酶循环法及其在酶法分析中的应用

杨昌国；许叶

关键词：酶法分析, 酶循环法

摘要：由于酶法测定的特异性好,检测简便,反应温和,无污染,且灵敏度较高(10～100 μmol/L),已能满足体液中大部分物质的测定,因此在临床化学测定中已广为应用.随着临床化学的发展,体液中某些微量物质的准确测定逐渐显得重要.酶循环法是利用酶的底物特异性来放大靶物质(被测物)的测定方法.此法仅循环靶物质,减少了样品中存在的其它物质对测定的干扰,因此不需要对样品进行预处理或对靶物质的提取,而且该法不需要专门的设备,是一种前景广阔的测定技术.日本旭化成(Asahi Chemical)公司发展了这一技术,笔者参考旭化成公司的有关资料[1～3],将这一技术介绍给国内同道.

临床检验杂志相关文献

耐万古霉素肠球菌表型检测及基因分型

目的研究对万古霉素耐药或中介的肠球菌株的表型和基因型,以了解本院耐万古霉素肠球菌(VRE)的流行状况,指导临床合理用药.方法收集200株临床分离的肠球菌株,用琼脂筛选法筛选VRE,并分别用E test和多重PCR检测和分析对万古霉素耐药或中介肠球菌株的表型和基因型.结果共检出10株对万古霉素耐药或中介的肠球菌株,其中5株为天然耐万古霉素肠球菌.基因型分析的结果为1株van A型,4株van C1型,3株van C2型,2株基因型不明.结论已发现5株VRE(1株VAN A型),提示临床上须合理使用抗生素,以防止VRE等多重耐药细菌的爆发流行.

作者：应春妹；项明洁；倪语星刊期： 2001年第05期
肝硬化患者肝移植后丙型肝炎的复发

丙型肝炎(HC)患者肝移植后HCV的再感染,其自然病程、转归及影响因素复杂多样[1,2].丙肝复发后,多数发展为慢性活动性肝炎,甚至肝硬化,导致移植失败[3,4].早期诊断和及时治疗,有可能延缓病情发展.我们利用FQ-PCR检测异体肝移植患者血清中HCV RNA水平,结果如下.

作者：段继惠；黄繁嫱；王欣；李代红刊期： 2001年第05期
婴儿硬脑膜下积液培养出阴沟肠杆菌1例

1998年12月,我科从一婴儿硬脑膜下积液中培养出E.cloacae(阴沟肠杆菌),报道如下.1 病例摘要患儿,男,5月.因反复发热,前胸隆起20天.于1998年12月收住我院.纳差;流涕;烦哭.体温39℃～41℃,面色青灰,神志恍惚.颈抵抗(+).偶有抽搐,心律160/分,律不齐.头颅CT提示大量硬脑膜下积液,抽取硬脑膜下积液涂片检出革兰染色阴性杆菌,培养鉴定为阴沟肠杆菌.

作者：朱洋；黄海林；杨晓红刊期： 2001年第05期
流式细胞术检测活化血小板的临床应用

目的观察高粘滞综合征(HVS)与活化血小板的关系.方法用流式细胞术以单克隆抗体作分子探针,对120例HVS患者治疗前联合测定CD62P、CD63、CD31、CD41,并与正常组(50例)测定值比较.结果 (1)CD62P、CD63、CD31阳性百分率均高于正常测定值,CD41阳性表达无明显改变.(2)联合检测可提高HVS的阳性率至90%～100%,其敏感性达95%.结论活化血小板参与了高粘滞综合征的发生和发展,应用流式细胞术分析血小板膜糖蛋白,其特异性强,阳性检出率高,重复性好,快速简便,在分子水平上为HVS早期诊断提供了一种新的可靠依据.

作者：陆紫敏；顾凤英；吴金莺；陈宝安刊期： 2001年第05期
t-PSA为4.0～10.0 ng/ml时f-PSA百分率对前列腺疾病的鉴别诊断价值

目的为了明确游离前列腺特异性抗原(f-PSA)百分率鉴别t-PSA在4.0～10.0 ng/ml范围前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)的临床价值及确定f-PSA百分率异常的截断点.方法采用放射免疫分析法,检测t-PSA在4.0～10.0 ng/ml范围46例PCa和71例BPH患者血清t-PSA和f-PSA,并计算f-PSA百分率,同时比较不同水平f-PSA百分率的截断点对PCa诊断的价值.结果 t-PSA在4.0～10.0 ng/ml范围内,BPH组和PCa组的f-PSA百分率有极显著性差异(P<0.01),而t-PSA差异无显著意义(P＞0.05).以f-PSA百分率<15%作为PCa诊断的截断点,其敏感性,特异性,阳性预测值,实验有效率分别为84.8%,88.7%,82.9%,87.2%.结论用f-PSA百分率鉴别t-PSA在4.0～10.0ng/ml范围的PCa和BPH,具有较大的鉴别诊断意义.建议临床上以f-PSA百分率<15%作为PCa诊断的截断点,能大幅度地提高t-PSA测试的特异性和PCa的检出率,减少或避免不必要的前列腺活检.

作者：谢克俭；潘芙蓉；管瑜刊期： 2001年第05期
MTT-半固体培养基测定细菌动力的研究

目的制成一种容易测定细菌动力的半固体培养基.方法根据Difco动力试验培养基配方,降低琼脂浓度,加入MTT代替TTC.培养基组成为10.0g Tryptose,5.0g NaCl,3.5g agar,1000.0 ml蒸馏水,高压灭菌后,冷却至50℃～60℃.无菌加入1.5 ml滤器除菌的10 g/L MTT水溶液.分装无菌管.结果有动力菌株沿着穿刺线扩散,形成蓝色云雾状,而无动力菌株在穿刺线上生长只形成蓝线,蓝线周围培养基保持澄清.检测了123株菌,鞭毛染色证实94株有鞭毛、29株无鞭毛;有鞭毛的菌株中,90株菌培养10～18 h动力阳性,其余4株大肠埃希菌培养24h动力阳性,但这4株菌应用Difco动力试验培养基需诱导传代才获得阳性结果.除此4株外,还有9株用Difco动力培养基需培养48 h才阳性.结论 MTT半固体培养基为测定细菌动力适培养基.

作者：谷海瀛；张慧云；符惠群；王旭明；莫成锦刊期： 2001年第05期
心肌梗死患者血清脂蛋白氧化易感性及高密度脂蛋白氧化抑制能力分析

目的了解心肌梗死存活患者(MIS)血清脂蛋白氧化易感性以及高密度脂蛋白(HDL)对低密度脂蛋白(LDL)氧化抑制能力的变化.方法采用密度梯度超速离心分离33例MIS患者的血清脂蛋白组分(VLDL,LDL,HDL),用A234 nm光吸收鉴定脂蛋白氧化易感性,硫代巴比妥酸值(TBARS)分析脂蛋白脂质过氧化程度,并与正常人(44例)进行了比较.结果 MIS患者VLDL、LDL组分脂质过氧化程度明显高于正常人(P<0.01),氧化延滞时间明显缩短(P<0.001),HDL组分对LDL氧化抑制能力显著降低(P<0.01).结论 MIS患者VLDL,LDL组分氧化易感性增加,HDL抗氧化能力受损,可能与其动脉粥样硬化的发生发展有关.

作者：张春妮；万瑛；许跃龙；庄一义刊期： 2001年第05期
假高钙血症产生原因及鉴别方法

前不久,英国Whiston医院的化学病理学家M A Al-Jubouri在因特网上的一个临床生化电子邮件专题讨论组中发出了一封邮件[1],主要内容如下:

作者：刘泽军；魏明竞刊期： 2001年第05期
星形奴卡菌致软组织挫裂伤感染1例

2000年8月从车祸致伤的1例住院患者的左眉弓软组织挫伤血肿穿刺液中分离出N.asteroides(星形奴卡菌),报道如下.

作者：姚新忠刊期： 2001年第05期
谷氨酸脱羧酶抗体测定的临床意义

我们应用ELISA测定62例糖尿病伴有或不伴有自身免疫性甲状腺疾病(AITD)的患者血清中谷氨酸脱羧酶(GAD)抗体,并对其临床价值进行了探讨.

作者：孙红霞；黄慧；田浩明刊期： 2001年第05期
医学实验室全面质量管理体系的概念与建立

近年来,随着先进仪器的普及应用和技术人员素质的提高,我国的检验医学事业有了飞速的发展,如何加强实验管理是进一步提高我国检验医学水平的首要问题.全面管理体系的建立,是保证质量,提高水平的关键,本文以我科近年学科建设为例,谈谈体会,供同道们参考.

作者：丛玉隆；邓新立刊期： 2001年第05期
部分Rh阴性汉族人RHD基因的多态性

随着分子生物学技术在血型研究方面的应用,不断发现RhD的多态性有着复杂的遗传背景,也发现RhD抗原阴性的群体中,部分人却携带RHD基因.我们采用PCR-SSP方法对血清学已经确定的23名RhD抗原阴性、2名RhDU型和2名RhD抗原阳性的汉族无亲缘关系的供血者进行了RHD基因检测,结果如下.

作者：王毅；石翠英；何路军；刘敬闪；张虹；赵志弘刊期： 2001年第05期
66株阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测

我们从66株阴沟肠杆菌检出产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)8株,并对头孢噻肟、泰能等8种抗生素作药敏试验,报告如下.

作者：杨美云；邬硕平；蒋泓宇刊期： 2001年第05期
心型脂肪酸结合蛋白的测定及临床意义

近年来,急性心肌梗死(AMI)的标志物研究取得很大进展.血清酶学指标在AMI诊断、预后、疗效评估等方面的应用价值已被公认,肌红蛋白(MB)、心肌钙蛋白T(cTnT)和心肌钙蛋白I(cTnl)在临床应用也十分广泛.近,又有一个AMI的标志蛋白-心型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid-binding protein,H-FABP)受到重视和关注,本文对其理化性质、检测方法及在AMI诊断和心肌损伤评价中的应用作一综述.

作者：罗以勤；李芳秋；武建国刊期： 2001年第05期
两种直接测定高密度脂蛋白胆固醇的方法与沉淀法的对比

目的评价聚阴离子多聚物/表面活性剂(PPD)法与PEG修饰酶/硫酸α-环糊精(PEGME)法直接测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的准确性和特异性.方法将两法试剂与沉淀法作对比,分别考察对序列超离HDL、LDL及对正常血清标本、高胆红素标本、高甘油三酯标本和校准血清的作用情况.结果 PPD法与沉淀法相比偏差较大,准确性、特异性均较差,而PEGME法与沉淀法结果一致.结论临床实验室使用PPD法试剂应谨慎,而PEGME法优于PPD法.

作者：屈步华；董伟；陈大宁；庄一义刊期： 2001年第05期
P系统及红细胞糖苷脂集合

P血型系统是由Landsteiner与Levine(1927)以人红细胞注射家兔免疫而发现[1].引起P系统命名混淆的原因有:(1)由Landsteiner及Levine(1927)发现的抗原现在称为P1而不是P,而且P1是P血型系统中唯一的抗原;(有关天然抗-P1引起配血不合及定型困难,国内文献屡有报道[7-8].郭倩雯[9]报道1例抗-P1抗体引起配血不合,是由于母亲P1阴性,父亲P1阳性,患儿在出生前3月时,输注父亲血三次,每次30 ml,每次间隔一周而引起.方春富等[10]报告一例IgM抗-P1引起配血不合,由右肺包囊破裂并感染,右肝包虫囊肿所引起.病人血型P2,直接抗球蛋白试验阴性,抗体鉴定病人血清与4份P1红细胞17℃NS法凝集4+,吸收后血清凝集强度减弱为1+,放散液2+.37℃ 30 min出现溶血.这是由于P1物质也见存在于多种寄生虫组织,如包生绦虫囊肿液,牛肝吸虫以及华支睾吸虫等.

作者：张莉尼；陈忠刊期： 2001年第05期
念珠菌PCR检测技术的初步探讨

念珠菌18S rRNA基因区为念珠菌共有的保守区,我们在此基因区设计了一对寡核苷酸引物,建立了念珠菌的PCR检测方法,现介绍如下.

作者：谢晓谦；孙华；曹照明；李峰；朱易华刊期： 2001年第05期
PCR检测志贺菌和侵袭性大肠埃希菌的侵袭性质粒抗原H基因

目的建立一种志贺菌和侵袭性大肠埃希菌的PCR诊断方法.方法根据志贺菌和侵袭性大肠埃希菌的侵袭性质粒抗原H(ipaH)基因序列,设计一对引物,优化各种工作条件,建立一种PCR诊断方法.结果本法特异性好,敏感性可达10 CFU,整个实验过程在6～7 h内完成.结论建立的方法在理论和实际应用上都有优越性,可用于临床诊断.

作者：杨春梅；王福元；刘小云；李家恒刊期： 2001年第05期
江苏地区汉族人载脂蛋白E基因型及等位基因频率分布

载脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)作为高亲和力的配体,与apoE受体及LDL受体结合,介导含apoE脂蛋白的细胞吞饮和降解,在脂质代谢中起重要作用.动物实验证实apoE在清除致动脉粥样硬化脂蛋白残基中起作用[1].文献报道apoE多态性与冠心病、阿尔茨海默病等存在密切联系.

作者：孙承龙；潘闽；朱健华；王惠民；刘志华刊期： 2001年第05期
自身免疫病抗核抗体测定分析

自身免疫性疾病共同的发病基础是自身免疫紊乱,出现自身抗体,但病理变化和免疫学改变各有特点.本文进一步对有关疾病做了抗核抗体测定,报告如下.

作者：刘玉琴；居哈尔；哈丽姗；普雄明刊期： 2001年第05期