学术投稿

MDR1基因全长序列真核表达载体的构建

李彦敏;刘力华

关键词:多药耐药基因, PCR技术, 真核表达载体, 构建
摘要:目的构建MDR1基因全长序列真核表达栽体.方法采用PCR技术,扩增MDR1基因全长序列,并定向克隆入pcDNA3.1(+)质粒载体CMV启动子序列下游的BamH I和Xho I限制性内切酶酶切位点之间.结果重组体经转化E.ColiJM109后可大量扩增,提取该重组体进行限制性内切酶酶切分析,可见预期的目的片段和载体片段,并且以重组体为模板,用特异性引物可扩增出MDR1基因的1kb片段.结论成功地构建了MDR1基因全长序列真核表达载体,为进一步探讨MDR1基因表达产物的生物学活性以及临床检测、治疗等应用提供实验依据.
实用肿瘤学杂志相关文献
  • 浅谈螺旋CT sure start功能在肝癌扫描上的应用

    螺旋CF增强扫描对肝癌的定性定位明显优于普通CT,但在实际工作中,不论采用双期或多期扫描,肝癌增强扫描的动脉期均难以捕捉.近年来,我们应用螺旋CT sure start功能对于肝癌进行了多例增强扫描,取得了较好的图像质量和较高的诊断正确率.现汇报如下:

    作者:王长德;于韬;华阳;孟楠;马冬 刊期: 2002年第03期

  • 电子支气管镜在鼻咽癌诊治中的应用分析

    目的评价电子支气管镜在鼻咽癌诊治中的作用.方法应用电子支气管镜对临床疑为鼻咽癌及放疗后复查的492例鼻咽癌患者进行鼻咽部检查,同时与间接鼻咽镜检查及病理检查结果作对比分析.结果电子支气管镜检查的492例患者中,用间接鼻咽镜仅能对66.7%的患者作鼻咽部检查;初诊患者电子支气管镜诊断与病理诊断相符率为87.0%(380/437).结论电子支气管镜可常规应用于鼻咽癌诊断及治疗后随访,尤其是对一些间接鼻咽镜检查不配合的患者,其使用价值远远高于间接鼻咽镜检查;对临床高度怀疑鼻咽癌的患者应认真检查,不能轻易放过,好给予追踪观察.

    作者:葛莲英;朱小东 刊期: 2002年第03期

  • cyclin D1基因异常表达、多态性与乳腺癌关系

    对细胞周期调控机制的研究表明,细胞周期蛋白(cyclin)是细胞周期中短暂出现的基因表达产物,具有严格的顺序性,与特定的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)结合构成复合体,使CDK活化,完成各个时相的转换,然后降解.

    作者:吴建芳;苏宁 刊期: 2002年第03期

  • 小细胞肺癌的外科治疗

    目的探讨小细胞肺癌术前化疗对手术的影响及提高小细胞肺癌远期生存率的重要因素.方法对1991~1998年间我科经手术治疗的78例小细胞肺癌进行回顾性综合分析,化疗方案为DAE:DDP 100mg/m2,d1静点,EPI-ADM30mg/m2,d1静注,Vp-16 100mg,d1-5静点.结果术前化疗组41例,均为中心型肺癌,经支气管镜病理证实,一疗程33例,CR4例,PR29例,切除率100%,残端阴性,病理分期Ⅱa-Ⅲb期.二疗程2例,均为PR,残端阴性,Ⅲa-Ⅲb期.三疗程3例,CR1例,PR2例,残端2例为阳性,1例阴性,Ⅱa-Ⅲb期;介入化疗3例:PR2例,NC1例,残端阴性.未经化疗而手术,再行综合治疗组37例,术前刷检:找到癌细胞25例,Ⅱb-Ⅲa期,余皆为周围性肺癌,Ⅰ a-Ⅱb期.两组3年生存率分别为:46.4%、70.3%.结论术前化疗一疗程能提高切除率;二-三疗程化疗使肺门及纵隔组织瘢痕化,血管鞘增厚,使血管与周围组织呈胼胝样粘连,影响根治性手术;小细胞肺癌远期生存率主要在于TNM分期(尤其是N的分期)和术中淋巴结的清扫及后续的综合治疗.

    作者:刘刚;陈文庆;曲明江;李景岗 刊期: 2002年第03期

  • 异种肿瘤细胞疫苗抗肿瘤活性的研究

    目的研究异种肿瘤细胞疫苗抗肿瘤免疫反应,从而达到抑瘤作用.方法采用福氏佐剂与人肺腺癌AGZY-138、人肝癌HepG2细胞分别混合研磨制成疫苗,小鼠腹部皮下多点注射免疫小鼠或治疗小鼠,定期测定瘤体,计算抑瘤率、生存率等.结果预防保护实验肿瘤接种第五周时,与对照组比较抑瘤作用显著,肿瘤治疗实验肿瘤接种第五周时,人肺癌AGZY-138疫苗对小鼠Lewis肺癌治疗作用与对照组比较有显著意义,而人肝癌HepG2疫苗治疗作用对小鼠H22肝癌作用不显著,与对照组比较无差异.结论用异种肿瘤细胞疫苗对小鼠进行主动免疫后,再接种肿瘤,肿瘤生长明显减慢.肺癌疫苗预防保护小鼠生存期延长.

    作者:马占好;张春艳;张金龙;袁孝纯 刊期: 2002年第03期

  • 培养液中不同浓度的小牛血清对前列腺癌细胞增殖的影响

    目的培养液中不同浓度的小牛血清对前列腺癌细胞增殖的影响.方法用含有不同浓度小牛血清的细胞培养液培养人前列腺癌细胞系(PC-3)和人雄激素非依赖型前列腺癌细胞系(PC-3M),培养3天后,进行细胞记数并用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测上清液中血管生成素的含量.结果(1)不同浓度的小牛血清对前列腺癌的增殖有不同的影响,浓度越高增殖速度越快;(2)上清中的血管生成素与细胞增殖结果呈正相关.结论培养液中血清含量高细胞的增殖速度快;外源血管生成素的缺乏能够刺激细胞分泌更多的血管生成素来维持细胞的增长.

    作者:房金波;王丽 刊期: 2002年第03期

  • 肝脾动脉双栓塞治疗原发性肝癌合并脾机能亢进21例

    目的探讨肝脾动脉栓塞治疗原发性肝癌合并脾机能亢进的疗效及价值.方法采用Seldinger技术,将导管插至脾动脉,先行部分脾栓塞术,后插入肝动脉行灌注化疗栓塞术.结果21例病人均不同程度的改善了临床症状,肝癌治疗的有效率达80.9%,脾亢治疗的有效率达100.0%.结论肝脾动脉双栓塞治疗原发性肝癌合并脾机能亢进疗效确切,创伤小,具有较高的治疗价值.

    作者:纪成周;尹化斌 刊期: 2002年第03期

  • AFU、AFP和γ-GT在原发性肝癌诊断中的价值

    目的本文探讨血清α-L-岩藻糖苷酶(AFU)、甲胎蛋白(AFP)和γ-GT在原发性肝癌(PHC)病人中检测的临床意义.方法应用动力学方法对96例正常人及未/经治疗肝癌88例患者检测血清AFU、AFP和γ-GT.结果PHC的AFU活力为25.3±10.4u/L高于正常对照组6.3±1.6u/L(P<0.01),以正常对照组均值加5倍S(6.3+5×1.6)为诊断界值,PHC组阳性率高达86.4%.按国际诊断标准(≥12u/L)PHC组阳性率高达90.9%.88例中35例AFP<100ng/L,在此35例中33例AFU≥12u/L的辅助诊断率为94.2%.AFU、AFP、γ-GT三项指标的阳性率分别为90.9%、60.2%、53.4%.AFU+AFP总阳性率达到96.6%,AFU、AFP、γ-GT总的阳性率达到98.9%.结论联合检测AFU、AFP、γ-GT可以明显提高PHC的诊断率.

    作者:王文龙;邢德君;于秀艳 刊期: 2002年第03期

  • 纤支镜对剖胸术后肺部并发症的应用价值

    目的总结分析应用纤支镜检查对剖胸术后肺部并发症的治疗作用.方法91例术后发生急性肺不张患者均在床边急诊纤支镜检,同时吸氧及心电监护,纤支镜下发现分泌物即吸引,当浓性分泌物特粘稠时,可用生理盐水反复冲洗吸引,总量不超过60ml,如发现有坏死组织、脓痂可用活检钳或异物钳清除,待脓性分泌物吸净后,注入庆大霉素8万单位~16万单位.a糜蛋白酶5mg~10mg,地塞米松5mg加生理盐水10ml~20ml.操作时动作要轻柔,间断吸引,尽可能缩短操作时间.35例支气管断端残留缝线在纤支镜直视下用拆线剪刀或活检钳拆除.结果一次吸痰注药后呼吸症状立即明显改善,并在24小时内肺复张者60例,经2次吸痰注药后肺复张者23例,经3次反复吸痰的7例,仅1例年老体弱者是在4次反复冲洗吸痰并注入抗菌素后肺复张.35例残留缝线经1-2次全部拆除干净,32例术后病人刺激性咳嗽明显减轻或消失,仅3例因术后复发咳嗽减轻不明显.结论应用纤支镜治疗剖胸术后急性肺不张是一种迅速有效、安全可靠的方法.术后残留缝线纤支镜下拆除也是能迅速解除病人因异物刺激引起咳嗽的一种疗效确切、简便易行的方法.

    作者:李秀环;柴艳;陈丹峰;王国华 刊期: 2002年第03期

  • 高颈段髓外肿瘤26例临床分析

    目的探讨高颈段髓外肿瘤的诊断与治疗.方法对26例高颈段髓外肿瘤患者的临床资料进行分析.结果21例MRI检查均能清晰的显示肿瘤,手术全部采用侧卧位,多采用颈后正中入路(24例),颈外侧入路(2例),26例均行肿瘤全切.结论MRI是诊断本病的首选诊断方法,手术应根据肿瘤特点选用不同入路.

    作者:安玉胜;吴斌;李学记 刊期: 2002年第03期

  • 软组织肉瘤声像图与病理关系的探讨

    目的旨在探讨软组织肉瘤的声像图特征及其与病理组织结构的关系.方法对39例经手术病理证实的软组织肉瘤的患者,做回顾性统计分析.观察声像图与病理之间的关系变化.结果软组织肉瘤声像图与肉瘤细胞、纤维组织、肿瘤血管及间质含量有关.结论声像图一定程度反映了其内部组织结构,分析研究二者之间的关系,对提高诊断及鉴别诊断有一定帮助.

    作者:陈忠民;郭雅新;熊雅玲 刊期: 2002年第03期

  • 联合检测血清GPDA与CHE对原发性肝癌诊断价值的临床研究

    目的探讨血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(glycylproline dipepetidylamino-pepeti dase,GPDA)与胆碱酯酶(cholinesterase,CHE)活力对原发性肝癌(primary hepatocarcinoma,PHC)的诊断价值.方法采用速率法联合检测62例经计算机体层摄影(computed tomography,CT)及(或)外科手术病理证实的原发性肝癌患者血清GPDA与CHE活力(选50例正常人血清作正常对照.GPDA正常范围:42~48平均值64u.L-1,CHE正常范围:3100~7400平均值5250u.L-1)并与CT及外科手术中癌肿生长情况进行比较.结果62例原发性肝癌患者中,血清GPDA与CHE值较正常均值分别升高122±28和降低3248±122,与对照组比较差异具有显著性(P<0.01和P<0.05);CT检查或手术发现有转移(肝内、肝门、腹腔淋巴结或门静脉、远端脏器任其一有转移)的患者30例和未有转移的32例患者血清GPDA较正常均值分别升高159±45和89±2,二者比较差异具有显著性(P<0.05);有转移的和未有转移病例血清CHE值较均值分别降低2584±56和4102±46,二者差异有显著性(P<0.05).结论联合检测血清GPDA及CHE,可作为原发性肝癌的肿瘤标志物,对PHC的诊断及预后判定都有重要的临床价值.

    作者:王秀兰;李蕾;李丹光;陈丹峰;叶敏娟 刊期: 2002年第03期

  • 小脑血管网状细胞瘤的影像学分型和手术治疗

    目的探讨小脑血管网状细胞瘤的影像学表现及其对应的手术策略.方法选择21例小脑血管网状细胞瘤的患者,根据头颅CT中肿瘤的特征分为囊肿结节型、囊肿型和实体型;根据肿瘤与四脑室的关系,分为脑室沟通型和非脑室沟通型.依CT及手术中所见行肿瘤切除.结果21例中非脑室沟通型7例、脑室沟通型3例行囊壁及结节全切除;非脑室沟通型5例、脑室沟通型5例行瘤结节全切和囊壁部分切除.囊肿型1例未能找到瘤结节而以后复发.结论术前影像学对肿瘤的切除具有重要的指导作用,根据分型而采取的手术方法具有一定的临床应用价值.

    作者:周东;林志俊;李昭杰;许作奎;林晓风;詹升全;唐凯 刊期: 2002年第03期

  • 头颈癌的治疗进展

    本文综述近几年头颈癌治疗的某些方面的进展,如诱导化疗,术后辅助化疗或放疗,同步放化疗,器官功能保留术式的应用,根治术后缺损处功能重建,特异定靶导向治疗等.

    作者:邱杰;张文伟;彭诗东 刊期: 2002年第03期

  • 库肯勃(Krukenberg)瘤的诊断与治疗(附18例分析)

    目的探讨Krukenlerg瘤的临床特点、治疗方法.方法回顾性分析我院1988-2000年收治的18例Krukenberg瘤临床资料.结果Krukenberg瘤在年轻女性中多见,多为双侧性(16/18),原发灶多为低分化腺癌或粘液腺癌,临床分期多为中晚期(Ⅲ期、Ⅳ期胃癌12例,DukesC、D期大肠癌5例)恶性度高,易漏诊,预后极差.结论确诊为卵巢恶性肿瘤时应首先排除转移性可能,先发现卵巢转移肿瘤者,应常规行胃肠道检查以寻找原发灶.女性胃肠癌患者应注意有无卵巢转移.有卵巢转移者应同时切除原发灶、子宫及双侧附件.无卵巢转移者是否行预防性卵巢切除术应遵循个体化原则.

    作者:杨玉波;杨玉梅;王莅 刊期: 2002年第03期

  • 90例腮腺腺样囊性癌的临床分析

    目的总结腮腺腺样囊性癌的疗效.方法本组90例手术治疗30例,综合治疗60例.其中术后化疗30例,术后放疗80例.手术、化疗、放疗综合治疗.结果随访1~10年,3年生存率为100%,5年生存率为90%,10年生存率为60%.结论综合治疗是治疗腮腺腺样囊性癌的根本方法.

    作者:徐雅娟;金志巍;董桂英;陈卓 刊期: 2002年第03期

  • 细胞周期调控及其在肿瘤发生与治疗中的应用

    细胞周期素(cyclin)和细胞周期素依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDK)是细胞周期调控的基本分子[1-2].CDK的活性依赖于cyclin的存在,cyclin-CDK复合体周期性装配、激活和降解是驱动细胞周期有序进行的基本分子机制[3].已经发现cyclin有11种:cyclin A-K,CDK有10种:CDK 1-10.但是在细胞周期过程发挥主要作用的只有:cyclin A、B、D和E,以及CDK1、2、4和6.CDK在大部分细胞中恒定表达,而cyclin的合成与降解仅仅发生在细胞周期的某一时相.cyclin与CDK装配成不同的复合体在细胞周期的不同时相发挥作用,保证细胞周期有序进行.

    作者:袁长青;丁振华 刊期: 2002年第03期

  • p21ras在胃癌中表达的意义

    目的探讨胃癌组织中p21ras的表达及其意义.方法应用免疫组化S-P法检测51例胃癌中p21ras的表达情况.结果p21ras阳性表达率为62.75%(32/51).p21ras阳性表达与胃癌的分化程度无明显关系,但与浸润深度和淋巴结转移密切相关.结论p21ras阳性表达在胃癌的发生发展中起重要作用.检测p21ras表达情况可作为判断胃癌预后的一项有用指标.

    作者:张林;张华献;宋精玲;付红梅;金树珍 刊期: 2002年第03期

  • 介入性超声治疗的并发症8例报告

    目的降低介入性超声治疗的并发症.方法回顾分析4004例介入性超声治疗中8例并发症的临床资料.结果本组介入性超声治疗并发症发生率为0.2%,其中死亡率为0.03%.结论通过不断总结经验教训,改进方法,能够在一定程度上减少介入性超声治疗的并发症.

    作者:张钧;赵芳 刊期: 2002年第03期

  • MDR1基因全长序列真核表达载体的构建

    目的构建MDR1基因全长序列真核表达栽体.方法采用PCR技术,扩增MDR1基因全长序列,并定向克隆入pcDNA3.1(+)质粒载体CMV启动子序列下游的BamH I和Xho I限制性内切酶酶切位点之间.结果重组体经转化E.ColiJM109后可大量扩增,提取该重组体进行限制性内切酶酶切分析,可见预期的目的片段和载体片段,并且以重组体为模板,用特异性引物可扩增出MDR1基因的1kb片段.结论成功地构建了MDR1基因全长序列真核表达载体,为进一步探讨MDR1基因表达产物的生物学活性以及临床检测、治疗等应用提供实验依据.

    作者:李彦敏;刘力华 刊期: 2002年第03期

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主管:哈尔滨医科大学

主办:黑龙江省肿瘤医院