学术投稿

nm23-H1基因实时荧光定量PCR标准质粒的构建

张传海;刘秋英;金琳;刘格;郭朝万;张美英;王一飞

关键词:nm23-H1基因, 实时荧光定量PCR, 重组质粒, 标准品
摘要:目的:制备用于nm23-H1基因mRNA实时荧光定量PCR检测的质粒标准品.方法:通过PCR扩增出目的片断,纯化后T-A连接至pMD18-T载体,转化宿主菌E.coli DHSα,获得阳性克隆;通过PCR扩增、双酶切鉴定和测序分析,确认重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,并进行荧光定量PCR检测分析.结果:nm23-H1基因目的片段成功重组至pMD18-T载体上,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性.梯度浓度标准质粒的荧光定量PCR结果显示,循环阈值(Ct)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系.结论:成功构建了nm23-H1基因实时荧光定量PCR质粒标准品.
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    作者:刘艳;金华丽;陈华 刊期: 2007年第04期

  • 辽宁省肾综合征出血热基因分型及序列分析

    目的:了解辽宁省汉坦病毒的分子特征,建立肾综合征出血热(HFRS)病毒基因库.方法:用RT-PCR方法对间接免疫荧光阳性鼠肺标本进行目的基因的扩增并测序,与标准汉坦病毒(HV)株一起进行同源性分析及系统发生树分析.结果:23株扩增产物与L99 HV同源性在78.5%~99.6%之间,属汉城型(SEO)型HV,除[01]Shenyang-Yuhong/5/2005/sewer-r,[02]Shenyang-Yuhong/4/2005/sewer-r,[03]Shenyang-Yuhong/7/2005/sewer-r外,同源性均在94%以上.获得的23株HV序列在系统发生树上的遗传距离较近,同源性也均在94.7%以上,基本属于同一亚型.各株与LR1 HV相应序列进行比较同源性仅在26.7%~43.7%之间.结论:辽宁省是以SEO型HV为主的SEO和汉滩(HTN)混合型疫区,且SEO型汉坦病毒变异较小,稳定性较高.

    作者:秦彩明;姚文清;吴少慧;刘芸;孙英伟;郭军巧 刊期: 2007年第04期

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    突发公共卫生事件,因涉及范围广,危害性大,在社会上日益被重视.疾病预防控制中心在介入突发公共卫生事件的调查处理中,担负着主要的职责.突发公共卫生事件发生后,如何快速准确地查明事件发生的原因,查清事件主要的危害因子,对有效的启动应急预案,防止事件进一步地扩大有着重要的作用.本文针对基层疾病预防控制中心的一些具体情况,对怎样做好应急检测技术的储备,提高检测能力,作一些探讨.

    作者:朱爱民 刊期: 2007年第04期

  • 肠侵袭性大肠埃希菌检测方法进展

    肠侵袭性大肠埃希菌(Enteroinvasive Escherichia coli,EIEC)具有侵袭性[1],主要侵犯较大儿童和成人[2],引起人类细菌性痢疾[3].该菌的生化反应很不典型[1].引起的痢疾样腹泻依然是全球性的公共卫生问题.可爆发流行或散发,亦可引起食物中毒(主要是O28ac)[1],由其引起的食物中毒时有报告,因而其病原学的诊断对该病的防治和流行病学调查有着十分重要的作用.

    作者:包芳珍;方叶珍;徐丹戈;高海明;黄世旺 刊期: 2007年第04期

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    实验室内部质量控制是实验室分析人员对分析质量进行自我控制的过程,是保证实验室提供准确可靠分析结果的必要基础,只有作好内部质控才能及时发现随机因素和系统因素对检测工作的影响,以便随时采用相应的纠正措施,确保实验室分析结果的可靠性.

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    作者:刘红旗 刊期: 2007年第04期

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    目的:建立火焰原子吸收光谱法测定金属罐装果汁饮料中锡的分析方法.方法:样品用硝酸和高氯酸消化后,导入火焰原子吸收分光光度计中,与标准系列比较定量.结果:在224.6 nm波长下,灯电流为4.0 mA,狭缝宽度为0.2 nm时,该方法的测定范围为0~100 mg/L,回归方程为:Y=0.0017+0.0011X,r=0.9994,检出限为0.75 mg/L,相对标准偏差为0.66%~2.15%,加标回收率为93.7%~102.9%.结论:本法具有干扰少,线性范围宽,操作简便、快速、准确等优点,适用于金属罐装果汁饮料中锡的测定.

    作者:练翠雯 刊期: 2007年第04期

  • 病原微生物实验室生物安全管理探讨

    目的:探讨病原微生物实验室生物安全管理问题.方法:从管理角度介绍了遵循质量管理体系要求,结合流行病学原理,开展病原微生物实验室建设的心得体会.结果:病原微生物实验室生物安全要依照质量管理体系要求;从流行病学的思路出发,按照流行病学的防治策略和措施开展工作,并配合人员培训和硬件建设,实现病原微生物实验室生物安全的现代化管理.结论:有效开展病原微生物实验室生物安全管理,防止病原微生物造成的实验室传播.

    作者:姚丽;高鹏 刊期: 2007年第04期

  • 丙肝病毒核心抗原与丙肝病毒抗体检测的比较研究

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    作者:索凤霜;李萍燕;康熙雄 刊期: 2007年第04期

  • 实验室信息系统在检验医学中的应用价值

    目的:随着检验医学、信息技术的不断发展和实验室大型检验设备的引进,LIS系统和HIS系统的无缝连接,已经成为医学实验室重要的组成部分.方法:通过对传统检验工作模式和LIS与HIS系统连接工作模式进行对比.结果:以科学合理的检验流程为基础,以无纸化工作模式为载体的信息体系,更能够全面保证检验质量,提高实验室自动化程度,优化检验流程,降低差错率.结论:LIS系统与HIS系统的应用,对医院科学化、规范化、人性化的管理,对提高医疗服务质量有着非常重要的意义.

    作者:吴燕丹 刊期: 2007年第04期

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    作者:王春娥;潘振球;鲁兵;李剑 刊期: 2007年第04期

  • 食品卫生微生物检验中培养基的质量控制

    培养基的制备和使用是食品微生物实验室检测工作的重要环节,培养基的质量直接影响到检测结果的准确性.文章就目前食品卫生微生物检验中培养基的制备及使用过程中存在的问题,从培养基的水化、灭菌、平板的制备、接种和培养、物理学和生物学质量控制及贮存等方面,讨论食品卫生微生物检验中培养基的质量控制.

    作者:刘春梅;蔡芷荷;吴清平 刊期: 2007年第04期

  • 超市熟食制品的食品安全问题及其对策研究

    超市,作为现代流通渠道的代表,正逐渐成为消费者购买食品的主渠道.随着市场经营方式的变革,超市开始设立食品加工场所,提供各类可直接进口的熟食制品,极大地方便了生活、工作节奏日益加快的广大消费者[1].但随着人们食品安全意识、媒体及相关部门对超市食品安全的关注程度的增强,超市熟食制品存在安全隐患的报道却不断见诸于报端.

    作者:胡珍娣;吴清平;张菊梅;郭伟鹏 刊期: 2007年第04期

  • 不同戊型肝炎病毒检测方法用于无偿献血筛查效果评价

    目的:评价无偿献血HEV筛查的必要性和选择适当的方法.方法:使用抗-HEV IgG和抗-HEV IgM检测方法对绍兴市2005年6月至2006年5月3 701份街头无偿献血标本进行检测,对阳性标本进行RT-PCR确认是否为病毒血症.结果:3 701份标本抗-HEV IgG和抗-HEV IgM阳性率分别为29.91%和1.35%,与RT-PCR的阳性符合率分别为0.45%和12.00%.结论:在目前献血人群中确实存在HEV病毒血症,有必要增加相应的检测项目,抗-HEV IgM检测相比抗-HEV IgG检测更适合作为无偿献血人群的HEV筛查方法.

    作者:桑列勇;傅立强;方放;吴士定 刊期: 2007年第04期

  • 用脉冲场凝胶电泳方法对O139霍乱弧菌分型的研究

    目的:利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术探讨O139群霍乱弧菌的分子分型方法.方法:用Sfi Ⅰ酶和Not Ⅰ酶切O139群霍乱弧菌染色体DNA,经脉冲场凝胶电泳进行片段分离.结果:14株O139群霍乱弧菌经Sfi Ⅰ酶切后电泳分离可得一个PFGE型,用Not Ⅰ酶切电泳可分为2个PFGE型.结论:脉冲场凝胶电泳技术分析O139群霍乱弧菌,分型发现微小差别有助于分析追踪疫情和来源.

    作者:金春光;石优章;徐景野;郑剑 刊期: 2007年第04期

  • nm23-H1基因实时荧光定量PCR标准质粒的构建

    目的:制备用于nm23-H1基因mRNA实时荧光定量PCR检测的质粒标准品.方法:通过PCR扩增出目的片断,纯化后T-A连接至pMD18-T载体,转化宿主菌E.coli DHSα,获得阳性克隆;通过PCR扩增、双酶切鉴定和测序分析,确认重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,并进行荧光定量PCR检测分析.结果:nm23-H1基因目的片段成功重组至pMD18-T载体上,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性.梯度浓度标准质粒的荧光定量PCR结果显示,循环阈值(Ct)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系.结论:成功构建了nm23-H1基因实时荧光定量PCR质粒标准品.

    作者:张传海;刘秋英;金琳;刘格;郭朝万;张美英;王一飞 刊期: 2007年第04期

  • 水中阴离子表面活性剂两种测定方法的比较

    目的:建立一种简便、快速、高灵敏度的测定水中阴离子表面活性剂的方法.方法:水样中阴离子合成洗涤剂与酸性亚甲蓝反应形成有色络合物,用氯仿萃取后在640 nm处测定,比较流动注射仪和分光光度计测定结果.结果:流动100.3%,分光光度法测定的线性范围为0.10~0.80 mg/L,线性相关系数为0.9962,检出限为0.10 mg/L,回收率为85.0%~98.5%.结论:流动注射法与国标分光光度法两种检验方法测定结果无显著差异,流动注射法线性范围较宽、灵敏度较高且可自动、快速地测定大批量水样中的阴离子表面活性剂.

    作者:杨阳;刘莉治;刘穗星;李静 刊期: 2007年第04期

  • 木聚糖酶的亚慢性毒性研究

    目的:研究木聚糖酶的亚慢性毒性作用.方法:根据GB15193-2003《食品安全性毒理学评价程序和方法》设104.2、208.4、416.7、833.3 mg/kg4个剂量组,进行大鼠亚慢性毒性试验研究.结果:木聚糖酶大鼠亚慢性毒性试验各剂量组各指标均未显示明显毒性作用.结论:在本次实验条件下,木聚糖酶在833.3 mg/kg剂量下未显示有毒性作用.

    作者:程东;韩晓英;鲁传宏;张天亮;姚文环 刊期: 2007年第04期

中国卫生检验杂志

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主管:中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会