学术投稿

超高效液相色谱串联质谱法测定人尿中的8-羟基脱氧鸟苷

王丽英;杨立新;路杨;刘印平;秦振顺;常凤启

关键词:超高效液相色谱-串联质谱, 8-羟基脱氧鸟苷, 人尿, 固相萃取
摘要:目的 建立一种超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)简单、快速的分析人尿液中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量的检测方法.方法 人尿样品经离心后,通过HLB固相萃取柱进行净化处理,采用5%的甲醇-水(含0.1%甲酸)作为色谱的分离条件,在MRM模式下采集8-OHdG(m/z=284.2> 168.2及m/z=284.2> 140.2)的信号,用外标法定量.结果 本文报道的检测方法具有较高的灵敏度,8-OHdG在线性范围0.1 ng/ml ~ 2.0 ng/ml内线性关系良好,相关系数为0.9995,定量下限为0.02 ng/ml,低、中、高3个加标水平的回收率为90.2%~103.7%,相对标准偏差为1.1% ~6.8%.结论 该方法操作简便,与前人报道的检测结果一致,也可以应用于评价各种氧化因素引起的DNA氧化损伤.
中国卫生检验杂志相关文献
  • 主动外排泵系统qacA/B、杀白细胞素与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性的研究

    目的 研究主动外排泵系统qacA/B和杀白细胞素(PVL)在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的流行现状和对MRSA耐药性的影响.方法 PCR扩增qacA/B基因和PVL基因;运用琼脂稀释法检测消毒剂和抗生素的小抑菌浓度;把MRSA分为4组:在1株MRSA中,qacA/B基因和PVL基因均阳性为第1组(No.1),仅qacA/B阳性为第2组(No.2),仅PVL基因阳性为第3组(No.3),qacA/B基因和PVL基因均阴性为第4组(No.4),采用卡方检验分析数据.结果 qacA/B基因和PVL基因的检出率分别为34.00%(68株)和28.00%(56株),其中No.1、No.2和No.3分别为35株(17.50%)、33株(16.50%)和21株(10.50%);消佳净(1.00 g/L)、碘伏(1.00 g/L)、苯扎溴胺(1.00 g/L)、阿米卡星、环丙沙星、利福平在No.1的耐药率明显高于No.4(P <0.05),这种情况同样存在于No.2与No.4、No.2与No.3、No.1与No.3中.结论 MRSA对消毒剂和阿米卡星等抗生素产生的耐药性与主动外排泵系统qacA/B有关系,而与PVL均无相关性.

    作者:郭震;张燕莲;陈传;徐株锦;谢文熙;刘军 刊期: 2014年第23期

  • 液体型MPT-NAG匀相速率法试剂测定NAG活性

    目的 建立以6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)为底物的液体型匀相速率法试剂测定NAG活性.方法 在含表面活性剂的柠檬酸缓冲液中,NAG催化MPT-NAG分解产生6-甲基-2巯基吡啶(MPT),用全自动生化分析仪监测340 nm处吸光度的变化速率,与标准液比较后计算出样本中NAG活性.结果 该法线性范围为0 U/L~ 380 U/L,平均回收率为98.8%;批内、批间相对标准差(RSD)分别为1.2%~ 3.3%和2.4%~3.9%;与参考方法相比的回归方程及相关系数分别为y=1.01x +0.24,r=0.9986.结论 用液体型MPT-NAG匀相速率法试剂测定NAG活性,具有快速、稳定、简便等优点,适合临床应用.

    作者:方芳;连国军;赵长容;王文蔚;马美萍 刊期: 2014年第23期

  • 胃幽门螺杆菌感染情况诊断中快速尿素酶试验检测应用的价值

    目的 探讨胃幽门螺杆菌(Hp)感染情况诊断中快速尿素酶试验(RUT)检测应用的价值.方法 从本院消化内科2010年5月-2013年5月收治的住院患者中,随机选择100例进行研究,分为2组,分别予以快速尿素酶试验检测和14C尿素呼气试验(14C-UBT)检查.观察记录2组的检查结果,并进行比较.结果 经统计,100例患者中,经RUT检测Hp阳性率为86.0%,同时经14C-UBT检测Hp阳性率为60.0%.2种方法的阳性检出情况比较差异有统计学意义(X2=8.57,P<0.05,).2组在消化性溃疡和慢性胃炎、十二指肠炎阳性检出率方面差异均有统计学意义(X2=19.82,x2=21.25,均P<0.05);但在急性糜烂出血性胃炎和胃食管反流病,以及胃癌和胃息肉的阳性检出率方面差异均无统计学意义(X2=2.72,X2 =5.13,X2=5.28,X2 =4.11,均P>0.05).结论 快速尿素酶试验用于检测胃幽门螺杆菌感染情况具有较高的应用价值,且操作简单,值得临床大力推广应用.

    作者:王翔军;任永强;王新花 刊期: 2014年第23期

  • 布鲁杆菌病3种血清学检测方法比较分析

    目的 通过比较虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)和胶体金免疫层析法(GICA)检测结果,客观评价3种方法对布鲁杆菌病诊断效率和价值.方法 采用虎红平板凝集试验、试管凝集试验和胶体金免疫层析法3种布鲁杆菌病血清学检测方法,对300位从事养殖、屠宰加工、皮毛贩运等重点职业人群进行检测,检测结果运用卡方检验进行统计分析.结果 运用3种检验方法对300位重点职业人群血清样本进行检测,RBPT法阳性血清25例、阴性血清275例;GICA法阳性血清24例、阴性血清276例;SAT法阳性血清21例、阴性血清279例,3种检验方法的阳性检出率间差异无统计学意义(P>0.05).结论 RBPT法、GICA法敏感性好,SAT法特异性高,在实际检测工作中应该把几种检验方法结合起来应用,并结合流行病学和临床体征来确诊布鲁杆菌病患者.

    作者:董文杰;解英波 刊期: 2014年第23期

  • 抗HIV-1治疗后病毒学失败患儿的耐药基因型分析

    目的 了解抗艾滋病病毒治疗患儿病毒学失败者的耐药突变特点.方法 采集接受过高效抗病毒治疗患儿的血浆,对病毒载量≥1 000拷贝/ml者进行耐药基因型检测,将所得序列上传到斯坦福大学耐药数据库(http://hivdb.stanford.edu)进行对比分析.结果 发生病毒学失败的有66例患儿,其中38例患儿出现了耐药突变,耐药发生率为57.58% (38/66).逆转录酶抑制剂的耐药发生率(56.06%,37/66)明显高于蛋白酶抑制剂的耐药发生率(3.03%,2/66).结论 HIV-1耐药突变是导致治疗失败的主要原因,在艾滋患儿开始抗病毒治疗之前进行基因型耐药检测是必要的,可为制定适用的抗病毒治疗方案提供数据.

    作者:马同锁;赵景茹 刊期: 2014年第23期

  • Xpert结核分枝杆菌/利福平试验快速诊断儿童结核病及其耐药性的研究

    目的 评价Xpert结核分枝杆菌/利福平试验(Xpert MTB/RIF试验)检测儿童结核病及利福平耐药性的临床应用价值.方法 收集72例疑似结核病患儿痰标本,进行涂片镜检、固体培养、比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测,分析Xpert MTB/RIF法检测痰中MTB及其耐药性的敏感度和特异度,与金标准进行一致性检验.结果 以固体培养结果作为金标准,Xpert MTB/RIF法检测痰标本MTB的敏感度和特异度分别为96.9%和87.5%,Xpert MTB/RIF和MTB固体培养具有较好的一致性(K=0.808);以比例法药敏试验结果作为金标准,Xpert MTB/RIF方法检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为95.9%和93.9%,Xpert MTB/RIF和比例法药敏试验具有较好的一致性(K=0.831).结论 Xpert MTB/RIF法检测痰液标本的敏感度和特异性高,可为儿童结核病早期诊断及其利福平耐药情况提供及时的数据.

    作者:周蕾;王海;朱明利 刊期: 2014年第23期

  • 一起沙门菌食物中毒的检测与溯源分析

    目的 对一起沙门菌引起食物中毒的病原菌检测及溯源分型进行分析.方法 对中毒事件中采集的患者标本和剩余食物,采用GB4789.4-2010方法分离沙门菌,分离到的13株沙门菌进一步鉴定培养,应用H9812作为脉冲场凝胶分子量标准,限制性内切酶XbaI消化酶切后进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型.结果 从食物中毒样品中,5份可疑食品花生分离出2株雷根特沙门菌(血清型为O3.10∶Hf,g);患者粪便和呕吐物15份,分离出11株雷根特沙门菌.挑选3株菌株进行脉冲场凝胶电泳分型,条带基本一致,说明同起食物中毒分离到的沙门菌具有相同的指纹图谱.结论 这起食物中毒是由雷根特沙门菌引起的,PFGE是一种非常有效的分子分型方法,可应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究.

    作者:刘玉霞;陈旭;李红叶;美丽克;左迪晓雪 刊期: 2014年第23期

  • 男性不育患者精子质量与生殖激素关系的研究

    目的 探讨男性不育患者生殖激素水平与精子质量的相关性.方法 3 108例男性不育患者按世界卫生标准进行精液常规分析,根据精液分析结果分为对照组(精液正常)和4个研究组:A组(弱精子症)、B组(少精子症)、C组(少弱精子症)、D组(严重少精子症).回顾性分析各组的生殖激素(FSH、LH、E2、PRL、T)水平.结果 4组的FSH和LH水平明显高于对照组(P<0.05),T和E2水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).A组、C组的PRL水平明显高于对照组(P<0.01),B组、D组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).D组的FSH水平增高者异常发生率高于其他各组(P<0.05).结论 精子质量与多种血清性激素尤其是FSH异常密切相关,精液分析联合血清生殖激素检测为临床治疗男性不育提供了重要依据.

    作者:王荣香;毛金观 刊期: 2014年第23期

  • 儿童代谢综合征血清瘦素水平变化及其临床意义

    目的 探讨代谢综合征血清瘦素变化及其临床意义.方法 回顾性分析本院生长发育门诊就诊儿童,MS组35例,SO组35例,对照组35例.对3组血清瘦素(leptin,Lep)水平进行检测,并与血生化指标和体质指数进行相关性分析.结果 MS组Lep为(11 337.36±1 074.98) ng/L,SO组Lep为(5 536.44 ±291.21) ng/L,对照组Lep为(3 395.42±113.05) ng/L;SO组和对照组差异有统计学意义(t=40.55,P<0.01),MS组与对照组差异有统计学意义(t=43.47,P<0.01),MS组和SO组差异有统计学意义(t=9.71,P<0.01);血清Lep与BMI呈正相关(r=0.71,P<0.01),与血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白呈正相关(r=0.93;r=0.76;r=0.91;r=0.67,P<0.01),与高密度脂蛋白呈明显负相关(r=-0.76,P<0.01).结论 血清Lep水平可反应儿童MS病情及进展.

    作者:王惠庭;管敏昌;汤卫红;俞慧君;叶建敏;邹朝春 刊期: 2014年第23期

  • 浅谈临床微生物检验的实习教学

    临床微生物检验是一门重要的检验专业课程,其内容涵盖广泛,包括细菌、病毒、支原体、衣原体、螺旋体、真菌等;涉及技术繁多,囊括分子生物学技术、免疫学技术、生化技术、光镜及电镜技术等;研究范畴全面,既有微生物的生物学性状,又有微生物的耐药机制,还涉及部分基因工程内容[1].鉴于本学科特点,单纯依靠理论讲授难以保证学习效果.为此,各医学院校均对学生设置了专业实习教学.

    作者:郭小兵;马俊芬;刘红春;张世杰;沈燕;明亮 刊期: 2014年第23期

  • 2种染色方法查找痰中结核杆菌的比较

    目的 评价发光二极管荧光染色法(简称LED法)与萋-尼氏抗酸染色法(简称Z-N法)查找痰中结核杆菌的差异.方法 对1 168份痰标本分别进行萋-尼氏抗酸染色和荧光染色检测,比较2种方法检查结核杆菌的阳性检出率、读片时间、褪色速度等方面的差异.结果 LED法检测结果与Z-N法检测结果的符合率为99.1%,二者差异无统计学意义(P>0.05),另有11份用Z-N法染色检测为阴性的标本其荧光染色检测为阳性,表明荧光染色检测方法具有更高的灵敏度,LED法的读片时间明显短于Z-N法.结论 LED法具有读片时间短、灵敏度较高、操作步骤简单等特点,在基层痰检室对肺结核患者的发现具有一定优势,适合在临床推广.

    作者:曾希鹏;张小芬;陈烨 刊期: 2014年第23期

  • 大便漂浮集卵新法

    目的 建立一个能提高肠道蠕虫卵阳性检出率的漂浮集卵新法.方法 在原有的饱和盐水漂浮法基础上滴加汽油,瓶口上不盖载玻片,用细铁丝环取漂浮油膜置载玻片上,直接镜检寄生虫卵.结果 对282份门诊和住院病人大便标本的检测中,肠道蠕虫卵阳性检出率从0.35%提高到2.48%;对187份幼儿园小孩大便标本的检测中,肠道蠕虫卵阳性检出率从0%提高到3.21%;对216份小学生大便标本的检测中,肠道蠕虫卵阳性检出率从0.46%提高到3.24%.结论 新建立的大便漂浮集卵方法,液面油膜起到了稳定虫卵的作用,从而使肠道蠕虫卵阳性检出率有明显提高,且操作简便.

    作者:吴寒 刊期: 2014年第23期

  • 高效液相色谱法同时检测肉制品中9种合成色素

    目的 建立高效液相色谱法同时检测肉制品中柠檬黄、诱惑红、赤鲜红、亮蓝、靛蓝、胭脂红、红2G、日落黄、苋菜红等9种合成色素的方法.方法 肉样用1%高氯酸提取、离心,提取液经过聚酰胺/C18混合固相萃取柱净化,3ml无水乙醇-氨水溶液-水(7∶2∶1,V/V)溶液洗脱,洗脱液浓缩后进行反相液相色谱测定,甲醇-0.02 mol/L乙酸铵溶液梯度洗脱,二极管阵列检测器检测.结果 9种合成色素在1.0ug/ml~20.0 μg/ml范围内线性关系较好,相关系数r2>0.999,本方法肉制品中9种合成色素的检出限为0.1 mg/kg,定量限为0.4 mg/kg,回收率在86.0%~98.3%之间,相对标准偏差在1.03%~3.9%之间.结论 该方法简单、快速、准确,适用于肉制品中9种合成色素的同时检测.

    作者:王志园;谭莹;王天娇;倪竹南;马冰洁;吴平谷 刊期: 2014年第23期

  • 蚕丝-PLGA网状支架的力学强度检测及其与骨髓间充质干细胞共培养

    目的 进行蚕丝-PLGA复合网状支架的力学强度检测及其与骨髓间充质干细胞的体外共培养.方法 采用纬编针织法制备蚕丝丝素-PLGA纤维复合网状支架,并进行力学强度测试.在网状支架上滴加Ⅰ型胶原并冷冻干燥,再用纤维连接蛋白表面修饰后,种植兔骨髓间充质干细胞进行体外共培养,观察细胞与支架复合生长情况.结果 蚕丝-PLGA网状支架宽约5 mm.支架的大载荷、抗拉强度、断点伸长率、弹性模量分别为(118.32±11.21)N、(52.90±5.03) MPa、49.79%±5.16%、(177.25±19.18) MPa.支架-MSCs复合物培养2 d的扫描电镜观察显示:MSCs细胞黏附于支架表面呈立体状生长,细胞呈梭形,增殖良好,并分泌基质.结论 蚕丝-PLGA复合网状支架具有良好的力学性能与细胞相容性,是一种较有潜力的组织工程韧带的支架材料.

    作者:张科技;张文元;杨亚冬;李颖;房国坚 刊期: 2014年第23期

  • 柱前衍生-HPLC法测定香菇中二硫代氨基甲酸盐类农药残留量

    目的 建立香菇中二硫代氨基甲酸盐类(DTCs)农药残留量的测定方法.方法 采用L-半胱氨酸盐酸盐和EDTA-N%混合液进行提出,0.05 mol/L碘甲烷-氯仿-正己烷溶液萃取、衍生、浓缩,氨基小柱净化,C18柱分离,高效液相色谱-紫外检测器检测.结果 3类DTCs农药线性范围为0.25 mg/L~5.0 mg/L,相关系数r>0.998,方法检出限和低检出浓度分别为:福美类(DMDs) 0.02 mg/L、0.015 mg/kg,代森类(EBDs) 0.04 mg/L、0.03 mg/kg,丙森类(PBDs)0.08 mg/L、0.06 mg/kg,平均加标回收率为77% ~98%,相对标准偏差为2.2%~9.6%.结论 本方法对3类DTCs农药衍生物分离效果好,选择性强,不易产生假阳性,测定结果准确可靠,能满足对该类农药残留限量(MRLs)的检测要求.

    作者:贺东霞 刊期: 2014年第23期

  • 优化原子吸收光谱法测尿锰的方法研讨

    目的 探讨石墨炉原子吸收分光光度法测定尿中锰含量的方法.方法 通过原子吸收光谱仪的原子化和灰化,优化升温程序对基体改进剂的筛选,将佳的基体改进剂加入尿样后,调整石墨炉原子吸收分光光度仪测定的好状态,直接测定.结果 测定浓度在0 μg/L~15 μg/L范围内,方法的线性关系良好,相关系数r=0.9993,样品的加标回收率为85.9% ~90.7%,变异系数<10%,检出限为0.25μg/L~0.39 μg/L.结论 该方法具有操作简单、快速简便、灵敏度和准确度高的优点,适用于尿中锰含量的测定.

    作者:黄文锋;陈创钦;杨桓照 刊期: 2014年第23期

  • 粪便中隐孢子虫的提取与检测方法的建立

    目的 建立粪便中隐孢子虫的提取与检测技术,分析腹泻病人粪便中隐孢子虫的感染情况,为该病的诊断、防治提供科学依据.方法 选择经病原学检测已经确诊的5份隐孢子虫阳性和4份阴性粪便,分别采用FTA卡和商业化DNA抽提试剂盒抽提粪便样本中DNA,经荧光PCR法进行扩增,比较核酸提取效果;同时用直接涂片法、改良抗酸染色法及荧光PCR法对63例腹泻病人隐孢子虫感染情况进行粪样检测分析.结果 应用FTA卡抽提DNA效果优于应用商业化DNA抽提试剂盒抽提DNA.同时对63份腹泻病人粪便运用直接涂片法、改良抗酸染色法及荧光PCR法都未检出隐孢子虫.结论 应用FTA卡进行粪便样本中隐孢子虫DNA的抽提方法具有简单有效、快速灵敏、准确可靠等特点,可以应用于粪便中隐孢子虫的检测,同时可联合多种检测手段来提高腹泻病人原虫感染的检出率.

    作者:黄达娜;唐屹君;李迎慧;阳帆;吴春利;李玥 刊期: 2014年第23期

  • 常见市售香皂抑菌效果的比较研究

    目的 研究常见市售香皂的抑菌效果,为人们日常选购香皂以预防某些传染病的发生提供一定的指导建议.方法 采用常规细菌培养技术,选取常见市售香皂,设置不同浓度和pH值的皂液分别与细菌作用,然后进行抑菌实验,并按标准计算抑菌率.结果 各种香皂对不同菌株均显示一定的抑菌效果:上海硫磺皂、舒肤佳、滴露和六神4种香皂对大肠杆菌、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、乙型链球菌和变形杆菌5种细菌的抑菌率在浓度达到50 mg/ml及以上时均高于90%,而其余4种香皂(力士、OLAY、多芬和夏士莲)则效果不一,对部分细菌有良好的抑菌率,可达到90%以上.结论 通过比较分析,4种常见市售香皂滴露、六神、舒肤佳和上海硫磺皂抑菌效果相对较好.同时,各种香皂对非致病菌的抑制效果要好于致病菌.

    作者:陈亚兰;郑伟鹏;王梓茗;钱楚芸;蔡铭升;李美丽 刊期: 2014年第23期

  • 332例复治肺结核患者一线抗结核药物耐药情况分析

    目的 为了初步了解宁波地区复治肺结核患者对4种一线抗结核药物的耐药状况及相关危险因素,并为完善本地区结核病防控策略提供相应的科学依据.方法 采用WHO/IUATLD推荐的1%药敏比例法,对332株临床分离的复治患者结核分枝杆菌进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)及乙胺丁醇(EMB)4种药物的耐药性测定,运用单因素及多因素logistic回归分析复治病例耐药的相关因素.结果 纳入的复治肺结核患者总耐药率、耐多药率分别为57.2%和36.1%.耐药谱以耐异烟肼为高.户籍情况是复治肺结核患者耐药的影响因素.结论 宁波地区复治肺结核患者一线抗结核药物的耐药趋势依然严峻,需进一步加强复治肺结核患者的防控工作.

    作者:车洋;于梅;许国章;平国华 刊期: 2014年第23期

  • 2009年-2013年余姚市中医医院2390例妇女HPV感染情况分析

    目的 调查2 390例妇科门诊就诊人群中妇女人乳头状瘤病毒(HPV)感染情况和核酸分型的分布特征.方法 采用PCR-反向点杂交基因芯片技术,对2009年-2013年来本院门诊就诊的2 390例妇女宫颈脱落细胞进行HPV基因分型检测,并对HPV感染阳性高危型人群进行液基薄层细胞学(TCT)检查.结果 2 390例HPV标本中阳性538例,总阳性检出率为22.51%,在538例HPV阳性标本中,单一感染者为431例,占80.11%,2种亚型感染者92例,占17.10%,3种亚型感染者15例,占2.79%,无4种及以上亚型感染;高危型感染率为22.09% (528/2 390),低危型感染率为5.52%(132/2 390).HPV亚型感染常见依次为HPV52、HPV58、HPV16,该人群未检出HPV39、HPV45、HPV73、HPV83.各年龄段HPV感染率随着年龄的增长呈逐渐上升趋势;感染高危型HPV人群宫颈上皮内瘤变发生率为3.07%,癌变发生率为1.02%.结论 本妇科门诊人群中HPV感染率较高,并以单一高危型为主,常见的是HPV52、HPV58、HPV16;结合TCT检查,可早发现、早预防、早治疗宫颈病变及癌变.

    作者:余小定;陈盈盈;赵莹 刊期: 2014年第23期

中国卫生检验杂志

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主管:中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会