照WHO相关规定制备、分装和冻干参考品,经全面检测合格,用TH生色底物法进行体外生物学活性检测.结果外观、无菌试验合格,水分含量为0.8%.经过10次标定,平均生物学活性为12 701 ATU/支,标准差为2 226 ATU/支,变异系数为17.5%.在-20℃、4℃和25℃条件下,生物学活性可以稳定保持9个月.结论该批重组水蛭素各项指标均符合要求,性质稳定,可作为国家参考品,用于重组水蛭素的生物学活性检测.
作者：丁有学；张翊；郭莹；韩春梅；刘兰；饶春明；王军志 刊期： 2005年第06期
目的制备甲型肝炎病毒抗原定量参比品.方法依据<甲型肝炎灭活疫苗制造及检定规程>制备了1批甲肝病毒抗原参比品,并进行蛋白质含量测定、HAV蛋白纯度分析和酶标抗原含量标化.结果经纯化,杂蛋白去除率达99.9%,参比品的纯度大于95%;抗原含量在20～80EU/ml范围内,抗原含量的对数与其A值呈剂量-效应关系.结论该参比品可用于甲肝病毒ELISA定性及定量标定.
作者：刘建生；庞伟；孟明耀；马进；王萍；杨丽仙；陈统球；侯宗柳 刊期： 2005年第06期
目的在毕赤酵母中表达HBsAg/GM-CSF融合蛋白.方法利用PCR扩增HBsAg和GM-CSF基因,通过15个氨基酸的连接肽将两个片段连接,获得融合基因S-GM,克隆入酵母穿梭质粒pPIC9K中.将重组质粒9K-S-GM电转化毕赤酵母后,G418筛选,甲醇诱导,HBsAg/GM-CSF融合蛋白表达.经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测表达产物特异性.结果 PCR扩增的片段与预期大小一致,HBsAg/GM-CSF融合蛋白在毕赤酵母中获得了表达.Western blot检测,该融合蛋白同时具有HBsAg和GM-CSF的特异性.结论该融合蛋白的获得为提高乙肝疫苗的免疫原性奠定了科学基础.
作者：席晓蓉；李鼎锋；孙强明；杨芳；易山；孙茂盛 刊期： 2005年第06期
目的进行治疗性肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的质量控制研究.方法用细胞计数、ELISA和FCM分别检测细胞生长、抗体生成速度和抗原结合活性;冻存细胞复苏后及体外传代3个月,检测抗体分泌稳定性和克隆阳性率;进行无菌检查、细胞核型和同工酶谱分析,了解细胞遗传稳定性、外源因子污染和细胞间交叉污染情况.结果肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速度分别为0.047～0.052/h和1.1～1.4 pg/cell·h,与靶细胞FHCC98结合的阳性率达99%,平均荧光强度在200以上.冻存细胞复苏后及体外连续传代3个月后,其特异性抗体生成速度维持在1.0 pg/cell·h以上,培养上清抗体效价仍为1:1000.不同批次的生成细胞核型均符合杂交瘤细胞特征,外源因子检查阴性,无细胞间交叉污染.结论HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速率、抗体稳定性和特异性均符合已建立的规模化放大培养的种子细胞质控标准.
作者：李玲；米力；刘蓉；汪莉；徐力青；冯强；田蓉；陈志南 刊期： 2005年第06期
目的观察不同诱导剂对工程菌发酵及HSP-MUC1重组蛋白表达的影响,从而选取佳诱导表达条件.方法分别用IPTG和乳糖作为诱导剂,发酵表达HSP-MUCI重组蛋白质,并对重组蛋白质表达量和性状进行分析.结果用IPTG诱导发酵的菌体经普通匀浆法即可将细菌破碎;而用乳糖发酵的菌体经普通匀浆法不能破菌,通过延长发酵时间也能达到与IPTG诱导相同的表达量.结论乳糖可以作为基因工程重组蛋白的理想诱导剂.
作者：卫红飞；万敏；杨世杰；王燕媚；李大鹏；王爱丽；于永利；王丽颖 刊期： 2005年第06期
目的在大肠杆菌中高效表达SARS核衣壳蛋白.方法将已合成的SARS-CoV N蛋白基因片段,克隆至pUG18载体,与pET28质粒连接,转化大肠杆菌,进行SARS-CoV核衣壳融合蛋白表达.用SARS患者恢复期血清进行表达产物鉴定.用色谱方法进行表达产物的层析纯化.结果SARS病毒N基因在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量占总蛋白的30%以上;经三步纯化后纯度达90%以上.结论已获得了SARS核衣壳蛋白样品.
作者：李洋；王宣军；张秀霞；吉海滨；王志武；方勇；盛军 刊期： 2005年第06期
目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growthfactor,bFGF)体外作用于骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)后,诱导其向神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞定向分化的情况.方法从鼠骨髓中获得MSCs,培养传代,用MTT法检测bFGF对骨髓MSCs生长的影响.10ng/ml bFGF作用2 d后,通过IBMX、细胞因子bFGF、GDNF、IL-1β、中脑神经胶质细胞条件培养基和中脑神经细胞膜碎片等分组联合诱导骨髓MSCs向神经元样细胞、多巴胺能神经元样细胞分化,免疫细胞化学方法鉴定特异标志NSE、MAP-2a,b和TH的表达.结果在一定范围内,bFGF对骨髓MSCs具有明显的促增殖作用.分化的神经元样细胞表达NSE、MAP-2a,b和TH,联合应用GDNF、IL-1β、中脑条件培养基和中脑神经细胞膜碎片诱导7 d后,NSE阳性率为(27.774±2.747)%,MAP-2a,b为(28.006±3.080)%,TH为(3.098±0.352)%.结论体外骨髓MSCs被诱导分化成神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞,为帕金森等中枢神经系统疾病的细胞移植治疗奠定了基础.
作者：郭丽；尹飞；王欣；凌翎；呼和塔娜；李鹏；段德生；范洪学 刊期： 2005年第06期
目的获得序列正确的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因,并进行表达.方法用PCR法从SENV阳性血清中获得SENV-D ORF1 C-端基因,测序验证后,构建pQE30-SD重组表达质粒,并转化E.coli M15,进行IPTG诱导表达及Western blot分析.结果获得的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因序列正确,表达蛋白相对分子质量约为38000.经Western blot证实能与阳性血清发生抗原抗体反应.结论已成功获得了SENV-D ORF1 C-端蛋白,为今后进一步研究奠定了基础.
作者：陈蕤；穆士杰；杜娟；王全立 刊期： 2005年第06期
传染性法氏囊病毒感染主要采用疫苗进行预防.近年来由于变异毒株不断出现,给疫病预防带来困难,因此:人们积极投向基因工程疫苗的研究.本文综述了基因工程疫苗的研究进展.
作者：赵怀龙；贾世玉；陈如明 刊期： 2005年第06期
献血者,男,39岁,在我站献血过程中,因其红细胞与抗-A、抗-B均不凝集,但血清凝集A、B、O红细胞,经进一步血清学检测和基因分析,确定为类孟买型ABhm,现报道如下.
作者：刘芳兰；王振卿；周海江 刊期： 2005年第06期
目的制备重组人干扰素-βSer17(rhIFN-βSer17),并检测其对SARS病毒的抑制作用.方法通过发酵收集菌体,经高压匀浆破碎收集包涵体、有机溶剂抽提、酸沉淀、柱层析纯化重组蛋白,通过细胞病变抑制法检测其对SARS病毒的抑制作用.结果研制的rhIFN-βSer17的纯度超过95%,比活性超过2.0×107 IU/mg蛋白,在体外对SARS病毒具有明显的抑制作用.结论已成功制备rhIFN-β Ser17,并在体外对SARS病毒具有抑制作用.
作者：张振龙；刘建源；杨云凯；邓宛明；崔春青；王淑芳；汤燕文；赵建英 刊期： 2005年第06期
目的观察人巨细胞病毒(HCMV)gB基因真核表达载体在小鼠中的免疫效果.方法大量提取目的质粒,分3个剂量组进行多点肌肉注射免疫小鼠,利用MTT法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性,ELISA法检测小鼠血清中HCMV特异性抗体,中和试验检测小鼠血清中和抗体.结果 ELISA检测结果表明,与空白对照、空载体对照组相比,3个剂量组pcDNA3.1/gB质粒免疫后小鼠血浆中抗HCMV IgG抗体水平均明显增高(P＜0.05),中和抗体水平为1:20～1:40,而对照组血清中无中和抗体存在.淋巴细胞增殖指数免疫小鼠与正常小鼠差异无显著意义.结论已构建的HCMVgB基因真核表达载体可以诱导小鼠产生明显的体液免疫,为核酸疫苗研究奠定了基础.
作者：张中洋；李秀玲；何薇薇 刊期： 2005年第06期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
