学术投稿

单细胞显微操作法克隆技术

王雪岷

关键词:单细胞, 显微操作法, 细胞株, 单克隆, 细胞克隆技术, 选择与培育, 细胞培养室, 选育技术, 特殊设备, 技术模式, 工作量, 重工, 效率, 实验, 普及, 批量, 配置, 耗材
摘要:普通和特殊单克隆细胞株(系)的选择与培育日益重要、广泛和普及.探索不用特殊设备、操作简单、高效并适合任意批量单克隆细胞株(系)的选育技术将有利于这一重要而繁重工作的简化和推广.在实验中作者曾试过多种细胞克隆技术[1].为了简化技术模式,争取一次性准确获得欲选育量的可靠单克隆细胞株(系)并节省耗材,提高效率,减轻工作量,作者探索了仅利用细胞培养室常规配置设备进行的单细胞显微操作法克隆技术.
解剖学杂志相关文献
  • N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成及表达的调节作用

    目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的调节作用.方法:建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成.采用Western印迹法检测心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:PDGF对心脏成纤维细胞胶原蛋白合成的促进作用与浓度相关,并以10 ng/ml时强.AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞胶原合成有抑制作用,并且在10-9mol/L时作用强.结论:AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用,可能与其抗心脏纤维化的作用相关.

    作者:王丽平;朱曦龄;杨方;王瑞敏;马文东;罗玲;户万秘;李治国;李琪佳;裴新;张丽娟;王献华 刊期: 2006年第06期

  • 山羊窦房结的组织学观察

    有关哺乳动物心脏窦房结的形态学研究国内外已有不少报道,但不同动物心脏传导系统存在着物种差异.因此,需要对大量的不同物种心脏做全面研究,才能为心电生理实验、电镜取材等的基础研究提供确切的解剖学证据.山羊作为常见的实验动物,国内尚缺少资料.本研究利用光镜对山羊窦房结系统观察,旨在进一步积累生物学资料,为心脏基础和临床研究提供形态学参考.

    作者:郭志坤;蔡新华;王鹏;毛慧丽 刊期: 2006年第06期

  • 喉的应用解剖与临床意义

    目的:为功能性喉手术提供解剖形态学数据.方法:对50例结构完整的喉标本进行解剖观察和测量.结果:提供了喉重建术相关的甲状软骨、环状软骨、甲状舌骨膜、环甲韧带、弹性圆锥和方形膜等共75项按性别分组的测量数据.结论:为临床功能性喉手术以及喉功能重建提供了形态学参考数据.

    作者:陈其俐;翟浩;徐国;陈瑞玲;郑秉学;黄鹤年;罗宝国 刊期: 2006年第06期

  • 组织胚胎学教学新模式的探索与实践

    多年来,组胚教学一直沿用传统的教学模式,即教师在讲台上讲,学生在下面做笔记,考试也是围绕教师所讲内容进行,学生依赖教师的讲授和总结,对课本以外的知识知之甚少,造成了学生学习被动,学习就是应付考试.这些旧教学模式对现代人才培养十分不利.在知识高速增长、信息网络发达的今天,这种旧的教学模式已经不能适应时代发展的需要.为此,在广西壮族自治区教育厅和学校领导的支持下,作为自治区重点课程和精品课程的学科,本教研室在新形势下对组织胚胎学课程的教学新模式进行了初步的探索.

    作者:何少位;谢小蕙;陈维平;李后文;廖红;莫发荣;黄巨恩;罗国容 刊期: 2006年第06期

  • 大鼠脑胶质瘤伽玛刀治疗后穹隆下器一氧化氮合酶表达的变化

    目的:探讨穹隆下器(subfornical organ,SFO)在脑肿瘤免疫过程中的作用及意义.方法:脑胶质瘤大鼠分伽玛刀治疗和对照组.通过NADPH-d和iNOS免疫组化染色,观察SFO阳性细胞面密度,并测定大鼠外周血NO的含量.结果:与对照组大鼠比较,治疗组大鼠SFO处阳性数量明显增多,以其腹内侧区为著.阳性细胞排列呈团状或片状,胞质深染,并可见大量浓染的阳性突起,细胞面密度较对照组非常明显增高.治疗组大鼠外周血NO的含量为(12.63±1.16)μmol/L,非常显著高于对照组的(8.33±0.21)μmol/L).结论:大鼠脑胶质瘤伽玛刀治疗后NOS和iNOS在SFO的表达显著增多,提示SFO可能与放射治疗引起的神经免疫调节有关.

    作者:周立霞;张明峰;檀国军;杨天祝 刊期: 2006年第06期

  • 人胎儿早中期肺免疫细胞的发育

    目的:探讨人胎儿早中期肺免疫细胞的发生及发育特点.方法:采用免疫组化方法对胎儿肺免疫细胞的发生和发育进行观察.结果:肺间质中的白细胞共同抗原(leukocyte common antigen,LCA)阳性细胞和溶菌酶阳性细胞均在13周时出现;此后,两种阳性细胞数目有所增多,形态和分布上也有变化,且LCA阳性细胞数目较多.CD45-RO和CD20阳性细胞在28周开始出现于肺组织中.结论:人胎儿肺的固有免疫出现早,其中肺间质免疫细胞出现早(13周),而支气管黏膜的稍迟(18周);适应性免疫则出现较迟(28周).同时肺间质细胞在间质中免疫细胞功能成熟的过程中也起到促进和加速的作用.

    作者:肖鹏;李永平;周国民 刊期: 2006年第06期

  • 发育大鼠心肌细胞间隙连接蛋白43表达特性

    目的:探讨大鼠心肌细胞间隙连接蛋白43(Cx43)表达的发育特性.方法:应用SP免疫组化和图像分析方法,观察胎大鼠、出生1 d、5 d、10 d和25 d大鼠心肌细胞Cx43的蛋白表达.结果:(1)胎鼠心肌细胞Cx43呈斑点状遍布于心肌细胞侧-侧连接、细胞质内和闰盘处.(2)出生后1 d大鼠心肌细胞的Cx43分布与胎鼠相似,5 d和10 d组逐渐向闰盘处聚集.25 d时部分已聚集于端闰盘处,其余仍呈斑点状散在分布.(3)出生前后心室肌细胞Cx43分布有差异.分布密度总规律是:胎大鼠>出生1 d>5 d>10 d>25 d.结论:出生前后大鼠心肌细胞Cx43分布随心脏发育逐渐向闰盘处重排,其分布密度呈逐渐下降趋势.

    作者:徐振平;张进忠;郭志坤;张光谋 刊期: 2006年第06期

  • RWT法评价拉萨藏族儿童青少年膝部骨龄

    目的:探讨拉萨藏族儿童青少年膝部骨发育规律.方法:随机选取世居拉萨、父母为藏族的7~21岁儿童青少年1 496名为研究对象,拍摄膝部X线片,以RWT法评价膝部骨龄.结果:骨龄与日历年龄高度相关;各年龄组骨龄显著小于日历年龄;骨龄存在性别差异.结论:RWT法可以预测骨龄;拉萨藏族儿童青少年膝部骨龄小于日历年龄,提示该地区骨发育存在延缓的特点.

    作者:任甫;李长勇;席焕久;温有锋;李春山;黄克强 刊期: 2006年第06期

  • 黄体生成素对小鼠子宫生长发育及其相关基因表达的影响

    目的:通过分析黄体生成素(LH)受体基因敲除小鼠子宫生长发育相关基因表达的改变,探讨LH对子宫生长发育的影响.方法:应用基因芯片和RT-PCR方法分析LH受体基因敲除鼠子宫基因表达.结果:155个基因表达改变超过3倍;与生长发育相关的基因中,10个基因表达上调、5个基因表达下调;细胞周期蛋白cyclinD基因上调、cyclin B基因下调,半定量RT-PCR分析证实了细胞周期蛋白基因表达的变化,表明LH受体基因敲除鼠子宫细胞生长发生阻滞,21 d雌二醇和孕酮替代疗法不能够使这些基因表达的改变完全恢复正常.结论:LH除促进卵巢类固醇激素合成调控子宫生长发育外,还对子宫生长发育直接起作用.

    作者:林德馨;雷振民;RAO CV 刊期: 2006年第06期

  • 当归补血汤含药血清体外诱导耳蜗干细胞的增殖分化

    目的:观察当归补血汤对耳蜗干细胞体外诱导分化的影响,并探讨浓度对其的影响.方法:分离新生大鼠Corti器的耳蜗干细胞进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,用Nestin免疫荧光法进行耳蜗干细胞鉴定.采用不同剂量当归补血汤进行诱导分化后,采用Myosin ⅦA、P27KIP1免疫荧光方法,鉴定内耳毛细胞和支持细胞,并进行细胞计数.结果:当归补血汤细胞诱导分化的内耳毛细胞和内耳支持细胞数量明显较对照组多,其中剂量为0.5 g/ml组向内耳毛细胞的分化比例高.结论:当归补血汤可以提高耳蜗干细胞体外分化为内耳毛细胞和支持细胞的数量.其中剂量0.5 g/ml组向内耳毛细胞的分化数量较高.

    作者:郑鸿燕;邰浩清;曾水林 刊期: 2006年第06期

  • 动物组织细胞分离纯化方法学

    要了解某种特定细胞的结构、功能或表面标志等特征,就必须将其在体外培养增殖获得足够的数量以供研究,这首先就必须获取种子细胞.从血液、淋巴液等液体中分离细胞时,可直接进行纯化,从心脏、肝脏等器官分离细胞时,一般的方法是先获得细胞悬液,再对其进行分离纯化.近年来细胞分离纯化技术发展较迅速,它们主要依据两类原则:(1)各种细胞不同的物理性状,如:大小、密度、表面电荷及黏附能力等;(2)各种细胞表面受体或抗原的差异.本研究对其中一些方法在比较的基础上进行综述.

    作者:姜俊芬;韩伟 刊期: 2006年第06期

  • 不同年龄大鼠免疫器官的衰老细胞

    目的:研究不同年龄大鼠免疫器官的衰老细胞.方法:应用衰老相关β-半乳糖苷酶组织化学染色显示不同年龄大鼠胸腺、脾、淋巴结的衰老细胞.结果:胸腺内衰老细胞多分布于胸腺小叶皮质和髓质交界处;脾内衰老细胞主要分布于边缘区及脾索;淋巴结内衰老细胞主要分布于皮质淋巴小结之间和髓质.随着年龄的增长胸腺、脾和淋巴结内的衰老细胞逐渐增多.结论:免疫器官胸腺、脾和淋巴结内存在衰老细胞,并随年龄的增长而增多,提示细胞衰老与个体衰老有关.

    作者:邢文英;张娓;丁一;朱晓燕 刊期: 2006年第06期

  • 脑结构计算机三维重建技术的研究进展

    脑是人体结构中复杂的器官之一,脑内遍布的神经、核团是协调和管理人体机能的高级指挥中心.因此,研究脑的结构对认识脑和治疗脑部疾病有着非常重要的意义.随着CT、MRI等成像技术的提高,由断层图像生成和提取人体的三维组织结构日益完善,从而为我们提供了比较详细的脑内部结构图像,但是对于某些细微结构,特别是丘脑内部各核团(这些核团之间的边界非常模糊),图像的分辨率还远达不到我们的要求,因此进一步发展脑部结构的计算机三维重建和仿真显示仍是非常必要的.

    作者:陈华;李世荣 刊期: 2006年第06期

  • 脑源性神经营养因子预处理后急性高眼压下大鼠视网膜TrkB的表达变化

    目的:检测脑源性神经营养因子(BDNF)干预后大鼠视网膜TrkB的表达变化,为受损后视网膜节细胞的保护及外源性BDNF的应用提供一定的理论基础.方法:大鼠左眼分为急性眼高压及BDNF预处理组.使左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压并维持60 min,分别存活1~14 d后处死,冰冻切片行尼氏染色及TrkB的免疫组织化学.结果:急性高眼压组各时间点节细胞层细胞数目均显著少于BDNF预处理组;1、3 d时TrkB的表达明显增加,7、14 d时则明显减少;BDNF预处理组在存活1、3 d时TrkB的表达明显增加,7 d时则下降至正常对照组水平,14 d时再次明显增加.结论:急性高眼压后大鼠视网膜内TrkB的表达存在时空变化,TrkB表达的上调提示视网膜对BDNF的需求增加.

    作者:黄菊芳;蒋丽珠;童建斌;陈旦;熊鲲;曾乐平 刊期: 2006年第06期

  • 翼腭间隙的三维断层解剖

    目的:为翼腭间隙疾病的影像诊断提供解剖学资料.方法:选用成人尸体头颈部制成连续横、矢、冠状断面,观察翼腭间隙及其结构的解剖学关系,利用游标卡尺及求积仪分别测量其径线和面积.结果:翼腭间隙形态多变,经蝶骨体横断层面较固定,与翼突形态密切相关.两侧翼腭间隙及其结构呈对称性,径线和面积均无显著性差异.横断面可清晰显示翼腭间隙前、后、内侧和外侧壁上的结构及圆孔、翼管、蝶腭孔、翼上颌裂和眶下裂等自然通道;矢状断面能较好显示翼腭管、腭大管及腭小管的连续性;冠状断面利于观察翼腭间隙顶壁、圆孔、眶下裂、翼管及其与蝶窦的关系.结论:翼腭间隙的三维断层解剖对疾病的影像诊断具有重要意义.

    作者:付升旗;李炳宪;范锡印;刘恒兴;郭进学;王华 刊期: 2006年第06期

  • 上海地区成人鼻面部的观察和测量

    目的:收集上海地区汉族成年人的外鼻特征和鼻面部数据,为鼻整形手术和颌面部赝复学提供依据,并丰富人体测量学数据库.方法:采用人体测量方法,对190名上海地区健康汉族成年人的外鼻进行观察与测量.结果:获得所有被测者的面宽、面长、鼻高、鼻长、鼻宽、鼻深、鼻根高、鼻根宽、内眦间距、鼻孔宽和鼻孔高数据,同时获得各种外鼻形态、以及鼻尖、鼻翼和鼻侧面形态分类并获得鼻面比例.结论:上海地区汉族成年人的外鼻形态多为理想鼻型,鼻侧面形态多为直型,鼻尖中等,鼻翼高度适中,男女鼻指数都为中鼻型.

    作者:熊耀阳;孙健;张富强 刊期: 2006年第06期

  • MK-801对新生大鼠脑外伤后神经元凋亡的影响

    目的:探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK-801对新生大鼠创伤性脑外伤(traumatic braininjury,TBI)后神经元凋亡的影响.方法:建立新生7 d大鼠顶叶皮质挫伤模型,在TBI前30 min、TBI后即刻、TBI后30 min分别给予腹腔注射MK-801 1 mg/kg,在TBI后24 h取脑,连续切片,行H-E染色和Caspase-3免疫组化染色,检测脑神经元细胞的损伤和凋亡.结果:MK-801三组不同时间用药组与TBI组相比,在创伤同侧的扣带皮质、顶叶皮质和丘脑神经元凋亡细胞数减少,有显著性差异,其中TBI后即刻用MK-801治疗效果好.结论:MK-801能明显减少TBI后神经元的凋亡.

    作者:顾峻;顾红玉;陈玉英;何正瑞;丁文龙 刊期: 2006年第06期

  • 垂体的概念及与其相关名词的统一应用

    综观解剖学、组织学与胚胎学等医药院校教材和神经解剖学、格氏解剖学等专著以及有关的杂志、网络资料,对垂体的概念及与其相关名词的叙述尚不统一,使学者无法适从.主要表现如下:

    作者:安月勇;曲永松;韩文祥;裴燕芳;张福清 刊期: 2006年第06期

  • 对《人体结构学》教材的几点建议

    卫生高等职业教育《人体结构学》教材(李容孙、唐茂林主编,湖南科技出版社,2001年),在我院已使用4年.该教材有许多优点,也存在一些不足.由于是初版,且在当时卫生高职教育还刚起步,故存在不足在所难免.对该教材闾四平等[1]已提出了一些中肯的意见;今对该教材中9处提法,提出我们的不同看法,与大家讨论,不对之处望大家批评指正,以共同促进教材建设.

    作者:甘功友;韩立兮;何卫国 刊期: 2006年第06期

  • 戊四氮慢性致痫大鼠海马星形胶质细胞的激活

    目的:研究慢性癫痫大鼠点燃时海马星形胶质细胞的激活情况.方法:采用免疫组化和双重免疫荧光标记法观察戊四氮慢性癫痫大鼠点燃后海马NF-κBp65和胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的变化.结果:癫痫发作1 h,CA1区出现NF-κBp65-IR阳性细胞,4 h胶质细胞p65-IR维持在高水平,并持续至发作后12 h;发作1 h,CA1区GFAP-IR开始增强,4~8 h观察到明显浓染和突起增多的GFAP-IR阳性细胞,并持续至24 h;GFAP/p65-IR阳性细胞发作后1 h可观察到,4 h达高峰,24 h恢复至对照组水平.结论:戊四氮致痫大鼠点燃时,星形胶质细胞的这种早期而持续的激活提示该细胞在慢性癫痫的复发中可能起到重要作用.

    作者:赵珠峰;顾红玉;何正瑞;郭强苏;丁文龙 刊期: 2006年第06期

解剖学杂志

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