用新底物DCAP-P检测酸性磷酸酶方法的建立

丁晓琴；胡宗华；李英；谢克勤；李忠信

关键词：2, 6-二氯-4-乙酰基苯基磷酸, 合成, 酸性磷酸酶, 连续监测法

摘要：目的合成酸性磷酸酶(ACP)的底物2,6-二氯-4-乙酰基苯基磷酸(DCAP-P),并建立以DCAP-P为底物的一种新的ACP测定方法.方法在BTS-310型半自动分析仪和TBA-40FR型全自动生化分析仪上研究连续监测法,建立试验参数.结果本法测定DCAP吸收峰为326 nm;ACP的Km=0.139 mmol/L;340nm时DCAP的摩尔消光系数为14 440 L·mol-1·cm-1,缓冲液浓度0.1 mol/L,适pH5.4,底物浓度2.0 mmol/L,延滞期60 s,线性反应期15 min;线性范围为0～1 188 U/L;血红蛋白＜115.62 mg/L及胆红素对测定结果无影响;本法总ACP与PAP(前列腺酸性磷酸酶)的参考值范围分别为12.58～19.42U/L和2.52～9.04U/L.结论此方法重复性好,线性反应期长,线性范围广,干扰因素少,适用于自动化分析仪.

临床检验杂志相关文献

6577例输血前和手术前患者HBV、HCV、HIV、梅毒抗体检测结果的分析

为了减少和避免医院感染和医疗纠纷的发生,我院对输血前和手术前患者进行HBVM,抗HCV抗体,抗HIV抗体,梅毒抗体的检测.现将6 577例检测结果报告如下.

作者：马蔡昀；文怡；曾慧敏；蒋理刊期： 2004年第06期
地高辛标记引物酶显色法检测HBV基因多态性及应用

目的建立地高辛标记引物酶显色法,用于DNA芯片检测HBV基因多态性,并对实验条件进行优化.方法用地高辛标记引物进行HBV DNA前C/C区和P区双重PCR,制备含地高辛标记的DNA样品目的片段,并将目的片段杂交于含HBVDNA核苷酸序列野生型及突变型探针的DNA芯片上,用抗地高辛抗体-碱性磷酸酶进行显色,并转印于尼龙膜上,后用光学扫描仪读取结果.结果通过一次杂交反应同时获取HBV DNA前C/C区(1 896、1 814)、BCP区(1 762、1 764)和P区(552)位点的信息.杂交温度与时间为42℃1 h、酶作用和显色时间分别为30 min和45 min时结果较理想,采用高盐浓度洗涤获满意杂交信号,批内CV均在15%左右,敏感度为2.0×103拷贝/ml.50例乙型肝炎患者突变率52.0%(26/50),以上各位点突变率分别为34.0%、22.0%、38.0%、38.0%、4.0%.结论地高辛标记引物酶显色法用于芯片检测HBV基因常见位点多态性,简便易行,试剂成本显著降低,不需特殊设备,易于临床推广应用.

作者：马达；王惠民；张芹；王万相；蒋玲；郭乃洲；张冬雷；赵建龙；孙悦刊期： 2004年第06期
民族、性别、年龄及环境对4项凝血参数影响的初步调查

全自动血凝仪的使用,为临床提供了血栓与止血的众多参数,促进了血栓与止血实验诊断水平的提高.由于这项技术出现时间短,对其影响因素的研究报道甚少,作者对本地区518例成年健康人的凝血参数作了调查,就民族、性别、年龄及环境四个因素作了分析,报告如下.

作者：马雅静；谷杨；程江；张蕾刊期： 2004年第06期
血清结合胆红素酶法测定在自动生化分析仪上的应用

目的建立酶法测定血清结合胆红素的全自动分析方法,并在肝胆疾病患者中临床应用.方法通过试剂的合理组合,分析参数和操作程序的设定,建立结合胆红素(CB)的全自动分析方法,同时对总胆红素进行自动化酶法测定.结果酶法CB测定:精密度,批内n=20,-x=6.48 μmol/L,s=0.11,CV=1.7%和n=20,-x=77.9μmol/L,s=0.42,CV=0.53%;批间n=10,-x=9.46 μmol/L,s=0.17,CV=1.83%和n=10,-x=59.7 μmol/L,s=1.43,CV=2.39%;线性范围至少可达340μmol/L;比对实验:与Beckman重氮法试剂(在Beckman CX7型生化分析仪上)比较,Y(酶法)=0.759 X1-2.82、r=0.991,与Iagnosticum RT重氮法试剂(日立7600-020型分析仪)比较,Y=0.841X2-4.39、r=0.963.临床研究显示:与重氮法直接胆红素值相比,本法测定CB值能够更灵敏地反映黄疸患者的胆红素分泌功能.结论建立的CB全自动分析方法具有良好的分析特性,可在临床推广应用.

作者：赵建华；蒋胜高；罗浔阳；王毓三刊期： 2004年第06期
缺血修饰性白蛋白--一种新的心肌缺血标志物

近年来,各种心肌损伤标志物如心肌肌钙蛋白(cTn)、肌红蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)等广泛用于临床,辅助医生明确急性冠脉综合征(ACS)的诊断.但这些标志物只有在心肌坏死后血中浓度才升高,如何对急性胸痛患者进行早期诊断仍是临床关注的问题.心肌缺血标志物能在ACS早期可逆阶段检出,有助于对急性缺血患者进行正确诊断和及时治疗.

作者：李志艳；徐国宾；夏铁安刊期： 2004年第06期
抗凝新鲜血在血液分析仪质量控制及评价中的应用

目的探讨抗凝新鲜血在血液分析仪室内质量控制及室间质量评价中的应用.方法将当天采集制作的抗凝新鲜血分发至各医院临检实验室,当天完成血液分析仪的比对.仪器校准后,进行室内、室间质控物的检测.结果各实验室血液分析仪经定值抗凝新鲜血比对及校准后,室间质评抗凝新鲜血各项目检测结果的CV、平均VIS明显减小,优秀率提高到95%以上.结论抗凝新鲜血用于质控,提高了北京市各医院临检实验室血液分析仪的检测水平,使各医院的血液分析仪有了可溯源的参考标准,提高了血常规检验报告的准确性和可比性.

作者：岳育红；丛玉隆；王清涛；秦小玲；钱超刊期： 2004年第06期
鬼臼乙叉甙对SHG-44胶质瘤细胞表达β-1,4-半乳糖基转移酶V后粘附相关分子表达的影响

目的研究人脑星形胶质细胞瘤SHG-44细胞表达(β-1,4-半乳糖基转移酶V(beta-1,4-galactosyltransferase V,β-1,4-GalT V)后对化疗药物敏感性的影响,分析鬼臼乙叉甙(VP16)处理表达β-1,4-半乳糖基转移酶V的SHG-44细胞后其细胞粘附作用相关因子水平的变化.方法用120 μmol/L的VP16处理转染了正义、反义β-1,4-GalT V和空载体的SHG-44细胞24h后,采用western blot检测整合蛋白β1表达变化及局部粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的蛋白水平和FAK的酪氨酸磷酸化水平.结果在未经VP16处理的3株SHG-44细胞中,FAK的蛋白水平没有明显改变,而整合蛋白β1的蛋白表达在转正义β-1,4-GalT V的细胞中高;经VP16处理后,SHG-44细胞中整合蛋白β1的表达水平增高,FAK及其磷酸化水平下降.但整合蛋白β1,FAK及其磷酸化水平随细胞中β-1,4-GalT V表达水平不同而变化.结论VP16处理对表达不同水平的β-1,4-GalT V的SHG-44胶质瘤细胞的粘附影响有所不同,提示胶质瘤表达β-1,4-GalT V不仅与肿瘤的恶性行为有关,而且与肿瘤的化疗敏感性有关.

作者：程纯；严美娟；沈爱国；张冬梅；邵晓轶；王惠民；顾建新刊期： 2004年第06期
基于免疫金银染色的蛋白质与抗原分子微阵列技术

目的研制适于自身抗体检测的蛋白质与抗原分子微阵列.方法利用氧化型琼脂糖凝胶膜结合戊二醛分子衍生的活性表面,制作蛋白质与抗原分子微阵列,建立了检测血清自身抗体的胶体金免疫金银染色方法(IGSS).结果在未经选择的风湿病患者中(包括SLE,RA和MCTD),检出多种自身抗体阳性,其中又以子宫内膜抗体(EmAb)、抗ssDNA抗体、抗TG抗体、抗TPO抗体和RF等的检出频率较高;但心磷脂抗体(ACA)、抗LSP和抗精子抗体(AsAb)均为阴性.经初步方法学对比考证,实验结果与ELISA有较好的一致性(达90%).结论本法具有方法敏感,结果直观和实验条件易于控制等特点,为发展可视化阵列芯片提供了一种很好的模式.

作者：虞伟；陶洋；王艾丽；武建国刊期： 2004年第06期
抗-HIV抗体检测时出现拖带污染分析

我们在抗-HIV抗体检测工作中遇到2份抗-HIV抗体强阳性血清,污染了邻近标本,造成假阳性.有关情况报道如下.

作者：柯苑；马成平；赵静刊期： 2004年第06期
肝实质损害患者凝血、抗凝和纤溶指标检测及其临床意义

肝实质损害的患者因肝细胞严重损害,致使肝功能减退,多系统受累,血液系统亦发生不同程度的异常改变.我们对45例肝硬化、肝癌患者及40例健康人进行了PT、APTT、Fib、TT、凝血因子(Ⅱ、V、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ)活性、AT、PLG、α2-AP检测,现报告如下:

作者：吴家明刊期： 2004年第06期
尿微量蛋白对监测2型糖尿病早期肾功能损害的价值

糖尿病(diabetes mellitus,DM)及其并发症严重影响患者的生活质量.20%DM患者将并发糖尿病肾病(DN),从而对患者造成不可逆的损害.肾脏穿刺组织病理学检查是诊断DN的可靠方法,但技术要求高,且具有创伤性,不易推广.目前研究较多的为反映肾小管、肾小球功能的相关检测指标.我们联合检测尿中微量白蛋白(mAlb)、α1巨球蛋白(α1-MG)、转铁蛋白(uTf)等微量蛋白,结合糖化血红蛋白,能反映早期肾脏损害及其程度,现报告如下.

作者：汤俊明；赵进良；张小莉刊期： 2004年第06期
比较基因组杂交技术在淋巴瘤遗传学研究中的应用

目的采用基因组杂交(CGH)技术,探讨淋巴瘤的分子遗传学特征.方法获取10例淋巴瘤患者的活检淋巴结组织,以CGH技术检测淋巴瘤基因组DNA拷贝数的变化.结果10例淋巴瘤患者中,2例有DNA扩增,1例有DNA缺失,1例DNA扩增和缺失同时存在,另6例未见基因组异常.结论CGH技术是淋巴瘤遗传学研究中的有用工具.

作者：许家仁；陈丽娟；郭锡熔刊期： 2004年第06期
高脂血对不同方法测定血清高密度脂蛋白胆固醇的影响

目的观察不同浓度血清三酰甘油(TG)对高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定的影响,在临床实验室内寻找可靠的HDL-C测定方法以满足临床诊治需求.方法采用全自动生化分析仪检测血清TG、TC、HDL-C以及LDL-C并与沉淀法和电泳法测定HDL-C进行分组比较.结果当血清TG＜1.69mmol/L时,3种方法测定值之间无差异;当血清TG为1.69～4.0 mmol/L范围时,各方法测定HDL-C有显著差异,但相关性良好.当TG＞4.0 mmol/L,各方法之间的差异程度不一致.结论对高TG标本HDL-C的测定电泳法、沉淀法和直接法之间有显著差异,有条件的实验室应尽可能采用电泳法测定高TG标本HDL-C.

作者：张葵；王丽；张欣；罗浔阳刊期： 2004年第06期
特发性血小板减少性紫癜患者血小板再生功能的测定及临床意义

为了解特发性血小板减少性紫癜(idiopathicthrombocytopenic purpura,ITP)患者血小板再生功能的改变,本文以平均血小板体积(mean platelet volume,MPV)和网织血小板(reticulated platelets,RP)反映血小板的更新状况,分析比较血小板数量与血小板再生功能的关系,以期从血小板再生功能的改变阐述ITP的发生机制,并为ITP的诊断、预后判断提供灵敏可靠的实验室指标.

作者：杨晓静；姜翠英；王谦刊期： 2004年第06期
加热煮沸对免疫法胃液隐血试验的影响

在应用免疫学方法检测隐血时,许多检验人员仍沿袭过去的做法,对胃液标本煮沸后再进行隐血试验.我们观察了煮沸后对结果的影响,结果报告如下.

作者：周毓菁；顾国浩刊期： 2004年第06期
肝胆疾病患者血清总胆汁酸的检测

我们用迈克公司总胆酸循环酶法测定试剂盒、奥地利Dialab公司AST、ALT、GGT速率法试剂盒,在日立7150生化分析仪上对101例体验正常成人(对照组)和36例肝硬化、23例原发性肝癌、34例急性肝炎、32例胆石症患者进行了血清总胆汁酸(TBA)的测定,并对1例肝移植术后患者进行了TBA的动态观察.结果见表1.

作者：欧阳良；彭可君刊期： 2004年第06期
肺癌患者血清胃泌素前体释放肽检测及意义

目的检测肺癌患者血清中胃泌素前体释放肽(ProGRP)的水平,探讨其在肺癌鉴别诊断中的意义.方法用ELISA试剂盒对78例肺癌患者血清中ProGRP含量进行测定并与健康对照组和肺良性疾病组进行对照分析.结果小细胞肺癌(SCLC)血清ProGRP水平显著高于对照组(P＜0.01).以大于46 pg/ml为临界值,ProGRP对SCLC的阳性率为64.9%,ProGRP与NSE水平呈高度正相关(r=0.9,P＜0.01).结论患者血清中ProGRP水平可作为小细胞肺癌的辅助诊断指标.

作者：严枫；胡效亚；徐祥刊期： 2004年第06期
2型糖尿病患者血浆血小板活化因子和血清可溶性细胞间粘附分子-1测定的临床意义

目的研究2型糖尿病患者血浆血小板活化因子(PAF)和血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)水平的变化及其临床意义.方法采用ELISA法和生物学方法分别测定55例2型糖尿病患者(其中糖尿病并发冠心病患者24例,糖尿病未并发冠心病患者31例)和32名健康人(对照组)血浆PAF和血清sICM-1水平.结果糖尿病组PAF和sICAM-1水平与对照组PAF和sICAM-1相比均显著升高(P＜0.01);糖尿病并发冠心病组PAF和sICAM-1水平均显著高于糖尿病未并发冠心病组(P＜0.05,P＜0.01);糖尿病患者PAF与sICAM-1水平呈正相关(r=0.637,P＜0.01).结论血浆PAF和血清sICAM-1在糖尿病及其并发症的发生、发展中起作用,其测定可能有助于糖尿病及其并发症的早期诊断和病情的监测.

作者：钱晖；朱伟；赵彦平；姜润秋；严丽荣；许文荣刊期： 2004年第06期
抑癌基因APC启动子甲基化检测及其在肺癌诊断中的应用

目的建立抑癌基因APC启动子部位甲基化的检测方法,并对肺癌临床样品进行初步检测研究.方法:对肺癌组织提取的DNA及转甲基后的脐带血DNA进行化学修饰,以甲基化特异性引物进行基因扩增(methylation specific PCR,MSP)和甲基化序列分析(methlation sequencing,MS).结果:经转甲基的人脐带血DNA样品MSP检测为阳性,其序列与预期相符,未经转甲基样品为阴性.17例肺癌患者的肿瘤及其正常肺组织APC甲基化检测阳性率分别为47%(8/17)和18%(3/17),1例肺部良性肿瘤及其正常肺组织的检测结果均为阴性;对MSP检测为阴性的9例肺癌患者肿瘤及其正常肺组织进行MS检测分析,有4例APC启动子部位存在CpG甲基化.结论:利用MSP和MS两种甲基化检测分析手段,对17例临床确诊肺癌组织的检测总阳性率可达71%(12/17).MSP操作简便,价格低廉,可适合于大规模肿瘤患者样本的筛查;而对于MSP检测为阴性的临床样品,可以利用MS进行进一步的确认,为临床肺癌诊断提供更准确的信息.

作者：潘世扬；张寄南；魏源华；姚孝明；黄珮珺；戎国栋；王宏刊期： 2004年第06期
用HEK-TSHR细胞检测TSAb时不同浓度PEG提取IgG对结果的影响

目的探讨不同浓度聚乙二醇(PEG)提取IgG对甲状腺刺激性抗体(TSAb)检测结果的影响,完善TSAb检测体系.方法用300g/L及200g/LPEG提取人血清IgG,刺激表达有人TSH受体的人胚肾细胞(HEK-TSHR),采用131I-cAMP药盒测上清液cAMP以确定TSAb活性.结果用2种不同浓度PEG提取IgG检测被检标本中TSAb活性存在良好的正相关;高浓度PEG组和常规浓度PEG组比较,TSAb活性及TSAb阳性率无显著性差异.结论用表达人TSH受体的人胚肾细胞检测TSAb,提取样品中IgG所选PEG浓度对TSAb检测结果无显著影响.

作者：郭辉；徐利；张景宇刊期： 2004年第06期